WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

«ФЕНИЛКАРБОНОВЫЕ КИСЛОТЫ ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ ...»

На правах рукописи

Бедова Александра Юрьевна

ФЕНИЛКАРБОНОВЫЕ КИСЛОТЫ

ПРИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССАХ

14.03.03 – патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва – 2015



Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении

«Научно-исследовательский институт общей реаниматологии имени В.А.

Неговского» (ФГБНУ «НИИОР»).

Научные руководители:

заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАН, профессор, доктор медицинских наук, директор ФГБНУ «НИИОР» - Мороз Виктор Васильевич;

доктор медицинских наук, профессор, заведующая лабораторией метаболизма критических состояний ФГБНУ «НИИОР» - Белобородова Наталья Владимировна.

Официальные оппоненты:

Балякин Юрий Викторович – доктор медицинских наук, профессор, заведующий кафедрой общей патологии медико-биологического факультета Российского национального исследовательского медицинского университета имени Н.И.

Пирогова.

Анаев Эльдар Хусеевич – доктор медицинских наук, профессор,

Ученый секретарь Федерального государственного учреждения «Научно-исследовательского института пульмонологии» ФМБА России.

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Научноисследовательский институт общей патологии и патофизиологии".

Защита состоится «____»__________2015 г. в «____» часов на заседании диссертационного совета Д 001.051.01, созданного на базе Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт общей реаниматологии имени В.А. Неговского» по адресу: 107031, г.

Москва, ул. Петровка, д. 25, стр. 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБНУ «НИИОР» по адресу:

107031, г. Москва, ул. Петровка, д. 25, стр. 2 и на сайте www.niiorramn.ru

Автореферат разослан «____»___________2015 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 001.051.01, доктор медицинских наук, профессор Решетняк Василий Иванович Актуальность Актуальность проблемы инфекции в отделениях реаниматологии остается стабильно высокой, несмотря на прогресс в области медицины и техники. По данным эпидемиологических исследований у 30-50% больных в критическом состоянии документируется инфекционный процесс [Alberti C., 2002; Vincent J.L., 2009], в основном бактериальной этиологии [Vincent J.L., 2009; Руднов В.А., 2011].

Повышенный риск развития инфекции у больных в критических состояниях связан с высокой степенью бактериальной контаминации окружающей среды, использованием большого количества инвазивных процедур [Хорошилов С.Е., 2013], проведением длительной искусственной вентиляции легких [Голубев А.М., 2015], ослаблением защитной функции организма, нарушениями метаболизма на фоне стрессовой реакции организма [Заржецкий Ю.В., 2014] и риском развития стрессовых язв и транслокации микробиоты кишечника [Мороз В.В., 2004; Vincent J.L., 2009].

Нейтрофилы являются первой линией защиты организма от бактериальных агентов [Косицкий Г.И., 1985; Borregaard N., 2010]. Несостоятельность первичного звена иммунитета приводит к развитию инфекционных процессов и их длительному течению [Vento S., 2003; Сурков А.Н., 2012]. Данные литературы свидетельствуют о нарушении защитной функции нейтрофилов у больных в критическом состоянии, что связано с неблагоприятным исходом [Черневская Е.А., 2008; Danikas D.D., 2008].

Бактериальная этиология жизненно опасных осложнений [Vincent J.L., 2009;

Мороз В.В., 2013] указывает на необходимость поисковых исследований, в том числе направленных на изучение роли микробных метаболитов. В последние годы растет число публикаций, в которых особое внимание уделяется фенилкарбоновым кислотам

- производным фенилаланина и тирозина, а также полифенолов растительного происхождения, продуцируемым бактериями из состава микробиоты человека [Gonzlez-Barrio R.,2011; Russell W.R., 2013]. Наибольший интерес привлекают фенилмолочная, фенилуксусная, фенилпропионовая, п-гидроксифенилуксусная и пгидроксифенилмолочная кислоты (ФМК, ФУК, ФПК, п-ГФУК и п-ГФМК соответственно), так как их уровень значительно изменен у больных с сепсисом по сравнению с нормой [Khodakova A., 2007; Белобородова Н.В., 2009]. Существует связь между метаболическим профилем фенилкарбоновых кислот и исходом заболевания, а также их участием в развитии полиорганной недостаточности [Белобородова Н.В., 2012].





В ряде исследований отмечается повышенное содержание некоторых фенилкарбоновых кислот у больных с хронической почечной и печеночной недостаточностью различного генеза, что свидетельствует о накоплении этих веществ в организме больных при нарушении их связывания и выведения [Leibich H.M., 1985;

Экспериментальные и клинические Scholze A., 2007; Aronov P.A., 2011].

исследования подтверждают наличие биологической активности у фенилкарбоновых кислот, особый интерес вызывает их способность влиять на: функции митохондрий [Fedotcheva N.I., 2008], нейтрофилов [Cohen G., 2013], транспортные белки [Jankowski J., 1998] и вегетативную нервную систему [Beppu Y., 2013].

В связи с вышеизложенным представляется актуальным изучение роли фенилкарбоновых кислот в развитии бактериальных инфекционных процессов.

Цель исследования Установить взаимосвязь уровня ароматических метаболитов фенилкарбоновых кислот и тяжести гнойно-воспалительного процесса для обоснования использования количественного анализа фенилкарбоновых кислот в клинической практике.

Задачи Модифицировать и адаптировать методику газохроматографического 1.

определения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови человека к использованию в условиях клинических лабораторий Изучить качественное и количественное содержание фенилкарбоновых кислот 2.

в сыворотке крови здоровых людей (доноров) Изучить закономерности изменения уровня фенилкарбновых кислот (ФКК) в 3.

сыворотке крови больных в зависимости от степени тяжести гнойно-воспалительного процесса Выявить способность ключевых фенилкарбоновых кислот влиять на 4.

фагоцитарную функцию нейтрофилов человека в исследовании in vitro.

Научная новизна работы Впервые показано, что фенилкарбоновые кислоты всегда присутствуют в сыворотке крови здоровых людей.

