WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 9 |

«МОЛЕКУЛЯРНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПАТОГЕНЕЗА ХАНТАВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ

УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ «КАЗАНСКИЙ (ПРИВОЛЖСКИЙ)

ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

На правах рукописи

Хайбуллина Светлана Францевна

МОЛЕКУЛЯРНЫЕ И КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПАТОГЕНЕЗА

ХАНТАВИРУСНЫХ ИНФЕКЦИЙ



14.03.03 – патологическая физиология Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Научный консультант:

д.б.н., доцент Ризванов А.А.

КАЗАНЬ – 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ

1.1 Актуальность исследования

ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.2. Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) и хантавирусный легочный синдром (ХЛС)

2.2.1. Эпидемиология хантавирусов

2.2.2. Серологическая прослойка населения проживающего в эндемичных районах

2.2.3. Вирус и структура вириона

2.2.4. Хантавирусы и их естественные хозяева

2.2.5. Инфицирование человека

2.2.6. Рекомбинация геномов хантавирусов

2.2.7. Клинические проявления хантавирусной инфекции

2.2.8. Патогенез ГЛПС и ХЛС

2.2.9. Иммунный ответ к хантавирусным антигенам

2.2.10. Генетические маркеры патогенеза хантавирусной инфекции

2.2.11. Роль цитокиов в патогенезе хантавирусой инфекции

2.2.12. Лечение хантавирусной инфекции и вакцинация

ГЛАВА 3. MАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Клеточные линии и реагенты

3.2. Сыворотки крови человека

3.3. Вирус

3.4. Метод непрямого бляшкообразования

3.5. Выделение общей РНК

3.6. Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени (ПЦР-РВ)

3.7. Синтез кДНК

3.8. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

3.9. Анализ ДНК-чипов

3.11. Иммунофлуоресцентный анализ

3.12. Иммуногистохимический анализ

3.13. Получение клеточной линии, экспрессирующей р78

3.14. Твёрдофазный иммуноферментный анализ (ИФА)

3.15. Анализ изменения электрофоретической подвижности (EMSA)

3.16. Мультиплексный анализ

3.17. Микоплазменный тест

3.18. Иммуноблотинг

3.20. Mодифицированный анализа белка по Лоури

3.21. Получение поликлональных антител к гликопротеину G2.

3.22. Получение реассортантных вирусов in vitro

3.23. Клональная селекция хантавирусов

3.24. Скрининг вирусных реассортантов

3.25. Анализ TUNEL

3.26. Статистический анализ

ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1. Получение и исследование реассортантов хантавирусов

4.1.1 Выявление реассортации у вирусов ANDV и SNV

4.1.2. Иммуногистохимический анализ реассортанта V1

4.1.3 Эффективность репликации реассортантов в клетках Vero E6

4.2. ИССЛЕДОВАНИЕ ПАТОГЕНЕЗА ХАНТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ IN VITRO

4.2.1 Влияние ФНО- на накопление нуклеокапсидного белка SNV в культуре клеток Vero E6. 84 4.2.3 Определение влияния ФНО- на проницаемость монослоя HUVEC

4.2.4 Инфицирование альвеолярных макрофагов человека вирусом SNV

4.2.5 Синтез ФНО- инфицированными SNV и обработанными ЛПС альвеолярными макрофагами человека

4.2.6 Эффект надосадочной жидкости, взятой от инфицированных SNV и обработанных ЛПС альвеолярных макрофагов, на проницаемость монослоя клеток HUEVEC

4.2.7 Регуляция экспрессии клеточных генов в эндотелиальных клетках вирусами SNV и PHV. 98 4.2.8 Следующие группы генов изменялись под действием хантавирусной инфекции............... 105 4.2.9 Анализ TaqMan экспрессии отдельных генов

4.2.10 Влияние репликации вирусов на внутриклеточный уровень мРНК гена CCL5................. 110 4.2.11 Вирус AND стимулирует экспрессию индуцируемого интерфероном белка MxA в клетках эндотелия

4.2.12 Эффективность репликации хантавирусов в клетках Vero E6, A549 и HUVEC................. 112 4.2.13 Влияние хантавирусной инфекции на транскрипцию гена MxA

4.2.14 Влияние репликации вирусов на экспрессию гена р78





4.2.15 Влияние репликации ANDV на транслокацию IRF-3 в ядро клетки

4.2.16 Влияние хантавирусной инфекции на внутриклеточные уровни белка р78

4.2.17 Влияние экспрессии р78 на репликацию ANDV в клетках Vero E6

4.2.18 Внутриклеточная локализация белка р78 в ANDV инфицированных клетках HUVEC.... 122 4.2.19 Влияние хантавирусной инфекции на активацию факторов ядерной транскрипции PML, SP100 и ISG-20 в клетках HUVEC in vitro

4.2.21 Колокализация PML с SP100 и его частичная колокализация с DAXX в инфицированных хантавирусом клетках HUVEС

4.2.22 PML тесно связан с ISG-20 в инфицированных хантавирусом клетках HUVEC............... 128 4.2.24 Активация PML требует экспрессии хантавирусного белка

4.2.25 PML и SUMO имеют различную локализацию в инфицированных хантавирусом клетках HUVEC

4.2.26 Изучение цитокинового профиля сывороток больных ГЛПС

4. 3.1. АНАЛИЗ МЕХАНИЗМОВ НИЗКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА РИБАВИРИНА

ПРИ ХАНТАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

4.3.1. Неэффективность рибавирина в ингибировании выделения ФНО-, вызванного активацией RANTES и интерлейкина-6 в инфицированных вирусом АND эндотелиальных клетках пупочного канатика человека

4.3.2 Препарат Рибавирин подавляет транскрипцию гена CCL5 в клетках HUVEC, инфицированных вирусом ANDV

4.3.3 Эффект различных концентраций препарата Рибавирин на накопление S-сегмента мРНК вируса ANDV и CCL5 в клетках HUVEC

4.3.4 Влияние ФНO- и препарата Рибавирин на активацию NF-B

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

ГЛАВА 1. ВВЕДЕНИЕ

–  –  –

Проблема терапии вирусных заболеваний остается актуальной и недостаточно исследованной в медицине. Эта актуальность обусловлена, с одной стороны, высокой встречаемостью этого вида патологии, а с другой — отсутствием эффективных терапевтических подходов для их лечении.

Вирусные геморрагические лихорадки (ВГЛ) являются острыми заболеваниями, характеризующимися нарушениями молекулярных и клеточных процессов, регулирующих реологические свойства крови. Эндотелиальные клетки являются мишенью для вирусов, вызывающих ВГЛ (N.A. Dalrymple et al., 2012; R. Rodrigues et al., 2012). Проникнув в клетку, вирусы используют внутриклеточные механизмы для собственной репликации, таким образом, внося нарушения в ее нормальные физиологические процессы. Несмотря на интенсивные исследования, молекулярные механизмы патогенеза ВГЛ остаются недостаточно исследованными.

