WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«БИЛАЛОВ ИЛЬФАТ НУРАХМАТОВИЧ ПОЛОВЫЕ И ВИДОВЫЕ ОСОБЕННОСТИ NO–ЗАВИСИМЫХ МЕХАНИЗМОВ РЕГУЛЯЦИИ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ПОЧЕК 03.03.01 – физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ

ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕСИОНАЛЬНОГО

ОБРАЗОВАНИЯ «КАЗАНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ

ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ИМЕНИ Н.Э. БАУМАНА»

На правах рукописи

БИЛАЛОВ ИЛЬФАТ НУРАХМАТОВИЧ



ПОЛОВЫЕ И ВИДОВЫЕ ОСОБЕННОСТИ

NO–ЗАВИСИМЫХ МЕХАНИЗМОВ РЕГУЛЯЦИИ

ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ПОЧЕК

03.03.01 – физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Научный руководитель Каримова Руфия Габдельхаевна, доктор билогических наук, доцент Казань – 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

Введение………………………………………………………………………..…..5 Основная часть…………………………………………………………………....10 Анализ состояния вопроса, задачи исследования и перспективы его 1.

решения…………………………………………………………………………..12 Оксид азота (II) – газообразный мессенджер…………………………….12 1.1.

Образование оксида азота в почках………………………………………14 1.2.

Роль оксида азота в регуляции клубочковой фильтрации……………...20 1.3.

Роль оксида азота в регуляции канальцевой реабсорбции ……………..23 1.4 Роль оксида азота в регуляции канальцевой секреции ………………….27 1.5 Роль NO в реализации инкреторной функции почек ………………..….30 1.6 Материал и методы исследований………………………………

2.

Собственные исследования………………………………………………….…...41 3.

Половые особенности системы оксида азота у разных видов 3.1.

животных…………………………………………………………………….…...41 Гендерная зависимость физиологических эффектов доноров оксида 3.2.

азота и ингибитора NO-синтаз на гидроуретическую функцию почек….......44 Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в 3.2.1 плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке L-аргинином…………………………………………………………………...…44 Объем суточного диуреза и потребляемой воды белых крыс 3.2.2 разного пола при нагрузке L-аргинином ……………………………………....50 Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в 3.2.3 плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке хлофузаном…………………………………………………………………….....55 Объем суточного диуреза и потребляемой воды белых крыс 3.2.4 разного пола при нагрузке хлофузаном ……………………………………….57 Стр.

Содержание суммарного количества нитрат-и нитрит-анионов в 3.2.5 плазме крови и моче белых крыс разного пола при нагрузке L-NAME……..60 Объем суточного диуреза и потребляемой воды белых крыс 3.2.6 разного пола при нагрузке L-NAME…………………………….……………..62 Гендерная зависимость физиологических эффектов доноров оксида 3.3 азота и ингибитора NO-синтаз на ионоуретическую функцию почек…..…….64 3.3.1 Натрийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз……….…...……..67 3.3.2 Калийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз …………………..….……..69 3.3.3 Хлоруретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз………………………….….71 3.3.4 Кальцийуретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз……….…….……73 3.3.5 Фосфоруретическая функция почек белых крыс разного пола при нагрузке донорами оксида азота и ингибитором NO-синтаз………….……….76

3.4 Гендерная зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на почечные процессы: клубочковую фильтрацию, канальцевую реабсорбцию, канальцевую секрецию …………….……...……86

3.5 Экспериментальная острая почечная недостаточность………….……………86 3.5.1 Активность системы оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности……………………………………………………….86

–  –  –

3.5.2 Гидроуретическая и ионоуретическая функция почек после введения доноров оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности……………………………………………………..……………88 3.5.3 Динамика изменения почечных процессов: фильтрации, реабсорбции и секреции после введения доноров оксида азота при экспериментальной острой почечной недостаточности……………………………………………...…..…...92 Заключение…………………………………………….………………………….95 Список сокращений……………………………………………………………...107 Список литературы………………………………………………………...........108 Приложения……………………………………………………………..….…….134

–  –  –





Актуальность темы исследования. Оксид азота II (NO) является короткоживущей и легко подвергающейся химическим трансформациям, высоко реактивной сигнальной молекулой, оказывающей пусковое и модулирующее влияние на многие физиологические процессы.

В 1980 г. R. F. Furchgott и J. W. Zawadzki впервые описали релаксацию кусочков аорты с интактным эндотелием в ответ на ацетилхолин. Это свидетельствовало о присутствии вещества, выделяемого эндотелиальными клетками и влияющего на миоциты, которое было названо эндотелийзависимым релаксирующим фактором (EDRF) [95]. Позже R.M.J. Palmer et al.

[182] установили, что эндотелий-зависимый релаксирующий фактор – это оксид азота (II). В 1998 году R. Furchgott, Luis J. Ignarro и Ferid Murad стали лауреатами Нобелевской премии в области физиологии и медицины «За открытие роли оксида азота как сигнальной молекулы в регуляции сердечнососудистой системы». Анализу роли оксида азота в организме посвящено несколько обзоров: C.J. Lowenstein et al., К.Г. Гуревича, Х.М. Маркова, S.P.

Sharma, А.В. Бабушкиной [1, 6, 16, 140, 217].

Оксид азота, синтезируемый в эндотелиальных, мезангиальных и эпителиальных клетках почек участвует в регуляции ренального кровотока, водно-солевого обмена [16], процессов фильтрации [231], реабсорбции, секреции, инкреции [107, 170]. Существуют данные об экспрессии всех изоформ нитроксидсинтазы (NOS) в почках, а также о постоянном синтезе оксида азота в эндотелии почечных сосудов, мезангиоцитах, эпителиальных клетках почечных канальцев, собирательных трубочек и в области "macula densa" [16]. В различных отделах почек представлены все три изоформы NOS-1 (нейрональная NOS), NOS-2 (индуцибельная NOS) и NOS-3 (эндотелиальная NOS). Все изоформы NO-синтаз, каждая из которых имеет свои особенности как в локализации так и в механизмах действия на почечные процессы (фильтрации, реабсорбции, секреции и инкреции), катализируют образование оксида азота [41, 110, 147, 174, 248]. Скорость клубочковой фильтрации (СКФ) определяется соотношением тонуса афферентных и эфферентных артериол. Результаты исследований методом микроперфузии показывают, что афферентные артериолы особенно чувствительны к оксиду азота по сравнению с эфферентными артериолами клубочков, в следствии чего может происходит изменение СКФ [62, 74].

Эксперименты P.A. Ortiz и др. доказывают влияние оксида азота на различные транспортные системы, локализованные в канальцах нефрона, которые способствуют обратному всасыванию или секреции веществ [178].

Во многих экспериментах натрийуретическое и мочегонное действие оксида азота не сопровождались изменениями в скорости клубочковой фильтрации или почечного кровотока [122, 194], тем самым доказывая, что NO непосредственно ингибирует Na+ и водный транспорт в стенках канальцев нефрона, механизм которого не до конца раскрыт на сегодняшний день.

