WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

«ИЗУЧЕНИЕ ВНУТРИВИДОВОГО ГЕТЕРОМОРФИЗМА TRICHOMONAS VAGINALIS И ЕГО ВЛИЯНИЯ НА НОРМАЛЬНУЮ МИКРОФЛОРУ МУЖЧИН С ХРОНИЧЕСКИМ УРОГЕНИТАЛЬНЫМ ТРИХОМОНИАЗОМ ...»

На правах рукописи

ЗЕМЛЯНСКАЯ Юлия Михайловна

ИЗУЧЕНИЕ ВНУТРИВИДОВОГО ГЕТЕРОМОРФИЗМА TRICHOMONAS

VAGINALIS И ЕГО ВЛИЯНИЯ НА НОРМАЛЬНУЮ МИКРОФЛОРУ МУЖЧИН С

ХРОНИЧЕСКИМ УРОГЕНИТАЛЬНЫМ ТРИХОМОНИАЗОМ

03.02.03 – микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук



Иркутск – 2015

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии с курсом КЛД ГБОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель доктор биологических наук, профессор Симонова Елена Васильевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой микробиологии, вирусологии и иммунологии ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России Сергеев Александр Григорьевич доктор медицинских наук, профессор кафедры акушерства и гинекологии, главный врач поликлиники ГБОУ ВПО «Пермский государственный медицинский университет им.

академика Е.А. Вагнера» Минздрава России Олина Анна Александровна

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого» Министерства здравоохранения Российской Федерации (660022, г. Красноярск, ул. Партизана Железняка, д. 1)

Защита состоится « » 2015 г. в часов на заседании диссертационного совета ДМ 004.019.01 в Институте экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН по адресу: 614081, г. Пермь, ул. Голева, д. 13. Факс (342) 280 92 11.

Автореферат диссертации размещен на официальном сайте Министерства образования и науки Российской Федерации (http://www.vak.ed.gov.ru) и сайте Института экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН (http://www.iegm.ru).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИЭГМ УрО РАН и на сайте ИЭГМ УрО РАН (http://www.iegm.ru).

Автореферат разослан « » 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук Максимова Юлия Геннадьевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Инфекции, передаваемые половым путем, остаются сложнейшей медико-социальной и экономической проблемой во всем мире (Юнусова Е.И., 2014). Особое внимание среди этих инфекций заслуживает урогенитальный трихомониаз. Сегодня известны эпидемиологические особенности и клинические формы данного заболевания, прослежены иммунные сдвиги в организме больных, активно изучается его патогенез, однако урогенитальный трихомониаз продолжает занимать лидирующее положениесреди половых инфекций у людей репродуктивнозначимого возраста (Черешнев В.А., 2011). Прежде всего это обусловлено преобладанием вялотекущих и бессимптомных форм заболевания, поскольку в таких случаях пациенты долгое время не обращаются за медицинской помощью, что увеличивает риск заражения здоровых людей (Прохоренков В.И., 2014). Кроме того, стертость клинических проявлений урогенитального трихомониаза способствует развитию у больных хронического, часто рецидивирующего процесса, ведущего к тяжелым постинфекционным осложнениям. К числу последних относятся воспалительные заболевания органов малого таза и мошонки, нарушение репродуктивной функции у молодых людей, снижение эффективности применения репродукционных технологий и даже онкопатология (Гриценко В.А., 2013). Научную и практическую значимость в проблеме урогенитального трихомониаза определяет и вопрос об изменчивости возбудителя инфекции (Рюмин Д.В., 2011). В связи с этим, большой интерес вызывают его атипичные формы, роль которых в патогенезе заболевания до сих пор не установлена.

Кроме того, в научных публикациях есть данные о том, что трихомонады, нарушая равновесие в сбалансированной системе «макроорганизм-микрофлора», становятся причиной дисбиоза, обуславливающего возникновение оппортунистической инфекции (Кулага О.В., 2008).

Все вышеизложенное определило цель диссертационной работы: изучить изменчивость морфотипа T. vaginalis в зависимости от клинических проявлений заболевания и определить ее влияние на формирование патобиоценоза в урогенитальном тракте мужчин с хроническим трихомониазом.





Для реализации поставленной цели были определены задачи исследования:

1. Установить взаимосвязь между морфотипом и степенью T. vaginalis выраженности воспалительного процесса в урогенитальном тракте больных мужчин.

2. Оценить возможность использования морфотипа возбудителя как диагностического критерия этиологической значимости при развитии хронического урогенитального трихомониаза.

3. Определить влияние антипротозойных препаратов на уровень изменчивости в структуре популяции T. vaginalis.

4. Изучить влияние T. vaginalis на формирование патобиоценоза в урогенитальном тракте больных мужчин.

