WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«КИШКИ ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ НАУЧНОЕ

УЧРЕЖДЕНИЕ «ТОМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ

ИНСТИТУТ ОНКОЛОГИИ»

На правах рукописи

ИВАНОВА ЭМИЛИЯ ВЛАДИМИРОВНА

ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ СИСТЕМЫ В

ПАТОГЕНЕЗЕ И ПРОГНОЗЕ РАКА ЖЕЛУДКА И ТОЛСТОЙ КИШКИ



Специальность:14.01.12 – онкология 14.03.03 – патологическая физиология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор КОНДАКОВА И.В.

доктор медицинских наук ЧЕРЕМИСИНА О.В.

Томск — 2015 Оглавление СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1 Современные представления о патогенезе рака желудка и толстой кишки

1.1.1 Современные представления о патогенезе рака желудка.................. 13  1.1.2 Современные представления о патогенезе рака толстой кишки...... 21 

1.2 Молекулярные маркеры прогноза течения рака желудка и рака толстой кишки

1.3 Роль убиквитин-протеасомной системы в развитии рака желудка и колоректального рака

1.3.1 Характеристика убиквитин-протеасомной системы

1.3.2 Роль убиквитин-протеасомной системы в патогенезе рака желудка 35  1.3.3 Роль убиквитин-протеасомной системы в патогенезе колоректального рака

1.4 Роль кальпаинов в развитии рака желудка и толстой кишки.................. 44  1.4.1 Характеристика кальпаиновой системы

1.4.2 Роль кальпаинов в патогенезе рака желудка

1.4.3 Роль кальпаинов в патогенезе рака толстой кишки

ГЛАВА 2. Материал и методы исследования

2.1 Клиническая характеристика больных

2.2 Материал исследования

2.3 Методы исследования

2.3.1 Получение осветленных гомогенатов

2.3.2 Фракционирование протеасом

2.3.3 Определение активности протеасом

2.3.4 Электрофорез

2.3.5 Вестерн блоттинг

2.3.6 Определение активности кальпаинов

2.3.9 Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение.

.............. 60 

3.1 Протеасомы и кальпаины в опухолевой и неизмененной ткани желудка и слизистой оболочке при атрофическом гастрите

3.1.1 Активность протеасом и их пулов в опухолевой и неизмененной ткани желудка и слизистой оболочке при атрофическом гастрите........... 61  3.1.2 Экспрессия субъединиц протеасом в опухоли желудка

3.1.3 Активность кальпаинов в опухолевой и неизмененной ткани желудка и слизистой оболочке при атрофическом гастрите

3.2 Прогностическая значимость показателей протеасомной системы у больных раком желудка

3.3 Определение прогноза исхода заболевания у больных раком желудка на основании показателей внутриклеточного протеолиза

3.4 Протеасомы и кальпаины в опухолевой и неизмененной ткани ободочной кишки

3.4.1 Активность протеасом и их пулов в опухолевой и неизмененной ткани ободочной кишки

3.4.2 Экспрессия субъединиц протеасом в опухоли ободочной кишки.... 93  3.4.3 Активность кальпаинов в опухолевой и неизмененной ткани ободочной кишки

3.5 Прогностическая значимость показателей протеасомной системы у больных раком ободочной кишки

3.6 Определение риска развития отдаленных метастазов у больных раком ободочной кишки на основании показателей внутриклеточного протеолиза

3.7 Протеасомы и кальпаины в опухолевой и неизмененной ткани прямой кишки

3.7.1 Активность протеасом и их пулов в опухолевой и неизмененной ткани прямой кишки

3.7.2 Экспрессия субъединиц протеасом в опухоли прямой кишки....... 117  3.7.3 Активность кальпаинов в опухолевой и неизмененной ткани прямой кишки

3.8 Прогностическая значимость показателей протеасомной системы у больных раком прямой кишки

3.9 Определение риска развития отдаленных метастазов у больных раком прямой кишки на основании показателей внутриклеточного протеолиза. 125  ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ





СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АТФ — аденозинтрифосфотат ВЭБ - вирус Эпштейна–Барр ДНК – дезоксирибонуклеиновая кислота ЖКТ – желудочно-кишечный тракт КРР – колоректальный рак НАХТ – неоадьювантная химитерапия РЖ – рак желудка РТК – рак толстой кишки РНК – рибонуклеиновая кислота РЭА – раковый эмбриональный антиген ЭДТА — этилендиамидтетраацетат APC – Adenomatous polyposis coli, онкосупрессор HP - Helicobacter pylori HIF – hypoxia-inducible factor, фактор, индуцируемый гипоксией KRAS – Kirsten rat sarcoma, протоонкоген LMP - low molecular mass polypeptide, иммунные субъединицы протеасом NF-B – nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells, ядерный фактор B PA28 – proteasome activator, активаторная частица протеасом Rpt6 – regulatory particle aTpase 6, регуляторная субъединица протеасом SDS – sodium dodecyl sulfate, додецилсульфат натрия Suc-LLVY-AMС - N-сукцинил-лейцин-лейцин-валин-тирозин-7-амино-4метилкумарин TNF- - фактора некроза опухолиVEGF – vascular endothelial growth factor, сосудистый эндотелиальный фактор роста

ВВЕДЕНИЕ

Заболеваемость злокачественными новообразованиями органов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) сохраняет одно из ведущих мест в стуркуре онкологической патологии. Наиболее распространенными среди них являются рак желудка (РЖ) и рак толстой кишки (РТК).

К числу наиболее распространенных онкологических заболеваний органов ЖКТ как в России, так и за рубежом относится РЖ. В структуре общей заболеваемости онкологической патологией он составляет 7,0%.

Следует отметить, что РЖ более распространен среди мужского населения (8,6%), нежели среди женского (5,5%) [12].

РЖ часто развивается на фоне патологических состояний (атрофический гастрит, полипы желудка) и предраковых изменений слизистой оболочки желудка, которые проявляются в дисплазии различной степени. Для РЖ характерно разнообразие гистологических типов, раннее метастазирование, а также высокая запущенность и смертность [33].

Известно, что главным прогностическим фактором при РЖ служит резектабельность [34]. Неоперабельные больные живут 3-11 мес. после подтверждения диагноза. После радикального хирургического лечения 5летняя выживаемость в зависимости от окончательной стадии заболевания составляет: IA - 95%, IB - 85%, II - 54%, IIIА - 37%, IIIB - 11%, IV - менее 7% [41]. На сегодня разработаны алгоритмы лечения РЖ на разных стадиях заболевания, включающие радикальное хирургическое лечение, неоадьювантную химиотерапию (НАХТ), адьювантную химио- и лучевую терапию.