Экспериментально доказано, что расположение изоформ NO-синтаз в почках имеет половую специфичность [205] и более высокая активность системы оксида азота выявлена у самок, по сравнению с самцами [145, 214].

Однако вопрос о состоянии системы NO у разных видов животных, половая специфичность эффектов химических соединений, являющихся донорами или ингибиторами оксида азота на регуляцию деятельности почек, остается актуальным на сегодняшний день.

Степень разработанности темы. Теоретической базой для исследования системы оксида азота послужили труды Х.М. Маркова (1996г.г.), N.G. Majmudar et al. (1999-2000 г.г.), O.V. GlushkovskayaSemyachkina et al. (2006-2011 г.г.), C. Jennifer Sullivan et al. (2006-2010 г.г.), Р.Г. Каримовой (2009-2015 г.г.).

Х.М. Марков (1996) экспериментально доказал участие оксида азота в почечных процессах и написал несколько обзоров о роли NO в физиологии и патологии почек [16]. O.V. Glushkovskaya-Semyachkina et al. (2006), N.G.

Majmudar et al. (2000) установили, что общая активность системы оксида азота в организме у самок намного выше, чем у самцов животных [145, 214].

Исследования C. Jennifer Sullivan et al. посвящены изучению активности различных изоформ NO-синтаз в почечной ткани, которые выясняли половую специфичность в их расположении [205]. Исследования Р.Г. Каримовой посвящены изучению комплексной нитроксидергической реакции организма на соединения бензофуроксанового ряда, которые являются экзогенными донорами оксида азота [11].

Половая специфичность системы оксида азота, а также половые особенности эффектов доноров NO и ингибиторов его синтаз на различные процессы, протекающие в организме, в частности в почках, остаются не изученными.

Цель исследования – изучить половые и видовые особенности NO–зависимых механизмов регуляции деятельности почек.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Определить половые особенности системы оксида азота у разных видов животных;

2. Изучить зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на гидроуретическую функцию почек от пола животного;

3. Изучить зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на ионоуретическую функцию почек от пола животного;

4. Изучить зависимость физиологических эффектов доноров оксида азота и ингибитора NO-синтаз на процессы фильтрации, реабсорбции, секреции в почках от пола животного;

5. Изучить влияние доноров NO на процессы фильтрации, реабсорбции и секреции на модели острой почечной недостаточности;

Научная новизна. Впервые установлено, что система оксида азота видоспецифична и ее активность, а также физиологические эффекты доноров NO и ингибитора NOS зависят от пола животного. Установлено, что концентрация метаболитов оксида азота в плазме крови и моче зависит от дозы и путей введения доноров оксида азота и ингибитора его синтаз.

Установлено, что изменение активности системы оксида азота, путем введения доноров оксида азота и ингибитора NO- синтаз, сопровождается изменением почечных процессов фильтрации, реабсорбции и секреции в зависимости от пола животного. Половая специфичность выявлена в процессе секреции при введении эндогенного донора – L-аргинина, в процессе реабсорбции при введении экзогенного донора – хлофузана.

Впервые показано, что в модели острой почечной недостаточности введение доноров оксида азота восстанавливает выделение ионов натрия, хлора, реабсорбцию воды, а также снижает концентрацию мочевины и креатинина в сыворотке крови, увеличивая их экскрецию с мочой.

Восстановление экскреции мочевины и креатинина с мочой, а также реабсорбции воды происходит более эффективно при введении эндогенного донора – L-аргинина, а восстановление экскреции ионов с мочой, при введении экзогенного донора – хлофузана.

Теоретическая и практическая значимость работы. Данная работа содержит новые решения актуальной научной проблемы выявления половой специфичности системы NO организма у разных видов животных.

Установленные факты о половой специфичности системы оксида азота позволяют научно обоснованно организовывать эксперименты и создавать оптимальные условия для грамотной интерпретации полученных результатов при физиологических и патологических состояниях. Установленные изменения в организме при поступлении доноров оксида азота и ингибитора расширяют представления о половой специфичности NO-синтаз деятельности почек, что необходимо учитывать для правильной дозировки препаратов, являющихся NO донорами, при лечении различных заболеваний.

Доноры оксида азота можно применять как средства, восстанавливающие процессы реабсорбции и секреции в почках при лечении нефропатий.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс в ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана», а также могут быть использованы в учебно-методическом процессе на биологических, ветеринарных и медицинских факультетах ВУЗов.

Методология и методы исследования Основой для наших исследований явилось участие оксида азота в различных физиологических и патофизиологических процессах в организме. Предметом исследования служила система оксида азота в аспекте ее участия в регуляции различных процессов и функций почек.

Объектом исследования служили белые нелинейные крысы (425), кролики (20), кошки (20), овцы (20) и крупный рогатый скот (10). Для решения поставленных задач применялись физиологические и биохимические методы исследования.

Особенности NO-зависимых механизмов регуляции фильтрации, реабсорбции и секреции у животных разного пола определяли при повышении и снижении активности системы оксида азота за счет применения доноров NO и ингибитора его синтаз. Активность системы оксида азота определяли по концентрации нитрат- и нитрит-анионов в крови и моче.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Система оксида азота видоспецифична. В плазме крови и моче крыс, кошек, коров, овец уровень метаболитов NO выше у самок; в плазме крови и моче кроликов – у самцов. Физиологические эффекты доноров NO и ингибитора его синтаз зависят от пола животного.

2. Концентрация метаболитов оксида азота в плазме крови и моче зависит от дозы и путей введения доноров оксида азота и ингибитора его синтаз. Максимально эффективная доза – при L-аргинина внутрижелудочном введении – 200 мг/кг, при внутрибрюшинном введении – 20 мг/кг; хлофузана – 2 мг/кг; L-NAME – 20 мг/кг.

3. Объем суточного диуреза, интенсивность экскреции натрия и калия положительно коррелирует с содержанием нитрат- и нитрит-анионов в плазме крови. Повышение объема диуреза, натрийуреза и калийуреза при введении доноров NO обусловлено снижением канальцевой реабсорбции, интенсивность которой при введении эндогенного донора оксида азота – L-аргинина ниже у самцов, а при введении экзогенного донора – хлофузана у самок.

4. В модели острой почечной недостаточности введение доноров оксида азота восстанавливает секрецию мочевины, экскрецию ионов хлора, натрия и реабсорбция воды. Восстановление экскреции мочевины и креатинина с мочой, а также реабсорбции воды происходит более эффективно при введении эндогенного донора – L-аргинина, а восстановление экскреции ионов с мочой, при введении экзогенного донора – хлофузана.

Степень достоверности и апробации результатов. Биометрическая обработка цифрового материала проведена на персональном компьютере по общепринятым методикам вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента.