Научная новизна исследования. В организме мужчин, страдающих хроническим урогенитальным трихомониазом, встречается выраженный гетероморфизм возбудителя инфекции с преобладанием его атипичных форм. Впервые установлена умеренная ассоциативная взаимосвязь между морфотипом T. vaginalis и степенью активности воспалительного процесса в урогенитальном тракте больных мужчин, а также то, что морфотип возбудителя трихомонадной инфекции зависит от места локализации патогена в мочеполовых путях обследованных пациентов. Впервые показано влияние антипротозойных препаратов на изменчивость простейших, которая носит адаптивный характер. Наличие возбудителя трихомонадной инфекции в урогенитальном тракте больных способствует формированию патобиоценоза, в котором простейшие вступают в ассоциативные взаимоотношения с отдельными видами собственной микрофлоры.

Факультативно-патогенные микроорганизмы испытывают индуцирующе-стимулирующее влияние со стороны T. vaginalis и характеризуются выраженным патогенным потенциалом.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Выполненный комплекс экспериментальных исследований дополняет картину патогенетических механизмов воздействия T. vaginalis на организм человека. Полученные данные позволяют расставить приоритеты в последовательности выделения трихомонад из клинического материала больных мужчин в зависимости от клинических проявлений заболевания. Морфотип T. vaginalis может использоваться как прогностический критерий для верификации диагноза, оценки течения заболевания и определения эффективности проводимой у больных антипротозойной терапии. Установлена резистентность изолятов T. vaginalis, циркулирующих в организме обследованных пациентов, к широко используемым антипротозойным препаратам, что свидетельствует о необходимости проведения постоянного мониторинга для оценки эффективности лечения таких больных.

Выявлены наиболее значимые ассоцианты T. vaginalis и факторы их патогенности среди представителей нормальной микрофлоры урогенитального тракта больных мужчин, что позволяет клиницистам разработать на их основе новые подходы в терапии хронического урогенитального трихомониаза и профилактике его осложнений. Результаты исследований легли в основу разработки способа диагностики урогенитального трихомониаза (Патент Российской Федерации на изобретение № 2552320), а также методических рекомендаций для последипломной подготовки по специальности бактериология на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии с курсом КЛД

ГБОУ ВПО ИГМУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. В клиническом материале мужчин с хроническим урогенитальным трихомониазом атипичные формы T. vaginalis преобладают над типичными, их появление

– есть результат адаптивной возможности простейших, обеспечивающий длительное пребывание в организме человека.

2. Определение морфолого-функциональных свойств является T. vaginalis необходимым условием достоверной диагностики поражений урогенитального тракта больных мужчин, а также важным показателем эффективности проводимой антипротозойной терапии.

3. Антипротозойные препараты оказывают влияние на морфологофункциональные свойства возбудителя, которые в свою очередь определяют степень выраженности воспалительной реакции в урогенитальном тракте.

4. Изменения в микробиоценозе урогенитального тракта мужчин с хронической трихомонадной инфекцией свидетельствуют о селекции собственной микрофлоры и увеличению содержания микроорганизмов с выраженными агрессивными свойствами, способствующими развитию осложнений в виде сочетанных инфекций.

Апробация работы и публикации. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены на: 75-й научно-практической конференции «Вопросы клинической и экспериментальной медицины» (29 апреля 2008 года, Иркутский государственный медицинский университет, Иркутск); V молодежной школеконференции с международным участием «Актуальные аспекты современной микробиологии» (26 – 28 октября 2010 года, Институт Микробиологии им. С.Н.

Виноградского РАН, Москва); областной научно-практической конференции, посвященной теме «Актуальные вопросы дерматовенерологии и косметологии» (13 – 14 апреля 2010 года, Иркутский государственный медицинский университет, Иркутск);

Всероссийской конференции молодых ученых «Биоразнообразие: глобальные и региональные процессы» (14 – 17 сентября 2010 года, Институт общей и экспериментальной биологии СО РАМН, Улан-Удэ); научной конференции с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней», посвященной 90-летию кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии ИГМУ (15 – 17 сентября 2010 года, Иркутск); заседании проблемной комиссии «Инфекционные болезни, эпидемиология и микробиология» ИГМУ (протокол № 3 от 17 апреля 2014 года, Иркутск); Всероссийской научно-практической конференции по медицинской микробиологии и клинической микологии XVII Кашкинские чтения (9 – 11 июня 2014 года, Санкт-Петербург); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Природно-очаговые и другие актуальные инфекции Сибири и Дальнего востока» (16 – 18 сентября 2015 года, Иркутск).

По материалам диссертационной работы опубликовано 11 работ, 7 из которых относятся к изданиям ВАК Минобрнауки РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 180 страницах печатного текста, состоит из введения, 5-ти глав (обзора литературы, главы по описанию материала и методов исследования, 3-х глав собственных исследований и обсуждения результатов), заключения, выводов, списков литературы и сокращений.

Библиографический указатель включает 264 источника, в том числе 191 отечественный и 73 зарубежный. Текст диссертации содержит 67 таблиц и 54 рисунка.

Связь работы с научными программами и личный вклад автора.