Следует отметить, что на развитие и прогрессирование РЖ, помимо клинико-морфологических параметров заболевания, влияют и индивидуальные биологические особенности злокачественных опухолей.

Поэтому поиск новых молекулярных критериев, характерных для патогенеза РЖ требует дальнейшего изучения. Новые молекулярные маркеры, отражающие прогрессирования РЖ, позволят расширить возможности персонализированной терапии и помогут прогнозировать ее отдаленные результаты, что в конечном итоге повысит качество и эффективность лечения РЖ.

К другим часто встречающимся локализациям опухолей ЖКТ относятся опухоли толстой кишки. Рак ободочной и рак прямой кишки в последнее время принято объединять в понятие колоректальный рак (КРР). В структуре онкологической патологии распространенность данных заболеваний составляет 11,4%. Показатели распространенности КРР практически не отличаются среди обоих полов. Так, у мужчин он составляет 11,2%, а у женщин – 11,7% [12].

Патогенез рака ободочной и прямой кишки, вероятно, имеет отличия, однако этот вопрос не решен и требует дальнейших исследований.

Несмотря на современный прорыв в диагностике и лечении опухолей толстой кишки, отмечается высокий процент больных с диссеминированным процессом, качество и продолжительность жизни которых оставляет желать лучшего. В этой связи для КРР необходим поиск новых маркеров для прогнозирования отдаленного метастазирования.

Развитие фундаментальных представлений о патогенезе рака желудка, ободочной и прямой кишки является актуальной проблемой современной онкологии. Решение данной проблемы позволит не только понять закономерности изменения клеточных процессов на молекулярном уровне при развитии опухолей, но и применить полученные знания для поиска новых маркеров прогрессирования заболевания, а также формирования адекватной лекарственной терапии онкологических заболеваний.

В связи с этим, актуально исследование универсальных молекулярных процессов, к которым относится внитриклеточный протеолиз. В последнее время, среди протеолитических систем организма, имеющих значение для патогенеза онкологических заболеваний, важную роль приобретают протеасомная и кальпаиновая системы. Роль протеасом в клетке разнообразна и многогранна. Они осуществляют протеолиз около 80% цитозольных, ядерных белков. В механизмах развития злокачественных образований ЖКТ неотъемлемую роль играет протеасомная система, осуществляющая деградацию внутриклеточных белков [3, 26].

Изменение активностей пула протеасом в разные периоды развития опухоли может быть уникальной характеристикой различных стадий заболевания [26]. В настоящее время проведено лишь частичное исследование протеасом опухолей ЖКТ [56, 101].

Кроме протеасомной системы к внутриклеточным протеолитическим системам относится кальпаиновая система [29] Физиологические функции кальпаиновой системы являются многообразными и до конца не изученными.

Кальпаины выполняют функцию «модернизации» цитоскелета, протеолитической модификации молекул трансдукции сигнала, ферментов, белков клеточного цикла, апоптоза и других [139]. Тот факт, что кальпаины расщепляют полипептиды в небольшом числе сайтов, оставляя большие часто каталитически активные фрагменты, указывает на то, что у кальпаинов есть регулирующая или сигнальная функция в клетках [139]. В этой связи, изучение роли кальпаиновой системы в развитии и прогрессировании рака желудка, ободочной и прямой кишки является весьма актуальным. Вопрос о значении кальпаиновой системы в развитии и прогрессировании опухолей ЖКТ, а также в прогнозе течения заболевания злокачественными новообразованиями в настоящее время остается открытым.

Таким образом, представленные выше данные свидетельствуют о важной роли протеасомной и кальпаиновой системы в развитии РЖ и КРР.

Однако особенности функционирования внутриклеточных протеолитических систем в ткани РЖ и КРР в зависимости от клинико-морфологических параметров заболевания и его исхода не изучены, что затрудняет оценку роли данных протеолитических систем в опухолевой прогрессии. Изучение состояния протеасомной и кальпаиновой систем представляется актуальным и может послужить основой для разработки маркеров, позволяющих прогнозировать течение РЖ и КРР.

Цель исследования Изучение связи функционирования протеасом и кальпаинов с клиникоморфологическими параметрами заболевания и прогнозом рака желудка и колоректального рака.

Задачи исследования

1. Провести сравнительный анализ активности протеасом, их пулов, субъединичного состава и активности кальпаинов в опухоли желудка, неизмененной ткани, слизистой оболочке при атрофическом гастрите.

2. Провести сравнительный анализ активности протеасом, их пулов, субъединичного состава и активности кальпаинов в образцах опухолей толстой кишки в сравнении с соответствующими гистологически неизмененными тканями.

3. Сопоставить активность протеасом, их пулов, экспрессию субъединиц протеасом, а также общую кальпаиновую активность со стадией заболевания и дифференцировкой изучаемых опухолей.

4. Оценить прогностическую значимость показателей протеасомной системы и активности кальпаинов в отношении 2-летней общей и безметастатической выживаемости больных раком желудка и колоректальным раком.

5. Разработать способы прогнозирования исхода заболевания при раке желудка и отдаленного метастазирования при раке толстой кишки.

Научная новизна работы Впервые при раке желудка показано увеличение химотрипсинподобной активности протеасом при лимфогенном метастазировании и выявлено уменьшение активности 26S и 20S пулов протеасом в низкодифференцированных опухолях по сравнению с умереннодифференцированными новообразованиями. В опухоли желудка показано увеличение экспрессии тотального пула протеасом и экспрессии субъединиц LMP7, LMP2, PA28 и Rpt6 по сравнению с неизмененной тканью. Также впервые показано увеличение общей кальпаиновой активности при раке желудка по сравнению с неизмененной тканью, слизистой оболочкой при атрофическом гастрите, а также нормальной слизистой желудка.

При раке ободочной кишки впервые выявлено увеличение активности протеасом и их пулов, а также экспрессии иммунных (LMP7, LMP2) субъединиц протеасом в опухоли по сравнению с неизмененной тканью. При локорегионарном метастазировании зарегистрировано увеличение активности 26S и 20S пулов по сравнению с группой больных, не имеющих метастазов в лимфоузлы. При наличии отдаленных метастазов, напротив, увеличивается тотальная активность протеасом, что может служить прогностически неблагоприятным фактором течения рака ободочной кишки.

Впервые показано, что при наличии отдаленных метастазов снижена экспрессия LMP2 субъединицы протеасом по сравнению с группой больных без отдаленных метастазов. При раке ободочной кишки зарегистрировано увеличение общей кальпаиновой активности как при развитии метастазов в регионарных лимфоузлах, так и при отдаленных метастазах, что также является важным прогностическим фактором.