Именно поэтому до сих пор не существует эффективных методов лечения этих заболеваний.

Начало 21-го века ознаменовалось значительным расширением эпидемических ареалов геморрагических лихорадок. Например, значительное распространение получила Конго-Крымская геморрагическая лихорадка (R.M. Vorou, 2009). Были отмечены изменения в ареалах распространения хантавирусных инфекций, таких как геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) в странах Европы и в России (T.K. Dzagurova et al., 2008). На основании этих данных можно сделать заключение, что в настоящее время происходит интенсивное распространение возбудителей ВГЛ. Основной причиной распространения ВГЛ являются изменение климата, расширение производственной деятельности человека и развитие туризма.

Таким образом, человечество стоит перед новым вызовом 21 века: стремительным распространением ВГЛ на фоне отсутствия эффективных терапевтических средств.

В Российской Федерации ГЛПС является наиболее значимой из ВГЛ. Республика Татарстан относится к зоонозным очагам ГЛПС, где инфекционным агентом является хантавирус Пуумала (англ. Puumala virus, PUUV), вызывающий легкую форму заболевания с летальным исходом менее 0,4% (N.A. Khismatullina et al., 2015). Исследования тканей умерших пациентов выявило наличие вирусных антигенов в эндотелиальных клетках капилляров, а дальнейшие исследования in vitro подтвердили высокую чувствительность этих клеток к инфицированию хантавирусами (M. Mori et al., 1999; S.R. Zaki et al., 1995). Многочисленные исследования тканей умерших от ГЛПС выявили отсутствие поражений, связанных с репликацией вируса (M. Mori, et al., 1999; S.R. Zaki, et al., 1995). Поэтому было высказано предположение, что патогенез хантавирусной инфекции определяется реакцией организма на проникновение вируса и его репликацию. На основании накопленных данных была предложена гипотеза «цитокинового шторма» для объяснения патогенеза этого заболевания (L.T. Figueiredo et al., 2014). Считается, что активация провоспалительных цитокинов в ответ на хантавирусную инфекцию приводит к нарушению регуляции гемодинамических параметров, стимулируя иммунный ответ и активируя эндотелиальные клетки. Это в совокупности может приводить к нарушениям физиологических процессов регуляции коагуляционного каскада, приводящим к агрегации кровяных пластинок (тромбоцитов) и развитию коагулопатии, проявляющейся в виде геморрагического синдрома.

Значительные успехи в нашем понимании механизмов иммунного ответа и факторов его регуляции существенно изменили подходы в методах лечения многих заболеваний. Например, получило широкое распространение применение антител к различным воспалительным цитокинам при лечении ревматоидного артрита, а моноклональные антитела к ИЛ-5 используются при лечении бронхиальной астмы (G. Garcia et al., 2013; R.N. Maini et al., 2000). Одним из ярких примеров терапевтического использования моноклональных антител является лечение ряда аутоиммунных заболеваний антителами к интерферону (B. Skurkovich et al., 2003; S. Skurkovich et al., 2005). Однако принципы лечения ГЛПС и других хантавирусных инфекций остаются неизменными и малоэффективными в течение последних 50 лет и включают, в основном, симптоматическую терапию, которая не способна подавлять вирусную репликацию и предотвращать патологическое действие цитокинов (Z. Bi et al., 2008; C.B. Jonsson et al., 2008).

Основной причиной отсутствия новых методов лечения хантавирусных инфекций, как уже отмечено, является наша ограниченность в понимания патогенеза заболевания. Это связано, в основном, с отсутствием модели на животных in vivo, а проведение исследований in vitro возможно только в лабораториях с повышенной степенью биобезопасности.

Таким образом, несмотря на многолетние исследования, молекулярные основы патогенеза хантавирусных инфекций остаются во многом неизвестными. Именно отсутствие глубокого понимания молекулярных механизмов ГЛПС является основной причиной отсутствия патогномоничной терапии и методов предупреждения заболевания. Поэтому существует необходимость всесторонних исследований патогенеза ГЛПС с целью выявления и использования маркеров диагностики, лечения и предупреждения болезни.

Цель работы: выявление молекулярных и клеточных механизмов патогенеза хантавирусной инфекции.

Задачи исследования:

1. Анализ транскрипционной активности в эндотелиальных клетках человека, инфицированных патогенными и непатогенными хантавирусами.

2. Анализ механизмов активации ядерных транскрипционных факторов в эндотелиальных клетках человека, инфицированных различными хантавирусами.

3. Анализ механизмов антивирусной защиты, опосредованной активацией интерферониндуцированных факторов в клетках человека, инфицированных хантавирусами.

4. Изучение механизмов активации интерферон-индуцированных белков в клетках, инфицированных хантавирусами.

5. Изучение роли сывороточных цитокинов в механизме иммунного ответа против хантавирусных инфекций.

6. Выявление причин низкой эффективности лечения хантавирусной инфекции препаратом Рибавирин.

7. Анализ особенностей репликации реассортантных вирусов между различными патогенными хантавирусами.

Научная новизна Новыми являются данные по транскрипционной активности в эндотелиальных клетках, инфицированных патогенными и непатогенными для человека хантавирусами. Впервые показана активация ядерных транскрипционных факторов в клетках, инфицированных хантавирусами, и выявлены механизмы, объясняющие отсутствие цитопатического эффекта в этих клетках.

Несомненной новизной обладают данные об активации уникального цитокинового профиля в клетках, инфицированных хантавирусами, позволяющие объяснить гистологические изменения, обнаруженные у больных хантавирусной инфекцией. Впервые показана активация интерферониндуцированных генов (ИИГ) в клетках, инфицированных хантавирусами, а также зависимость вирусной репликации от способности клеток активировать интерферон индуцированные белки.

Приоритетными являются данные о возможности ингибирования хантавирусной репликации путем активации интерферон индуцированных белков. Новыми являются результаты, указывающие на то, что патогенез хантавирусной инфекции у человека, вызванной вирусом Пуумала, определяется активацией цитокинов в сыворотке крови. Впервые показано, что тяжесть заболевания определяется активацией ИЛ-12 и ИФН-. Новизной обладают данные о влиянии препарата Рибавирин на активацию цитокинов в клетках, инфицированных хантавирусом.

Показано, что неэффективность препарата Рибавирин при лечении хантавирусной инфекции, возможно, определяется его неспособностью ингибировать активацию цитокинов, вызванную инфекцией. Впервые получены реассортанты между патогенными для человека штаммами хантавирусов, циркулирующими в генетически отдаленных популяциях мелких грызунов, а также исследованы инфекционные характеристики новых химерных вирусов и их отличие от родительских штаммов.