Основные результаты исследований доложены и получили одобрение на: Международной научно-технической конференции «Прикладная электродинамика, фотоника и живые системы» (Казанский национально исследовательский технический университет имени А.Н. Туполева – КАИ. – Казань, 2013); 17-ой международной Пущинской школы конференции молодых ученых «Биология – наука ХХI века» (Пущинский государственный естественно-научный институт. – Пущино, 2013); ХХII съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Волгоградский государственный медицинский университет. – Волгоград, 2013);

Международной научной конференции «Научное и кадровое обеспечение инновационного развития агропромышленного комплекса» посвященная 140летию академии (Казань, 2013); XIII Всероссийской молодежной научной конференции «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2014); 18-ой международной Пущинской школы конференции молодых ученых «Биология – наука ХХI века»

(Пущино, 2014); Всероссийской научно-практической конференции «Ветеринарная медицина и зоотехния, образование, производство:

актуальные проблемы» (Казань, 2014); Международной научной конференции «Актуальные вопросы зоотехнии и ветеринарной медицины:

опыт, проблемы и пути их решения», посвященная 95 летию зоотехнического образования в Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана (Казань, 2015).

Основная часть 1. Анализ состояния вопроса и перспективы его решения

1.1 Оксид азота – газообразный мессенджер Оксид азота является свободным радикалом, играющим роль универсального модулятора разнообразных функций организма, включая регуляцию дыхания, поддержания сердечно-сосудистого гомеостаза, иммунного статуса организма, активности макрофагов, экспрессии генов, пластичности нервной ткани, памяти, секрецию нейротрансмиттеров [14, 16, 57, 139, 156, 162, 170, 220]. Оксид азота (II), представляет собой восстановленную форму моноокиси азота (NO) (период полураспада которого составляет несколько секунд) [2].

NO – в химическом отношении – это липофильная молекула газа, растворимая в воде и жирах, состоящая из одного атома азота и одного атома кислорода и имеющая непарный электрон, который превращает ее в высоко реактивный радикал, свободно проникающий через биологические мембраны и легко вступающий в реакции с другими соединениями.

В организме оксид азота образуется из L-аргинина под действием трех изоформ фермента NO-синтазы [8, 158, 164, 245]. Этот процесс представляет собой комплексную окислительную реакцию, где молекулярный кислород присоединяется к конечному атому азота в гуанидиновой группе L-аргинина (рисунок 1) [57].

В настоящее время идентифицированы три основные формы этого фермента, каждая из которых кодируется собственным геном [23]. К конститутивным формам NO-синтазы относятся эндотелиальная (eNOS, тип III), которая впервые была обнаружена в эндотелии кровеносных сосудов, и нейрональная (nNOS, тип I). Конститутивные изоформы NO-синтазы экспрессируются в эндотелиоцитах, нейронах и других клетках. Ca2+ под влиянием определенных стимулов (ацетилхолин, гистамин, 5-оксиптриптамин, глутамат и др.) входит в клетку, где связывается в единый комплекс с кальмодулином в цитозоле. Комплекс Ca-кальмодулин выступает как кофактор и активирует NO-cинтазу. Под влиянием NOS образуются очень малые количества NO, которые измеряются пикомолями. NO активирует клеточный фермент гуанилатциклазу (ГЦ), что приводит к образованию циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ), который и опосредует все эффекты NO [139, 156].

2Arg + 3NADPH + 4О2 + 3H = = 2Cit + 2NO + 3NADPH + 4H2O, где Arg - аргинин; Cit – цитруллин Рисунок 1 Синтез и метаболизм оксида азота (Bredt D.S. Nitric Oxide in the Nervous System // Ed. by Vincent S.. - N.Y.: Academic Press, 1995. P. 1-21) Третья изоформа NO-синтазы - индуцибельная (iNOS, тип II) – была идентифицирована в цитоплазме иммунных, гладкомышечных, эпителиальных клеток, гепатоцитах и нефронах. В отличие от eNOS и nNOS, она не экспрессируется постоянно (конститутивно). Индуцибельная кальций независимая NO-синтаза синтезируется в течение 6-8 часов в ответ на действие триггеров иммунонейроэндокринной системы – цитокинов, эндоили экзотоксинов [22, 24, 25, 56, 159].

Изучение состояния системы оксида азота в организме имеет важное значение для раскрытия механизма физиологических и патологических процессов.

1.2 Образование оксида азота в почках Существуют сведения об экспрессии всех изоформ нитроксидсинтазы в почках и постоянном синтезе оксида азота в эндотелии почечных сосудов, мезангиоцитах, эпителиальных клетках почечных канальцев, собирательных трубочек и в области плотного пятна (macula densa) [16, 35].

Исследованиями многих ученых установлено расположение различных изоформ NO-синтаз в почечных структурах [253]. Доказано присутствие мРНК и иммунореактивного белка каждой изоформ NOS в почечных канальцах и сосудистых сегментах (верхних, верхних и нижних передних, нижних и задних) [94, 116, 139, 153, 160,]. Изучено распределение ферментативной активности NOS на уровне изолированных канальцев и сосудистых сегментов.

Загрузка...
Об активности NOS в почках судят по концентрации нитрит- и нитрат-анионов, уровню цГМФ в почечной ткани или гистохимическому определению отражающей NADPH-диафоразы, каталитическую активность NOS [8]. NADPH-диафораза – фермент класса оксидоредуктаз, катализирующий реакцию восстановления амидолипоевой кислоты в амид дегидролипоевой кислоты. NADPH диафораза обнаруживается в сегменте «плотного пятна» почек крыс, в афферентных и эфферентных артериолах [41]. Этот факт требует дополнительных доказательств, поскольку реакция NADPH-диафораза-тетразолий не особо специфична для NOS, так как она может обнаруживать и другие соединения, в том числе ферменты.

M.L. Biondi, J.C. Romero проводили количественное определение NOS и их ферментативную активность за счет выявления вторичного мессенджера циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) в тканях. Они установили, что мозговой слой почек собак имеет больший потенциал для синтеза NO, чем корковый слой почек [54]. Исследования M. Mckee и соавт., а также F. Park и соавт. показали, что мозговой слой почек содержит большее количество иммунореактивного белка с общей ферментативной активностью NOS по сравнению с корковым слоем [39, 85, 153]. M. Mckee и соавторы определили большее количество nNOS-, eNOS- и iNOS-иммунореактивного белка во внутреннем и внешнем мозговом слое почек относительно коры [153].

Дальнейшие исследования B.A. Moridani и R.L. Kline в гомогенате почек крыс [158] доказывают, что каталитическая активность NOS в интерстиции мозгового слоя почти в 10 раз больше, чем в корковом слое [253].

мРНК нейрональной ранее была обнаружена в NO-синтазы медуллярных отделах собирательных трубочек методом микродиссекции в ПЦР [138, 187], а также nNOS была обнаружена в культуре клеток медуллярных отделов собирательных трубочек мышей [56], и в общей почечной ткани из внутреннего мозгового гомогената [70, 116].

