WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |

«РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ОСНОВ СОЗДАНИЯ СЕЛЕКЦИОННО-ЦЕННОГО МАТЕРИАЛА МАСЛИЧНЫХ КУЛЬТУР ...»

-- [ Страница 1 ] --

ИНСТИТУТ МАСЛИЧНЫХ КУЛЬТУР

НАЦИОНАЛЬНОЙ АКАДЕМИИ АГРАРНЫХ НАУК УКРАИНЫ

На правах рукописи

УДК 581.1: 633.854.78: 633.854.54

СОРОКА АНАТОЛИЙ ИВАНОВИЧ

РАЗРАБОТКА БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ОСНОВ

СОЗДАНИЯ СЕЛЕКЦИОННО-ЦЕННОГО МАТЕРИАЛА



МАСЛИЧНЫХ КУЛЬТУР

03.00.20 – биотехнология Диссертация на соискание ученой степени доктора сельскохозяйственных наук

Научный консультант:

Лях Виктор Алексеевич, доктор биологических наук, профессор Запорожье – 201

СОДЕРЖАНИЕ

стр.

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

РАЗДЕЛ 1

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ ДЛЯ

УСКОРЕНИЯ СЕЛЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА И РАСШИРЕНИЯ

ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ У КУЛЬТУРНЫХ И

ДИКОРАСТУЩИХ РАСТЕНИЙ

1.1. Эмбриокультура и пути ее использования

1.1.1. Эмбриокультура при межвидовой и межродовой гибридизации

1.1.2. Эмбриокультура для получения дополнительных поколений и доращивания незрелых семян

1.1.3. Другие пути использования эмбриокультуры

1.2. Получение гаплоидов у разных видов растений

1.2.1. Получение гаплоидов у масличных культур

1.2.2. Получение гаплоидов у видов рода Linum

1.3. Расширение генетической изменчивости с использованием технологий in vitro

1.3.1. Разработка систем каллусогенеза у масличных культур....... 39 1.3.2. Изменчивость в культуре in vitro как путь получения новых генотипов растений

1.3.3. Разработка методов оценки и отбора in vitro на устойчивость к различным факторам

1.3.4. Сочетание методов in vitro и мутагенеза для расширения генетической изменчивости

РАЗДЕЛ 2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Условия проведения исследований

2.2. Материал

2.3. Методика проведения исследований

РАЗДЕЛ

ЭФФЕКТИВНОСТЬ КАЛЛУСОГЕНЕЗА В КУЛЬТУРЕ IN VITRO

ЭКСПЛАНТОВ МАСЛИЧНЫХ КУЛЬТУР

3.1. Влияние типа экспланта и генотипа на образование каллуса у подсолнечника

3.2. Каллусообразование у некоторых однолетних видов льна.............. 83

РАЗДЕЛ

РАЗРАБОТКА МЕТОДА КУЛЬТУРЫ ПЫЛЬНИКОВ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ

ГАПЛОИДОВ И УДВОЕННЫХ ГАПЛОИДОВ ЛЬНА МАСЛИЧНОГО.. 91

4.1. Особенности подготовки материала и питательных сред для получения гаплоидов из пыльников льна

4.2. Влияние температурной обработки пыльников и сроков их культивирования на индукцию каллусообразования

4.3. Роль генотипа при образовании каллуса из пыльников льна......... 100

4.4. Влияние состава питательной среды на процессы каллусогенеза и органогенеза

4.5. Влияние состава питательной среды на удлинение и укоренение побегов льна

4.6. Исследования плоидности при получении удвоенных гаплоидов у льна

Способ установления гаплоидной природы растений, 4.6.1.

полученных через культуру пыльников

4.6.2. Цитологический анализ числа хромосом у регенерированных растений льна

РАЗДЕЛ 5

РАСШИРЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТЕЙ МЕТОДА КУЛЬТУРЫ IN VITRO ДЛЯ

ПОЛУЧЕНИЯ ГАПЛОИДОВ И УДВОЕННЫХ ГАПЛОИДОВ РАПСА И

ГОРЧИЦЫ

5.1. Подбор питательных сред для индукции новообразований в культуре пыльников рапса и горчицы

5.2. Действие температурного фактора на индукцию новообразований в культуре пыльников рапса

5.3. Особенности развития женской генеративной сферы рапса и индукции новообразований в культуре семенных зачатков................. 145 5.3.1. Связь между размером бутонов и семязачатков у рапса..... 145 5.3.2. Влияние температурной обработки бутонов рапса на способность к индукции новообразований в культуре семенных зачатков

5.4. Идентификация гаплоидов и удвоенных гаплоидов рапса, полученных через культуру пыльников (цитологические и морфологические исследования)





РАЗДЕЛ 6

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МЕТОДА КУЛЬТУРЫ НЕЗРЕЛЫХ ЗАРОДЫШЕЙ

ПОДСОЛНЕЧНИКА ПРИ ПОЛУЧЕНИИ ИСХОДНОГО МАТЕРИАЛА 165

6.1. Влияние возраста зародышей подсолнечника на частоту полученных из них растений в культуре in vitro

6.2. Проявление некоторых морфологических признаков у растений, полученных из зародышей разного возраста

6.3. Эффективность метода незрелых зародышей в зависимости от генотипа экспланта

РАЗДЕЛ 7

СОЧЕТАНИЕ МЕТОДОВ ЭМБРИОКУЛЬТУРЫ IN VITRO И

ХИМИЧЕСКОГО МУТАГЕНЕЗА КАК ПУТЬ УВЕЛИЧЕНИЯ

ГЕНЕТИЧЕСКОГО РАЗНООБРАЗИЯ ПОДСОЛНЕЧНИКА

7.1. Выживаемость растений, полученных после обработки этилметансульфонатом зародышей подсолнечника разного уровня развития

7.2. Влияние обработки незрелых зародышей разного возраста и зрелых семян самоопыленных линий подсолнечника этилметансульфонатом на спектр наследуемых изменений