Теоретическая и практическая значимость Патогенез хантавирусных инфекций у человека остается в основном мало изученным. Это является основной причиной отсутствия эффективных препаратов для лечения и профилактики заболевания. Вирусы являются нецитопатичными, поэтому фармакологическое влияние на внутриклеточные процессы, активированные хантавирусной инфекцией, представляется наиболее логичным в подходе к лечению хантавирусной инфекции. Однако именно эта область знаний оставалась наименее изученной. Поэтому полученные данные о влиянии хантавирусной инфекции на внутриклеточные процессы является важным шагом в дальнейшей разработке препаратов для лечения и предупреждения инфекции. В этом разрезе, особенно интересными представляются полученные данные о чувствительности хантавирусной инфекции к активации интерферониндуцированных белков. Поэтому, данные об эффективности ингибирования хантавирусной инфекции путем активации внутриклеточных интерферон-индуцированных механизмов выявили новый подход к лечению хантавирусной инфекции. Также впервые показаны механизмы активации интерферон-индуцированных белков в клетках, инфицированных хантавирусом. Таким образом, был выявлен круг белков — потенциальных мишеней для терапевтического вмешательства. Далее, нужно отметить, что получены данные, подтверждающие гипотезу о роли активации цитокинов у больных ГЛПС. Показано, что тяжесть заболевания определяется активацией ИЛ-12 и ИФН. Более того, активация этих цитокинов приводит к развитию легкой формы болезни. Поэтому сделано заключение, что лекарственные вещества, способные активировать ИЛ-12 и ИФН в крови больных ГЛПС, могут обладать высокой терапевтической эффективностью при лечении этого заболевания. Таким образом, выявлены две потенциальные мишени для лечения хантавирусной инфекции, включающие интерферон-индуцируемые белки и цитокины ИЛ-12 и ИФН. Проведенные исследования впервые представили объяснение неэффективности препарата Рибавирин при лечении хантавирусной инфекции, что представляет важный вклад в разработку новых подходов к лечению ГЛПС. Важность полученных данных определяется и тем, что прежние представления о лечении хантавирусных инфекции противовирусными препаратами неприменимы к лечению хантавирусных инфекций. Показана важность купирования «цитокинового шторма», вызванного хантавирусной инфекцией, поскольку активация цитокинов определяет тяжесть заболевания.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Инфицирование эндотелиальных клеток человека вирусом Син Нобре (SNV) активирует транскрипционный фактор PML и приводит к образованию нуклеарных телец внутри клеточного ядра.

2. Активация интерферон зависимого белка MxA (р78) ингибирует хантавирусную репликацию и определяет эффективность репликации хантавирусов в культуре клеток.

3. Препарат Рибавирин подавляет хантавирусную репликацию, но не ингибирует активацию цитокинов, вызванную ФНО-.

4. Патогенные хантавирусы Андес (AND) и Син Нобре (SNV), циркулирующие в различных подвидах мелких грызунов, образуют реассортанты in vitro, способные к репликации в клетках Vero E6.

Связь работы с базовыми научными программами Представленная работа была поддержана грантом Национального Института Здоровья (NIH) за номером AI36418, AI39808, AI45059и AI65359, а также офисом The Medical Service and Research Service of the Veteran Affairs Sierra Nevada Health Care System. Кроме того, исследования были финансированы Российским Министерством Науки и образования ФСП №14.А18.21.1930, ФСП №16.552.11.7083.

Работа выполнена за счет средств субсидии, выделенной в рамках государственной поддержки Казанского (Приволжского) федерального университета в целях повышения его конкурентоспособности среди ведущих мировых научно-образовательных центров (5-ТОП-100).

Апробация работы Материалы диссертации представлены на ежегодных естественно-научных конференциях Университета Штата Невада (г. Рено, Лейк Тахо, США, 1998 г. и 2006 г.). Кроме того, результаты представлены на IV Международной конференции по геморрагической лихорадке с почечным синдромом и хантавирусному легочному синдрому (г. Атланта, США, 1998 г.), V Международной конференции по геморрагической лихорадке с почечным синдромом и хантавирусному легочному синдрому (г. Аннси, Франция, 2001 г.), VI Международной конференции по геморрагической лихорадке с почечным синдромом и хантавирусному легочному синдрому и хантавирусам (г. Сеул, Корея, 2004 г.), VII Международной конференции по ГЛПС, ХЛС и хантавирусам (г. Буэнос Аэрес, Аргентина, 2007 г.). Также результаты были представлены на 22-м ежегодном собрании Американского общества Вирусологов (г. Давис, США, 2003 г.), и на собрании Американского общества Микробиологов: Viral Immune Evasion (г. Акапулько, Мексика, 2005 г.). Кроме того, результаты исследований были доложены на VI Ежегодном Международном симпозиуме «Актуальные вопросы генных и клеточных технологий» (г. Казань, Россия, 2013 г.), на IV Международной научно-практической конференции «Новые концепции механизмов воспаления, аутоиммунного ответа и развития опухоли» (г. Казань, Россия, 2014 г.), на XII Межгосударственной научно-практической конференции «Вклад государств-участников Содружества Независимых Государств в обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия населения в современных условиях» (г. Саратов, Россия, 2014 г.); на V Международной конференции «New concepts on the mechanisms of inflammation, autoimmunity and tumorogenesis» (г. Казань, Россия, 2015 г.), на 19-й Международной конференции молодых ученых «Биология – наука ХХI века» (г. Пущино, Россия, 2015 г.).

Публикации По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ, опубликованных в ведущих рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК для защиты докторских диссертаций, а также 27 тезисов докладов на международных конференциях и конгрессах.

Место выполнения работы Основные экспериментальные данные получены автором за время работы в лабораториях профессора Стива Ст. Джоура в Университете штата Невада, г. Рено, США (1996–2010) и в Казанском (Приволжском) федеральном университете (2010-2015).

Загрузка...

Структура и объем работы Диссертация состоит из введения, обзора литературы, результатов исследования, обсуждения, заключения, выводов, списка сокращений, списка литературы (405 ссылок) и списка иллюстративного материала. Работа содержит 46 рисунков и 13 таблиц.

Личный вклад автора Все данные, приведенные в работе, получены при непосредственном участии диссертанта на всех этапах проведения исследования, а именно: составление плана работы, подготовка и проведение экспериментов, анализ и систематизация полученных данных, а также оформление публикаций.

На основании самостоятельной работы автора решена важная патофизиологическая задача исследования роли активации клеточного ответа в патогенезе хантавирусной инфекции, что вносит важный вклад в разработку методов и научных принципов поиска новых эффективных лекарственных средств лечения хантавирусной инфекции. Данные, полученные лично автором, демонстрируют возможность использования методов активации интерферон-индуцируемых белков в качестве нового подхода в поиске терапевтических средств лечения хантавирусной инфекции. Кроме того, автором показана значимость активации ИЛ-12 и ИФН- в развитии легкой формы клинического течения хантавирусной инфекции, что открывает новые перспективы в подборе терапевтических средств лечения хантавирусной инфекции.