Установлено, что уровень фенилкарбоновых кислот отражает тяжесть течения гнойно-воспалительного процесса, повышается при легком течении инфекции и может достигать значений, превышающих норму более чем в 100 раз при крайне тяжелом течении бактериального воспалительного процесса.

Установлено, что фенилкарбоновые кислоты в клинически значимых концентрациях способны подавлять фагоцитарную активность нейтрофилов.

Практическая значимость Определение уровня фенилкарбоновых кислот методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием (ГХ-ПИД) применяется в научноисследовательской работе ФГБНУ «НИИОР» и МГУ им. М.В. Ломоносова.

Установлены нормальные значения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови здоровых доноров, что будет использовано в дальнейшем при проведении научно-исследовательских и прикладных работ.

Результаты настоящего исследования использованы для разработки «Способа лабораторной оценки эффективности лечения интоксикации у реаниматологических больных» (получен Патент РФ № 2522877) и «Способа лабораторной оценки эффективности антибактериальной терапии» (получен Патент РФ № 2543335).

Основные положения, выносимые на защиту Фенилкарбоновые кислоты всегда присутствуют в сыворотке крови человека и 1.

в норме поддерживаются организмом в стабильно низких концентрациях.

Уровень фенилкарбоновых кислот повышается при развитии неспецифического 2.

гнойно-воспалительного процесса и связан с его тяжестью.

Некоторые фенилкарбоновые кислоты (фенилуксусная, фенилмолочная, пгидроксифенилуксусная, п-гидроксифенилмолочная кислоты) способны подавлять фагоцитарную активность нейтрофилов.

Публикации Материалы данной работы были представлены в докладах на российских и международных конференциях, в том числе: на XV Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях»

Москва, 2013г., XVII форуме «Национальные дни лабораторной медицины России»

Москва, 2013г., Научно-практических конференциях молодых ученых «Современные методы диагностики и лечения в реаниматологии», Москва, 2013 и 2014 гг., IX и X Ежегодных конференциях с международным участием «Проблема инфекции при критических состояниях», Москва, 2013 и 2014 гг., Fifth Congress of the European Shock Society, Vienna, Austria, 2013 г., 24th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Barcelona, Spain 2014 г., 34th International Symposium on Intensive Care and Emergency Medicine, Brussels, Belgium 2014 г. и др.

По теме диссертации опубликовано 27 научных работ, из них 3 статьи в российских рецензируемых журналах, включенных в перечень ВАК, получено 2 Патента на изобретение.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 93 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы, представляющей материалы и методы исследования, 3 глав с изложением и обсуждением результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 22 таблицами и 13 рисунками. Библиографический список включает 181 источник (из них 57 работ отечественных авторов и 124 зарубежных).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования Основное оборудование. В работе при модификации методики определения фенилкарбоновых кислот и для анализа образцов сыворотки крови использовали газовый хроматограф Российского производства «Кристалл 5000.2» (Хроматэк), оснащенный пламенно-ионизационным детектором.

Пробоподготовка. Образцы сыворотки крови размораживали непосредственно перед анализом при комнатной температуре. В стеклянную пробирку объемом 10 мл помещали 800 мкл воды для инъекций, 200 мкл сыворотки крови, 100 мкл раствора внутреннего стандарта в ацетоне, содержащего 400 нг 3,4-дигидроксибензойной кислоты. К полученному объему добавляли 0,3 - 0,5 г хлорида натрия до образования насыщенного раствора и концентрированную серную кислоту до рН 2. После денатурации белка проводили экстракцию органических соединений (3 1 мл) диэтиловым эфиром. Полученный эфирный раствор упаривали досуха при 40°. Для получения триметилсилильных производных остаток обрабатывали 20 мкл N,Oбис(триметилсилил)трифторацетамида при 80° в течение 15 мин. Полученный препарат разбавляли 80 мкл гексана.

Образцы сыворотки крови.

На этапе модификации и оценки показателей качества методики определения фенилкарбоновых кислот использовали сыворотку крови здорового добровольца.

Для оценки уровня фенилкарбоновых кислот у здоровых людей (норма) и у больных с бактериальной инфекцией разной степени тяжести использовали образцы остаточной сыворотки при заборе крови по назначениям для клинических и биохимических исследований. Образцы сыворотки замораживали и хранили при -20 °С. Повторного размораживания-замораживания не допускалось.

Набор образцов здоровых доноров (n=72) осуществлялся в Отделении трансфузиологии, заготовки и процессинга гемопоэтических стволовых клеток ФГБУ «ФНКЦ ДГОИ им. Дмитрия Рогачева» МЗ РФ. Образцы сыворотки крови от больных с локальным течением инфекции кожи и мягких тканей (n=15) получены от пациентов, находящихся на амбулаторном лечении в городской поликлинике г.

Москвы. Образцы сыворотки крови от больных с тяжелым течением инфекции (n=42) получены в Отделении реаниматологии и интенсивного лечения ГКБ им. С.П.

Боткина ДЗ г. Москвы.

У амбулаторных больных регистрировались общеклинические признаки воспаления: температура тела, уровень лейкоцитов в крови, частота сердцебиения и частота дыхания. Для больных отделения реаниматологии и интенсивной терапии (ОРИТ) из медицинских карт дополнительно выписывались показатели оценки тяжести общего состояния по шкалам APACHE II [Knaus W.

A., 1985] и SOFA артериального давления и результаты биохимических [Vincent J.L., 1996], исследований - общего билирубина и креатинина. Наличие абдоминального гнойновоспалительного очага инфекции подтверждено в протоколе операции, наличие пневмонии — рентгенологическим исследованием. При создании коллекции сывороток для исследования не включались образцы от больных моложе 18/старше 80 лет, со сведениями о хронической почечной/печеночной недостаточности в анамнезе, больных, получающих терапию, подавляющую резистентность к инфекции т.е. иммуносупрессию.

Экспериментальное исследование фагоцитарной активности нейтрофилов.

Поглотительную функцию нейтрофилов периферической крови оценивали модифицированным методом [Гордиенко Г.И., 2003; Черневская Е.А., 2008] в цельной гепаринизированной крови здоровых добровольцев - мужчин (n=30).