7.3. Частота наследуемых изменений при обработке незрелых зародышей и зрелых семян самоопыленных линий подсолнечника этилметансульфонатом

7.3.1. Оценка мутантных линий методом электрофореза запасных белков семян

7.4. Наследование некоторых признаков у мутантных образцов подсолнечника, полученных с использованием эмбриокультуры и химического мутагенеза

РАЗДЕЛ 8 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение А. Таблицы экспериментальных данных

Приложение Б. Акты внедрения, патенты, свидетельства

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота 2,4-Д БАП 6-бензиламинопурин ГК3 гибберелловая кислота ИМК индолилмасляная кислота ИУК индолил-3-уксусная кислота КФ культуральный фильтрат МС питательная среда Мурасиге-Скуга

-нафтилуксусная кислота НУК ПЦР полимеразная цепная реакция ЭМС этилметансульфонат ЯМР ядерный магнитный резонанс В-5 питательная среда Гамборга-Эвелега питательная среда Полякова-Пролетовой LMA-1 питательная среда по Chu (1978) N6 питательная среда Лихтера NLN-13 RAPD random ampliphied polymorphic DNA питательная среда Ллойда-Мак-Коуна WPM

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Ограниченность зародышевой плазмы, также как и значительная длительность селекционного процесса, являются до сих пор серьезными нерешенными проблемами на пути создания современных сортов и гибридов большинства масличных культур. В их решении биотехнология может сыграть определяющую роль, тем более, что ряд биотехнологических методов и приемов уже успешно апробирован на других культурах [45, 77, 204].

Масличные культуры занимают в мире значительные площади (около 100 млн. га), являясь одними из самых высокорентабельных и востребованных культур. Такая же закономерность справедлива и для Украины, в которой под этими культурами занято более 6 млн. га. Кроме Украины, странами, в которых сосредоточены основные площади возделывания масличных культур, являются Российская Федерация, США, Канада, Индия, Бразилия, Аргентина, Китай.

Высокая потребность в масличных культурах обусловливает проведение широкомасштабных селекционных работ по созданию современных высокоурожайных сортов и гибридов, хорошо приспособленных к варьирующим условиям среды. Однако, эффективность селекционного процесса ограничивается целым рядом факторов, среди которых наиболее важными являются отсутствие доступной зародышевой плазмы и длительное получение константных образцов. В решении вопросов расширения имеющейся генетической базы сельскохозяйственных культур и ускоренного получения гомозиготного материала существенный вклад могут внести биотехнологические методы.

Ряд биотехнологических приемов, таких, например, как эмбриокультура или экспериментальная гаплоидия, уже успешно используются в селекции некоторых культивируемых растений. Вместе с тем для многих масличных культур, включая подсолнечник, лен, биотехнологические методы разработаны еще недостаточно. В силу этого усовершенствование либо разработка новых биотехнологических приемов, направленных на повышение эффективности селекции, применительно к масличным культурам, является актуальной задачей.

Основной масличной культурой в Украине является подсолнечник, занимающий в последние годы площадь более 3,5 млн. га. Известно, что подсолнечник имеет довольно узкую генетическую базу, не позволяющую вести его эффективную селекцию [15, 40, 71]. Поэтому разработка любых приемов, в том числе с использованием биотехнологических методов, способствующих расширению генетической изменчивости этой культуры, является крайне необходимой и важной задачей. Подобные задачи успешно решаются с использованием биотехнологических приемов на других культурах [45, 153, 177, 243].

Для такой важной масличной культуры как подсолнечник биотехнологические подходы могут найти успешное применение и в других аспектах. Так, например, длительный период его вегетации не позволяет использовать несколько поколений в течение одного года и, таким образом, вести ускоренную селекцию. В то же время использование такого биотехнологического метода как культура зародышей дает возможность увеличить число поколений, что обеспечивает более быстрое создание нового селекционного материала.

Несмотря на то, что для многих видов растений эмбриокультура является широко распространенным приемом [160], у подсолнечника до сих пор остаются вопросы, которые не решены или требуют доработки этого метода. В частности, не достаточно исследован вопрос влияния возраста зародышей на различные характеристики получаемых из них растений, например, число дней до начала цветения, высоту растений и другие. Также еще недостаточно разработаны вопросы каллусогенеза и регенерации из каллусной культуры подсолнечника, что необходимо для получения новых генетических форм.

Еще одной важной масличной культурой является лен масличный, площади под которым составляют в мире 7,5 млн. га и с каждым годом расширяются. С целью ускорения селекционного процесса льна необходимо наличие значительного количества разнообразного константного генетического материала. Таким биотехнологическим приемом, обеспечивающим желаемое разнообразие и гомогенность, может быть культура пыльников. Вместе с тем, несмотря на усилия ряда исследователей [144, 163, 257], многие вопросы получения удвоенных гаплоидов через культуру пыльников у льна масличного до сих пор остаются не выясненными. А вопросы ввода в культуру in vitro эксплантов диких видов льна практически не освещены в научной литературе.

Для культур семейства Brassicaceae такой биотехнологический прием как культура пыльников и микроспор уже давно и успешно используется для получения константного генетического материала [60, 118, 175]. В то же время известно, что на процесс индукции гаплоидных новообразований и регенерации из них растений влияют многие факторы и, в первую очередь, состав питательной среды [23, 162, 182]. В связи с этим представляет интерес выяснение закономерностей индукции новообразований различного типа в зависимости от вида фитогормонов и их соотношения в питательной среде у таких крестоцветных культур как рапс масличный и горчица.

Растения, получаемые через культуру пыльников, могут быть представлены как гаплоидами, так и удвоенными гаплоидами. В силу этого стоит проблема их своевременной идентификации, что часто затруднительно сделать визуально. И для рапса в настоящее время приемы такой идентификации еще недостаточно разработаны, включая цитологический и морфологический уровни.

При получении удвоенных гаплоидов в культуре пыльников, независимо от изучаемого объекта, важно знать плоидность клеток, являющихся источником их происхождения. Появляющиеся на пыльниках новообразования, либо в виде каллуса, либо в виде эмбриоидов, могут образовываться как из гаметофитной ткани, так и из спорофитной.