В отличие от рака ободочной кишки, в опухоли прямой кишки не установлено увеличения протеасомной активности по сравнению с неизмененной тканью. При этом зарегистрировано увеличение общей кальпаиновой активности в опухоли. Кроме того, при раке прямой кишки впервые показано увеличение экспрессии активаторной PA28, регуляторной Rpt6 и иммунной LMP2 субъединиц протеасом, по сравнению с неизмененной тканью.

Теоретическая и практическая значимость Полученные данные фундаментального характера раскрывают роль протеасомной и кальпаиновой систем в прогрессировании рака желудка и толстой кишки и могут служить основой для дальнейшего изучения патогенеза злокачественных новообразований. Полученные результаты, характеризующие значимое увеличение активности протеасом и кальпаинов при раке желудка, по сравнению с неизмененной тканью, слизистой оболочкой при атрофическом гастрите показывают важную роль данных протеолитических систем в патогенезе рака желудка. Представленные в работе результаты характеризуют зависимость протеасомной и кальпаиновой систем от клинико-морфологических параметров рака желудка и толстой кишки, что также свидетельствует об участии изучаемых протеолитических систем в разных этапах патогенеза данных заболеваний.

Результаты исследования могут послужить дополнительными критериями прогноза течения рака желудка и толстой кишки. Выявлено, что тотальная активность протеасом и активность 20S пула протеасом, а также экспрессия LMP7 и PA28 субъединиц протеасом являются значимыми факторами в отношении 2-летней безметастатической выживаемости больных раком желудка, а содержание Rpt6 субъединицы протеасом - 2летней общей выживаемости.

При раке ободочной кишки зафиксировано, что тотальная активность протеасом и общая кальпаиновая активность в опухолевой и неизмененной ткани ободочной кишки, являются значимыми факторами в отношении 2летней безметастатической выживаемости больных.

Созданы математические модели прогноза исхода заболевания у больных раком желудка и оценки риска развития отдаленных метастазов у больных раком ободочной кишки.

Положения, выносимые на защиту

1. Активность протеасом и их пулов, а также кальпаиновая активность значительно выше в опухоли желудка по сравнению с неизмененной тканью, а также слизистой оболочкой при атрофическом гастрите и нормальной слизистой. Протеасомная и кальпаиновая активность значительно выше в опухоли ободочной кишки по сравнению с неизмененной тканью. Напротив, в опухоли прямой кишки значимое увеличение наблюдалось лишь для кальпаиновой активности. Изменение активности протеасом сопровождалось изменением их субъединичного состава.

2. Химотрипсинподобная активность протеасом и их субъединичный состав, а также активность кальпаинов при раке желудка зависит от местной распространенности опухоли, наличия регионарных метастазов, а также степени гистологической дифференцировки опухоли. При раке ободочной кишки активность протеасом зависит от наличия отдаленных метастазов.

3. Активность протеасом, их субъединичный состав и активность кальпаинов могут служить важными прогностическими факторами в отношении 2-летней безметастатической выживаемости больных раком желудка и раком ободочной кишки. Кроме того, активность 20S пула протеасом, а также экспрессия LMP7 и PA28 субъединиц протеасом служат значимыми факторами в отношении 2-летней безметастатической выживаемости, а содержание Rpt6 субъединицы протеасом - 2-летней общей выживаемости больных раком желудка.

Апробация работы Основные результаты работы доложены на Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни биохимии в СПбГМУ», (Санкт-Петербург, 2011) и на VII – IX Региональных конференциях молодых ученых-онкологов, посвященной памяти академика РАМН Н.В. Васильева «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии» (Томск, 2012-2014).

Публикации По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ, отражающих основные ее положения, в том числе 3 статьи в рецензируемых отечественных журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, трех глав, заключения, выводов и списка цитируемой литературы.

Работа изложена на 156 страницах машинописного текста, содержит 27 таблиц и иллюстрирована 34 рисунками.

Бибилография включает 152 литературных источников, из которых 49 отечественных и 103 иностранных.

ГЛАВА 1. Обзор литературы

1.1 Современные представления о патогенезе рака желудка и толстой кишки 1.1.1 Современные представления о патогенезе рака желудка Известно, что повышенный риск возникновения РЖ может быть обусловлен чрезмерным потреблением солёной, жареной, консервированной (в том числе маринованной) пищи; использованием продуктов, заражённых микотоксинами; злоупотреблением алкоголем и курением. Кроме того, установлено, что в регионах с кислой и богатой органическими веществами почвой показатели заболеваемости РЖ выше [13, 32]. В некоторых эпидемиологических исследованиях продемонстрирована обратная связь между потреблением свежих овощей и фруктов, микроэлементов и некоторых витаминов (в частности, Е и С) и частотой развития РЖ. К числу промышленных факторов риска относят производство резины, асбеста, винилхлорида, минеральных масел, хрома и др. [48].

Особое внимание в патогенезе РЖ в настоящее время уделяют генетическим факторам. К доминантным онкогенам относят: гены факторов роста (TGF, TGF, VEGF); гены серин/треонин киназ (RAF/MIL, MOS, BCR); гены ядерных транскрипционных факторов (FRA1, FRA2, REL).

Канцерогенный эффект доминантных онкогенов связан с гиперпродукцией кодируемых белков. Рефлюкс дуоденального содержимого, бактерии, аутоиммунные процессы, раздражающие пищевые продукты, обусловливающие синтез нитрозосоединений, способствуют разрушению слизистого барьера, развитию воспаления, некрозу регенерировавшей слизистой оболочки. Эти изменения могут приводить к снижению желудочной секреции. В таких условиях возрастает канцерогенное воздействие нитрозосоединений, приводящее к нарастанию атипических реакций с переходом их в преинвазивный и далее в инвазивный рак [11].

Основным предраковым заболеванием считают хронический гастрит (до 90% случаев), в том числе в оперированном желудке. Меньшее значение имеют аденомы (около 8%), гиперпластические полипы (до 3%) и язва желудка (менее 1%) [35].

Загрузка...

При хроническом гастрите обнаруживаются дисрегенераторные изменения, которые, в свою очередь, провоцируют ускоренное перемещение клеток из генеративной зоны без полноценной дифференцировки в зоны расположения зрелых высокодифференцированных эпителиоцитов. В результате желудочные железы становятся функционально неполноценными.

Таким образом, в метаплазированных железах происходит реорганизация эпителия со смещением зоны пролиферативного компартмента от перешейка желез к основанию и модификация стромальных клеток собственной пластинки слизистой, окружающих измененные железы, по кишечному типу [111].