Диссертационная работа выполнена в рамках научной темы «Этиологические, патогенетические аспекты, региональные особенности эпидемиологии и клиники инфекционных заболеваний, характерных для Восточной Сибири и сопредельных территорий, разработка методов профилактики и лечения этих заболеваний» на базе ГБОУ ВПО «Иркутский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения РФ (№ гос. регистрации 01.2.00304318). Автором лично определена программа, выбраны объекты, методы и объем исследования. Собраны исходные данные, из которых сформирована электронная база данных Excel. Выполнен комплекс микробиологических исследований на основе микроскопического и культурального методов. Проведены экспериментальные исследования по изучению роста культур T.

vaginalis в условиях периодического культивирования и определению факторов патогенности у выделенной микрофлоры. Автором выполнен математико-статистический анализ полученных данных. Подготовлена диссертационная работа, в которой в обобщенном виде представлены результаты исследования, сформулированы основные положения и выводы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в период с 2007 по 2010 гг. В исследовании принимали участие мужчины, страдающие хроническим урогенитальным трихомониазом, находившиеся на плановом обследовании и лечении в специализированной клинике г. Иркутск «Медицинский центр репродуктивного здоровья». Для сбора данных о состоянии здоровья пациентов проводилась выкопировка результатов их полного обследования из историй болезни, любезно предоставленных директором центра. Забор исследуемого материала (соскобов из уретры, секретов простаты, эякулятов) у здоровых (n = 28) и больных трихомониазом мужчин (n = 143) осуществлял медперсонал клиники.

Микробиологические исследования проводили на базе НИИ Биомедицинских технологий ИГМУ и на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии с курсом КЛД ИГМУ.

Из клинического материала обследованных пациентов было выделено 205 изолятов и 328 культур факультативно-патогенных микроорганизмов. Для T. vaginalis культивирования T. vaginalis использовались селективные питательные среды Vagicult (Финляндия) и СДС-199 (Россия). Морфотип T. vaginalis оценивали в соответствии с рекомендациями Н.В. Раздольской (2009). Определение антипротозойной чувствительности у простейших проводили по методу Ю.Ф. Захаркива (2007). Ростовые характеристики культур возбудителя описывали по методикам О.В. Блажевича (2004), А.И. Нетрусова (2005), Д.А. Плянченко (2007).

Для определения изменений в микробиоценозе урогенитального тракта у 45 обследованных пациентов проводилось комплексное микробиологическое исследование полученных клинических образцов. Качественные и количественные характеристики микробиоценоза мужчин с хроническим трихомониазом сравнивали с аналогичными показателями, полученными в группе контроля. Для выделения факультативнопатогенных микроорганизмов применяли плотные питательные среды «HiMedia Labs»

(Индия): модифицированный шоколадный агар, МакКонки, кровяной агар 5,0 %, Шадлер 5,0 %, агар Левенштейна-Йенсена, Актиномицет агар, Сабуро и мясо-пептонный агар.

Идентификацию выделенных штаммов собственной микрофлоры проводили по общепринятой методике на основании морфологических, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств (Приказ МЗ СССР от 22.04.1985 № 535). Факторы агрессии оценивали в соответствии с рекомендациями А.С. Лабинской (2008).

Первичные данные были обработаны с помощью компьютерных программ: MS Excel 7.0 и StatSoft – Statistica 6.0. Краткая характеристика методов и объемов исследований представлена в табл. 1.

–  –  –

T. vaginalis была выделена только из одного клинического образца (2 = 178,6, р 0,001).

Приоритетно ее можно было обнаружить в эякуляте (49,6 %, 2 = 6,32, р 0,001 - 0,010).

У35,0 % больных она встречалась в соскобе из уретры, а у 4,9 % пациентов возбудителя дифференцировали в секрете простаты (2 = 72,2, р 0,001). Одновременно в двух клинических образцах простейшие обнаруживались у 10,5 % пациентов, при этом в 7,0 % случаев трихомонады диагностировались в соскобе из уретры и эякуляте, в 2,0 раза реже их идентифицировали в секрете простаты и эякуляте.

В ходе исследований было установлено, что морфология возбудителя трихомонадной инфекции зависит от вида клинического материала, из которого его выделили. Так в соскобе из уретры больных мужчин превалировали простейшие грушевидной формы (2 = 7,6, р = 0,001 – 0,050). Округлые клетки T. vaginalis лидировали в эякуляте (2 = 4,3, р = 0,001 – 0,037). Особи овальной формы встречались преимущественно в секрете простаты (2 = 4,9, р = 0,006 – 0,026). Нечасто в клиническом материале больных идентифицировали возбудителя амебоидной формы (в соскобе из уретры – 5,5 ± 2,9 %; в эякуляте – 4,3 ± 2,2 %; в секрете простаты – 13,3 ± 8,7 %).

Полиморфизм клеток возбудителя, выделенных из биоматериала обследованных мужчин, представлен на рис. 1.