Новообразования, полученные из спорофитной ткани, не представляют практического интереса, поскольку повторяют генетические свойства исходного родителя. При получении регенерантов в культуре пыльников важны растения, ведущие происхождение от гаплоидных структур (микроспор), поскольку именно они являются генетически уникальными и в случае удвоения набора хромосом обладают полной гомозиготностью.

Ограниченность подходов, позволяющих определять плоидность клеток, являющихся источниками растений-регенерантов в культуре пыльников, предполагает поиск новых путей решения этого вопроса.

Таким образом, обеспечение успеха в селекции масличных культур в значительной степени может быть достигнуто за счет разработки новых биотехнологических методов и усовершенствования уже имеющихся, что определяет целесообразность и актуальность данной работы.

Связь с научными программами. Научные исследования по теме диссертации выполнены лично автором в секторе биотехнологии Института масличных культур Национальной академии аграрных наук Украины (ИМК НААН) за период 1996-2000 гг. согласно НТП ”Теоретичнi основи селекції та насінництва сільськогосподарських культур” и заданий тематического плана на 1996-2000 гг. 02.02.07 ”Розробити методи використання ембріокультури з метою залучення до селекційного процесу соняшника зародкової плазми диких видiв” (№ государственной регистрации 01950006480); за период 2001-2005 гг. в соответствии с НТП ”Сільськогосподарська біотехнологія 2001-2005 рр.” и заданиями тематического плана на 2001-2005 гг. 1.1 ”Створення цінного селекційного матеріалу сільськогосподарських рослин з використанням культури in vitro” (№ государственной регистрации 0101U003991); за период 2006-2010 гг. в соответствии с НТП ”Сільськогосподарська біотехнологія 2006-2010 рр.” и заданиями тематического плана на 2006-2010 гг. 02.01.03.01 ”Розширення генетичної мінливості у олійних культур за допомогою біотехнологій in vitro” (№ государственной регистрации 0106U006467) ), а также за 2011гг. в соответствии с НТП №23 ”Розвиток сучасних біотехнологій і підвищення ефективності методів поліпшення господарсько корисних ознак рослин, тварин і мікроорганізмів” (”Сільськогосподарська біотехнологія”) и заданием тематического плана на 2011-2013 гг. ”Особливості одержання гаплоїдних рослин ріпака на базі експериментальної гаплоїдії” (№ государственной регистрации 0111U006017).

Цель и задачи исследований. Целью работы является разработка новых биотехнологий и усовершенствование традиционных приемов и способов культивирования in vitro органов и тканей для использования в сельском хозяйстве, в частности, для расширения генетической изменчивости и ускорения селекционного процесса масличных культур.

Для достижения этой цели необходимо решить следующие задачи:

– установить особенности каллусогенеза в зависимости от типа экспланта и генотипа у подсолнечника и ряда однолетних видов льна;

– определить влияние возраста зародышей подсолнечника при их культивировании in vitro на частоту полученных из них растений и экспрессию некоторых морфологических признаков;

– выявить эффективность метода культуры незрелых зародышей в зависимости от генотипа у подсолнечника;

– установить режимы и условия культивирования пыльников льна масличного для получения гаплоидов и удвоенных гаплоидов;

– выяснить закономерности индукции новообразований различного типа в зависимости от класса фитогормонов и их соотношения в питательной среде у рапса и горчицы;

– изучить цитологические и морфологические особенности гаплоидов и удвоенных гаплоидов рапса с целью их дифференциации;

– разработать методику доказательства гаплоидной природы растений, полученных в культуре пыльников in vitro на основе расщепления по маркерным признакам;

– выявить степень выживаемости растений, полученных после обработки этилметансульфонатом незрелых зародышей подсолнечника разного возраста;

– разработать метод расширения спектра генетической изменчивости у подсолнечника на основе обработки этилметансульфонатом незрелых зародышей, а также выявить эффективность данного приема в сравнении с обработкой зрелых семян.

Объект исследований: биотехнологические методы и приемы, обеспечивающие ускорение селекционного процесса и расширение генетической изменчивости масличных культур.

Предмет исследований: морфогенез в культуре эксплантов разного типа у подсолнечника и льна; эффективность метода культуры незрелых зародышей подсолнечника; характерные свойства культуры пыльников льна масличного, рапса и горчицы; цитологические и морфологические параметры дифференциации гаплоидов и удвоенных гаплоидов рапса;

определение происхождения растений, полученных методом андрогенеза;

особенности культивирования обработанных мутагеном незрелых зародышей подсолнечника и их влияние на генетическую изменчивость признаков.

Методы исследований: культура клеток, тканей и органов для изучения процессов морфогенеза и каллусогенеза, культура незрелых зародышей подсолнечника для установления эффективности данного метода, культура пыльников для получения андрогенных новообразований и удвоенных гаплоидов льна масличного, рапса и горчицы, химический мутагенез в культуре незрелых зародышей подсолнечника для получения индуцированных изменений, методы учета и выделения мутаций для установления их частоты и спектра, цитологические методы для оценки плоидности растительного материала, метод гибридологического анализа для установления расщепления растений-регенерантов, световая микроскопия для анализа микроскопических объектов, электрофорез запасных белков семян, статистические методы для анализа и оценки достоверности полученных результатов.

Научная новизна полученных результатов. Впервые с целью расширения генетического разнообразия исходного материала подсолнечника разработан метод, в основе которого лежит обработка незрелых зародышей химическим мутагеном. Доказано, что использование данного метода приводило к появлению более высокой частоты мутаций, чем при обработке зрелых семян. Показано, что обработка мутагеном незрелых зародышей подсолнечника была, в зависимости от генотипа, в два-три раза эффективнее стандартной технологии. Установлено, что спектр мутаций в значительной степени зависит от возраста незрелых зародышей.