Таким образом, эти исследования дают убедительные доказательства того, что мозговой слой почек более обогащен ферментом NO-синтазой, которая здесь имеет более выраженную активность, по сравнению с корковым слоем почек.

Имунногистохимическим методом установлено наличие nNOS только в плотном пятне [41, 113, 174], тогда как методом микродиссекции в почечных сосудах и канальцах показано наличие мРНК нейрональной NO-синтазы в плотном пятне, внутренних и внешних собирательных канальцах, клубочках, дуговых артериях, почечных нервах и в периваскулярной соединительной ткани [41, 66, 187]. Также иммуногистохимическим анализом выявлена гендерная зависимость расположения nNOS. У самцов крыс более интенсивно окрашивается nNOS в канальцах почек, а у самок – в сосудах клубочков [98]. Следовательно, экспрессия изоформ NO-синтаз в почках также может иметь половую зависимость [205]. Это объясняется тем фактом, что общая активность, системы оксида азота в организме у самок намного выше, чем у самцов [86, 145, 167, 214,].

NOS-1 (nNOS) преимущественно локализована в плотном пятне (macula densa), нейронах, капсуле Боумена-Шумлянского, собирательных канальцах, где она участвует в регуляции клубочковой гемодинамики, секреции ренина и натрийуреза [42, 64, 91, 128, 174].

Deyin Lu и соавторы в своих опытах продемонстрировали наличие в плотном пятне трех изоформ нейрональной NOS (nNOS-, nNOS- и nNOSУровень nNOS-, nNOS- и nNOS- был измерен в изолированых микродиссекциях захватом лазера [175, 212, 223].

В организме наиболее распространенной нейрональной NO-синтазой является nNOS–, которая обнаруживается в головном мозге, в почках, кишечнике, надпочечниках, в сердце и скелетных мышцах; реже встречается nNOS-: только в эмбрионах и nNOS-: в почках, скелетных мышцах и эмбрионах [235].

Некоторые авторы используют для определения активности NOS измерение количества превращенного радиоактивного в L-аргинина L-цитруллин методом микродиссекции в отдельных сегментах почек.

Количественное определение образования цитруллина позволяет произвести точный расчет активности NOS.

У крыс ферментативная активность выше в медуллярных отделах собирательных трубочек, микродиссекциях клубочков, в прямых кровеносных сосудах (vasa recta), и существенно ниже в прямом участке проксимального канальца (pars recta), в сегменте собирательных трубочек, в наружных медуллярных отделах собирательных трубочек, в корковых частях толстого восходящего колена, в мозговых частях толстого восходящего колена, в тонком нисходящем отделе петле Генле. Значительное количество ферментативной активности NOS в медуллярных отделах собирательных трубочек и прямых кровеносных сосудах согласуется с предыдущими исследованиями F.Wu et al., в которых доказывается тот факт, что мозговой слой почек имеет значительно большую активность NOS, чем корковый слой [248] Одной из потенциальных проблем, связанных с использованием ферментативных тестов для количественного определении NO-синтаз в отдельных сегментах нефрона является вероятность того, что эндогенные ингибиторы NOS, например АДМА (асимметричный диметиларгинин), могут присутствовать в различных сегментах нефрона, что может снизить достоверность результатов.

После идентификации почечных сегментов с наибольшей ферментативной активностью стал вопрос об определении NOS, разновидности изоформ NOS в медуллярных отделах собирательных трубочек, микродиссекциях клубочков, в прямых кровеносных сосудах vasa recta. Исследователи указывают на наличие нейрональной NO-синтазы, индуцибельной NO-синтазы и эндотелиальной NO-синтазы в медуллярных отделах собирательных трубочек. Это согласуется с предыдущими исследованиями, которые определили наличие мРНК и иммунореактивного белка для всех трех изоформ NOS в медуллярных отделах собирательных трубочек и внутреннем мозговом слое.

Методом микродиссекции был найден мРНК индуцибельной NO-синтаз в дуговых и междольковых артериях, клубочках, проксимальных канальцах, толстых восходящих коленах и собирательных канальцах [70, 120].

Выявление мРНК индуцибельной NO-синтазы с кальций-независимой активностью в медуллярных отделах собирательных трубочек также согласуется с предыдущими работами, которые обнаруживают их в почках крыс методом ПЦР [164], методом гибридизации мРНК [120], а также в культуре клеток медуллярных отделов собирательных трубочек почек крыс [56] и во всём гомогенате почечной ткани внутреннего мозгового слоя [116, 153, 160]. Некоторые исследователи предполагают, что iNOS (индуцибельная NOS) конститутивно экспрессируется в толстой части восходящего колена нефрона [139, 94], а также в дуговых артериях [147].

ПЦР-исследования обнаруживают мРНК эндотелиальной NO-синтазы в клубочках, дуговых артериях, междольковых артериях и афферентных артериолах [138], исследования иммуногистохимическим методом – в эндотелиальных клетках пре- и постгломерулярных сосудов [41].

Наличие мРНК эндотелиальной NOS свидетельствует об экспрессии ее в медуллярных отделах собирательных трубочек [174], в клубочках, дуговых артериях, междольковых артериях и афферентных артериолах [138], а также в культуре клеток медуллярных отделах собирательных трубочек почек мышей [56] и мозговом гомогенате почек в целом [153]. Наличие еNOS в эндотелиальных клетках сосудов и канальцах играет важную роль в поддержании скорости клубочковой фильтрации, сосудистого тонуса и почечного кровотока [42, 64, 128].

M.J. Solhaug и соавторы изучили локализацию eNOS в почечных сегментах у крыс в антенатальном и постнатальном периодах онтогенеза.

eNOS обнаруживается в эндотелиальных клетках, недифференцированных внутрипочечных капиллярных сетях у плодов в возрасте 14 суток. У плодов и новорожденных интенсивность иммуноокрашивания eNOS гораздо сильнее в развивающейся сосудистой системе коркового слоя почек, чем мозгового. По мере созревания почек, после рождения, иммуноокрашивание eNOS постепенно уменьшается в корковом слое, а экспрессия еNOS в мозговом слое постепенно увеличивается в эндотелиальных клетках сосудистых пучков и капилляров и достигает высокого уровня у взрослых крыс [88, 89].

При определении роли оксида азота в толстой части восходящего колена петли Генле, пришли к выводу, что NO вырабатывается при участии eNOS. Этот факт подтверждается путем прямых измерений NO в изолированном, перфузированном материале, а также в суспензии с толстой частью восходящего колена петли Генле с использованием двух различных методов: NO-специфическим флуоресцентным красителем [111, 220] и NOселективным электродом [110, 176].