Известно, что развитию опухоли предшествуют нарушение роста и дифференцировки клеток, и их злокачественное перерождение. Наряду с опасными для здоровья факторами окружающей среды (профессиональные, курение, алкоголизм, неправильное питание) в наше время важнейшим фактором риска канцерогенеза, заслуживающим особого внимания, признано хроническое носительство потенциально онкогенных инфекционных агентов (в частности, Helicobacter pylori (HP) и вируса Эпштейна–Барр (ВЭБ)) [38].

Таким образом, не вызывает сомнений актуальность изучения роли вирусов и хронической хеликобактерной инфекции в канцерогенезе опухолей эпителиального происхождения. Хеликобактериоз является так называемой медленной инфекцией, что обусловлено длительной, практически пожизненной персистенцией возбудителя в организме человека, его способностью взаимодействовать с иммунной системой и адаптироваться к ее изменениям. Несмотря на то, что в настоящее время доказана роль HP в возникновении MALT-лимфом и РЖ [16, 22, 31], остается много неясных вопросов относительно не только роли этой бактерии в опухолевой трансформации, но и возможного влияния на механизмы опухолевой прогрессии [38].

Известно, что HP вызывает определенные нарушения в клеточном обновлении, приводящие к атрофии слизистой оболочки желудка, дисплазии, кишечной метаплазии – основным характеристикам предрака желудка.

Показано, что около 80 % аденокарцином желудка связаны с HPассоциированным хроническим гастритом, при этом развивается опухоль кишечного типа [8, 23]. Рак диффузного типа, по-видимому, не связан с HPинфекцией, поскольку расшифрована генетическая природа этого заболевания – мутация гена E-кадгерина [19]. Е-кадгерин является представителем семейства трансмембранных гликопротеинов, осуществляющих адгезивные межклеточные контакты. Е-кадгерин, повидимому, влияет на регуляцию экспрессии гена р53. Продемонстрировано, что мутации гена Е-кадгерина и разобщение межклеточных контактов вызывают уменьшение экспрессии гена и функциональной активности белка р53 [21].

Взаимоотношения HP и рака различных отделов желудка остаются недостаточно изученными. Существует предположение о том, что эрадикация возбудителя способствует повышению риска развития рака кардиального отдела желудка. Однако в целом показано, что при успешной эрадикации HP происходит значительное уменьшение нейтрофильной инфильтрации, обратное развитие атрофии слизистой оболочки желудка, регресс кишечной метаплазии и дисплазии (обычно легкой степени) преимущественно в теле желудка и только у части больных. Регрессии изменений слизистой оболочки желудка, вызванных HP, в антральном отделе желудка обычно не происходит [22, 23, 31].

Следует отметить, что значительную роль в возникновении гипохлоргидрии, обусловленной НР-инфекцией, играет повышенное образование провоспалительного цитокина IL-1, который обладает способностью ингибировать желудочную секрецию и моторику, причем эта способность различна у разных индивидуумов вследствие кластерного полиморфизма гена IL-1. Нельзя исключить также определенную роль IL-6, IL-8 и фактора некроза опухоли- (TNF-), продукция которых стимулируется HР, в возникновении гипохлоргидрии. Генетические факторы, влияющие на уровень экспрессии IL-1, лежат в основе того факта, что РЖ развивается далеко не у всех больных гастритом, ассоциированным с хеликобактерной инфекцией [19].

Кроме того, в настоящее время примерно в 10 % злокачественных опухолей желудка выявляются элементы генома вируса ВЭБ, и, соответственно, эти опухоли описывают как ВЭБ-позитивные [91]. В 13 % ВЭБ-позитивные карциномы находились в окружении кишечнометаплазированного эпителия по сравнению с 41 % ВЭБ-негативных карцином желудка кишечного типа. Рядом авторов показано, что ВЭБпозитивные карциномы локализовались в верхней трети желудка, по сравнению с ВЭБ-негативными опухолями, были диффузного или смешанного типов, причем разница была статистически значима [103].

Необходимо отметить, что значительная часть аспектов проблемы возникновения РЖ на фоне ВЭБ не решена. Несмотря на то, что большинство исследований свидетельствует о низкой частоте таких раков и о том, что в диспластических и метапластических очагах слизистой оболочки желудка ВЭБ не детектируется, появились данные о наличии ВЭБ в опухольинфильтрирующих лимфоцитах у некоторых больных EBER-негативными РЖ [38].

Согласно многоступенчатой модели гастроканцерогенеза [70], существует ряд последовательных этапов длительного патологического процесса в слизистой оболочке желудка (начинающегося с воспалительного процесса, на фоне которого формируется хронический гастрит, через кишечную метаплазию и дисплазию к возникновению рака), опосредованного взаимодействием факторов внешней среды и генетическими особенностями организма. Вероятность злокачественной трансформации такого предракового заболевания, как хронический гастрит, по разным оценкам, составляет от 3 до 50 % [32, 40]. Такая вариабельность поднимает вопрос о поиске информативных маркеров, ассоциированных с риском злокачественной трансформации клеток [24].

Помимо всего названного, в патогенезе развития и прогрессирования РЖ немаловажную роль играют генетические факторы. При дифференцированных формах РЖ основные генетические нарушения обнаружены в изменении экспрессии следующих генов: p53 (40%), k–ras (10%), c-erb B2 (20%), c-met (11%), APC, E-cadherin. При низкодифференцированных аденокарциномах – k-sam, E-cadherin.

Большинство исследователей признают, что гистогенез РЖ может развиваться по двум направлениям. Первый путь схематично можно представить следующим образом. Длительное воздействие (более 20 лет) на нормальную слизистую факторов окружающей среды, питания, и прежде всего НР, приводит к атрофическому гастриту. Атрофический гастрит либо через кишечную метаплазию, дисплазию/аденому, дифференцированную карциному, либо через неметапластическую атрофию слизистой и низкодифференцированную аденокарциному приводит к инвазивному раку и метастазированию. Данный тип гистогенеза чаще наблюдается у пожилых и не связан с наследственным фактором. Второй тип гистогенеза предполагает наличие мультипотентной пролиферативной клетки шеечной зоны.