–  –  –

Рис. 1. Разнообразие форм T. vaginalis у мужчин: а – округлая, б – овальная, в – грушевидная, г – амебоидная, д – мелкая, е - крупная (окраска по Романовскому – Гимза, х1000, Ю.М. Землянская) При изучении подвижности простейших было выявлено, что волнообразное движение свойственно трихомонадам, обладающим грушевидной формой клетки, выделенным преимущественно из соскоба уретры больных (2 = 26,9 – 4,71, р 0,001 – 0,029). В популяции возбудителя атипичного морфотипа, диагностированного в эякуляте, лидировали малоподвижные клетки, а в секрете простаты встречались трихомонады полностью лишенные движения (2 = 18,4 – 10,5, р 0,001).

Особое внимание при изучении морфологии простейших уделялось их ядерному аппарату. Большая часть особей грушевидной и округлой формы были одноядерными (2 = 20,2 – 32,4, р 0,001). Однако важно отметить, что среди грушевидных трихомонад значимо чаще встречались многоядерные клетки, а у каждой второй амебоидной и овальной T. vaginalis, выделенной из секрета простаты или эякулята, ядро отсутствовало.

Данные, полученные в ходе изучения морфолого-функциональных особенностей возбудителя трихомонадной инфекции, показали их взаимосвязь с локализацией и степенью активности патологического процесса в урогенитальном тракте обследованных мужчин (табл. 2). Так, при уретрите, сопровождающемся выраженной воспалительной реакцией, лидирующей была грушевидная форма паразита с волнообразным типом движения. При снижении активности воспалительной реакции в уретре, а также при восходящей трихомонадной инфекции мочеполовых путей частота регистрации возбудителя типичного морфотипа с волнообразным типом движения существенно снижалась (2 = 5,45, р = 0,019). Умеренноактивный патологический процесс, локализующийся в органах малого таза или мошонке, характеризовался превалированием атипичной T. vaginalis с округлой формой клетки и маятникообразной подвижностью (ТМФ: р = 0,020). При слабоактивном воспалительном процессе любой локализации в биоматериале больных значительно чаще регистрировались овальные трихомонады.

Кроме того, основная масса этих клеток была неподвижной (2 = 8,3, р = 0,002).

Прямая зависимость прослеживалась между ядерным аппаратом простейших и степенью выраженности заболевания у больных мужчин. Так, в исследуемом материале обследованных пациентов с высокой активностью патологического процесса значимо чаще встречались многоядерные клетки возбудителя (2 = 9,2, р = 0,030). По мере снижения активности воспаления частота их регистрации уменьшалась. В биоматериале больных с умеренно выраженной реакцией доминировали одноядерные клетки (2 = 7,6, р = 0,042). При незначительном воспалительном процессе в урогенитальном тракте больных лидировали безъядерные формы трихомонад (2 = 4,1 – 5,7, р = 0,020 – 0,042).

Проведенные исследования показали взаимосвязь между размером простейших и выраженностью патологического процесса в урогенитальном тракте обследованных пациентов. Было выявлено, что при его высокой активности в клиническом материале больных чаще обнаруживались трихомонады мелкого размера. По мере снижения

–  –  –

9 р = 0,037; 10р = 0,042; 11р = 0,039; 12р = 0,042; 13р = 0,020; 14р = 0,016; 15р = 0,016; 16р = 0,013.

активности воспалительного процесса частота их обнаружения значительно снижалась (ТМФ: р = 0,016). Обратная картина прослеживалась при выявлении трихомонад крупных размеров. При этом в клиническом материале больных с высокоактивным патологическим процессом крупные клетки простейших отсутствовали, при умеренном течении заболевания диагностировались в небольшом количестве, однако превалировали у пациентов со слабой активностью воспалительной реакции (ТМФ: р1 0,001 – 0,026).

Анализ данных показал, что возбудитель инфекции атипичного морфотипа, выделенный из организма больных, является результатом адаптивной трансформации T.

vaginalis типичного фенотипа на фоне развития трихомонадной инфекции, вследствие совершенствования межвидовых взаимоотношений.

Загрузка...
При этом особи грушевидной формы, диагностированные преимущественно при поражении уретры, мелких размеров и, как правило, обладающие прогрессивной подвижностью, обеспечивают возбудителю возможность адгезироваться на чувствительной клетке эпителия и колонизировать слизистую оболочку с последующим развитием инфекционного процесса. В то время как атипичные простейшие с округлой формой клетки, обнаруженные в клиническом материале больных с восходящей трихомонадной инфекцией, характеризующиеся одноядерностью, маятникообразным движением или обездвиженные, являются формой адаптированной к неблагоприятным условиям среды обитания. Эти формы обеспечивают паразиту длительную персистенцию в организме человека. Кроме того, как выяснилось, между морфолого-функциональными особенностями паразита и клиническим течением заболевания есть умеренная ассоциативная взаимосвязь (r = 0,4, 2 = 35,7, р 0,001).

Вследствие этого морфотип паразита можно использовать как диагностический критерий при постановке диагноза заболевания, для оценки его течения, а также определения эффективности проводимой у больных химиотерапии.