ГЛАВА 2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Вирусные геморрагические лихорадки: разнообразие этиологических агентов, распространение, клиническое течение и методы терапии Вирусные геморрагические лихорадки (ВГЛ) представляют из себя группу заболеваний, вызываемых оболочечными РНК вирусами, принадлежащими к различным семействам вирусов, включая аренавирусы, буньявирусы, филовирусы и флавивирусы (M. Bray, 2005; T.W. Geisbert et al., 2004). Эти вирусы также характеризуются внутрицитоплазменным репликационным циклом и не являются цитопатогенными (A. Vaheri et al., 2013). В настоящее время, по разным оценкам, ежегодно регистрируется от 50 до 100 миллионов случаев ВГЛ в мире (R.V. Gibbons et al., 2002;

J.C. Zapata et al., 2014), при этом смертность составляет до 60 миллионов в год. Большинство ВГЛ являются зоонозными заболеваниями. Случаи ВГЛ регистрируются по всему миру и обычно совпадают с ареалами обитания носителей и/или переносчика вируса. Вспышки ВГЛ носят спорадический характер, при этом вирусы могут появляться на новых териториях, недавно освоенных носителем патогена в природе. Заражение человека не является частью репликационного цикла вирусов вызывающих ВГЛ. Инфицирование происходит через респираторный тракт при вдыхании контаминированного аэрозоля или через кровь. Следует отметить, что некоторые ВГЛ могут переноситься горизонтально от одного пациента к другому, таким образом, представляя угрозу распространения заболевания.

ВГЛ регистрируются на территориях соответствующих ареалу носителя. Например, лихорадка Денге диагностируется на территориях являющихся ареалом для комаров рода Aedes aegypti и Aedes albopictus (E. Little et al., 2011) В то время как геморрагическая лихорадка с почечным синдромом (ГЛПС) регистрируется в ареалах проживания рыжей полевки, а хантавирусный легочный синдром (ХЛС) регистрируется в местах обитания оленьего хомячка ((S.

Escutenaire et al., 2002) (R.A. Loehman et al., 2012). На территории России зарегистрированы зоонозные очаги ГЛПС (территоря между Волгой и Уралом, а также Дальний Восток) и КонгоКрымской геморрагической лихорадки (ККГЛ) (Юг России, Крымский полуостров) (S.B. Garanina et al., 2009) (H. Miyamoto et al., 2003). В совокупности, десятки тысяч случаев ВГЛ регистрируется на территории Российской Федерации ежегодно с частотой смертельных случаев доходящей до 5%. Следует отметить, что увеличение экономических связей и расширение туристических контактов между различными странами и континентами остро ставит вопрос о возможности заражения граждан России ВГЛ за пределами Российской Федерации, а также увеличивает риск распространения экзотических ВГЛ на територии Российской Федерации.

Развитие туризма и экономических связей со станами Южной Азии и Латинской Америки, увеличивает вероятность заражение граждан российской Федерации вирусом Денге. Лихорадка Денге это острое вирусное заболевание зачастую сопровождающееся смертельным исходом (D.J.

Gubler, 1998). Лихорадка Денге регистрируется в странах Южной Азии, Латинской Америки и на островах Карибского моря (A. Amarasinghe et al., 2011). Заболевание может проявляться в форме системной лихорадки или в виде геморрагического синдрома (S.H. Waterman et al., 1989). (V. Dietz et al., 1996). Ежегодно в мире регистрируется от 50 до 100 миллионов случаев лихорадки Денге (S.

Bhatt et al., 2013). По оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), более 2,5 миллиарда человек (более 40% населения мира) подвергаются риску заболевания лихорадкой Денге (S.B. Halstead, 2007); (D.J. Gubler, 1998). Всвязи с существенным изменением климата, ареал распространения комаров переносчиков значительно расширился, что привело к ежегодному увеличению случаев заболевания. Например, если в 1970х годах, лихорадка Денге регистрировалась в 9 странах, то теперь заболевание диагностируется в более чем 100 странах мира (S. Ranjit et al., 2011). Другим примером, подтверждающим значительное увеличение заболеваемости Денге, является тот факт, что если в 2008 году было зарегистрировано 1,2 миллиона случаев лихорадки Денге в странах ареала обитания комаров переносчиков, то в 2010 году было зарегистрировано уже 2,3 миллиона случаев (увеличение в 2 раза!) Увеличение (http://77.rospotrebnadzor.ru/index.php/san-epid/40-2009-08-20-06-08-14/1141-san-epid).

случаев лихорадки Денге зарегистрировано не только в исторически эндемичных очагах, но также появляется угроза распространения заболевания на Европейском континенте, который исторически не является эндемичным. Например, в 2010 году лихорадка Денге была зарегистрированa во Франции и Хорватии ((I. Gjenero-Margan et al., 2011).(O. Engler et al., 2013) (G. La Ruche et al., 2010)). А в 2012 году, более 2,000 случаев лихорадки Денге было зарегистрировано в Португалии (C.A. Sousa et al., 2012) Исследования Bouzid и коллег показали увеличение риска инфицирования вирусом Денге в странах северной Европы связанного со значительными изменениями климата (M. Bouzid et al., 2014). Похожая ситуация наблюдается и в странах Юго Восточной Азии. Например, после длительного перерыва, рост заболевания зарегистрирован в Сингапуре (A.H. Mohd-Zaki et al., 2014). Также в 2014 году, после 10 летнего перерыва, отмечено значительное увеличение случаев лихорадка Денге на островах Тихого Океана (A.H. Mohd-Zaki, et al., 2014) (K. Limkittikul et al., 2014); (L. Bravo et al., 2014). Среди заболевших, в 500,000 случаях ожидатся развитие тяжелой формы лихорадки Денге и потребуется госпитализация. Смертность от лихорадки Денге достигает 5% (WHO, Prevention and Control of Dengue and Dengue Haemorrhagic Fever, WHO, SEARO, 1999).

Таким образом, можно сделать вывод, что эпидемиологическая ситуация по лихорадке Денге продолжает оставаться напряженной не только всвязи с увеличением числа заболевших, но и вследствии вовлечения новых эпидареалов.

Комары рода Aedes aegypti являются основными переносчиками вируса у человека, в то время как Aedes albopictus является переносчиком Денге вируса у обезьян (L.B. Carrington et al., 2014); (H. Delatte et al., 2010). Местом обитания комаров Aedes aegypti является водная среда, главным образом в искусственных емкостях вблизи жилья человека и часто внутри помещений (M.A. Roslan et al., 2013; T. Tsunoda et al., 2014). Укусы комаров этого рода происходят в дневное время суток (T.W. Scott et al., 2000). Комары рода Aedes albopictus первоначально были обитателями лесных опушек (H. Delatte, et al., 2010). Однако расширение активности человека существенно изменило ареал распространения этого комара. В настоящее время характерным считается размножение Aedes albopictus в скоплениях дождевой воды в старых автомобильных покрышках. Транспортировка этих покрышек привела к расширению ареала заселения комара.