Еще одним важным моментом исследований является наличие относительно больших количеств ферментативной активности nNOS и eNOS в сосудистых структурах коры почек, особенно в афферентных артериолах и клубочках. В отличие от медуллярных отделов собирательных трубочек, мРНК нейрональной NO-синтазы и эндотелиальной NO-синтазы были обнаружены только в микродиссекциях клубочков, в прямых кровеносных сосудах vasa recta. Это согласуется с предыдущими исследованиями на крысах [41, 138, 174]. Полученные данные позволяют предположить, что эти сегменты с nNOS и eNOS оказывают наибольшее биологическое действие.

Хотя eNOS является мембранно-связанной, а nNOS – цитозольной, механизм их действия сходен.

Нейрональная NO-синтаза и эндотелиальная NO-синтаза присутствуют в дуговых и междольковых артериях, афферентных артериях клубочков, и сосудах vasa recta, в то время как мРНК индуцибельной NO-синтазы обнаруживается только в дуговых артериях [147, 248]. Кроме того, некоторые исследователи отмечают, что введение селективного ингибитора nNOS аминогуанидина не изменяет кровоток в почках крыс [115, 116]. Эти результаты показывают, что NO, регулирующий почечное сосудистое сопротивление продуцируется при участии nNOS или eNOS. Принято считать, что еNOS является основным источником оксида азота в кровеносных сосудах, хотя другие изоформы, особенно nNOS могут быть экспрессированы в сосудах почечной ткани.

W.H. Beierwaltes в своих исследованиях установил, что селективное ингибирование nNOS с 7-нитроиндазолом (7-NI) не оказывает влияния на изменение почечного кровотока у крыс [50, 51], когда как C.S. Wilcox et al.

выявили обратный эффект: хроническое ингибирование nNOS, приводит к снижению почечного кровотока у крыс [249].

Оксид азота играет важную роль в регуляции клубочковой гемодинамики [197]. Экспериментальные данные из микроперфузионных исследований показывают, что афферентные артериолы особенно чувствительны к сосудорасширяющему действию оксида азота, по сравнению с эфферентными артериолами клубочков [74]. Тем не менее, существуют противоречивые данные по этому поводу [41, 74]. Исследования на крысах показали, что NO может оказывать большее влияние на мозговое кровообращение почек, чем на корковый кровоток у взрослых крыс [146].

Имеющиеся в литературе сведения указывают на то, что локализация NOS изоформ в структурах почек различна, что свидетельствует об участии NO во многих физиологических процессах, протекающих в почках.

1.3 Роль оксида азота в регуляции клубочковой фильтрации Как биологический мессенджер, оксид азота играет важную роль в регуляции клубочковой гемодинамики в роли сосудорасширяющего фактора [197] и, как следствие, влияет на процесс фильтрации [231]. В экспериментах обнаружено относительно большое количество ферментативно активного nNOS и eNOS в сосудистых структурах коркового слоя почек [41, 138, 174].

Тем не менее, существуют противоречивые данные относительно того, что афферентные или эфферентные артериолы являются основным источником синтезированного в эндотелии NO [41, 74]. Результаты исследований методом микроперфузии показывают, что афферентные артериолы особенно чувствительны к оксиду азота, по сравнению с эфферентными артериолами клубочков, что приводит к повышению активности клубочковой фильтрации [74].

Скорость клубочковой фильтрации (СКФ)определяется соотношением тонуса афферентной и эфферентной артериол. Вазодилатация афферентных артериол приводит к увеличению СКФ, тогда как тонус эфферентных артериол остается почти неизменным.

NO является мощным сосудорасширяющим веществом, поэтому чем больше NO действует на афферентные артериолы, тем больше СКФ [62]. Снижение СКФ в ответ на торможение NO-синтаз, является косвенным предположением более высокой чувствительности к NO афферентных артериол относительно эфферентных [186]. Функциональные исследования показывают, что острое ингибирование NOS приводит к уменьшению коэффициента клубочковой фильтрации [54, 66, 67, 253]. Однако не все исследователи обнаруживают снижение СКФ в ответ на торможение NO-синтаз [80, 81, 114, 173,]. В большинстве случаев натрийуретическое и гидроуретическое действие оксида азота не сопровождается изменениями в скорости клубочковой фильтрации и почечного кровотока [122, 194].

В процессе фильтрации задерживаются белки, которые практически не должны присутствовать в моче в норме у здорового человека и животных.

Естественной преградой на пути проникновения белков в просвет нефрона служит гломерулярный фильтр, а часть профильтровавшихся белков подвергаются реабсорбции в проксимальных отделах нефрона. Некоторые исследования показывают, что у здоровых крыс при различных вариантах увеличения мочеотделения проявляется кратковременная протеинурия [12].

Гемодинамика клубочка контролируется NO-зависимыми процессами, а проницаемость для белков гломерулярного фильтра во многом определяется отрицательным зарядом образующих его молекул. Блокада продукции NO при введении метилового эфира L-нитроаргинина приводила к небольшому усилению мочеотделения, к увеличению выделения белка, и к увеличению экскреции альбумина. Однократное введение неселективных ингибиторов NO, вызывает изменение клубочковой фильтрации для белков, по видимому, воздействуя на его заряд. Это приводит к развитию острой селективной протеинурии и снижению коэффициента клубочковой фильтрации [67, 96, 123, 124]. Длительная блокада продукции NO вызывала у крыс протеинурию и альбуминурию [48]. Этот эффект объясняется развитием гипертензии и последующим поражением почечных клубочков при хронической блокаде NO-синтазы [218]. Протеинурия при действии производных аргинина, обладающих высоким положительным зарядом, свидетельствует не только об их влиянии на заряд фильтрационной мембраны, но и об участии NO-зависимых процессов в регуляции фильтрации в почечных клубочках [13].

В экспериментах K. Prasun et al. [84] показано изменение клубочковой проницаемости для белков и участие оксида азота в качестве важного механизма в сохранении проницаемости барьера капилляров клубочков при их повреждении. В инкубированных клубочках с ингибитором NO-синтаз протеинурия увеличивается, что связано со снижением NO. Авторы доказывают, что не только оксид азота является регулятором клубочковой проницаемости для белка, но и повышение биодоступности O2-[84].

В почках существует тесная взаимосвязь между процессами клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции в канальцах [232]. Во многом это достигается деятельностью комплекса тубулогломерулярной обратной связи (TOC). При этом концентрация глюкозы и NaCl в канальцах имеет четко определенную концентрацию. Если эта концентрация понижена

– это сигнал для повышения СКФ, если повышена – сигнал для снижения [243]. Недостаток поступления натрия хлорида в плотное пятно (macula densa) увеличивает скорость клубочковой фильтрации [32]. Таким образом, функции клубочков регулируются за счет механизма тубулярногломерулярной обратной связи. Сигналы из дистальных канальцев поступают в специальный "почечный центр", координирующий фильтрацию и реабсорбцию. Этот центр «macula группа призматических densa»

эпителиальных клеток дистального отдела нефрона, которые входят в состав юкстагломерулярного комплекса почки. Повышенное поступление ионов Na+ и воды в дистальные отделы нефрона служит стимулом для освобождения юкстагломерулярным аппаратом вазоактивных веществ (ренина). Ренин вызывает и поддерживает спазм афферентных артериол с перераспределением почечного кровотока, запустеванием артериол и уменьшением СКФ. Всё это приводит к уменьшению экскреции солей и воды. Оксид азота играет важную роль в регуляции системы TОС [174, 234, 242].