Оценивали исходные показатели фагоцитарной активности, влияние добавок индукторов фагоцитарной активности и фенилкарбоновых кислот в разных концентрациях. В конической пробирке при 37°С в течении 30 мин инкубировали смесь: 0,1 мл гепаринизированной крови; 0,1 мл суспензии латекса (частицы латекса d=1,5 мкм); 10 мкл добавки физиологического раствора или раствор индукторов / ФКК. Готовили мазки инкубационной смеси на стекле, которые после высыхания фиксировали в пламени горелки. Окрашивали 1% раствором метиленового синего, микроскопия - под иммерсией при увеличении х 100. Просматривали не менее 10 полей зрения, осуществлялся подсчет 100 полиморфноядерных лейкоцитов.

Определяли два показателя: фагоцитарную активность нейтрофилов (ФАН) – количество лейкоцитов, поглотивших за время инкубации больше 3 частиц латекса и фагоцитарное число (ФЧ10) –количество нейтрофилов, поглотивших за время инкубации больше 10 частиц латекса.

Статистическая обработка результатов исследования выполнялась с использованием прикладного программного обеспечения Microsoft Excel и STATISTICA 10, StatSoft. Inc. При описании полученных результатов и групп исследования использованы функции нормальной и непараметрической статистики (приведены средние значения и показатели среднеквадратичного отклонения, или медианы и показатели 25-75 квартилей). Сопоставление результатов выполнялось с использованием критериев Манна-Уитни, Знаков, и t-теста.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Адаптация методики определения фенилкарбоновых кислот к применению в условиях клинических лабораторий В данной работе была поставлена задача по адаптации методики определения ФКК в сыворотке крови для использования в условиях клинических лабораторий, а следовательно, переход от дорогостоящего оборудования, требующего обслуживания высококвалифицированным персоналом (газовых хромато-масс-спектрометров - ГХ

–  –  –

В процессе адаптации пробоподготовки подобран внутренний стандарт (3,4дигидроксибензойная кислота), подходящий для метода детектирования, и добавлена процедура высаливания, позволяющая повысить степень экстракции исследуемых аналитов. На основе анализа модельных растворов ФКК в диапазоне концентраций 0,3-7 µМ, по относительному отклику (отношение площади пика определяемого вещества к площади пика внутреннего стандарта – Si/Sst) в Microsoft Excel 2010 построены градуировочные графики. Для всех пяти ФКК в исследуемом диапазоне концентраций выявлена линейная зависимость относительного отклика от содержания компонентов (табл. 2).

–  –  –

В процессе апробации методики измерения ФКК на реальных образцах выявлены случаи неполного разделения хроматографических пиков ФПК и ФУК с примесями пробы. При этом у больных содержание ФПК зачастую было ниже предела обнаружения, а неполное разделение пика ФУК и постороннего пика не позволяло проводить точную количественную оценку содержания этой кислоты. На основании полученных данных предложено проводить качественное определение ФПК для клинических образцов от больных людей, а оценку содержания ФУК предложено проводить полуколичественно.

Для ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК проведена оценка метрологических характеристик методики измерения ФКК в сыворотке крови здорового донора в диапазоне концентраций 0,5-50 µМ (методом добавок). При измерении этих кислот среднеквадратичное отклонение повторяемости r и воспроизводимости R не превышает 5% и 13%, соответственно.

Таким образом, благодаря оптимизации инструментальных параметров, модификации стадий пробоподготовки и проведению экспериментальных исследований для аттестации и внедрения в клинико-лабораторную практику предложена методика качественного и количественного определения ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК в сыворотке крови.

Сывороточные концентрации фенилкарбоновых кислот в норме.

С целью выявления концентраций ФКК, встречающихся у здоровых людей, в исследование включено 72 образца сыворотки крови от здоровых доноров крови (42 мужчин и 30 женщин) старше 18 лет. Средний возраст доноров составил 30 (±8) лет.

–  –  –

Сывороточные концентрации фенилкарбоновых кислот при бактериальных воспалительных процессах разной степени тяжести.

В исследование включено 57 образцов сыворотки крови от 57 больных с документированными очагами инфекции различной локализации и степени тяжести.

Из них 15 образцов от больных с локальными гнойными инфекциями кожи и мягких тканей (группа ИКМТ) - амбулаторное хирургическое лечение; и 42 образца от реаниматологических больных с пневмониями и перитонитами (группа ОРИТ).

В группе ИКМТ обследовано 7 мужчин и 8 женщин, медиана возраста составила 48 (ИР 31-64) лет. В группу включены больные со следующими заболеваниями: абсцедирующий фурункул (n=9), абсцесс мягких тканей (n=5), абсцедирующий гидраденит (n=1).

В группе ОРИТ обследован 21 мужчина и 21 женщина, медиана возраста составила 67 (ИР 57-75) лет. У больных документированы следующие очаги инфекции: пневмония (n=25), перитонит (n=12), перитонит в сочетании с пневмонией (n=5).

В табл. 4 отражены основные клинико-лабораторные показатели, зафиксированные в группах. У больных с локальным инфекционным процессом, не нуждающихся в госпитализации, выявлено значительное повышение каждой из четырех представленных ФКК (в сравнении с нормой, рис 1). У больных с тяжелым течением инфекции (группа ОРИТ) уровни фенилкарбоновых кислот, содержащих гидроксильную группу, были значительно выше, чем в группе с локальной инфекцией. Полученные результаты позволяют утверждать, что гидроксилированные фенилкарбоновые кислоты (ФМК, п-ГФУК, п-ГФМК) лучше отражают тяжесть течения бактериального воспалительного процесса.