Например, если в 1997 году ареал обитания Aedes albopictus занимал несколько районов северной Италии, то к 2007 году уже вся территория Италии обьявлена ареалом обитания насекомого (R.

Veronesi et al., 2015). Успешному распространению Aedes albopictus также способствует устойчивость отложенных яиц к высыханию (T.W. Geisbert, et al., 2004). Комары являются хозяевами-переносчиками вируса, в организме которого вирусная репликация может сохраняться от 3 месяцев и более. После инфицирования насекомого, вирус диссеминирует по всему организму, где наибольшее его накопление обнаруживается в слюнных железах (S. Sim et al., Последние исследования показали способность вируса влиять на поведение 2012).

инфицированных комаров. Так результаты, опубликованные Sim с коллегами, показали транскриптационную активацию генов регулирующих иммунный ответ и пищевое поведение комара (S. Sim, et al., 2012). К примеру, вирус способен активировать гены регулирующие обоняние насекомого, таким образом, увеличивая способность комара к поиску места укуса.

Вследствии этого, комар меньше проводит время на одном человеке, улетая еще не вполне сытым, что увеличивает опастность укусов большего числа людей. Это поведение комара приводит к значительному увеличению количества зараженных людей.

Вирус передается людям через укус инфицированной самки комара. В процессе укуса, комар выделяет в кожу на месте укуса слюну, вызывающую локальное воспаление. На месте укуса происходит первичное размножение вируса. Считается, что вирус заражает клетки Лангерганса (дендритные клетки кожи), моноциты и макрофаги (S.J. Wu et al., 2000); (S.B. Halstead et al., 1977;

Z. Kou et al., 2008). Последние исследования показали, что вирус изначально инфицирует незрелые дендритные клетки кожи ((S. Taweechaisupapong et al., 1996) (S.J. Wu, et al., 2000); (M. Marovich et al., 2001). Вирус использует различные рецепторы для проникновения в клетку мишень. Например, было показано что вирус денге проникает в клетку посредством связывания вирусного гликопротеина Е с клеточным рецептором кладгерином (E.G. Acosta et al., 2008; H.M. van der Schaar et al., 2008). В другом исследовании было показано, что вирус связывается с поверхностным CD209 рецептором на поверхности дендритных клеток (E. Navarro-Sanchez et al., 2003; B.

Tassaneetrithep et al., 2003). Исследования, проведенные Chen с коллегами показали, что вирус использует CD14 рецептор для инфицирования моноцитов (Y.C. Chen et al., 1999). Несмотря на интенсивные исследования, до сих пор нет консенсуса по поводу клеток где происходит первичная репликация вируса. Долгое время считалось, что вирус реплицируется в клетках эффекторах иммунной системы. В подтвержление этому приводились данные о репликации вируса денге в мононуклеарных лейкоцитах (N.J. Marchette et al., 1973);(N.J. Marchette et al., 1975). Далее, еще одним аргументом в пользу этого предположения был тот факт что впервые вирус Денге был выделен из белых клеток крови (R.M. Myers et al., 1965). Кроме того, вирусные антигены обнаруживались в лейкоцитах крови больных незадолго до окончания периода виремии (N.J.

Marchette, et al., 1973). Также, исследование аутопсийных образцов показало наличие антигенов вируса Денге в макрофагах, дендритных клетках, моноцитах и лимфоцитах (N. Bhamarapravati et al., 1967; K. Jessie et al., 2004). Недавно интересная гипотеза была представлена Noisakran с коллегами (S. Noisakran et al., 2010). Авторы предложили новую концепцию первичной репликации вируса Денге, где ведущая роль отводится мегакариоцитам. Представленная гипотеза основывается на том, что ранняя стадия Денге инфекции характеризуется резким снижением количества циркулирующих тромбоцитов (C. Mitrakul et al., 1977). Ранняя тромбоцитопения сочетается с мегакариоцитопенией в костном мозге (H.R. Bierman et al., 1965); (E.R. Nelson et al., 1964); (E.R. Nelson et al., 1966). Далее, мегакариоцитопения сменяется нормоцитопенией и гиперцитопенией на момент развития первых симптомов заболевания (S. Na-Nakorn et al., 1966;

E.R. Nelson et al., 1964; E.R. Nelson, et al., 1966). Далее, вирус Денге был обнаружен и выделен из тромбоцитов больных вторичной Денге инфекцией (M. Saito et al., 2004). Кроме того, было показано, что тромбоциты восприимчивы к инфекции вирусом Денге и способны поддерживать вирусную репликацию (S. Noisakran, et al., 2010). Таким образом, клетки миелоидного ряда (макрофаги, моноциты и дендритные клетки) считаются основными носителями вируса Денге.

Однако, не исключена потенциальная роль других клеток крови, включая мегакариоциты и тромбоциты, в процессе пропагации вируса.

Вирус Денге относится к семейству Togaviridae рода Flavivirus. Вирионы содержат РНК геном положительной полярности размером 11 кб (Рисунок 1).

–  –  –

5’UTR – 5’ нетранслируемый регион; C – нуклеокапсидный белок; M – матричный белок; E

– оболочечный белок; NS –неструктурный белок; 3’UTR нетранслируемый регион.

Вирусная РНК кодирует один полипептид который в результате пост-трансляционной модификации производит три структурных белка (C, prM/M, E) и семь неструктурных белков (NS) (J. Jarmer et al., 2014).

Вирусная РНК заключена внутри протеинового кора, покрытого двухслойной липидной оболочкой из фосфолипидов и холестерола. Вирусная РНК инфекционна, поэтому проникновение РНК внутрь клетки является достаточным для индукции вирусной репликации. Вирионы размером 40-45 нм в диаметре. (Рисунок 2).

Fig 2. Ctruktura viriona Dengue Рисунок 2 – Структура вириона Денге Вирусная РНК находитсяVirusnaya RNA nahodistya vnutri белка окруженного оболочечными и внутри нуклеокапсидного матриксными белками. nukleokapsidnogo belka okruzchennogo Существуют 5 серотипов вирусаI matrichnym belkami 60-80% структурной гомологии obolochechnym Денге, имеющие Инфицирование каждым серотипом (http://web.stanford.edu/group/virus/flavi/2000/dengue.htm).

вируса вызывает клинически схожее заболевание у человека. Заболевание вызывает длительный и стойкий иммунитет. Однако антитела, выработанные к одному серотипу, не обладают кроссреактивностью к другим серотипам. Поэтому, иммунитет выработанный к вирусу Денге одного серотипа не защищает от инфицирования другим серотипом.