Мультипотентная пролиферативная клетка развивается либо в карциноид, либо через дифференцированную аденокарциному в ряд злокачественных новообразований: муцинозная («слизистая») аденокарцинома, низкодифференцированная аденокарцинома, перстневидноклеточный рак, эндокриноклеточная карцинома, AFP (–фетопродуцирующий) рак. Данный тип гистогенеза чаще развивается без предшествующего гастрита у молодых пациентов. Иммунофенотипические изменения, прежде всего, заключаются в снижении экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости HLAI и HLA-II класса, в изменении экспрессии рецептора трансферрина (CD71), молекул адгезии ICAM (CD54). Особо надо отметить изучение экспрессии карбогидратных (углеводных) антигенов на клетках РЖ [77, 80, 135], таких как Lewis-x, Lewis-a, Lewis-y, Lewis-b, Lewis-Tn и их сиалированных форм (sialyl-Lewis), как фактора более злокачественного течения РЖ. Так, было показано, что сиалированные формы Lewis-антигенов участвуют в метастатическом процессе посредством связывания с E и Р-селектинами эндотелия сосудов, мезотелия брюшины. Имеются данные об участии карбогидратных антигенов в прокаогулянтной активности (Lewis-y), апоптозе, клеточно-матриксном взаимодействии. Показано прогностическое значение экспрессии Lewis-антигенов при I, II, III стадии РЖ японскими исследователями [77].

Трансформация клеток в раковые и опухолевая прогрессия связаны с накоплением изменений в геноме, возникающих в результате нарушения нормального его функционирования под действием наследуемых мутаций и влияния канцерогенных факторов. Трансформированные клетки получают возможность выживать в организме за счет изменения сигнальных путей, обеспечивающих приобретение: независимых или автономных сигналов к росту; нечувствительности к сигналам, ингибирующим рост; резистентности к сигналам апоптоза; неограниченного потенциала к пролиферации;

способности поддерживать ангиогенез; способности к инвазии и метастазированию [94]. Молекулярные изменения, ответственные за приобретение вышеуказанных свойств, могут использоваться в качестве онкомаркеров [19].

Для интестинального типа РЖ показаны также мутации в гене APC, повышенная экспрессия -катенина, инактивация гастроспецифического pS2 гена, гиперметилирование супрессорного гена RAR [19].

Известно, что в карциномах желудка соматические мутации в гене онкосупрессоре р53 являются наиболее общими генетическими изменениями и обнаруживаются у 60 % больных [105].

Показано, что CDX2 (транскрипционный фактор, имеющий отношение к кишечному органогенезу) выступает в роли фактора транскрипции многих кишечных генов, в частности MUC2, MUC5AC, MUC6. Экспрессия генов CDX2 и MUC2 обнаруживалась в 80 % случаев в ткани с признаками кишечной метаплазии и РЖ. CDX2 и MUC2 играют важную роль в дифференцировке как нормальной, так и патологически измененной ткани желудка. Потеря CDX2 может быть сигналом прогрессии опухоли в случаях раннего РЖ и рака с кишечным фенотипом. Снижение экспрессии CDX2 при полной кишечной метаплазии, при желудочной дисплазии и РЖ позволило предположить, что CDX2 играет антиканцерогенную роль [112].

Циклины D-типа достигают максимальных уровней экспрессии и формируют функциональные комплексы с CDK4 (Cyclin-dependent kinase 4) во время середины G1 фазы митоза. Биологическая роль циклина D3 двояка, он участвует в клеточной пролиферации, а также играет роль в дифференцировке. В РЖ повышенную экспрессию циклина D1 связывают с кишечным фенотипом опухоли в одних исследованиях, с неизмененной тканью в других исследованиях и с диффузным типом РЖ и низкой дифференцировкой в третьем случае [50].

Активация неоангиогенеза связана с рядом факторов, среди которых особая роль принадлежит эндотелиальному сосудистому фактору роста – VEGF, который, активируя коллагеназу и урокиназу, приводит к лизису матрикса эндотелия. В результате данного каскада реакций повышается способность эндотелиальных клеток к миграции. Клетки опухоли также способны к экспрессии рецепторов VEGF, используя их активацию для инвазии и метастазирования. Было установлено, что у пациентов с VEGFположительными РЖ обнаруживается большее количество новообразованных микроциркуляторных сосудов. В результате прогноз у больных РЖ с VEGFнегативным статусом был значительно лучше, чем у пациентов с VEGFположительной экспрессией.

Экспрессия COX-2 выявлялась у больных, как с кишечным, так и с диффузным типом РЖ, однако, ряд авторов выявляли иммунореактивность COX-2 только при кишечном типе РЖ [73]. Поскольку было обнаружено повышение уровня COX-2 мРНК у пациентов не только с РЖ, но и с тяжелой дисплазией, его выявление у больных с предраковыми изменениями слизистой может служить инструментом ранней диагностики РЖ [19].

Одним из потенциально важных маркеров, вовлеченных в процессы клеточной пролиферации, дифференцировки и контроля метастазирования при РЖ, является белок nm23 [104]. Экспрессия nm23 связана с молодым возрастом пациентов, большим размером опухоли и высокодифференцированной гистологической структурой. Также экспрессия nm23 положительно коррелировала с обнаружением p53 [81].

Выявлена высокая корреляция между экспрессией HER-2/neu и кишечным гистологическим типом РЖ, при этом усиление экспрессии HERneu связано с низкой выживаемостью больных [19].

Молекула CD44 – поверхностный клеточный гликопротеин, играющий важную роль в межклеточных взаимодействиях, клеточной адгезии и миграции. Это рецептор гиалуроновой кислоты, а также некоторых других лигандов, таких как остеопонтин, коллаген и металлопротеиназы матрикса.

Аномальная транскрипция CD44 часто связана с РЖ и его метастазированием.

Остеопонтин (OPN) – белковый лиганд CD44, он повышенно продуцируется в 73 % случаев РЖ. При анализе его ко-экспрессии с CD44v9 была обнаружена положительная корреляция с инвазивностью и лимфогенным метастазированием [19].

Таким образом, молекулярные маркеры развития и прогрессирования РЖ, а также маркеры онкологического риска при атрофическом гастрите многообразны и до конца не исследованы по сей день.

1.1.2 Современные представления о патогенезе рака толстой кишки Росту случаев колоректальных карцином в развитых странах способствуют увеличение в пищевом рационе содержания мяса, особенно говядины и свинины, и уменьшение клетчатки и животного жира, что ускоряет рост кишечных бактерий, вырабатывающих канцерогены. Этот процесс способны стимулировать соли жёлчных кислот. Природные витамины А, С и Е инактивируют канцерогены, а вещества содержащиеся в турнепсе и цветной капусте, индуцируют экспрессию бензпиренгидроксилазы, способной инактивировать поглощенные канцерогены. Высока частота РТК среди работников асбестных производств и лесопилок. Многие эпидемиологические исследования подтверждают существование определенной взаимосвязи между избыточной массой тела и вероятностью возникновения опухолевого процесса в толстой кишке. Ряд исследователей настаивают на ассоциации между заядлым курением и умеренным увеличением риска возникновения КРР [48].