–  –  –

Примечание: р0.05 * - в сравнении с донорами, ** - в сравнении с ИКМТ, достоверность отличия по критерию Манна-Уитни Рис. 1. Сопоставление показателей фенилкарбоновых кислот между группами Наличие фенилпропионовой кислоты было выявлено: практически у всех здоровых доноров в 70 из 72 случаев – 97%, реже в группе ИКМТ в 12 из 15 случаев – 80%, в группе ОРИТ в 5 из 42 случаев – 12%. Отсутствие ФПК в образцах сыворотки крови больных с тяжелыми инфекционными процессами согласуется с результатами, полученными ранее с использованием ГХ-МС [Белобородова Н.В., 2012], и, возможно, свидетельствует о серьезных нарушениях в гомеостазе.

ФКК при разной степени органных нарушений В отделениях реаниматологии самым опасным осложнением при наличии инфекции является развитие полиорганной недостаточности. Поэтому для разделения больных группы ОРИТ на подгруппы по степени тяжести инфекционного процесса были использованы показатели шкалы SOFA - Sepsis-related Organ Failure Assessment (шкала оценки органной недостаточности, связанной с сепсисом) [Vincent J.L., 1996], зафиксированные в медицинских картах больных.

Подгруппа SOFA 0-2 балла - бактериальный воспалительный процесс средней степени тяжести. Включено 10 больных – 4 женщины и 6 мужчин, медиана возраста составила 59 (ИР 50-76) лет. Тяжесть состояния обусловлена течением гнойновоспалительного процесса, оценка по шкале APACHE II составила 6 (ИР 4—9) баллов.

Загрузка...

У больных верифицированы следующие очаги бактериальной инфекции:

пневмония (n=3), перитонит (n=6), перитонит в сочетании с пневмонией (n=1).

Подгруппа баллов тяжелое течение бактериального SOFA 3-7 воспалительного процесса. Включено 14 больных – 7 женщин и 7 мужчин, медиана возраста в группе составила 69 (ИР 63-77) лет. Оценка тяжести состояния больных по шкале APACHE II составила 14 (ИР 9-16) баллов. Документированные очаги бактериальной инфекции: пневмония (n=8), перитонит (n=4), перитонит в сочетании с пневмонией (n=2).

Подгруппа SOFA 8 баллов - крайне тяжелое течение бактериального воспалительного процесса. В группу включено 18 больных – 9 женщин и 9 мужчин, медиана возраста в группе составила 63 (ИР 57-74) года. По шкале APACHE II оценка тяжести состояния больных на момент забора образца крови составила - 26 (ИР 24-29) баллов. Верифицированы следующие очаги инфекции: пневмония (n=14), перитонит (n=2), перитонит в сочетании с пневмонией (n=2).

Подробная характеристика подгрупп представлена в табл. 5. По возрасту подгруппы не различались, показатели лейкоцитоза оказались значительно выше в подгруппе SOFA 8, чем в подгруппах SOFA 0-2 и 3-7. По показателям температуры тела и частоты сердечных сокращений достоверное повышение обнаружено в подгруппе SOFA 8, в сравнении SOFA 0-2. Подгруппы значительно различались по значению шкалы APACHE II, характеризующей общую тяжесть состояния, что подтверждает адекватность разделения выборки на подгруппы. Концентрации ФУК, ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК в каждой последующей подгруппе были значительно выше, чем в предыдущей: так в группе SOFA 3-7 концентрации всех ФКК были в 2 и более раз выше, а в подгруппе SOFA 8-15 в 10 и более раз выше, чем в подгруппе SOFA 0-2 (рис.2).

–  –  –

* 26,9 * 15 15 15 15 * * * 8,7 * * * * * 10 10 10 10 5,9 * 5,3 4,8 2,3 2,2 1,9 1,6 1,0 0,5

–  –  –

* - р0.05 в сравнении с другими подгруппами, достоверность отличия по критерию Манна-Уитни Рис. 2. Сопоставление показателей фенилкарбоновых кислот между подгруппами

–  –  –

лабораторными показателями, характеризующими течение воспалительной реакции (лейкоцитоз, температура тела, ЧСС). Для ФМК обнаружена высокая корреляция с количеством зафиксированных общеклинических признаков воспаления (табл. 6).

Ряд работ свидетельствует о повышении уровня ФУК в крови и моче больных с хронической почечной недостаточностью [Scholze A., 2007; Aronov P.A., 2011]. Креатинин является одним из маркеров, используемых в клинике для оценки функции почек. Для ФУК, ФМК и п-ГФУК выявлена умеренная корреляция с уровнем креатинина, а для п-ГФМК – высокая. Полученные данные свидетельствуют о прямой взаимосвязи уровня ФКК с уровнем креатинина (табл.

6).

В связи с наличием в литературе данных о повышенной экскреции ФМК, пГФУК и п-ГФМК с мочой у больных с циррозом печени [Leibich H.M., 1985;

Muting D., 1985] проведена оценка связи сывороточных уровней ФКК и общего билирубина – косвенного маркера печеночной недостаточности. Умеренная взаимосвязь обнаружена с уровнем ФМК. На данном этапе полученные результаты не позволяют делать выводов о взаимосвязи уровней ФКК с функцией печени (Табл. 6).

В эксперименте Beppu Y. и соавторов показано снижение артериального давления у крыс при трансдуоденальном введении ФМК [Beppu Y., 2013]. С учетом известного факта, что критически низкие показатели артериального давления фиксируются у больных с инфекцией в состоянии септического шока, нами проведен корреляционный анализ, который выявил обратную взаимосвязь уровней ФКК с показателями систолического и диастолического артериального давления. При этом заметная обратная корреляция обнаружена для показателей артериального давления с уровнем п-ГФМК (табл. 6).

С целью выявления взаимосвязи уровня фенилкарбоновых кислот и тяжести гнойно-воспалительного процесса проведен корреляционный анализ с показателями шкал SOFA и APACHE II, характеризующих тяжесть состояния больных. Выявлена высокая прямая корреляция уровней ФКК с показателями шкал оценки тяжести состояния больных (табл. 6).

–  –  –

Добавки были подобраны с учетом диапазона концентраций ФКК, фиксируемых у здоровых и больных людей.

Для оценки результатов исходную ФАН и исходное ФЧ (среднее пяти определений) принимали за 100%, при этом экспериментальные ФАН и ФЧ рассчитывали как процент от исходных показателей.