Получены новые данные о зависимости каллусообразования от типа экспланта для дикорастущих видов льна. Установлено, что в отличие от культурного льна меристемы однолетних дикорастущих видов Linum angustifolium Huds., L.grandiflorum Desf., L.hispanicum Mill. и L.pubescens Banks & Solander были наименее пригодными для получения максимального количества каллуса. Показано, что с наибольшей частотой каллус образовывался у L.angustifolium Huds. и L.grandiflorum Desf. на эксплантатах гипокотилей, а у L.hispanicum Mill. и L.pubescens Banks & Solander – семядолей.

Впервые показано, что фитогормон 6-бензиламинопурин (БАП) в концентрации 2-4 мг/л стимулирует в каллусной культуре льна масличного процессы гемогенеза, а в концентрации мг/л – ингибирует 4-6 пролиферацию каллуса. Установлены набор и концентрации фитогормонов, а также органических и неорганических добавок для эффективного удлинения и укоренения побегов льна в культуре in vitro, что позволило усовершенствовать технологию получения удвоенных гаплоидов льна масличного через культуру пыльников.

Впервые в культуре пыльников рапса и горчицы установлена значительная роль фитогормона ауксиновой природы 2,4-Д в индукции новообразований как гаметофитного, так и спорофитного типов. Показано, что наличие в среде одного БАП тормозит формирование структур спорофитного типа на пыльниках.

Загрузка...

Получены новые данные о дифференциации гаплоидов и удвоенных гаплоидов рапса с использованием непрямых методов анализа. Выявлено, что параметрами цитологических отличий служат количество хлоропластов в замыкающих клетках устьиц, размер замыкающих клеток устьиц и количество устьиц на единицу площади, а морфологических – размер элементов цветка.

Впервые разработан способ определения происхождения растенийрегенерантов в культуре in vitro, в котором для доказательства гаплоидной природы растений, полученных в культуре пыльников in vitro, используется анализ наличия или отсутствия в популяции расщепления по морфологическим маркерным признакам.

Впервые установлено, что возраст зародышей подсолнечника при их культивировании в искусственных условиях влияет на некоторые морфологические и физиологические признаки полученных из них растений. Показано, что с уменьшением возраста зародышей высота растений уменьшается и быстрее наступает цветение, что важно для более раннего проведения гибридизации.

Научная новизна работы подтверждена тремя патентами на изобретение.

Практическое значение полученных результатов. Разработан метод, основанный на обработке незрелых зародышей химическим мутагеном этилметансульфонатом с последующим их культивированием in vitro, который может быть использован для получения генетического разнообразия исходного материала у подсолнечника. Полученные в результате разработки данного метода мутантные образцы могут быть рекомендованы для включения их в селекционный процесс подсолнечника в качестве источников хозяйственно-ценных или маркерных признаков.

Рекомендовано для увеличения количества дополнительных поколений у подсолнечника получать растения из зародышей, начиная с их однонедельного возраста, принимая во внимание способность таких зародышей формировать полноценные растения.

Предложено для получения активно пролиферирующей каллусной культуры подсолнечника включать в состав питательной среды фитогормоны БАП и НУК, а в качестве эксплантов использовать гипокотили, а не меристемные зоны или семядоли.

Рекомендовано для получения каллусной культуры льна масличного в качестве эксплантов использовать как семядоли, так и апикальные меристемы, тогда как для однолетних дикорастущих видов льна L.angustifolium Huds. и L.grandiflorum Desf. более предпочтительно использование эксплантов гипокотилей, а для L.hispanicum Mill. и L.pubescens Banks & Solander – семядолей.

Предложено с целью получения гомогенного линейного материала льна масличного через культуру пыльников для индукции гемогенеза из каллусной ткани добавлять в питательную среду цитокинин БАП в концентрации 2 мг/л, а для удлинения регенерированных побегов использовать в комплексе набор фитогормонов (БАП, -НУК и ГК) и аминокислот (аспарагин, глутамин и серин).

Рекомендовано для дифференциации гаплоидов и удвоенных гаплоидов рапса использовать и непрямые методы анализа, исследуя такие цитологические и морфологические характеристики как количество хлоропластов в замыкающих клетках устьиц, размер замыкающих клеток устьиц, количество устьиц на единицу площади, а также размер элементов цветка.

Разработан способ выявления плоидности клеток – источников растений-регенерантов, который предлагается для доказательства гаплоидной природы образцов, полученных в культуре пыльников in vitro.

Полученные в результате исследований 522 линии удвоенных гаплоидов льна и рапса, 5 мутантных образцов подсолнечника и 104 образца подсолнечника, созданные методом культуры зародышей, а также 150 растений подсолнечника из мутантной популяции М2 переданы в селекционные подразделения Института масличных культур НААН. Десять мутантных образцов подсолнечника переданы на кафедру садово-паркового хозяйства и генетики растений Запорожского национального университета.

Семь образцов подсолнечника, полученных с использованием мутагенной обработки незрелых зародышей, передано в Национальный центр генетических ресурсов Украины (г. Харьков) и на два из них получены свидетельства.

Личный вклад соискателя. Соискателем лично проведены все представленные в диссертации лабораторные и полевые исследования, анализ и статистическая обработка полученных результатов, обобщение результатов исследований и формулирование выводов. Вклад соискателя по монографии «Ботанические и цитогенетические особенности видов рода Linum L. и биотехнологические пути работы с ними», опубликованной в соавторстве с д.б.н. В.А. Ляхом, в части биотехнологических исследований состоит в получении экспериментальных данных и обобщении результатов исследований и составляет 100%. В совместной с д.б.н. В.А. Ляхом и к.б.н.

И.А. Поляковой монографии «Индуцированный мутагенез масличных культур» соискателем полностью подготовлен раздел по использованию индуцированного мутагенеза в культуре незрелых зародышей подсолнечника.