Все исследователи единодушны в том, что развитию рака предшествует тяжелая дисплазия. Скорее всего, именно поэтому у больных хроническими воспалительными заболеваниями толстой кишки, особенно с язвенным колитом, частота возникновения КРР значительно выше, чем в общей популяции. На степень риска развития рака влияют длительность и клиническое течение заболевания. У больных язвенным колитом более 30 лет существует 60% вероятность развития КРР. Болезнь Крона толстой кишки также сопровождается высоким риском возникновения КРР, но он меньше, чем при язвенном колите. В то же время дифференцировать злокачественную трансформацию при этом заболевании значительно труднее [45].

К факторам риска также следует относить злокачественные опухоли других органов. Так, у женщин, имеющих рак молочной железы или рак гениталий, риск заболеть КРР значительно увеличивается [27]. К тому же, у больных, перенесших операцию по поводу КРР, имеется большая вероятность возникновения метахронной опухоли как в толстой кишке, так и в других органах.

Кроме указанных групп риска, вероятности заболеть РТК подвержены пациенты в возрасте старше 50 лет, страдающие хроническими заболеваниями ЖКТ, гениталий, сердечно-сосудистой системы, ожирением.

Патогенез РТК включает как активацию онкогенов, так и инактивацию супрессорных генов. Примерно в половине РТК отмечаются мутации в «горячих» кодонах гена KRAS. Мутация KRAS препятствует отщеплению фосфатной группы от кофактора белка, кодируемого этим геном - гуанозинтрифосфата, т.е. нарушает механизм негативной ауторегуляции его активности. В результате мутированный KRAS инициирует митогенный сигнал, что способствует безостановочному делению стволовых клеток кишечного эпителия [15].

Наиболее известным супрессорным геном, вовлечённым в развитие РТК, является ген р53, который отвечает за стабильное состояние генома; при возникновении повреждений ДНК происходит активация р53, что, в конечном счёте, приводит к апоптозу клетки - хозяина. Инактивация гена р53 позволяет клетке накапливать мутации, в том числе повреждения, которые активируют онкогены и инактивируют антионкогены. Мутации в гене р53, как правило, носят «точковый» характер, хотя могут наблюдаться и его делеции. С инактивацией гена р53 принято связывать частую встречаемость потерь гетерозиготности хромосомы 17р в РТК [86, 92].

Другим характерным для РТК повреждением является инактивация гена APC, расположенного в длинном плече пятой хромосомы (локус 5q21).

Данный ген отвечает за синтез белкового продукта, участвующего в процессах пролиферации и дифференцировке кишечного эпителия.

Возникающие в АРС гене мутации приводят к изменению структуры белковой молекулы, то есть к синтезу патологического белка, не выполняющего предназначенные для него функции, что сопровождается беспорядочным делением клеток, неконтролируемой пролиферацией железистого эпителия с образованием полипов и их последующим озлокачествлением [18].

Ген APC участвует в процессах клеточной адгезии и является составляющей сигнального каскада Wnt. В РТК с интактным APC часто отмечается повреждение другого участника Wnt-каскада – гена -катенина.

Перечисленные нарушения, в конечном счёте, приводят к активации транскрипции ряда онкогенов, например MYC и ССND1. Делеции хромосомы 18q раньше связывали с инактивацией супрессорного гена DCC.

За последнее время к генам-кандидатам, расположенным в этом регионе, прибавились SMAD2 и SMAD4 [86, 92].

Одно из направлений молекулярно-генетического изучения опухолей касается выявления молекулярных нарушений, характерных для более позднего развития метахронных опухолей, иногда ошибочно рассматриваемых как рецидив основной опухоли. Такие исследования включают изучение колоректальных аденом в качестве мишени для идентификации маркерного гена из-за их высокой частоты в популяции как предракового изменения по сравнению с низкой частотой выявления злокачественных опухолей [20].

Эндотелин-1 - полипептид из 21 аминокислотного остатка обладает вазоконстрикторной и митогенной активностью, а также вовлечен в механизмы регуляции апоптоза. На клеточных линиях РТК у экспериментальных животных (PRob и REGb) показано, что эндотелин-1 является фактором выживания и способен in vitro защищать клетки РТК против FasL-индуцированного апоптоза [79].

Частота выявления и уровень растворимого Fas-антигена (sFas) ингибитора апоптоза в сыворотке крови больных РТК - выше, чем у практически здоровых людей [20]. Отмечена тенденция к повышению содержания sFas в сыворотке крови больных РТК с метастазами в регионарных лимфатических узлах и печени, что позволяет обсуждать роль Fas/FasL-системы как возможную мишень противоопухолевой терапии у больных КРР.

Обнаружено, что высокая активность каспазы-3 коррелирует с высоким риском рецидива РТК, особенно в случаях правосторонней их локализации [66]. Также выявлена корреляция активности каспазы-3 с CD 57+ опухоль инфильтрирующими клетками.

Доказано, что неудачи химиотерапии КРР связаны с множественной лекарственной резистентностью этих новообразований [20]. R.C. Bates et al.

показали, что экспрессия различных изоформ CD44 ассоциируется с агрессивным поведением опухоли и ставит вопрос о том, модулирует ли сигнал от этого рецептора лекарственную чувствительность опухоли. Авторы доказали, что CD44 индуцирует активацию src-ceмейства тирозинкиназы LYN и A.kt. Способность супрессировать апоптоз может играть критическую роль в развитии опухолей толстой кишки, и это связано с экспрессией CD44 [51].

Предполагается, что для обеспечения процессов инвазии и метастазирования нужна комплексная протеолитическая цепочка, включающая различные протеазы. Считается, что плазмин, уменьшающий уровень внеклеточных матричных гликопротеидов и активирующий некоторые прометаллопротеазы, играет решающую роль в процессах инвазии и метастазирования, при этом в многоступенчатой цепочке протеаз ключевую позицию занимает сериновая протеаза - активатор плазминогена урокиназного типа (uРА), - поскольку она катализирует образование плазмина из его предшественника плазминогена.

Важную роль играет также рецептор uРА, так как при связывании uРА с рецептором его способность активировать плазминоген увеличивается. С другой стороны, в тканях РТК могут присутствовать ингибиторы uРА - PAI-1 и PAI-2. Показано, что уровни uРА и РАТ-1 в КРР выше, чем в гомологичной нормальной ткани и доброкачественных опухолях [20].

Исследования S. Hayashi et al. указывают на корреляционную связь между uРА и печеночными метастазами [89]. Авторы исследовали эффективность генной терапии КРР с помощью tPA с использованием модели печеночного метастаза РТК у мышей. Полученные результаты позволили авторам предположить, что трансдукция гена tPA в клетки РТК полезна с точки зрения ингибирования метастазирования в печень [20].