Зоонозные ареалы серотипов вируса Денге претерпели серьезные изменения в 90х годах прошлого столетия. Например, эпидемиологические исследования в конце 20-го века показали, что серотипы 1 и 2 вируса Денге регестрировались в Странах Старого и Нового Света, в то время как серотипы 3 и 4 были отмечены исключительно в Странах Юго-Восточной Азии (S. Fahri et al., 2013); (D.S. Burke et al., 1988; R.S. Lanciotti et al., 1994; N. Sangkawibha et al., 1984). Однако эпидемиологическая картина распространения вирусных серотипов претерпела значительные изменения 30 лет спустя, где серотипы 3 и 4 вируса Денге обнаруживались за пределами традиционного ареала в Странах Латинской Америки и Карибского региона (M.G. Guzman et al., 2010).Такие значительные изменения в распространении серотипов вируса объясняются прежде всего торгово-промышленными связями и развитием туризма. Однако особое внимание следует обратить на быстроту распространения серотипов 3 и 4. Исследования Messer с коллегами показали, что распространение вируса Денге серотипа 3 происходило в западном направлении из Шри Ланки в страны Восточной Африки и далее с Латинскую Америку (W.B. Messer et al., 2003).

Интересным является тот факт, что после регистрации вспышки лихорадки Денге обусловленной серотипом 3 в Шри Ланке в 1989 году, уже в 1994 году лихорадка Денге серотипа 3 регистрировалась в Никарагуа и Панаме (1995). Эти данные представляют наглядный пример тому, как быстро ВГЛ могут распрлостраняться по всему миру. Недавно 5-й серотип Денге вируса был обнаружен в Малазии (J.M. da Silva Voorham, 2014). Хотя результаты исследования не окончательны и тебуют дальнейшего подтверждения, возможность циркуляции дополнительных серотипов Денге вируса становится вполне вероятной.

Репликационный цикл вируса начинается вскоре после проникновения в клетку мишень (K.

Clyde et al., 2006). После связывания с поверхностным рецептором, вирус проникает в клетку путем эндоцитоза (Рисунок 3). Внутри клетки, вирусная оболочка сливается с мембраной эндосомы высвобождая вирионы в цитоплазму. Внутри клетки происходит «раздевание» вириона и вирусная РНК попадает в цитоплазму.

Рисунок 3 – Репликационный цикл вируса Денге Вирус проникает в клетки путем связывания с поверхностным рецептором, сопровождающимся эндоцитозом. Раздевание вируса происходит в цитоплазме, при этом высвобождается вирусная РНК, которая в последующем используется для процессов транскрипции и трансляции. Вирус использует клеточные механизмы для собственной репликации и созревания. Зрелые вирионы выделяются путем экзоцитоза.

Вирусная РНК используется в качестве матричной РНК для первоначального синтеза белков, однако вскоре вирусная репликация переключается на синтез молекулы комплементарной РНК отрицательной полярности которая, в свою очередь, используется для синтеза вирусной РНК положительной полярности. Вновь синтезированные вирусная РНК и белки используются для сборки вируса в аппарате Гольджи. Готовые вирионы выделяются посредством экзоцитоза.

Денге инфекция может протекать в 2х формах: Лихорадка Денге или Геморрагическая Лихорадка Денге. Инкубационный период длится до 2 недель, после чего острые симптомы заболевания проявляются в виде озноба, боли в спине, суставах (особенно коленных суставах).

Лихорадка достигает 400С и у большинства больных сочетается с гиперэмией лица, инъекцией сосудов склер, гиперэмия зева. Лихорадка Денге протекает благоприятно. Только у менее чем 1% больных развивается кома и остановка дыхания. Клинико-лабораторные данные демонстрируют лейкопению с относительным лимфо и моноцитозом и тромбоцитопенией. Клинически, у больных наблюдается артралгия, миалгия, перефирическая лимаденопатия. На 3-й день после первых симптомов, наступает ремиссия, которая длится 1-3 дня, после чего появляются лихорадка и основные симптомы заболевания. Характерным диагностическим симптомом лихорадки Денге является экзантема. Экзантема чаще всего малопапулезная, появляющаяся на туловище и затем распространяющаяся на конечности. Сыпь характеризуется зудом и оставляет после себя шелушение. Элемены сыпи наблюдаются в течение 3-7 дней. Затем температура спадает и наступает период ремиссии. Геморрагический синдром наблюдается редко, у 1-2% больных.

Период ремиссии характеризуется длительной астенией, мышечной болью и болью в суставах.

Гемморагическая лихорадка Денге начинается остро с высокой температурой (до 400С), кашлем, тошнотой, рвотой и болями в животе. В отличии лихорадки Денге, геморрагическая лихорадка не характеризуется болями в суставах. С прогрессированием заболевания состояние больного быстро ухудшается, развивается лимфаденопатия и гепатомегалия. По классификации ВОЗ, выделяют 4 степени тяжести заболевания. Степень 1 характеризуется лихорадкой, появлением кровоизлияний на сгибе локтя. Симптом «проба жгута» положительная. В крови наблюдается тромбоцитопения и увеличение гематокрита. Вторая степень тяжести характеризуется признаками присущими первой степени, однако, характерным является появление спонтанных внутрикожных и желудочно-кишечных кровотечений. Степени 3 присуще развитие циркуляторной недостаточности и возбуждение. Наконец четвертая степень тяжести характеризуется как циркуляторный шок. Третья и четвертая степени тяжести также носят название шоковый синдром Денге. При обследовании больного отмечается беспокойство, холодные и липкие конечности сочетаются с теплым туловищем. Отмечается бледность лица, цианоз губ, у половины больных выявляются петехии, локализующиеся чаще на лбу и на дистальных участках конечностей.

Гипотензивный сидром сопровождается снижением пульсового давления, тахикардией, цианозом конечностей и патологические рефлексы. Смерть чаще наступает на 4-5-й день болезни. Кровавая рвота, кома или шок являются прогностически неблагоприятными признаками. Распространенный цианоз и судороги представляют собой терминальные проявления болезни. Больные, пережившие критический период болезни, становятся конвалесцентами.

Повторных случаев заболевания не набдюдается.

ККГЛ является острым зоонозным заблеванием вызываемым вирусом семейства Bunyaviridae, рода Nairovirus. В природе, возбудитель ККГЛ циркулирует в популяциях грызунов, крупного и мелкого рогатого скота, птиц. Также клещи рода Hyalomma marginatus, Dermacentor являются резервуаром вируса ККГЛ, которые после заражения marginatus, Ixodes ricinus становятся носителями вируса и способны передавать вирус потомству через яйца. Вирус передается человеку при укусе клеща или при контакте с кровью зараженного животного или человека. Поэтому медицинский персонал и работники бойни подвержены высокому риску заражения ККГЛ.