Апробация результатов диссертации. Основные положения диссертации представлены и обговорены на заседаниях ученого совета и методической комиссии Института масличных культур НААН Украины (г. Запорожье, 1996-2012 гг.), на международной конференции ”Современные вопросы создания и использования сортов и гибридов масличных культур” (Запорожье, 2002), на I Всеукраинской научнопрактической конференции „Біотехнологія. Освіта. Наука.” (Киев, 2003), на

I международном конгрессе „Національна перлина Запорожжя:

впровадження інноваційно-інвестиційних технологій гармонiзацiї бiоекосистеми о. Велика Хортиця” (Запорожье, 2004), на международной научной конференции „Проблеми збереження, відновлення та збагачення біорізноманітності в умовах антропогенно зміненого середовища” (Кривой Рог, 2005), на международной научно-практической конференции "Современные проблемы научного обеспечения производства подсолнечника" (Краснодар, 2006), на Всеукраинской научно-практической конференции „Проблеми та перспективні напрями розвитку олійних культур в Україні” (Запорожье, 2007), на 4-й международной конференции молодых ученых и специалистов (Краснодар, 2007), на международной конференции „Сучасні проблеми біології, екології та хімії” (Запоріжжя, 2007), на IV международной научно-практической конференции „Біотехнологія. Наука. Освіта. Практика.” (Днепропетровск, 2008), на международной научной конференции «Геном рослин V» (Одесса, 2008), на семинаре «Мастер-класс» по биотехнологии (Одесса, 2009), на международной научной конференции „Современные научные проблемы создания сортов и гибридов масличных культур и технология их выращивания” (Запорожье, 2009), на Всеукраинской выставке достижений народного хозяйства (Киев, 2009), на международной научной конференции „Modern biotechnology of agricultural plants and biosafety (Plant genome VI)” (Одесса, 2010), на IX съезде Украинского общества генетиков и селекционеров имени Н.И. Вавилова (Алушта, 2012), на международной научной конференции «Современные научные тенденции, достижения в генетике, селекции, технологии выращивания и переработке масличных культур» (Запорожье, 2014), на международной научной конференции «Стійкість соняшнику до біо- та абіотичних чинників» (Харьков, 2014).

Публикации. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 52 научных печатных работах (29 без соавторов), включая две монографии (в соавторстве), две методических рекомендации, статьи, а также в материалах 14 научных конференций, симпозиумов и съездов. 20 публикаций включены в перечень специализированных изданий (12 без соавторов). Получено 3 патента Украины на изобретение. 8 статей опубликованы в журналах, входящих в международные наукометрические базы.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, раздела материала и методов, разделов 5-ти собственных исследований, анализа и обобщения результатов, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы и приложения.

Работа изложена на 316 страницах машинописного текста, включая 55 таблиц, 34 рисунка и приложение. Список цитированной литературы включает 331 источник (из них 212 на латинице).

РАЗДЕЛ 1

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРИЕМОВ ДЛЯ

УСКОРЕНИЯ СЕЛЕКЦИОННОГО ПРОЦЕССА И РАСШИРЕНИЯ

ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ У КУЛЬТУРНЫХ И

ДИКОРАСТУЩИХ РАСТЕНИЙ

1.1. Эмбриокультура и пути ее использования Одной из первых работ по культуре зародышей была работа Ханнига в самом начале ХХ столетия. Для межвидовых скрещиваний первое успешное применение эмбриокультуры было продемонстрировано Laibach в 1925-1929гг. у видов Linum perenne и L.austriacum [цит. по 293]. В настоящее время эмбриокультура используется не только при отдаленной гибридизации [307], но также для получения растений из ослабленных зародышей в пределах одного и того же вида [201] или для получения дополнительных поколений [96, с целью сокращения 97, 155] селекционного процессса. Кроме этого, R. Dolcet-Sanjuan et al. [173] и E. Kurtar c A. Balkaya [226] считают, что возможно использовать ее и при получении гаплоидов.

Как отмечают А. Пушкаренко и др. [77], T. Nedev et al. [248], C.S. Catarina et al. [154], успешное получение растений из зародышей в значительной степени зависит от стадии их развития и состава питательной среды. Обычно, частота выхода взрослых растений тем выше, чем более дифференцированные зародыши используются для доращивания. Так, зародыши H.annuus выделяли на разных стадиях развития – в начале процесса дифференциации (4-5 суток после опыления), на стадии дифференцировки семядолей и окончания формирования корешка (7-8 суток после опыления) и перед окончательным формированием зародыша (12-13 суток после оплодотворения) и культивировали их на искусственных питательных средах с разным набором фитогормонов. Было установлено, что наибольший выход растений наблюдался из наиболее зрелых зародышей, причем прорастание зародышей было тем энергичнее, чем меньшее количество рострегулирующих веществ добавлялось в питательную среду [77]. В работе C.S. Catarina et al. [154] показано, что лучшей средой для культивирования зародышей Ocotea catharinensis, находящихся на ранней стадии формирования семядолей была среда WPM, предложенная G. Lloyd and B. McCown в 1980г. [234], половинной концентрации с добавлением 400 мг/л глутамина и 1,5 г/л активированного угля.

Несмотря на широкий спектр применения культуры зародышей, все же наиболее широко этот метод используется при отдаленной гибридизации у растений [76, 166, 180, 224, 282].

1.1.1. Эмбриокультура при межвидовой и межродовой гибридизации

Для передачи ценных признаков от дикорастущих сородичей культурным формам стандартным приемом является гибридизация.

Отбирая среди потомков гибридов генотипы с необходимыми характеристиками и достигают поставленной задачи. Однако чем дальше в филогенетическом отношении отстоят скрещиваемые формы друг от друга, тем более вероятно, что вследствие презиготических или постзиготических барьеров такие скрещивания успешными не будут. В связи с этим возникает необходимость привлечения дополнительных методов, таких, например, как культура зародышей, способных более эффективно решать подобные задачи. Метод культуры зародышей или, иными словами, метод эмбриокультуры, заключается, вкратце, в том, что гибридные зародыши через определенное время после опыления переносят на искусственную питательную среду, где и доращивают до момента формирования растения, которое уже возможно культивировать в естественных условиях.