Изучение влияния антипротозойных препаратов на изменчивость Trichomonas vaginalis. Установлено, что изоляты T. vaginalis, выделенные из биоматериала больных, только в 38,0 ± 6,6 % случаев обладали чувствительностью ко всем исследуемым лекарственным препаратам. Интересно отметить то, что половина резистентных трихомонад проявляла нечувствительность к действию какого-либо одного лекарственного препарата, в то время как другая половина популяции была полирезистентной. При этом 17,9 ± 5,2 % культур T. vaginalis оказывались устойчивыми одновременно к двум антипротозойным препаратам, простейшие резистентные к трем из них составляли 11,2 ± 4,2 %. Частота встречаемости изолятов нечувствительных одновременно к четырем препаратам не превышала 1,9 ± 1,8 %. Так, все исследованные культуры возбудителя трихомонадной инфекции оказывались чувствительными к действию секнидазола. Менее эффективным был наксоджин – 89,1 ± 4,2 %.

Эффективность действия орнидазола и макмирора была одинаковой и определялась в 85,5 ± 4,8 % случаев. Доля культур, восприимчивых к тинидазолу и фуразолидону составляла 76,5 ± 5,7 % и 72,7 ± 6,1 % соответственно, в то время как чувствительность простейших к метронидазолу не превышала 60,0 ± 6,7 % (рис. 2).

Рис. 2. Степень выраженности чувствительности к антипротозойным препаратам у изолятов T. vaginalis на популяционном уровне В условиях периодического культивирования было установлено, что в контроле кривая роста T. vaginalis имела S-образную форму, в которой прослеживались все последовательно сменяющие друг друга стадии развития культуры, тогда как под влиянием антипротозойных препаратов после стадии адаптации трихомонад сразу наступала фаза их отмирания (рис. 3). В условиях физиологической нормы отмирание Рис. 3. Кривая роста и развития популяции T. vaginalis в контроле и опытах с антипротозойными препаратами клеток T. vaginalis наблюдалось только через 144 ч и имело логарифмическую зависимость. В опыте с макмирором была отмечена обратная зависимость гибели простейших от экспозиции, когда их отмирание проходило по экспоненте. В присутствии метронидазола гибель трихомонад носила диауксический характер.

Кроме того, выполненные исследования показали, что условия роста культуры накладывают свои отпечатки на морфолого-функциональные особенности возбудителя инфекции. Так, в фазу гибели в контроле среди типичных трихомонад обнаруживались амебоидные особи, а в опытных вариантах появлялись клетки округлой или овальной формы (2 = 8,4, р = 0,004). Частота их обнаружения зависела от механизма действия антипротозойного препарата. Так, под влиянием метронидазола в 3,5 раза чаще встречались округлые простейшие, а в опыте с макмирором в 3,9 раза чаще диагностировались особи овального фенотипа (2 = 4,3, р = 0,038). Кроме того, во всех исследованиях в процессе гибели простейших отмечалось их обездвиживание (2 = 21,4 – 42,0, р 0,001). Также, было установлено, что 71,4 % трихомонад в опытных вариантах в стадию отмирания имели безъядерную структуру клетки (р 0,001 – 0,005). Такие формы простейших обнаруживались и в контроле, однако частота их встречаемости была в 1,5 – 1,6 раза ниже, чем в опытных пробах (2 = 3,6, р = 0,056).

На основании вышеизложенного следует, что появление простейших округлой формы свидетельствует о неблагоприятных условиях развития периодической культуры, при этом сам морфотип является результатом ее приспособительной реакции, в то время как безъядерные клетки возбудителя, обнаруженные в условиях микробоцидного эффекта действия лекарственного препарата, указывают на гибель трихомонад.

Изучение изменений в микробиоценозе урогенитального тракта мужчин при хронической трихомонадной инфекции. Уровень КОЕ в биоматериале, отобранном из биотопов урогенитального тракта здоровых мужчин, значимо не отличался от аналогичного показателя, установленного другими авторами (табл. 3). Это дает основание Таблица 3 Микробная обсемененность биоматериала урогенитального тракта здоровых мужчин Исследуемый Уровень обсемененности Ссылки материал биоматериала, lg КОЕ/мл здоровые данные мужчины литературы Соскоб из уретры 5,3 ± 1,0 5,0 (Ильин И.И., 2005;

Shahmanesh M., 2009) Секрет простаты 4,2 ± 1,6 4,0 (Емельянова И.В., 1999;

Набер К.Г., 2006) Эякулят 4,2 ± 1,6 4,0 (Бухарин О.В., 2000;

Korrovits Р., 2006) для валидизации результатов исследования, поскольку все они в диссертационной работе выполнялись по общепринятой и утвержденной методике. В связи с этим, уровень КОЕ, лежащий выше или ниже установленных пределов статистической значимости, является

–  –  –

простаты при трихомониазе был на два, а в эякуляте на три порядка выше показателя КОЕ, установленного в контроле (test M-U: p = 0,001 – 0,005).