Из всего изученного, можно сделать заключение о том, что оксид азота играет важную роль в процессе клубочковой фильтрации, поддерживает тонус гломерулярного фильтра и участвует в регуляции его за счет общего снижения артериального давления и за счет влияния на внутрипочечные механизмы ауторегуляции. Однако недостаточно изучен вопрос о гендерной зависимости активности NO-синтаз в артериолах клубочков и их роль в процессе регуляции клубочковой фильтрации.

1.4 Роль оксида азота в регуляции канальцевой реабсорбции В регуляции процесса реабсорбции принимают участие различные биологические активные вещества, вырабатываемые в самой почке и вне ее.

К ним относится и оксид азота, который действует на различные транспортные системы, локализованные в канальцах нефрона и регулирующие перемещение растворенного вещества и растворителя по нефрону [178]. Влияние NO на транспорт ионов и воды доказано во многих экспериментах [14, 28, 79, 107, 147, 149, 170, 209]. Установлено, что стимуляция продукции оксида азота донорами увеличивает экскрецию Na+, К+, воды и некоторых органических веществ. Ингибирование оксида азота с использованием нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) оказывает антинатрийуретическое и антидиуретическое действие [82, 87, 178, 237].

Этот эффект подтверждается и снижением экскреции Na+ и объема мочи у еNOS нокаутных-мышей [172]. Во многих ситуациях натрийуретическое и мочегонное действие оксида азота не сопровождалется изменениями в скорости клубочковой фильтрации или почечного кровотока [122, 194], тем самым доказывая, что NO непосредственно ингибирует Na+ и водный транспорт в стенках канальцев нефрона.

В почках активная реабсорбция натрия происходит в большей части в Na+/K+-АТФазы.

канальцах благодаря активности Она обеспечивает движущую силу для натрия в базолатеральной мембране и транспортировку натрия из клетки в интерстиций. Вход натрия в клетку происходит за счет различных переносчиков. Содержание Na+/H+ обменника 3 типа (NHE3) высокое в проксимальных канальцах [90], в то время как «тиазид чувствительные» (подавляются тиазидовыми диуретиками) Na+, Cl--котранспортеры (TSC) участвуют в реабсорбции натрия и хлора в апикальной поверхности дистальных извитых канальцах. В толстой восходящей части петле Генле Na/K/2Cl котранспортер (BSC1) и NHE3 несут основную ответственность за реабсорбцию натрия [155].

Ряд исследований показывают влияние NO на натриевый и водный транспорт в проксимальных канальцах [67, 100, 121, 207] за счет ингибирования Na+/H+ обменника (NHE), а также Na+/K+-АТФазы в собирательных канальцах [227]. В корковом сегменте собирательных трубочек (CCD) Na+ транспортируется через эпителиальные натриевые каналы (ENaC) и через базолатеральные Na+/K+-АТФазы.. Доноры оксида азота Spermine–Nitric oxide complex hydrate (SPER/NO) и нитроглицерин уменьшают активность ENaC в сегменте собирательных трубочек у крыс [227]. Этот эффект был также подтвержден с эндотелий производными NO, которые снижают деятельность ENaC [227]. В отличие от этого, Lu et al.

(1997) наблюдают увеличение активности ENaC в связи с NO. Это, скорее всего, косвенное воздействие, посредством активации базолатеральных K+каналов [141]. Таким образом, влияние NO как ингибитора или активатора ENaC в сегментах собирательных трубочек остается спорным. Оксид азота ингибирует Na+/K+-АТФазу в проксимальных канальцах, но не в сегментах собирательных трубочек. Тем не менее, это несоответствие может быть объяснено различием окислительных процессов в эпителиальных клетках, которые могут противостоять эффекту NO на транспорт Na+ [33, 192].

В толстой части восходящего колена петли Генле поглощается 20-30% фильтрата NaCl [104], потому что это водонепроницаемый отдел, который генерирует большую часть осмотического давления, что приводит к поглощению жидкости в системе собирательных канальцев. Таким образом, логично предположить, что эффект действия NO проявляется в толстой части восходящего колена. Транспорт NaCl в толстой части восходящего колена происходит как через трансцеллюлярные, так и парацеллюлярные пути.

Трансцеллюлярное поглощение является активным процессом, в котором Na и Cl входят в клетки толстой части восходящего колена через просвет Na-K-2Cl котранспортера. Ионы Cl- выходят из базолатеральной мембраны через Cl- каналы или K-Cl котранспортер [105]. Базолатеральной Na-KАТФазой создается движущая сила для поступления NaCl путем выведения Na+ через базолатеральные мембраны [156]. Na+ также реабсорбируется через парацеллюлярные пути [108, 229]. C.F. Plato и соавт. впервые были продемонстрировано влияние NO на поглощение NaCl на изолированных перфузированных канальцах. Они показали, что доноры NO ингибируют всасывание Cl- [196]. Эти данные свидетельствуют еще о том, что NO который образуется в других отделах, таких как афферентные артериолы, сосуды Recta и т.д., может регулировать транспорт NaCl в толстой части восходящего колена нефрона почек. Оксид азота, который вырабатывается в толстой части восходящего колена выступает в качестве физиологически активного вещества, подавляющего всасывание NaCl [196]. Тот факт, что NO вырабатывается в толстой части восходящего колена, был подтвержден путем прямых измерений NO в изолированных, перфузированных материалах, а также в суспензии с толстым восходящим коленом с использованием двух различных методов: NO-специфическим флуоресцентным красителем [111, 220] и NO-селективным электродом [110, 176].

Ингибирующий эффект NO в толстом восходящем колене нефрона для Cl- может быть связан с торможением одного из транспортеров мембраны (Na-K-2Cl котранспортера или K+ каналов) или одного из базолатеральных переносчиков (Na+/K+-АТФазы; Cl- канала или K-Cl котранспортера).

Исследование механизма действия Na-K-2Cl котранспортера это подтвердило [177].

Рядом с толстой частью восходящего колена происходит также транспорт ионов Na+ через тонкие восходящие ветви. Предполагаемый эффект NO на Na+-транспортную деятельность в этих сегментах изучен недостаточно [97].

Влияние NO в толстой части восходящего колена является более выраженным, чем в проксимальных канальцах. В этом сегменте NO уменьшает поглощение свободного Cl- и НСО3-, оказывает прямое тормозящее действие на Na-K-2Cl котранспортер и Na/H обменник, а также стимулирует апикальные K+ каналы. Оксид азота препятствует реабсорбции бикарбонатов, снижая деятельность Na+/H + обменника. Реабсорбция HCO3регулируется прежде всего за счет этого апикального транспортера [101, 102, 103].