Особенно широко данный подход используется на подсолнечнике [180, 188, 302, 315]. Известно, что дикие виды pода Helianthus являются источником генов, ответственных за устойчивость к болезням, ЦМС, восстановление фертильности, урожайность и качество масла. Эти качества предопределяют их широкое вовлечение в гибридизацию с культурным подсолнечником.

Например, с целью передачи генов устойчивости к заразихе культурному подсолнечнику S. Sukno et al. [302] проводили скрещивания с многолетними видами H.giganteus, H.laevigatus, H.resinosus, H.panciflorus и H.decapetalus, устойчивыми к заразихе. Использование культуры незрелых 5-суточных зародышей позволило получить до 28% взрослых гибридных растений во всех скрещиваниях, кроме H.decapetalus.

Однако, межвидовые скрещивания в роде Helianthus не всегда удаются. Существенное влияние на эффективность культивирования зародышей при межвидовой гибридизации оказывает их возраст. В некоторых случаях результативны только работы по культивированию зародышей на самых ранних стадиях развития. В других случаях удаются гибриды и при доращивании зародышей более зрелого возраста.

Так, опытами A. Benvenuti и G.P. Vannozzi [142] выявлено наличие ранней абортивности зародыша у комбинаций H.annuus H.grosseserratus и H.annuus H.mollis и более поздней абортивности у комбинаций H.annuus и Для этих комбинаций H.giganteus H.annuus H.strumosus.

эмбриокультура оказалась необходимой.

По мнению G. Jeannin и G. Hahne [212], также важно учитывать влияние условий роста донорных растений, особенно при культивировании незрелых зиготических зародышей, поскольку они могут оказывать существенное влияние на выход регенерантов.

Для культивирования незрелых зародышей подсолнечника при межвидовой гибридизации используются питательные среды разного состава. Чаще всего используют среды по МС, Гамборгу (B-5) и некоторые другие. T. Nedev с сотр. [248] сравнили результаты культивирования на средах МС, Гамборга, Рича зародышей подсолнечника 8-11-суточного возраста и установили, что лучшие результаты получаются на среде МС при концентрации сахарозы 5г/л. В других случаях хорошие результаты получены на модифицированной среде с минеральной основой среды B-5, предложенной J.M. Chandler и B.H. Beard [157]. Используемый состав среды определяется и возрастом культивируемых незрелых зародышей. В частности, для культивирования мелких зародышей более эффективной может быть среда B-5 Гамборга, а для более крупных ( 1,5 мм) – среда МС. Когда мелкие зародыши подрастают их переносят на среду МС [223].

А для прямого соматического эмбриогенеза и регенерации растений из незрелых гибридных зародышей J.J. Finer [191] предлагает среду с высоким содержанием сахарозы.

В работе N. Faure с сотр. [187] сравнивалась эффективность естественных скрещиваний и эмбриокультуры и установлено, что использование эмбриокультуры существенно повышает уровень гибридизации, тогда как применение только естественного скрещивания дает значительно меньше гибридных комбинаций.

Также при межвидовых скрещиваниях было проведено сравнение выхода растений-регенерантов, полученных путем соматического эмбриогенеза и адвентивного побегообразования и путем прямого доращивания 10-11-суточных зародышей in vitro. Установлено, что в последнем случае эффективность приема была ниже [74].

Некоторые авторы сообщают о влиянии культуры зародышей на отдельные характеристики гибридного потомства. Так, И.Н. Анисимова с сотр. [4] указывают, что в потомствах ряда скрещиваний Н.annuus с многолетними диплоидными и полиплоидными видами возникали электрофоретические изменения спектра гелиантинина не связанные с генотипом отцовского родителя, а, по мнению авторов, были следствием способа получения гибридов.

Известен также способ получения растений подсолнечника через культуру завязей. Этот подход также можно с успехом использовать для получения редких гибридных комбинаций. Например, A. Espinasse et al.

[183] таким образом были впервые получены межвидовые гибриды H.annuus H.maximiliani. Техника данного способа выглядела следующим образом. Завязи с семисуточными гибридными зародышами культивировали в течение недели на искусственной питательной среде, затем зародыши извлекали и доращивали еще в течение двух недель на среде того же состава, что позволяло получать до 60% жизнеспособных растений.

Культура незрелых зародышей и даже завязей активно используется при отдаленной гибридизации не только подсолнечника, но и других масличных культур, например, крестоцветных. Связано это в первую очередь с тем, что ряд дикорастущих сородичей культивируемых крестоцветных видов являются донорами ценных для человека признаков, – масличности, определенного состава жирных кислот, устойчивости к стрессам, вредителям и болезням. Такого рода гибриды могут представлять как самостоятельную селекционную ценность, так и служить своеобразным «мостиком» для переноса нужных генов от дикорастущих сородичей [153].

Так, G.K. Ravi и др. [282] получили межродовой гибрид между диким видом Erucastrum caraminoides (n=9) и Brassica nigra (n=8). Гибридность потомков была подтверждена авторами при помощи методов RAPD и изоферментного анализа.

G.Q. Zhang с сотр. [327] с помощью эмбриокультуры получали гибриды между горчицей сарептской и рапсом. Частота регенерации растений в этом случае достигала почти 27%. При этом культура зародышей была эффективнее в плане регенерации при использовании зародышей после 15-ти суточного возраста, тогда как при культивировании зародышей 10-ти суточного возраста больше инициировался каллус.

Установлена и среда, обеспечившая лучшие результаты культивирования — МС с добавлением 0,3 мг/л НУК и 1,5-2,0 мг/л БАП.

Также L. Van Ripley и P.G. Arnison [311] и J. Brown et al. [151] скрещивали с рапсом и другой вид горчицы – горчицу белую. Этими авторами был разработан метод, основанный на использовании эмбриокультуры и позволяющий получать жизнеспособные гибриды данных видов, которые по морфологическим признакам оказались промежуточными по сравнению с родителями.

Предпринимались также попытки получения межродовых гибридов применяя культуру изолированных завязей. В частности, M. Zenkteler [323] были получены развивающиеся до той или иной стадии зародыши в комбинациях B.napus D.tenuifolia, B.napus M.arvensis, B.o. italica D.tenuifolia, D.tenuifiolia B.napus, D.tenuifolia M.arvensis и D.tenuifolia S.loeselli.