Кроме того, микробиоценоз урогенитального тракта обследованных пациентов отличался от контрольной группы по качественным характеристикам. Прежде всего, эти изменения касались соотношения грамположительных к грамотрицательным микроорганизмам. При этом в биоматериале больных грамположительные формы были представлены исключительно кокковидными бактериями, такими как Micrococcus spp., Tetracoccus spp., Staphylococcus spp., Streptococcus spp. и Enterococcus spp. (табл. 5). И если частота обнаружения Micrococcus spp., Tetracoccus spp. и Enterococcus spp. на фоне трихомонадной инфекции возрастала (р = 0,008 – 0,036), то встречаемость Staphylococcus spp. и Streptococcus spp., наоборот, понижалась (р = 0,027 – 0,044), а непатогенные грамнегативные диплококки рода Neisseria вовсе не диагностировались (2 = 21,4, р 0,001; ТМФ: р = 0,001).

Среди палочковидной микрофлоры во всех исследуемых биотопах у больных мужчин показатель соотношения грамположительных к грамотрицательным микроорганизмам смещался в сторону увеличения грамнегативных форм. При этом во всех биотопах урогенитального тракта обследованных пациентов значительно реже, чем у здоровых мужчин были зарегистрированы грампозитивные бактерии рода Lactobacillus (2 = 4,06, р = 0,043) и Corynebacteriа spp. (2 = 5,3, р = 0,021). Частота обнаружения грамнегативных палочек рода Escherichia, наоборот возрастала, что особенно было выражено в секрете простаты больных (р = 0,006). Кроме того, во всех клинических образцах у пациентов регистрировались палочки родов Proteus и Klebsiella.

Дисбиотические нарушения урогенитального тракта больных трихомониазом мужчин также сопровождались увеличением частоты обнаружения грибов Candida spp.

–  –  –

Обсемененность клинического материала больных и здоровых мужчин микроорганизмами разных таксонов представлена в табл. 6. Как видно в биотопах урогенитального тракта обследованных пациентов отмечалось статистически значимое уменьшение концентрации бактерий рода Neisseria (р = 0,003 – 0,048), а также Lactobacillus и Corynebacteriа (р = 0,001 – 0,034). Обсемененность материала больных мужчин микроорганизмами Micrococcus spp., Tetracoccus spp., Escherichia spp. и Candida spp., наоборот, увеличивалась (р = 0,035 – 0,051). Показатели КОЕ Staphylococcus spp. и Streptococcus spp. уменьшались на порядок в соскобе из уретры, однако возрастали в эякуляте и секрете простаты. Важно отметить и то, что у каждого второго пациента с трихомонадной инфекцией по сравнению с контролем обнаруживалась кишечная микрофлора (46,3 ± 7,9 %, 2 = 4,71, р = 0,030, ТМФ: р = 0,038).

Сравнительный анализ факторов патогенности собственной микрофлоры, выделенной у здоровых и больных мужчин, показал, что у обследованных пациентов в урогенитальном тракте значимо чаще обнаруживались культуры, способные

–  –  –

адсорбироваться на клетках уроэпителия. При этом выраженной адгезивностью обладали представители родов Proteus, Escherichia, Sarcina, Klebsiella, Enterobacter и Micrococcus.

Помимо адгезивных свойств, большая часть изолятов, выделенных из биоматериала больных мужчин, обладала выраженной фибринолитической активностью.

В биотопах урогенитального тракта обследованных пациентов, также прослеживалось увеличение частоты встречаемости культур, обладающих лецитовителазной активностью ( = 11,7, р 0,001). По сравнению с контрольной группой большинство среди них секретировали лецитовителазу с выраженной активностью (2 = 9,7, р = 0,002). Значительную долю изолятов, разрушающих лецитин, составляли Staphylococcus spp. и Micrococcus spp., а также грамнегативные палочки родов Escherichia, Proteus, Klebsiella, Enterobacter и Pseudomonas spp.

Среди ассоциантов T. vaginalis было выявлено увеличение числа изолятов, продуцирующих мембранотоксины (2 = 7,6, р = 0,006), в особенности -гемолизины (2 = 5,9, р = 0,015). Среди них были представители разных таксономических групп, в том числе: Staphylococcus spp., Sarcina spp., Micrococcus spp., Escherichia spp., Proteus spp., Klebsiella spp. и Enterobacter spp.

Аналогичная картина прослеживалась при сравнении ДНКазной активности у микроорганизмов, выделенных в группах сравнения. Так, в исследуемом материале мужчин с хронической трихомонадной инфекцией по сравнению с контролем в биотопе превалировали культуры, обладающие выраженной и умеренной активностью ДНКазы.

Существенную долю среди них составляли представители рода Staphylococcus, Streptococcus spp., Micrococcus spp., а также Escherichia spp. и Candida spp. (2 = 3,8 – 10,2, р = 0,001 – 0,051).