Контроль поглотительных функций нейтрофилов подтверждали параллельным исследованием ФАН и ФЧ под действием индукторов фагоцитарной активности - использовали зимозан и ЛПС (липополисахарид Klebsiella pneumoniae

- SIGMA, Германия), достигаемая концентрация которых в образце составила - 0,1 и 0,01 мкг/мл. Под действием ЛПС 0,1 и 0,01 мкг/мл, и Зимозана 0,1 мкг/мл выявлено повышение фагоцитарной активности нейтрофилов с p0,0005, а при более низкой концентрации Зимозана - 0,01 мкг/мл рост ФАН с p0,021 (Критерий знаков). Под действием ЛПС в обеих концентрациях отмечена тенденция к росту количества клеток, поглотивших более 10 частиц латекса.

Результаты экспериментального исследования эффектов ФКК на ФАН и ФЧ отражены на рис. 3 и 4 в табл. 8 и 9 Важным результатом данного эксперимента является обнаруженное снижение количества фагоцитирующих нейтрофилов под влиянием ФУК, п-ГФУК и ФМК в среднем на 11%. Для двух кислот (ФПК и п-ГФМК) такого эффекта не наблюдалось. На интенсивность поглотительной способности нейтрофилов (ФЧ) статистически значимо оказывали влияние п-ГФУК, ФМК и п-ГФМК - в среднем снижение на 26%. Несмотря на то, что п-ГФМК не оказывала воздействие на количество фагоцитирующих клеток, качество их поглотительной способности резко снижалось, причем с дозозависимым эффектом (рис. 3 и 4). При добавлении ФУК наблюдалась лишь тенденция к снижению ФЧ.

Так результаты проведенного эксперимента подтвердили, что клинически значимые ФКК в концентрациях, характерных для больных людей с бактериальными воспалительными процессами, способны неблагоприятно влиять на фагоцитарную функцию нейтрофилов, что особенно характерно для гидроксилированных кислот (ФМК, п-ГФУК, п-ГФМК). Возможно, способность к продукции ФКК является одним из приспособительных механизмов бактерий в защите от эффекторных клеток иммунной системы человека.

При сопоставлении с клиническими данными важно отметить, что именно гидроксилированные фенилкарбоновые кислоты многократно повышаются у больных с инфекционными процессами. Эти же кислоты в большей степени коррелируют с тяжестью состояния больных. В результате исследований установлено, что в патофизиологических механизмах снижения иммунореактивности, а именно – первого звена иммунитета – фагоцитоза, могут участвовать гидроксилированнные фенилкарбоновые кислоты. Таким образом,

–  –  –

повышение концентрации любой из трех гидроксилированных ФКК (ФМК, пГФУК, п-ГФМК) может способствовать тяжелому течению бактериальной инфекции и развитию неблагоприятного исхода у больных в критическом состоянии.

ВЫВОДЫ

1. Для клинических исследований существующая методика ГХ-МС измерения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови модифицирована и адаптирована, что позволяет использовать метод газовой хроматографии с пламенноионизационным детектированием для внедрения в практику (при измерении ФМК, п-ГФУК и п-ГФМК среднеквадратичное отклонение повторяемости r и воспроизводимости R не превышает 5% и 13%, соответственно);

2. Определены нормальные значения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови здоровых людей методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационным детектированием. Показано, что клинически значимые фенилкарбоновые кислоты всегда присутствуют в крови здорового человека и поддерживаются организмом на стабильном низком уровне. Установлены медианы нормальных показателей фенилкарбоновых кислот: ФМК 0,63 М; ФУК 1,41; п-ГФУК 0,98 М; п-ГФМК 1,47 М;

3. Развитие локального гнойно-воспалительного процесса мягких тканей сопровождается повышением уровня фенилкарбоновых кислот (ФУК, ФМК, пГФУК, п-ГФМК) в сыворотке крови по сравнению со здоровыми донорами (p0,02);

4. Уровень фенилкарбоновых кислот отражает тяжесть бактериального воспалительного процесса, достигая максимальных значений при крайне тяжелом течении инфекции. Обнаружена высокая корреляционная взаимосвязь концентраций ФКК с общей тяжестью состояния (APACHE II, rs от 0,733 до 0,872, р=0,001) и степенью органных нарушений (SOFA, rs от 0,668 до 0,834, р=0,001) при бактериальных инфекционных процессах;

5. Фенилкарбоновые кислоты обладают иммунотропной активностью, снижая фагоцитарную активность нейтрофилов (в эксперименте in vitro). Увеличение концентрации ФУК, п-ГФУК, ФМК приводит к уменьшению количества фагоцитирующих клеток. Повышение концентрации п-ГФУК, ФМК, п-ГФМК снижает поглотительную способность нейтрофилов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные результаты могут быть рекомендованы для аттестации 1.

модифицированной методики измерения фенилкарбоновых кислот в метрологической службе;

Установленные нормальные значения фенилкарбоновых кислот в сыворотке 2.

крови здоровых доноров могут быть использованы в научно-исследовательских работах для изучения роли этих метаболитов в различных патологических процессах, а также в клинических исследованиях с лечебно-диагностической целью.

Модифицированная методика определения фенилкарбоновых кислот может 3.

быть основой для разработки новых медицинских технологий;

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Белобородова Н.В. Лабораторная диагностика бактериальной интоксикации 1.

методом газохроматографического анализа крови / Белобородова Н.В., Возиян А.Ю., Осипов А.А. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2012. - №9. - с. 79.

Белобородова Н.В. Биологические свойства некоторых 2.

низкомолекулярных ароматических микробных метаболитов, ассоциированных с сепсисом / Белобородова Н.В., Осипов А.А., Бедова А.Ю. // Антибиотики и химиотерапия. - 2013. - №7-8. - с. 36-49.

Осипов А.А. Участие метаболитов микробиоты в развитии критического 3.

состояния у пострадавших с черепно-мозговой травмой / Осипов А.А., Власенко А.В., Черневская Е.А., Бедова А.Ю., Гецина М.Л., Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В. // Медицинский алфавит. - 2013. - Т.26. - №4. - с. 12-15.