Успешным оказалось применение культуры незрелых зародышей для передачи генов устойчивости к черной гнили от резистентных образцов B.juncea к Brassica oleracea [307]. И хотя гибриды от этого скрещивания имели признак мужской стерильности, они успешно использовались в качестве материнского родителя для получения устойчивых к черной гнили потомков.

Метод культуры изолированных зародышей нашел широкое применение и при отдаленной гибридизации других растений, в том числе и древесных [109].

Известно, что внутри родов Capsicum и Nicotiana межвидовая гибридизация сопровождается барьерами несовместимости на различных стадиях, начиная от момента прорастания пыльцевой трубки и заканчивая формированием взрослого гибридного растения. И на отрезке где несовместимость проявляется в период формирования и развития зародыша данный подход может быть особенно эффективным. Так, V.M. Nikova et al.

[252] зародыши от скрещиваний C.annuum C.praetermissum, C.annuum успешно доращивались при C.eximium, C.baccatum C.annuum использовании питательной среды МС с добавлением гибберелловой кислоты, кинетина и НУК, если их выделяли на стадиях начиная от глобулярной, и заканчивая стадией образования семядолей. Успешным у этих же авторов было доращивание гибридных зародышей рода Nicotiana, хотя наиболее результативной в данном случае оказалась немного другая комбинация гормонов.

Культура зародышей оказалась единственно возможным методом и для получения межвидовых гибридов проса. Однако по результатам исследований А.С. Кашина и др. [39] в случае использования зародышей 8возраста прямое их доращивание оказалось менее 10-суточного эффективным, чем получение регенерантов из каллусных тканей данных зародышей.

Такого же мнения придерживаются и М.М. Талат с сотр. [106]. Эти авторы отмечают, что при отдаленной гибридизации пшеницы с эгилопсом можно использовать как прямую регенерацию, так и регенерацию из каллуса. Однако каллусная культура позволяет получать значительно большее число гибридных растений. В данном случае для успешного каллусообразования использовались зародыши размером 0,4-0,5 мм и среда с добавкой 0,3 мг/л 2,4-Д.

Техника, основанная на культивировании зародышей и завязей, использовалась для получения межвидового гибрида нута Cicer arietinum C.pinnatifidum [239]. Полученные гибридные растения по строению листьев и габитусу напоминали отцовскую форму.

Постзиготическую несовместимость при межвидовой гибридизации нута отмечали H.J. Clarke с сотр. [166]. В одних случаях (нут C.bijugum) применение эмбриокультуры было успешным при культивировании глобулярных зародышей 2-7-суточного возраста, в других (нут C.pinnatifidum) – более зрелых зародышей (до 15–20 суток).

При отдаленных скрещиваниях можно использовать эмбриокультуру не для получения гибридов, а с целью получения гаплоидов. Этот подход оказался успешным в случае с такой культурой как цикорий, гаплоидные растения которого C. Dore et al. [174] получили после опыления пыльцой Lactuca tatarica и Cicerbita alpina и последующего культивирования зрелых зародышей.

При использовании культуры незрелых зародышей для увеличения генетического разнообразия Rosa hybrida отмечали, что абортивные незрелые зародыши обладали большей каллусообразовательной способностью, чем нормально развитые [56].

Выращивание in vitro зародышей позволило М.И. Уралец и др. [69] увеличить выход и межвидовых гибридов томата, а M. Xianhong et al. [317]

– гибридов Lilium dauricum. Однако если в первом случае наиболее высокая эффективность метода достигалась при культивировании зародышей самой ранней стадии, то во втором - более зрелые зародыши обеспечивали более высокий процент органогенеза. Межвидовые гибриды томата можно получать не напрямую из зародышей, а через эмбриогенный каллус. Этот подход оказался эффективным в случае скрещивания культурного томата Lycopersicon esculentum с дикорастущим видом L.peruvianum [30].

Стадия развития зародыша является одним из основных факторов, определяющих эффективность метода эмбриокультуры. Они специфичны для каждой культуры и используемой комбинации скрещивания. Например, по данным Л.В. Русиной и др. [82] для получения жизнеспособных гибридов шалфея между культурным видом Salvia sclarea и дикорастущими видами S.scfbiosifolia, S.grandiflora и S.aethiopis торпедовидная стадия развития зародыша оказалась оптимальной. У нута же, как показано H.J. Clarke et al. [166] в некоторых случаях оптимальным было культивирование глобулярных зародышей.

1.1.2. Эмбриокультура для получения дополнительных поколений и доращивания незрелых семян Хотя метод эмбриокультуры изначально придполагал его применение для спасения слабых или недоразвитых зародышей при отдаленной гибридизации, в последнее время культура незрелых зародышей широко используется для получения дополнительных поколений с целью ускорения селекционного процесса у различных видов растений [54, 84, 278], в том числе и подсолнечника [107, 171].

F. Cecconi et al. [155] проводили исследования по использованию культуры незрелых зародышей для укорачивания биологического цикла подсолнечника и тем самым получения большего количества поколений за год. Результаты исследований позволили авторам сделать вывод, что растения подсолнечника, выросшие из незрелых зародышей и в дальнейшем растущих в камере искусственного климата, имеют более короткий вегетационный период по сравнению с полевыми растениями.

Это обеспечивает успешное получение до четырех-пяти поколений подсолнечника в год. Аналогичные подходы использовались и другими авторами [171, 202, 242].

Подобные методы используются и для получения дополнительных поколений у других культур или для быстрого размножения медленнорастущих видов [196, 222, 272, 291].

Другим направлением использования эмбриокультуры может быть доращивание незрелых или с пониженной жизнеспособностью семян.

Многими авторами сообщается о том, что раносозревающие сорта плодовых и винограда из-за недоразвития зародыша образуют семена с низкой частотой прорастания в нормальных условиях и метод эмбриокультуры для них оказывается очень эффективным. Поэтому для плодовых и ряда других культур метод эмбриокультуры является обычным методом, начиная с 80-х годов прошлого столетия [186, 203, 280].