При определении патогенетической роли факультативно-патогенной микрофлоры в урогенитальном тракте обследованных пациентов большое значение имела оценка ее протеолитической активности. Было установлено, что в группе больных мужчин доля микроорганизмов, секретирующих протеазы, в 1,7 раза больше, чем в группе здоровых (2 = 77,7, р 0,001). Способность собственной микрофлоры разрушать клеточные белки возрастала за счет увеличения ферментативной активности Staphylococcus spp., Candida spp., Escherichia spp. и Micrococcus spp. (2 = 9,6 – 45,4, р 0,001 – 0,002).

Анализируя плазмокоагулазную активность нормальной микрофлоры, было установлено, что в микробиоценозе урогенитального тракта пациентов с трихомониазом количество культур, обладающих этим признаком, увеличилось в 2,0 раза (2 = 22,4, р 0,001). При этом если коагулазная активность изолятов, полученных в контроле сопровождалась образованием только хлопьев, то в группе больных с трихомонадной инфекцией этот процесс протекал более выражено и завершался образованием сгустков.

Кроме того, у 71,3 ± 2,5 % культур, выделенных из биоматериала пациентов, была обнаружена секреция щелочной фосфатазы, в контрольном варианте таких культур выделялось почти в 1,4 раза реже (2 = 7,2, р 0,007). И если у здоровых мужчин превалировали микроорганизмы, продуцирующие фосфатазу слабой активности, то на фоне трихомонадной инфекции выраженность этого признака значительно возрастала.

Эта особенность хорошо прослеживалась у представителей рода Streptococcus.

Данные, полученные при изучении микробиоценоза здоровых и больных мужчин, свидетельствуют о том, что на фоне развития трихомонадной инфекции в биотопах урогенитального тракта происходят дисбиотические нарушения, сопровождающиеся увеличением уровня КОЕ в биотопах. При этом концентрация резидентных видов в биоценозе, таких как Lactobacillus spp., Corynebacteriа spp., Neisseria spp. понижается, либо эти виды исчезают полностью, а содержание факультативно-патогенных микроорганизмов, таких как грибы рода Candida, грампозитивные кокки Micrococcus spp., Tetracoccus spp., а также грамнегативные палочковидные бактерии из семейства Enterobacteriaceae, наоборот, повышается. Кроме того, ассоциативная микрофлора испытывает индуцирующе-стимулирующее влияние со стороны возбудителя трихомонадной инфекции (r = 0,95; р = 0,020). Как оказалось, собственная микрофлора больных по сравнению с контрольной группой является более агрессивной (табл. 7).

Прежде всего, у исследуемых культур отмечается усиление адгезивности и секреции факторов патогенности, среди которых плазмокоагулаза, щелочная фосфатаза, гемолизины, ДНКаза, лецитовителаза, фибринолизин и ряд бактериальных протеаз.

Несомненно, установленная закономерность, усиливает болезнетворное влияние на здоровье человека, утяжеляет течение основного заболевания, способствует хронизации и развитию осложнений трихомонадной инфекции.

Выводы

1. Установлено, что в организме мужчин, страдающих хроническим урогенитальным трихомониазом, отмечается выраженный гетероморфизм возбудителя, с преобладанием атипичных форм, являющихся результатом адаптивной трансформации паразита типичного фенотипа, обеспечивающих его длительное пребывание в организме человека.

2. Выявлена корреляционная связь между морфотипом T. vaginalis и степенью выраженности воспалительного процесса в урогенитальном тракте больных мужчин. Так, особи типичного морфотипа обнаруживались у пациентов с выраженной воспалительной реакцией, когда уровень лейкоцитоза составлял 94,3 ± 9,7 в п/зр., округлые трихомонады лидировали у больных с умереновыраженным патологическим процессом, когда уровень лейкоцитоза не превышал 35,5 ± 15,9 в п/зр., у пациентов со слабой выраженностью воспалительной реакции, когда уровень лейкоцитоза был равен 10,1 ± 3,8 в п/зр., в биоматериале превалировали овальные клетки трихомонад.

3. Разработан «Способ диагностики урогенитального трихомониаза» (Патент Российской Федерации на изобретение № 2552320), позволяющий определять этиологическую значимость возбудителя трихомонадной инфекции с разным морфотипом, что повышает диагностическую ценность микробиологических методов исследования и позволяет оценивать эффективность лечения пациентов данной группы.

4. В условиях in vitro антипротозойные препараты, используемые в клинической практике для лечения больных урогенитальным трихомониазом, изменяют морфотип T.

vaginalis.

–  –  –

5. Установлено влияние T. vaginalis на формирование патобиоценоза в урогенитальном тракте больных мужчин, в котором отмечается отбор микроорганизмов нормальной микрофлоры с агрессивными свойствами, в то время как концентрация отдельных видов микроорганизмов, выполняющих роль биологического барьера на пути распространения возбудителя инфекции, наоборот, понижается. Это создает предпосылки для тотального поражения урогенитального тракта мужчин и формирования микстинфекций.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ

1. Колесникова Л.И. Состояние фертильности мужчин города Иркутска на фоне хронической трихомонадной инфекции / Л.И. Колесникова Н.А. Неронова, Е.А.