Впервые вирус ККГЛ был идентифицирован в 1945 году советским ученым Чумаковым М.П. во время вспышки заболевания в Крыму. Позже, в 1956 году, идентичный вирус был выделен из крови больного лихорадкой в Конго. В результате инфекционный возбудитель получил название вирус конго-крымской геморрагической лихорадки. ККГЛ регистрируется во многих странах включая Россию, Турцию, страны Ближнего Востока, Средней Азии, Китае и странах Африки (Конго, Кения, Уганда, и тд). Заболевание характеризуется сезонностью когда большенство случаев диагностируется в период с мая по август (H. Hoogstraal, 1979; F.M. Vescio et al., 2012). Вирус ККГЛ имеет сферическую форму с диаметром 92-96 нм. Вирусный геном состоит из 3-х одноцепочечных молекул РНК отрицательной полярности имеющих название S (малый), M (средний) и L (большой) отражающих размер молекулы (Рисунок 4). S, M и L сегменты кодируют нуклеокапсидный белок, гликопротеины и РНК зависимую РНК полимеразу, соответственно.

Каждый вирусный сегмент покрыт нуклеокапсидным белком и упакован внутри липидной оболочки.

Рисунок 4 – Структура вируса ККГЛ Вирусная РНК состоит из 3 сегментов: S –малый, M- средний и L –большой. Вирусная РНК находится внутри липидной оболочки, в которую погружены гликопротеины.

Несмотря на интенсивные исследования, специфичный вирусный рецептор на поверхности клетки до сих пор неустановлен. Некоторые исследования позволяют предположить, что вирус связывается с клатрин рецептором и затем проникает в клетку путем эндоцитоза (M. Simon et al., 2009). Внутри клетки, мембрана эндосомы сливается с оболочкой вириона в результате чего вирусная РНК и полимераза высвобождаются в цитоплазму. Синтез положительно полярной вирусной РНК отмечается очень рано после инфекции. Наши знания о механизмах репликации вируса ККГЛ ограничены и считается, что они во многом похожина те, что используются другими членами семейства Bunyaviridae. Так было показано, что Bunyaviridae использует cap-snaching механизм для инициирования синеза РНК. Для этого вирусная полимераза расщеляет клеточную мРНК в области 5’ конца на куски длиной 15 нуклеотидов, которые используются в качестве праймеров для транскрипции не-полиаденилированной вирусной мРНК (D. Garcin et al., 1995).

Вирусная мРНК короче, чем геномная РНК, поскольку транскриция терминирутся с области крючка Механизм, контролирующий синтез полноразмерной вирусной РНК (hairpin).

положительной полярности, которая может служить основой для синтеза вирусной геномной РНК отрицательной полярности, остается неизвестным.

Механизмы, регулирующие синтез вирусных белков и транспортировку в места сборки вириона, до сих пор стаются мало изученными. Например известно, что ненарушенная функция системы микротрубочек исключительно важна для успешной репликации вируса ККГЛ (I.

Andersson et al., 2004). Авторы показали, что вирусный нуклеопротеин (НП) не обнаруживается в аппарате Голджи, что предполагает синтез НП белка в эндоплазматическом ретикулуме. Далее, авторами было показано, что система актиновых филаментов участвует в транспортировке НП в перинуклеарную зону. Исследования вирусных гликопротеинов (ГП) показали, что они синтезируются в эндоплазматическом ретикулуме, однако потом ГП транспортируются в аппарат Гольджи. Гликопротеины синтезируются в виде одного белка предшественника, который потом разрезается, образует 2 белка: Gn и Gc. Gn белок содержит аминокислотную последовательность (мотив), необходимый для локализации ГП в аппарате Голджи, где происходит сборка вирионов.

Gc белок не содержит подобной аминокислотной последовательности и поэтому не способен самостоятельно локализоваться в аппарате Голджи. Исследования показали, что локализации Gc в аппарате Голджи возможна только при наличии Gn (I. Andersson, et al., 2004). Было высказано предположнение, что формирование Gn и Gc гетеро-олигомеров является необходимым условием для локализации ГП в Голджи. Вирионы формируются внутри Голджи, траспортируются на поверхность и выделяются из клетки с помощью экзоцитоза. Процессы транспортировки и экзоцитоза системы микровизикул обеспечиваются слаженной работой системы микротрубочек (A. Luini et al., 2008) (M. Simon et al., 2009).

Заражение человека вирусом ККГЛ происходит при укусе клещем носителем вируса или контакте с зараженной кровью. Считается, что вирус проникает в кровь и накапливается в клетках ретикуло-эндотелиальной системы. Исследования показали, что вирус ККГЛ реплицируется в макрофагах и дендритных клетках, полученных путем дифференциации моноцитов (F.J. Burt et al., 1997); (A.M. Connolly-Andersen et al., 2009). Посмертные исследования органов выявили множественные геморрагии в слизистых оболочках желудка, кишечника, также кровоизлияния наблюдаются в веществе головного мозга, легких и почках.

Различают 4 стадии заболевания: инкубационный период, прегеморрагический, геморрагический и стадию выздоровления. Продолжительность каждой фазы идивидуальна у каждого больного (F. Weber et al., 2008). Инкубационный период длится до 14 дней после чего заболевание развивается бурно с признаками общей интоксикации. Прегеморрагический период характеризуется признаками интоксикации и длится в среднем 3-4 дня. Больные жалуются на слабость, головную боль и слабость. Однако основным сиптомом является лихорадка, которая длится до 8 дней и характеризуется двойным пиком, за что и получила название «двугорбой лихорадки». Геморрагический период характеризуется выраженным тромбогеморрагическим синдромом, который и определяет тяжесть заболевания. Клинически в этот период наблюдается появление гемморагической сыпи на коже и слизистых оболочках, гематомы, возможны желудочные кровотечения. С ухудшением состояния появляются носовые и маточные кровоизлияния, обширные гематомы кожных покровов, кровохаркание. В наиболее тяжелых случаях наблюдается массивные желудочные кровотечения, появляются боли в животе, понос, рвота. В этох случаях отмечается увеличение печени, положительный сиптом Пастернацкого и снижение артериального давления. Лихорадка длится до 10 дней, после чего наступает период выздоровления, который характеризуется прекращением кровотечения. Однако астеничный синдром может продолжаться до 2 месяцев.

Лечение больных ККГЛ симптоматическое с использованием специфического иммуноглобулина. Также была показана эффективность противовирусных препаратов, таких как рибавирин и реаферон.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 9 |
 
Похожие работы:

«Фролов Александр Акимович Функциональные особенности респираторной системы в предродовом периоде и в родах в зависимости от стереоизомерии женского организма и их влияние на состояние плода 03.03.01 физиология 14.01.01 акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук...»

«ИВАНОВА ЭМИЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ В ПАТОГЕНЕЗЕ И ПРОГНОЗЕ РАКА ЖЕЛУДКА И ТОЛСТОЙ КИШКИ Специальность:14.01.12 – онкология 14.03.03 – патологическая физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор КОНДАКОВА И.В. доктор медицинских наук ЧЕРЕМИСИНА...»