С участием оксида азота в дистальных канальцах происходит активная и факультативная (альдостеронзависимая) реабсорбция электролитов и пассивная реабсорбция воды, регулируемая антидиуретическим гормоном.

Классическим механизмом биологического действия NO является стимулирование растворимой гуанилатциклазы. Это приводит к повышению производства циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) и воздействие на протеинкиназы, такие как протеинкиназы G. Исследования влияния цГМФ активированного с NO на NHE3 [193] и Na+/K+ - АТФазы [134, 135] в проксимальных канальцах показали, что NO-индуцированное продукция цГМФ имеет решающее значение для регуляции транспорта Na+ в проксимальных канальцах. Интересно, что S. Sasaki и соавт. показали, что цГМФ образуется при введении донора оксида азота SNAP в клетках проксимальных канальцев в организме, в результате чего снижается поглощение Na+ в эпителиальных клетках, а также толстом восходящем колене петли Генле [177]. Этот факт позволяет предположить, что транспорт цГМФ необходим для регуляции транспорта Na+ [190]. Это может быть результатом активации протеинкиназы G или тирозинкиназы Src сигнальных путей от внеклеточной цГМФ [204, Активация комплекса 211].

тирозинкиназы Src связана с эндоцитозом Na+/K+-АТФазы, а также NHE3 в почечных клетках [119, 199, 211].

Помимо активации цГМФ путей существуют альтернативные сигнальные механизмы, которые могли бы объяснить эффект NO на транспорт ионов Na+. Повышение количества продуктов окисления NO2 или N2O3, способствует тому, что они вступают в реакцию с остатками цистеина белков, т.е. в реакцию S-нитрозилирования [191]. S-нитрозотиолы могут регулировать деятельность ионных каналов и транспортеров, как, например Na+/K+–АТФазы [117]. Однако вклад S-нитрозилирования не достаточно изучен и требует дальнейших исследований [154].

Эти исследования демонстрируют, что NO производится различными типами клеток, влияет на конкретные транспортеры ионов, деятельность которых осуществляется с помощью клеточных сигнальных механизмов, таких как активация цГМФ. Оксид азота влияет на реабсорбцию натрия, хлора, калия, бикарбонатов и других ионов в почках, эти эффекты имеют специфичность действия в сегментах канальцев нефрона. Неизученным остается вопрос о влиянии NO на процессы реабсорбции в зависимости от пола животных.

1.5 Роль оксида азота в регуляции канальцевой секреции В процессе образования мочи ряд веществ, например, некоторые органические кислоты, не проникают в фильтрат, но тем не менее оказываются в конечной моче в результате канальцевой секреции.

В результате секреции в мочу поступают вещества из крови капилляров, окружающих канальцы, либо образующиеся в клетках канальцев ионы водорода, ионы калия, мочевина, мочевая кислота, креатинин и аммиак.

Секреция осуществляется за счет их активного транспорта канальцевым эпителием, особенно в проксимальных сегментах. В зависимости от состояния организма эти системы могут менять направление активного переноса веществ, обеспечивающих или их секрецию или обратное всасывание.

В эпителии проксимального извитого канальца синтезируется большая часть почечного L-аргинина — субстрата NOS. Высокая активность фермента обусловлена функциональными особенностями данного отдела нефрона и напрямую связана с регуляцией таких процессов, как секреция креатинфосфата, активная и облигатная реабсорбция электролитов, воды, некоторых органических веществ с их транспортом в интерстиций [14, 28].

Большая часть К+ реабсорбируется до альдостерон-чувствительных дистальных отделов нефрона, а в мочевыводящих каналах в основном секретируется, особенно в конце дистальных канальцев, соединяющих канальцах и сегментах собирательных трубочек [99]. При снижении концентрации K+ его реабсорбция происходит в собирательных трубочках наружного мозгового вещества [99, 251].

M. Lu и W.H. Wang с использованием целых клеток методом локальной фиксации установили, что NO-доноры увеличивают активность калиевого канала, а ингибитор NO-синтаз уменьшает его активность [143]. Однако реакция NO с супероксидом и продукт этой реакции – пероксинитрит может проявлять тормозящий эффект. Кислород производные свободные радикалы супероксида могут быть образованы путем различных оксидаз, таких как ксантиноксидазы, NADPH оксидазы и в некоторых условиях и за за счет NOS [40, 152, 183]. Механизм NO ингибирования Na+, по видимому, связан с прямым воздействием на апикальные Na+ каналы и возможно, тормозящим действим на базолатеральные К+ каналы. Различные эффекты NO на транспорт Na+ обусловлены различным уровнем супероксида и, таким образом пероксинитрита [178]. Влияние NADPH оксидаз также было происследовано C. Schreck и P.M. O'Connor, которые рассматривали действие О2-, имеющего тормозящее действие, на апикальную калиевую секрецию через ROMK-каналы [216].

У млекопитающих есть два типа переносчиков мочевины: мочевина транспортер (UT)-A и UT-B. UT-переносчики в основном находятся только в эпителиальных клетках почек, в то время как UT-B более широко распространен в почках, сердце, мозге, семенниках, мочевыводящих путях и других тканях [252]. UT-семейство состоит из шести типов UT-A1 – UT-A6 [44, 132, 137]. Полученные данные в экспериментах на мышах с нарушением переноса мочевины, позволили исследовать каждый тип и их физиологическую функцию. В почках удаление UT-A1/UT-A3 приводит к полиурии, указывая на то, что внутрипочечное выведение мочевины играет важную роль в общей способности концентрировать мочу.

Стимулирование или угнетение этих транспортеров во многом зависит от цАМФ (циклический аденозинмонофосфат), вазопрессина или от увеличения внутриклеточного кальция [188, 201, 240]. В литературе мало сведений, свидетельствующих о влиянии оксида азота на секрецию мочевины, тем не менее, отмечается опосредованное влияние его в связи с другими веществами. В опытах, проведенных с использованием L-аргинина – донора оксида азота, на кроликах, не обнаружено существенного влияния на креатинин и мочевину сыворотки крови [78].

Содержание креатинина, как и других продуктов азотистого обмена, в плазме крови, используется для изучения функции почек. Содержание креатинина в крови – величина довольно постоянная. Повышение его содержания происходит параллельно нарастанию азотемии, но в отличие, например, от мочевины, уровень которой динамично реагирует даже на небольшие изменения функции почек, креатинин является более устойчивым показателем. Уровень креатинина мало подвержен влиянию внепочечных факторов, в то время как содержание остаточного азота и мочевины снижается при малобелковой диете.



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 
Похожие работы:

«Курганова Ольга Петровна...»

«Королева Марина Владимировна ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА И ФАРМАКОДИНАМИКА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ВЛИЯЮЩИХ НА МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ, У БОЛЬНЫХ С ЭКЗОГЕННОТОКСИЧЕСКИМИ ПОРАЖЕНИЯМИ ПЕЧЕНИ 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора...»