4. Sarshor Y.N. New criteria of bacterial load in critically ill patients / Sarshor Y.N., Beloborodova N.V., Bedova A.Y., Osipov A.A., Chernevskaya E.A., Getsina M.L. // SHOCK. - 2013. - Vol.40. - Suppl.1. - p. 31.

Бедова А.Ю. Адаптация газохроматографических методик определения 5.

сепсис-ассоциированных ароматических микробных метаболитов в сыворотке крови / Бедова А.Ю., Белобородова Н.В., Гецина М.Л., Осипов А.А., Оленин А.Ю.

// Клиническая лабораторная диагностика. - 2013. - №9. - с. 60.

Осипов А.А. Диагностика эндогенной интоксикации у больных в 6.

критических состояниях по уровню фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови / Осипов А.А., Бедова А.Ю., Гецина М.Л., Иванов Д.А., Белобородова Н.В. // Сборник тезисов Научно-практическая конференция молодых ученых «Современные методы диагностики и лечения в реаниматологии». - М.: 2013. с.35-37.

Бедова А.Ю. Новые биомаркеры микробного происхождения в мониторинге 7.

бактериальной интоксикации при критических состояния / Бедова А.Ю., Осипов А.А., Саршор Ю.Н., Гецина М.Л. // Сборник научных работ Всероссийской научнопрактической конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки». – Ярославль: 2013. с. 252.

Гецина М.Л. Оптимизация методики пробоподготовки сыворотки крови для 8.

анализа на содержание фенилкарбоновых кислот методом газовой хроматографии с целью внедрения в клиники / Гецина М.Л., Бедова А.Ю., Осипов А.А., Ревельский А.И., Оленин А.Ю., Белобородова Н.В. // Сборник трудов Всероссийской конференции «Аналитическая хроматография и капиллярный электрофорез». – Краснодар: 2013. - с.109.

Бедова А.Ю. Динамика сепсис-ассоциированных микробных метаболитов у 9.

больных в критических состояниях / Бедова А.Ю., Осипов А.А., Саршор Ю.Н., Гецина М.Л., Белобородова Н.В. // Сборник публикаций IX Ежегодной всероссийской конференции с международным участием «Гнойно-септические заболевания и инфекционные осложнения при критических состояниях». - М.:

2013. - с. 138-140.

10. Иванов Д.А. Динамика ароматических микробных метаболитов (амм) у кардиохирургических больных, оперированных в условиях искусственного кровообращения, с неосложненным течением послеоперационного периода / Иванов Д.А., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Гецина М.Л.// Сборник публикаций IX Ежегодной всероссийской конференции с международным участием «ГНОЙНО-СЕПТИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ и инфекционные осложнения при критических состояниях». - М.: 2013. - с. 172-173.

11. Саршор Ю.Н. Новый критерий бактериальной нагрузки у больных в отделении общей реанимации / Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Осипов А.А., Черневская Е.А., Гецина М.Л. // Сборник публикаций IX Ежегодной всероссийской конференции с международным участием «ГНОЙНОСЕПТИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ и инфекционные осложнения при критических состояниях». - М.: 2013. - с. 210.

12. Бедова А.Ю. Адаптация газохроматографического метода определения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови к использованию в клинике / Бедова А.Ю., Осипов А.А., Гецина М.Л., Оленин А.Ю., Белобородова Н.В. // Труды « Второго съезда аналитиков России». - М.: 2013. - с. 248.

13. Белобородова Н.В. Нарушение биотрансформации ароматическихметаболитов при критическом состоянии макроорганизма / Белобородова Н.В., Иванов Д.А.,Осипов А.А., Бедова А.Ю., Гецина М.Л. // Сборник тезисов 15-й Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях». - М.: 2013. - с. 17-18.

14. Саршор Ю.Н. Оценка микробной нагрузки по уровню фенилкарбоновых кислот у реанимационных больных / Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Осипов А.А., Черневская Е.А., Гецина М.Л. // Сборник материалов Первой конференции Российского национального общества по изучению шока. - М.: 2013.

- с. 59-60.

15. Иванов Д.А. Мониторинг микробной нагрузки по уровню ароматических микробных метаболитов (АММ) у кардиохирургических больных с неосложненным течением послеоперационного периода // Иванов Д.А., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Гецина М.Л. // Сборник материалов Первой конференции Российского национального общества по изучению шока. - М.: 2013.

- с. 26-28.

16. Moroz V. Microbial phenylcarboxylic acids as potential participants of sepsisinduced organ dysfunction / Moroz V., Beloborodova N., Osipov A., Vlasenco A., Sarshor Y., Chernevskaya E., Getsina M., Bedova A. // 24th European Congress of

Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Spain. On-line library ECCMID 2014:

R003.

17. Sarshor Y. Value of microbial metabolites in blood serum as criteria for bacterial load in the pathogenesis of hemodynamic disorders in critically ill patients / Sarshor Y., Beloborodova N., Moroz V., Osipov A., Bedova A., Chernevskaya E., Getsina M. // Critical Care. – 2014. - 18(Suppl 1). – р. P208.

18. Хорошилов С.Е. Элиминация низкомолекулярных ароматических метаболитов во время экстракорпоральной детоксикации у больных ОПН при сепсисе / Хорошилов С.Е., Белобородова Н.В., Никулин А.В., Бедова А.Ю., Гецина М.Л., Осипов А.А. // Сборник материалов Девятой международной конференции «Актуальные аспекты экстракорпорального очищения крови в интенсивной терапии». - М.: 2014. - с. 44-45.

19. Алексашкина Т.Н. Ароматические метаболиты отражают тяжесть гнойновоспалительных заболеваний / Алексашкина Т.Н., Бедова А.Ю., Белобородова Н.В.

// Сборник публикаций X Ежегодной конференции с международным участием «Проблема инфекции при критических состояниях». - М.: 2014. - с. 48-49.