Известно, что при гематогенном метастазировании клетки опухоли должны прикрепиться к эндотелиальным клеткам, пройти в просвет сосуда, выжить в циркулирующей крови, остановиться в определенном органе или ткани и образовать там колонию. Высокоангиогенные первичные опухоли, к которым относится и КРР, с высокой внутри-опухолевой плотностью сосудов обладают большей способностью дать в отдаленном органе ангиогенный клон, который при благоприятных условиях способен образовать метастаз.

Большинство исследователей полагают, что высокая степень васкуляризации опухоли является статистически значимым маркером наличия метастазов в регионарных лимфатических узлах [20].

Рецепторы семейства ErbB могут образовывать как гомо-, так и гетеродимеры, при этом во многих случаях наиболее активными являются гетероструктуры с участием второго представителя этого семейства HER2/neu, не имеющего собственного лиганда. Таким образом, HER2/neu является ключевым звеном передачи митогенных сигналов ЭФР-подобных факторов роста, и его блокирование может существенно замедлить или остановить рост опухолей, зависимых от подобных стимулов. Полагают, что повышенная экспрессия HER2/neu в опухолях, в том числе и при КРР, может служить маркером чувствительности и мишенью для более эффективной биотерапии этих новообразований [20].

Показана возможность использования фермента синтеза простагландинов и эйкозаноидов — циклооксигеназы-2 (СОХ-2), известной также как простагландин-эндопероксидсинтетаза, в качестве маркера ранней диагностики и прогноза КРР. Экспериментальные и клинические данные свидетельствуют о важной роли СОХ-2 в патогенезе КРР. Показано отсутствие СОХ-2 в эпителии нормальной слизистой и увеличение экспрессия белка на 40% в полипах и на 80-90% в злокачественных опухолях толстой кишки, что является подтверждением участия СОХ-2 в неопластических процессах и в прогрессии КРР [20]. При исследовании тканей опухолей больных КРР установлена положительная корреляция экспрессии СОХ-2 с размером и стадией опухоли по классификации Dukes [143]. Увеличение экспрессии СОХ-2 в РТК стало основой для попыток использования ее ингибиторов, в частности нестероидных противовоспалительных препаратов, в качестве профилактических средств, предотвращающих развитие КРР и малигнизацию полипов толстой кишки. В экспериментах на животных было показано, что ингибиторы СОХ-2 проявляют защитное действие при колоректальном канцерогенезе. Кроме того, эти препараты предотвращали образование новых полипов и способствовали регрессии уже существующих в толстом кишечнике. С другой стороны, данные некоторых экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что противоопухолевое действие нестероидных противовоспалительных препаратов связано также с тем, что они индуцируют апоптоз в клетках РТК и ингибируют ангиогенез в экспериментальных опухолях [20].

В исследовании обнаружено, что интерлейкины 4 и 13, продуцирующиеся локально лимфоцитами, инфильтрирующими опухоль, могут регулировать адгезию клеток РТК путем подавления регуляции молекул адгезии [20].

Показано, что циклинзависимый ингибитор киназы Р27 (KIP1) может быть использован как маркер выявления ранних стадий КРР [72]. Однако он не может быть использован в качестве маркера ранней прогрессии этих новообразований.

Таким образом, молекулярные механизмы прогрессирования КРР разнообразны и их дальнейшее исследование необходимо для разработки новых прогностических факторов.

1.2 Молекулярные маркеры прогноза течения рака желудка и рака толстой кишки Использование методов молекулярной диагностики у пациентов имеет большой потенциал как в ранней диагностике и оценке ответа опухоли на терапию, так и в прогнозе заболевания [20].

В последнее время большое значение придается молекулярным маркерам для прогноза клинического течения и исхода новообразований как желудка, так и толстой кишки. Опухоли, сопоставимые по размеру, наличию или отсутствию метастазов, степени дифференцировки и гистологическому типу могут иметь различный потенциал к инвазии, метастазированию и рецидивированию, что зависит от их генотипа и действия микроокружения.

Маркёры РЖ (СА 72-4, РЭА, СА 19-9) характеризуются низкой чувствительностью и специфичностью, их содержание повышается до диагностических значений преимущественно при распространённых стадиях заболевания. Повторное исследование содержания маркёров в динамике рекомендуют при исходно повышенной их концентрации, мониторинг позволяет оценить эффективность лечения и заподозрить рецидив [48].

Раковый эмбриональный антиген (РЭА) - гликопротеин, вырабатываемый в тканях пищеварительного тракта и эмбриона. При РЖ чувствительность теста составляет - 27% при концентрации более 7,0 нг/мл, при КРР - 50% при концентрации более 7,0 нг/мл.

В настоящее время СА 19-9 является вторым по значимости маркером (после РЭА) для диагностики карциномы желудка. Его повышение наблюдается у 42 - 62% больных РЖ [28].

Показана связь прогноза РЖ с экспрессией VEGF, который приводит к образованию новых микроциркуляторных сосудов. Прогноз у больных РЖ с VEGF-негативным статусом значительно лучше, чем у пациентов с VEGFположительной экспрессией. Это позволяет считать оценку васкуляризации опухоли ценным инструментом для идентификации пациентов с высоким риском развития гематогенных метастазов [19].

У пациентов с КРР, молекулярные методы могут быть использованы для идентификации микрометастазов, для более точной оценки стадии опухолевого процесса, в частности, для выявления микрометастазов в лимфатических узлах или для оценки возможной гематогенной диссеминации опухолевых клеток в костный мозг [106]. Кроме того, молекулярная диагностика обладает большим потенциалом для выявления генотипических и фенотипических характеристик опухоли, которые обусловливают цепь событий, приводящих к метастазированию клеток - так называемый метастатический генотип и фенотип. Маркеры этого типа могли бы указывать на большую вероятность прогрессирования опухолевого процесса после радикальной операции.

Наиболее известный маркёр для опухолей толстой кишки - PЭA, хотя его не относят к патогномоничным и у 40% больных раком толстой кишки его не выявляют. PЭA не является специфическим маркёром, поскольку он может присутствовать и при других злокачественных опухолях (раке молочной железы, поджелудочной железы, лёгкого, яичников и саркомах), а также в эмбриональной ткани и при незлокачественных заболеваниях.

Уровень PЭA не коррелирует с размером опухоли - в большей степени он зависит от уровня её дифференцировки. При метастазах в печень PЭA чаще позитивный, при локальном раке - негативный. Высокий уровень PЭA после операции является неблагоприятным признаком нерадикальности операции, возможного рецидива, плохого прогноза, короткой выживаемости. Считается информативным и настораживающим уровень PЭA в крови более 4 нг/мл.