«Гурбанова Ляля Русдамовна Особенности вегетативной регуляции вариабельности сердечного ритма в репродуктивном, преи постменопаузальном периодах в зависимости от стереоизомерии женского организма 03.03.01 физиология 14.01.01 – акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«КИРЕЕВА НАТАЛИЯ СЕРГЕЕВНА ПОСЛЕОПЕРАЦИОННОЕ ВОССТАНОВЛЕНИЕ ПАЦИЕНТОВ ПРИ ДЕКОМПРЕССИВНЫХ ВМЕШАТЕЛЬСТВАХ ПО ПОВОДУ ШЕЙНОЙ СПОНДИЛОГЕННОЙ МИЕЛОПАТИИ (КЛИНИКО-НЕЙРОФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 14.01.11 – нервные болезни 14.01.18 – нейрохирургия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: Доктор медицинских наук Шахпаронова Н.В. Доктор медицинских наук...»

«КАЛЮЖНЫЙ Евгений Александрович МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ И АДАПТАЦИОННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ УЧАЩИХСЯ ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫХ УЧРЕЖДЕНИЙ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ 03.03.01 – физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научные консультанты – доктор биологических наук, профессор В.Н.Крылов доктор медицинских...»

«ДАНИЛОВА МАРИЯ НИКОЛАЕВНА Влияние мутаций по генам мембранных рецепторов цитокининов на экспрессию генов хлоропластных белков Arabidopsis thaliana Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Специальность 03.01.05 – физиология и биохимия растений Научные руководители: Доктор биологических наук, профессор В.В. Кузнецов...»

«ЕРМОЛИН Сергей Петрович ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ РЕАКЦИИ ОРГАНИЗМА ВОЕННОСЛУЖАЩИХ В УСЛОВИЯХ АРКТИЧЕСКОЙ ЗОНЫ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 03.03.01 – Физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Гудков А.Б. Архангельск 2015 стр. СОДЕРЖАНИЕ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И...»

«ШОШИНА ИРИНА ИВАНОВНА ЛОКАЛЬНЫЙ И ГЛОБАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ИЗОБРАЖЕНИЙ В НОРМЕ И ПРИ ШИЗОФРЕНИИ 03.03.01 – физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ: ШЕЛЕПИН ЮРИЙ ЕВГЕНЬЕВИЧ, ДОКТОР МЕДИЦИНСКИХ НАУК, ПРОФЕССОР САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ПРОСТРАНСТВЕННО-ЧАСТОТНЫЙ АНАЛИЗ КАК МЕТОД...»

«УЛЬЯНОВ Владимир Юрьевич ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ И САНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ГОМЕОСТАЗА В ОСТРОМ И РАННЕМ ПЕРИОДАХ ТРАВМАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ...»

«ХИЖНЯК Роман Михайлович ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ (Zn, Cu, Co, Mo, Cr, Ni) В АГРОЭКОСИСТЕМАХ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ ЮГО-ЗАПАДНОЙ ЧАСТИ ЦЧО Специальность: 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ, доктор сельскохозяйственных наук, профессор С.В. Лукин Белгород, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Мезенцева Ольга Александровна ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ АДАПТАЦИЯ СТУДЕНТОВБАКАЛАВРОВ МЛАДШИХ И СТАРШИХ КУРСОВ С УЧЕТОМ ИХ ЦЕННОСТНЫХ ОРИЕНТАЦИЙ 03.03.01. Физиология Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Научный руководителькандидат биологических наук, профессор Овсянникова Н. Н. Москва...»

«ГАЛЯМИНА АННА ГЕОРГИЕВНА ИССЛЕДОВАНИЕ ВЗАИМОСВЯЗИ ДЕПРЕССИИ И ТРЕВОЖНОСТИ В РАЗВИТИИИ СМЕШАННОГО ТРЕВОЖНО-ДЕПРЕССИВНОГО РАССТРОЙСТВА: ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ ПОДХОД (03.03.01) «физиология» Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: профессор, д. б. н. Н.Н. Кудрявцева Новосибирск 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Котельникова Светлана Владимировна НЕЙРОЭНДОКРИННЫЙ ГОМЕОСТАЗ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО СТРЕССА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ РЕЖИМАХ ОСВЕЩЕННОСТИ Специальность 03.03.01 – физиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор Д.Л....»

«Мезенцева Ольга Александровна ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ АДАПТАЦИЯ СТУДЕНТОВБАКАЛАВРОВ МЛАДШИХ И СТАРШИХ КУРСОВ С УЧЕТОМ ИХ ЦЕННОСТНЫХ ОРИЕНТАЦИЙ 03.03.01. Физиология Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Научный руководителькандидат биологических наук, профессор Овсянникова Н. Н. Москва...»

«КРЯЖЕВ ДМИТРИЙ ВАЛЕРЬЕВИЧ ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ДИАГНОСТИКИ ПРОЦЕССОВ БИОДЕСТРУКЦИИ ПРИРОДНЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ РЯДА АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ Специальность: 03.02.08 – экология (биология) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«ХИЖНЯК Роман Михайлович ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ (Zn, Cu, Co, Mo, Cr, Ni) В АГРОЭКОСИСТЕМАХ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ ЮГО-ЗАПАДНОЙ ЧАСТИ ЦЧО Специальность: 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ, доктор сельскохозяйственных наук, профессор С.В. Лукин Белгород, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Митин Игорь Николаевич Психофизиологическая адаптация как ведущий фактор обеспечения безопасности дорожного движения 05.26.02. Безопасность в чрезвычайных ситуациях (медицина катастроф) Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель доктор биологических наук, профессор В. Ю. Щебланов Москва,...»

«ВОНДИМТЕКА ТЕСФАЙЕ ДЕССАЛЕГН ВЛИЯНИЕ ФИЗИЧЕСКИХ УПРАЖНЕНИЙ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОРГАНИЗМА В УСЛОВИЯХ ГОРНОЙ ГИПОКСИИ И СУБТРОПИЧЕСКОГО КЛИМАТА ЭФИОПИИ 03.03.01 Физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор М.Т. Шаов Нальчик-2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЗОР...»

«Радюкина Наталия Львовна ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ДИКОРАСТУЩИХ ВИДОВ РАСТЕНИЙ ПРИ КРАТКОВРЕМЕННОМ ДЕЙСТВИИ СТРЕССОРОВ Специальность 03.01.05 – «физиология и биохимия растений» Диссертация на соискание учёной степени доктора биологических наук Научный консультант – чл.-корр РАН Кузнецов Вл.В. Москва – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Список сокращений...»

«Сафина Татьяна Владимировна ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АСИММЕТРИИ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА В РЕГУЛЯЦИИ ЭРГОТРОПНЫХ И ТРОФОТРОПНЫХ ФУНКЦИЙ Специальность 03.03.01 – физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.