20. Белобородова Н.В. Интеграция метаболизма человека и его микробиоты / Белобородова Н.В., Мороз В.В., Бедова А.Ю., Осипов А.А., Черневская Е.А., Дмитриева И.Б., Федотчева Н.И., Ревельский А.И., Оленин А.Ю.// Инфекция и иммунитет. - 2014. - Сентябрь, Специальный выпуск. – с. 67.

21. Бедова А.Ю. Новый способ оценки микробной нагрузки в реаниматологии / Бедова А.Ю., Алексашкина Т.Н., Черневская Е.А., Саршор Ю.Н., Белобородова Н.В. // Сборник тезисов докладов. XVI Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях». - М.:

2014. - c. 16.

22. Белобородова Н.В., Взаимосвязь артериальной гипотензии и микробной нагрузки у больных, поступающих в отделение реаниматологии. Белобородова Н.В., Мороз В.В., Карпун Н.А., Саршор Ю.Н., Бедова А.Ю., Черневская Е.А.

Сборник тезисов докладов XVI Всероссийской конференции с международным участием «Жизнеобеспечение при критических состояниях». - М.: 2014. - c. 17.

23. Beloborodova N. Tyrosine metabolism disorder and the potential capability of anaerobic microbiota to decrease the value of aromatic metabolites in critical ill patients / Beloborodova N., Moroz V., Osipov A., Bedova A., Sarshor Y., Vlasenko A., Olenin A.

// Critical Care, - 2014. - 18(Suppl 2). - р. P60

24. Патент на изобретение «Способ лабораторной оценки эффективности лечения интоксикации у реаниматологических больных» № 2522877 получен 21.05.2014 Белобородова Н. В., Возиян А.Ю., Оленин А.Ю., Осипов А.А., Прядко Ю.Н., Ревельский А.И. Опубликован 20.07.2014 г. Бюллетень № 20

25. Патент на изобретение «Способ лабораторной оценки эффективности антибактериальной терапии» № 2543335 получен 27.01.2015 Мороз В.В., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Осипов А.А., Саршор Ю.Н., Иванов Д.А.

Опубликован 27.02.2015 Бюллетень № 6

26. Мороз В.В. Разработка и адаптация к условиям клинической лаборатории методик газо-хроматографического определения фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови / Мороз В.В., Белобородова Н.В., Бедова А.Ю., Ревельский А.И., Гецина М.Л., Осипов А.А., Саршор Ю.Н., Бучинская А.А., Оленин А.Ю. // Журнал аналитической химии. – 2015. – Т.70.

- №4. - с. 418–425.

27. Белобородова Н.В. Нормальный уровень сепсис-ассоциированных фенилкарбоновых кислот в сыворотке крови человека / Белобородова Н.В., Мороз В.В., Осипов А.А., Бедова А.Ю., Оленин А.Ю., Гецина М.Л., Карпова О.В., Оленина Е.Г. // Биохимия. – 2015. – Т.80. - №3. - с. 449–455.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

БСТФА – (N,O-бис-триметилсилил) трифторацетамид ГХ-МС – газовая хромато-масс-спектрометрия ГХ-ПИД – газовая хроматография с пламенно-ионизационным детектированием ИКМТ – инфекция кожи и мягких тканей ИР – интерквартильный размах ЛПС – липополисахарид ОРИТ – отделение реанимации и интенсивной терапии п-ГФМК – пара-гидроксифенилмолочная кислота п-ГФУК – пара-гидроксифенилуксусная кислота ФАН – фагоцитарная активность нейтрофилов ФКК – фенилкарбоновые кислоты ФМК – фенилмолочная кислота ФПК – фенилпропионовая кислота ФУК – фенилуксусная кислота ФЧ – фагоцитарное число ЧСС – частота сердечных сокращений APACHE II – Acute Physiology and Chronic Health Evaluation SOFA – Sepsis-related Organ Failure Assessment WBC – white blood cells



Похожие работы:

«БОГОВИН Лариса Викторовна МОТИВАЦИЯ К ЛЕЧЕНИЮ И КООПЕРАТИВНОСТЬ В ДОСТИЖЕНИИ КОНТРОЛЯ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ 14.01.04 – внутренние болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Владивосток – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАН, Колосов Виктор Павлович...»

«СТЕФАНОВА Наталья Анатольевна ИССЛЕДОВАНИЕ КРЫС OXYS КАК МОДЕЛИ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА. ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ РАЗВИТИЯ 14.03.03 – патологическая физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Новосибирск –2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук», г. Новосибирск. Научный...»

«Саргсян Оксана Джемсиовна Особенности ангиогенных факторов и цитокинового баланса у женщин в динамике физиологической и осложненной беременности в зависимости от пола плода 03.03.01 физиология 14.01.01 акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Министерства...»

«Фролов Александр Акимович Функциональные особенности респираторной системы беременных в предродовом периоде и в родах в зависимости от стереоизомерии женского организма и их влияние на состояние плода 03.03.01 физиология 14.01.01 акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2015 г. Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и...»

«ПАВЛОВА ОЛЬГА НИКОЛАЕВНА РОЛЬ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ, ШРОТОВ СЕМЯН ВИНОГРАДА И КУНЖУТА, А ТАКЖЕ ГУМАТА КАЛИЯ В МОДУЛЯЦИИ НЕКОТОРЫХ СОСТАВЛЯЮЩИХ ГОМЕОСТАЗА 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Казань – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» Научный...»

«Щербаков Денис Леонидович ВЛИЯНИЕ НЕЙРОМЕДИАТОРОВ НА ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ И АНТИОКИСЛИТЕЛЬНУЮ АКТИВНОСТЬ ПРИ ИММОБИЛИЗАЦИОННОМ СТРЕСС-ВОЗДЕЙСТВИИ У КРЫС РАЗНОГО ВОЗРАСТА 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Екатеринбург – 2015 Работа выполнена на кафедре биохимии ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации и в лаборатории антивозрастных...»

«ПОХАЧЕВСКИЙ АНДРЕЙ ЛЕОНИДОВИЧ АДАПТАЦИОННАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ СЕРДЕЧНОГО РИТМА В ДИНАМИКЕ НАГРУЗОЧНОЙ ТОЛЕРАНТНОСТИ У СТАРШИХ ШКОЛЬНИКОВ И СТУДЕНТОВ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук Рязань, 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Рязанский государственный медицинский университет имени академика И.П.Павлова» Министерства здравоохранения...»