Существуют и другие опухолевые маркёры, используемые при РТК (СА19-9, Sialosyl-Tn); их диагностическое значение широко изучают в настоящее время [48].

Следует отметить, что РЭА остается маркером первого выбора при КРР и используется с высокой эффективностью в мониторинге заболевания, при этом главное внимание уделяют количественным его параметрам. По данным многочисленных авторов, маркер обладает прогностической значимостью, которая заключается в том, что высокий исходный уровень РЭА в сыворотке крови (более 25 нг/мл) свидетельствует о высоком риске развития раннего рецидива КРР, после хирургического удаления опухоли [20].

Кроме того, ученые показали, что определение р53 в сыворотке крови больных КРР наряду со стадией процесса и уровнями СА 19-9 можно использовать как фактор прогноза [68].

При изучении экспрессии VEGF при КРР показано, что интенсивность экспрессии ангиогенного фактора связана с прогрессией этих новообразований. Также при исследовании больных РТК с регионарными метастазами в лимфоузлах доказано, что у большинства из них (73,4%) безрецидивный период достоверно (р0,0001) выше при отсутствии экспрессии VEGF и низком индексе SPF (S-phase fraction) в опухоли [20].

Также, в дополнение к прогностической значимости VEGF, в исследовании показано, что блокирование VEGF-рецептора-2 ингибирует рост метастазов КРР в печени [62].

Таким образом, вопрос о молекулярных критериях прогноза течения РЖ и РТК, в силу малочисленности, а нередко и противоречивости исследований, остается открытым, в этой связи данная проблема является актуальной и требует дальнейшего изучения.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 
Похожие работы:

«Фролов Александр Акимович Функциональные особенности респираторной системы в предродовом периоде и в родах в зависимости от стереоизомерии женского организма и их влияние на состояние плода 03.03.01 физиология 14.01.01 акушерство и гинекология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук...»

«ВОНДИМТЕКА ТЕСФАЙЕ ДЕССАЛЕГН ВЛИЯНИЕ ФИЗИЧЕСКИХ УПРАЖНЕНИЙ НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ОРГАНИЗМА В УСЛОВИЯХ ГОРНОЙ ГИПОКСИИ И СУБТРОПИЧЕСКОГО КЛИМАТА ЭФИОПИИ 03.03.01 Физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор М.Т. Шаов Нальчик-2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЗОР...»

«КРЯЖЕВ ДМИТРИЙ ВАЛЕРЬЕВИЧ ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ДИАГНОСТИКИ ПРОЦЕССОВ БИОДЕСТРУКЦИИ ПРИРОДНЫХ И СИНТЕТИЧЕСКИХ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ РЯДА АБИОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ ВНЕШНЕЙ СРЕДЫ Специальность: 03.02.08 – экология (биология) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Тиунова Татьяна Алексеевна СОСТОЯНИЕ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ И ОЦЕНКА УРОВНЕЙ ОНКОМАРКЕРОВ У ПРОЖИВАЮЩИХ В ПРОМЫШЛЕННОМ РЕГИОНЕ ЖЕНЩИН С ПРОЛИФЕРАТИВНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ МОЛОЧНЫХ ЖЕЛЕЗ 14.03.09 Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук профессор...»

«Сафина Татьяна Владимировна ИССЛЕДОВАНИЕ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АСИММЕТРИИ ПОЛУШАРИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА В РЕГУЛЯЦИИ ЭРГОТРОПНЫХ И ТРОФОТРОПНЫХ ФУНКЦИЙ Специальность 03.03.01 – физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный...»

«Котельникова Светлана Владимировна НЕЙРОЭНДОКРИННЫЙ ГОМЕОСТАЗ В УСЛОВИЯХ ТОКСИЧЕСКОГО СТРЕССА ПРИ РАЗЛИЧНЫХ РЕЖИМАХ ОСВЕЩЕННОСТИ Специальность 03.03.01 – физиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор Д.Л....»

«КАЛЮЖНЫЙ Евгений Александрович МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ И АДАПТАЦИОННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ УЧАЩИХСЯ ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫХ УЧРЕЖДЕНИЙ В СОВРЕМЕННЫХ УСЛОВИЯХ 03.03.01 – физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научные консультанты – доктор биологических наук, профессор В.Н.Крылов доктор медицинских...»

«ХИЖНЯК Роман Михайлович ЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ (Zn, Cu, Co, Mo, Cr, Ni) В АГРОЭКОСИСТЕМАХ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ ЮГО-ЗАПАДНОЙ ЧАСТИ ЦЧО Специальность: 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ, доктор сельскохозяйственных наук, профессор С.В. Лукин Белгород, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Мезенцева Ольга Александровна ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ АДАПТАЦИЯ СТУДЕНТОВБАКАЛАВРОВ МЛАДШИХ И СТАРШИХ КУРСОВ С УЧЕТОМ ИХ ЦЕННОСТНЫХ ОРИЕНТАЦИЙ 03.03.01. Физиология Диссертация на соискание учной степени кандидата биологических наук Научный руководителькандидат биологических наук, профессор Овсянникова Н. Н. Москва...»

«УЛЬЯНОВ Владимир Юрьевич ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ И САНОГЕНЕТИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ГОМЕОСТАЗА В ОСТРОМ И РАННЕМ ПЕРИОДАХ ТРАВМАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ...»

«ЯБЛОНСКАЯ Елена Карленовна ЭКЗОГЕННАЯ РЕГУЛЯЦИЯ ПРОДУКЦИОННОГО ПРОЦЕССА, КАЧЕСТВА ЗЕРНА И УСТОЙЧИВОСТИ К ФИТОПАТОГЕНАМ ОЗИМОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ Специальность 03.01.05 – физиология и биохимия растений Диссертация на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук Научный консультант: Д.с.-х.н., профессор Котляров В.В....»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ «ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ДЕРМАТОВЕНЕРОЛОГИИ И КОСМЕТОЛОГИИ» МИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ НА ПРАВАХ РУКОПИСИ АРИПОВА МУКАДДАМ ЛУТФИЛЛОЕВНА ОСОБЕНННОСТИ ТЕЧЕНИЯ РОЗАЦЕА НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКОГО ОПИСТОРХОЗА (14.01.10 – КОЖНЫЕ И ВЕНЕРИЧЕСКИЕ БОЛЕЗНИ) Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: Доктор медицинских наук, профессор Хардикова С.А. Москва 2015 Стр. Список сокращений..4 Введение..5...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.