«РЕМЕЗОВ Андрей Владимирович ЭТАПНОЕ ХИРУРГИЧЕСКОЕ ЛЕЧЕНИЕ ГНОЙНО-НЕКРОТИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ СИНДРОМА ДИАБЕТИЧЕСКОЙ СТОПЫ. 14.01.17 – хирургия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доцент, кандидат медицинских наук, доцент В.В. ПЕТРОВА Санкт-Петербург Оглавление ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ САХАРНОГО ДИАБЕТА И ЕГО ХИРУРГИЧЕСКИХ ОСЛОЖНЕНИЙ. 9 1.2....»

«Кривоножкина Полина Станиславовна ОСОБЕННОСТИ НЕРВНОЙ СИСТЕМЫ И ДИАПАЗОН НЕЙРОПЛАСТИЧНОСТИ У ДЕТЕЙ С ГЕМИПЛЕГИЧЕСКОЙ ФОРМОЙ ДЕТСКОГО ЦЕРЕБРАЛЬНОГО ПАРАЛИЧА 14.01.08–педиатрия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, заведующий кафедрой детских болезней Н.В. Малюжинская Волгоград 2015 Оглавление Стр....»

«Марянян Анаит Юрьевна ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ РАЗЛИЧНЫХ ДОЗ СЛАБОАЛКОГОЛЬНЫХ НАПИТКОВ НА СИСТЕМУ «МАТЬ-ВНЕЗАРОДЫШЕВЫЕ ОРГАНЫ-ПЛОД» И ЗДОРОВЬЕ НОВОРОЖДЁННЫХ И...»

«Тагрыт Ирина Владимировна КЛИНИКО-ИНСТРУМЕНТАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ У СОТРУДНИКОВ ОРГАНОВ ВНУТРЕННИХ ДЕЛ 14.01.04 – Внутренние болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, доцент...»

«ЧУЕВА МАРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ОПТИМИЗАЦИЯ ТЕРАПИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ ВЕРХНИХ ОТДЕЛОВ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО ТРАКТА У ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКИМ ДЕРМАТИТОМ И ХРОНИЧЕСКОЙ КРАПИВНИЦЕЙ 14.01.08 – педиатрия ДИССЕРТАЦИЯ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК Научный руководитель: д-р мед. наук...»

«Смусева Ольга Николаевна НЕБЛАГОПРИЯТНЫЕ ПОБОЧНЫЕ РЕАКЦИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ: СИСТЕМА МОНИТОРИНГА И ПЕРСПЕКТИВЫ ОПТИМИЗАЦИИ ФАРМАКОТЕРАПИИ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора...»

«БЕРЕЗИН КОНСТАНТИН АЛЕКСЕЕВИЧ КЛИНИКО – ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ЭНДОДОНТИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ АПИКАЛЬНОГО ПЕРИОДОНТИТА 14.01.14 – стоматология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, доцент С.Л. Блашкова...»

«ГРИГОРЯН ЭЛИНА РУДОЛЬФОВНА Методический подход к оптимизации ассортимента лекарственных растительных препаратов, используемых в условиях санаторно-курортного реабилитационного комплекса Кавказских Минеральных Вод 14.04.03 –...»

«Клинико-экспериментальное обоснование ортопедического лечения пациентов при низкой коронке опорных зубов 14.00.21 – стоматология ВЕРСТАКОВ Дмитрий Викторович Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор...»

«Михеева Наталья Викторовна ФАРМАКОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЙ И ФАРМАКОЭКОНОМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ПРИМЕНЯЕМЫХ ДЛЯ ФАРМАКОТЕРАПИИ ИНФАРКТА МОЗГА 14.03.06 – Фармакология, клиническая фармакология Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Басиева Зарина Константиновна КЛИНИКО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ГАСТРОЭЗОФАГЕАЛЬНОЙ РЕФЛЮКСНОЙ БОЛЕЗНИ У БОЛЬНЫХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ. 14.01.04 внутренние болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель доктор медицинских наук...»

«Юдин Сергей Александрович КОМПЛЕМЕНТАРНОСТЬ МЕДИЦИНСКИХ И СОЦИАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ ПРИ РЕАБИЛИТАЦИИ ВО ФТИЗИАТРИИ 14.02.05 социология медицины Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор А.С. Борзенко; кандидат медицинских наук, доктор социологических наук, профессор В.В. Деларю Волгоград 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1....»

«Гурова Наталия Алексеевна «ПРОИЗВОДНЫЕ БЕНЗИМИДАЗОЛОВ НОВЫЙ КЛАСС КАРДИОПРОТЕКТОРНЫХ СРЕДСТВ» 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Академик РАН, Заслуженный деятель науки РФ, доктор...»

«ОЛЮШИНА ЕКАТЕРИНА АНАТОЛЬЕВНА ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ПИЩЕВОГО СТАТУСА ШКОЛЬНИКОВ В СИСТЕМЕ «ЗДОРОВЬЕ – СРЕДА ОБИТАНИЯ» 14.02.01 – Гигиена ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор Богомолова Е.С. Нижний Новгород СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ.. 4 ГЛАВА 1. ПИЩЕВОЙ СТАТУС ШКОЛЬНИКОВ КАК ПОКАЗАТЕЛЬ...»

«Воеводина Мария Ивановна ЭСТЕТОСФЕРА ТРАДИЦИОННОЙ КУЛЬТУРЫ В НООСФЕРНОЙ КОНЦЕПЦИИ (НА ПРИМЕРЕ КАЗАЧЕСТВА СТАВРОПОЛЬЯ) 24.00.01 – теория и история культуры диссертация на соискание учёной степени кандидата философских наук Научный руководитель доктор...»

«Потапова Анна Александровна «НЕФРОИ ГЕПАТОЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ШЛЕМНИКА БАЙКАЛЬСКОГО (SCUTELLARIA BAICALENSIS GEORGI) И ЕГО ВОДОРАСТВОРИМОЙ ФОРМЫ ПРИ СОЧЕТАННЫХ ПОРАЖЕНИЯХ ПЕЧЕНИ И ПОЧЕК» 14.03.06...»

«ПРОХОДНАЯ ВИКТОРИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ПЕРСОНАЛИЗАЦИЯ ДИАГНОСТИКИ, МОНИТОРИНГА И ПРОФИЛАКТИКИ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У БЕРЕМЕННЫХ ЖЕНЩИН 14.01.14 – стоматология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор...»

«ЗАКИРОВА ЛИЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ВКЛАД КАЗАНСКИХ ХИРУРГОВ В РАЗВИТИЕ РЕКОНСТРУКТИВНОЙ ХИРУРГИИ ЧЕЛЮСТНО-ЛИЦЕВОЙ ОБЛАСТИ (XIX-XX вв.) 14.01.14 Стоматология 07.00.10 История науки и техники (медицинские науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.