«АРТЕМЕНКОВ Алексей Александрович КОНЦЕПЦИЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ И ПОВЫШЕНИЯ АДАПТАЦИОННЫХ ВОЗМОЖНОСТЕЙ ЧЕЛОВЕКА 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Смоленск Работа выполнена на кафедре теории и методики физической культуры и спорта ФГБОУ ВПО «Череповецкий государственный университет» Научный консультант: Брук Татьяна Михайловна, доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой...»

«МИТРОШИНА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА АНТИГИПОКСИЧЕСКОЕ И НЕЙРОПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ N-АРАХИДОНОИЛДОФАМИНА ПРИ МОДЕЛИРОВАНИИ ОСТРОЙ ГИПОКСИИ IN VIVO И IN VITRO 03.03.01 – физиология 03.03.04клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2014 г. Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Нижегородская государственная медицинская...»

«ЗАХАРЧЕНКО Дмитрий Валерьевич ИЗМЕНЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ОКУЛОМОТОРНЫХ И ДВИГАТЕЛЬНЫХ РЕАКЦИЙ ОПЕРАТОРА ПОД ДЕЙСТВИЕМ АЛКОГОЛЯ 03.03.01 – Физиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена в лаборатории нейробиологии сна и бодрствования (зав. лабораторией – доктор биологических наук В. Б. Дорохов) Института высшей нервной деятельности и нейрофизиологии Российской Академии Наук (директор – член-корреспондент РАН...»

«ФЕДОРОВА Екатерина Васильевна КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ У ЖЕНЩИН С СИСТЕМНОЙ КРАСНОЙ ВОЛЧАНКОЙ И СОВРЕМЕННАЯ АКУШЕРСКАЯ ТАКТИКА 14.01.01 – акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2015 Работа выполнена в 1 отделении акушерском патологии беременности федерального государственного бюджетного учреждения «Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика...»

«Долгова Анна Сергеевна ЗАЩИТА ЭКСПРЕССИИ ГЕТЕРОЛОГИЧНЫХ ГЕНОВ В ТРАНСГЕННЫХ РАСТЕНИЯХ ПОСРЕДСТВОМ ДНК-ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ, ТЕРМИНИРУЮЩИХ ТРАНСКРИПЦИЮ. Специальность 03.01.07 – молекулярная генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва Работа выполнена в лаборатории регуляции генетических процессов Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биологии гена Российской академии наук Научный руководитель:...»

«Буряков Николай Петрович Физиологическое обоснование эффективности использования кормов с повышенным уровнем нитратов в рационах крупного рогатого скота 03.03.01 – Физиология 06.02.08 – Кормопроизводство, кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Дубровицы – 2010 Работа выполнена на кафедре кормления животных зооинженерного факультета ФГОУ ВПО Российского государственного...»

«Нагаева Элина Ильдаровна ПОИСК И ИЗУЧЕНИЕ ЛИГАНДОВ ПРОТОН-АКТИВИРУЕМЫХ ИОННЫХ КАНАЛОВ Специальность 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург Работа выполнена в лаборатории биофизики синаптических процессов Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова Российской академии наук Научный руководитель: Тихонов Денис Борисович...»

«Борисевич Сергей Александрович ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ СВОЙСТВА КОЖИ ПРИ ЗАНЯТИЯХ СПОРТОМ 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена на кафедре теории и методики прикладных видов спорта педагогического института физической культуры и спорта Государственного автономного образовательного учреждения высшего образования города Москвы «Московский городской педагогический университет» (ГАОУ ВО МГПУ)...»

«ЯБЛОНСКАЯ Елена Карленовна ЭКЗОГЕННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ПРОДУКЦИОННОГО ПРОЦЕССА, КАЧЕСТВА ЗЕРНА И УСТОЙЧИВОСТИ К ФИТОПАТОГЕНАМ ОЗИМОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ Специальность 03.01.05 – физиология и биохимия растений АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук. Краснодар, 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» Научный...»

«Иванов Андрей Дмитриевич ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОТЕКТОРНЫХ СВОЙСТВ НЕЙРОТРОФИНОВ ПРИ УГНЕТЕНИИ СИНАПТИЧЕСКОЙ ПЛАСТИЧНОСТИ В ГИППОКАМПЕ БЕТААМИЛОИДНЫМ ПЕПТИДОМ Специальность 03.03.01 – «Физиология» Специальность 03.01.03 – «Молекулярная биология» Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в лаборатории нейрофизиологии обучения и в лаборатории молекулярной нейробиологии Института Высшей Нервной Деятельности и...»

«БОБОХОНОВ РУСТАМ САТТОРОВИЧ ПОВЫШЕНИЕ ПРОДУКТИВНОСТИ КАРТОФЕЛЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СПОСОБОВ УСИЛИВАЮЩИХ АДАПТАЦИОННЫЕ РЕАКЦИИ РАСТЕНИЙ В УСЛОВИЯХ СТРЕССА Специальность 06.01.01.– общее земледелие, растениеводство АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора сельскохозяйственных наук Душанбе – 2015 Работа выполнена на кафедре физиологии и биотехнологии сельскохозяйственных культур Таджикского аграрного университета им. Ш.Шотемур (1993-2014гг). Научный кондоктор...»

«Хаccан Муcтафа Cалахелдин Абделхамид ГЕПАТОПPОТЕКТОPНЫЕ И АНТИОКСИДАНТНЫЕ ЭФФЕКТЫ ЭКСТРАКТОВ ЛОТОCА ОPЕХОНОCНОГО 03.03.01 – физиология, 03.01.04 биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Астрахань 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханский государственный университет» Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор...»

«Тян Юлия Аркадьевна Влияние стереоизомерии женского организма на репродуктивную функцию при нормальной и сниженной фертильности 03.03.01 Физиология 14.01.01 Акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Научные...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.