Кириленко, А.В. Аталян, Е. А. Батунова, Е.В. Симонова, Ю.М. Бардаева (Землянская) // Сибирский медицинский журнал. – 2009. – № 7. – Часть 2. – С. 160 – 163.

2. Колесникова Л.И. Влияние препарата «Трекрезан» на процессы перекисного окисления липидов-антиоксидантной защиты и показатели сперматогенеза мужчин с хронической монотрихомонадной инфекцией / Л.И. Колесникова, Б.Я. Власов, Н.А.

Неронова, Е.А. Кириленко, А.В. Аталян, Н.А. Курашова, Е.А. Батунова, Т.Ю.

Тонкошкурова, Ю.М. Бардаева (Землянская) // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2010. – № 6 (76). Часть 2. – С. 37 – 39.

3. Неронова Н.А. Влияние препарата трекрезан на показатели сперматогенеза мужчин с хронической монотрихомонадной инфекцией / Н.А. Неронова, Е.А. Кириленко, А.В. Аталян, Е.А. Батунова, Т.Ю. Тонкошкурова, Ю.М. Бардаева (Землянская) // Сибирский медицинский журнал. – 2010. – № 6 (1). – С. 93 – 96.

4. Колесникова Л.И. Состояние репродуктивной функции, процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у мужчин с хронической монотрихомонадной инфекцией / Л.И. Колесникова, Б.Я. Власов, Н.А. Неронова, Е.А.

Кириленко, А.В. Аталян, Н.А. Курашова, Е.А. Батунова, Т.Ю. Тонкошкурова, Ю.М.

Бардаева (Землянская) // Фундаментальные исследования. – 2011. – № 1. – С. 76 – 81.

5. Симонова Е.В. Эпидемиологический анализ заболеваемости урогенитальным трихомониазом в Иркутской области / Е.В. Симонова, Н.А. Неронова, Ю.М. Бардаева (Землянская), Е.А. Жигалова // Сибирский медицинский журнал. – 2011. – № 4. – С. 115 – 117.

6. Неронова Н.А. Состояние микрофлоры урогенитального тракта у половых партнеров при хроническом мочеполовом трихомониазе (Обзор литературы) / Н.А.

Неронова, Е.В. Симонова, Е.А. Жигалова, Ю.М. Бардаева (Землянская) // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. – 2012. – № 3(135). – Часть 1. – С. 135 – 140.

7. Симонова Е.В. Влияние Trichomonas vaginalis на нормальную микрофлору урогенитального тракта мужчин при хроническом трихомониазе / Е.В. Симонова, Н.А.

Неронова, Ю.М. Землянская // Актуальные проблемы гуманитарных и естественных наук.

– 2013. – № 05(52). – М.: «Литера». – С. 371 – 377.

Публикации в других журналах и сборниках

8. Симонова Е.В. Изучение микрофлоры в биоматериале больных мужчин с урогенитальным трихомониазом / Е.В. Симонова, Н.А. Неронова, Ю.М. Бардаева (Землянская) // Журнал инфекционной патологии. – 2008. – № 1 – 4 (Т 15). – С. 80 – 81.

9. Симонова Е.В. Роль нормальной микрофлоры в поддержании гомеостаза урогенитального тракта мужчин / Е.В. Симонова, Ю.М. Бардаева (Землянская) // Журнал инфекционной патологии. – 2009. – № 1 (Т 16). – С. 34 – 39.

10. Бардаева (Землянская) Ю.М. Изменение факторов патогенности микроорганизмов под влиянием внешних условий / Ю.М. Бардаева (Землянская), Е.А.

Жигалова, Ю.В. Журавлева // Сборник тезисов V Молодежной школы-конференции с международным участием «Актуальные аспекты современной микробиологии». Москва. – 2009. – С. 11 – 12.

11. Бардаева (Землянская) Ю.М. Изучение биоразнообразия морфотипов Trichomonas vaginalis в организме человека / Ю.М. Бардаева (Землянская) // Сборник тезисов Всероссийской конференции молодых ученых «Биоразнообразие: глобальные и региональные процессы». Улан-Удэ. – 2010. С. 126 – 128.

–  –  –

ИЗУЧЕНИЕ ВНУТРИВИДОВОГО ГЕТЕРОМОРФИЗМА TRICHOMONAS

VAGINALIS И ЕГО ВЛИЯНИЯ НА НОРМАЛЬНУЮ МИКРОФЛОРУ МУЖЧИН С

ХРОНИЧЕСКИМ УРОГЕНИТАЛЬНЫМ ТРИХОМОНИАЗОМ

–  –  –



Похожие работы:

«ЛИННИК Татьяна Александровна ПОВЫШЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ СПОСОБОВ РАЗМНОЖЕНИЯ СОРТОВ ЗЕМЛЯНИКИ САДОВОЙ (Fragaria x ananassa Duch.), ХАРАКТЕРИЗУЮЩИХСЯ НИЗКОЙ УСООБРАЗУЮЩЕЙ СПОСОБНОСТЬЮ Специальность: 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Москва – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.