Семена некоторых растений, таких, например, как Colocasia esculentum, Musa balbisiana и некоторых других не прорастают в природе, однако нармальные растения этих видов могут быть успешно получены через культуру зародышей [121, 131].

Еще раньше было известно, что у ряда орхидных практически не образуется эндосперм, что вызывает трудности в их размножении. Поэтому была предложена простая питательная среда для доращивания зародышей орхидных и получения из них растений [220]. Эта технология в настоящее время превратилась в широко используемый промышленный способ выращивания многих видов орхидных.

1.1.3. Другие пути использования эмбриокультуры

Растения можно получать не напрямую из зародышей, а посредством эмбриогенного каллуса. В данном случае культивирование зародышей является начальным этапом для получения каллуса и в последующем уже культуры каллусной ткани. Так, разными исследователями были предложены способы регенерации растений из каллуса, образовавшегося на незрелых зародышах. Применительно к подсолнечнику такой способ может состоять из трех стадий: образование эмбриогенного каллуса на среде, содержащей гормон типа цитокинина, индукция органогенеза и культивирование ростков [129, 192]. По заключению W. Tang и F. Ouyang [303]такой подход особенно эффективен у древесных растений, поскольку предоставляет возможность существенно увеличить коэффициент выхода регенерантов.

Как отмечают Т.Н. Чеченева и др. [115], зрелые зародыши также могут служить исходным материалом для индукции каллуса, особенно после отбора сомаклональных вариантов, обеспечивающих повышенный уровень каллусообразования. А модификацией состава питательной среды можно достичь еще большего результата.

Имеются и другие подходы. Так, M. Popielarska и L. Przywara [268] предлагают культивировать зародышевые мешки подсолнечника. Авторами показано, что при культивировании зародышевых мешков на жидкой питательной среде с 9% сахарозы из них развивается до 10% глобулярных зародышей, хотя требуются дополнительные манипуляции в виде пересадки на среды другого состава для стимулирования дальнейшего роста этих структур или индукции органогенеза.

Зародыши, особенно незрелые, могут служить эффективным типом экспланта для индукции эмбриоидов путем прямого соматического эмбриогенеза. Поскольку в данном случае стадия каллусообразования отсутствует, это дает дополнительные преимущества в скорости и генетической стабильности получаемых растений. Такой подход успешно используют у перца [146], паспалума [314].

Разрабатываются и методы создания устойчивых к болезням генотипов, используя зародыши в качестве объекта воздействия. Так, у льна методами in vitro на модифицированной селективной среде (MS или Sh-2) с добавлением культурального фильтрата гриба Colletotrichum lini при культивировании незрелых зародышей возрастом 8-9 суток были получены устойчивые к антракнозу регенеранты [65].

1.2. Получение гаплоидов у разных видов растений

Большинство высших растений на нашей планете содержит в своих клетках двойной (соматический) набор хромосом, в связи с чем они и называются диплоидами. Однако естественным или искусственным путем могут быть получены растения, клетки которых содержат одинарный или половинный набор хромосом, характерный для гамет данного вида [84, 130].

Гаплоиды в зависимости от уровня плоидности исходного растения можно разделить на две группы: моногаплоиды (моноплоиды) - гаплоиды, которые происходят от особей с диплоидным числом хромосом в соматических клетках и полигаплоиды - гаплоиды, которые происходят от полиплоидных особей (имеющих более двух наборов хромосом в соматических клетках). Например, гаплоиды кукурузы (n=10), ржи (n = 7) являются моноплоидами, поскольку обычные растения этих культур имеют клетки, содержащие 20 и 14 хромосом соответственно. Гаплоиды же мягкой пшеницы (n = 21) и картофеля (n = 24), которые являются естественными полиплоидами, представляют собой тригаплоиды (n=21=3x) и дигаплоиды (n=24=2x) [218].

Спонтанные гаплоиды у растений возникают редко. Бывает, что в одном семени образуется два или несколько зародышей, один из которых может быть гаплоидным. Следствием этого природного явления является образование двойных проростков. Появление таких "близнецов" связывают с аномалиями в развитии зародыша, но окончательно природа этого явления не выяснена. У культурных растений гаплоидные близнецы описаны для злаковых (пшеница, рожь, рис, овёс, ячмень), технических (кукуруза, сахарная свекла, лён), овощных (картофель, перец, томат) и других культур [113, 114, 141]. Образование гаплоидов вызывают также задержки при опылении, опыление пыльцой другого вида или опыление инактивированной пыльцой [208, 226, 227, 306, 310].



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 8 |
 
Похожие работы:

«Цехановская Ольга Константиновна Формирование и развитие корабельного декора русского императорского флота XVIII – начала XX вв. Специальность 17.00.04 –...»

«СЕРЕДИН Тимофей Михайлович ИСХОДНЫЙ МАТЕРИАЛ ЧЕСНОКА ОЗИМОГО (Allium sativum L.) ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ НА КОМПЛЕКС ХОЗЯЙСТВЕННО ЦЕННЫХ ПРИЗНАКОВ И СТАБИЛЬНО НИЗКИЙ УРОВЕНЬ НАКОПЛЕНИЯ ЭКОТОКСИКАНТОВ Специальности: 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений; 06.01.09 – овощеводство ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научные...»

«Попельницкая Татьяна Борисовна Специфика внутрифирменных переговоров в компаниях с различной силой организационной культуры Специальность 19.00.05 – «Социальная психология» (психологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата психологических...»

«МАНЬКО ЛЮДМИЛА ГЕННАДЬЕВНА РАЗВИТИЕ ГИБКОСТИ У ГИМНАСТОК 10-12 ЛЕТ НА ОСНОВЕ СОПРЯЖЁННОЙ ФИЗИКО-ТЕХНИЧЕСКОЙ ПОДГОТОВКИ 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата педагогических наук Научный руководитель: доктор педагогических наук,...»

«Бадманямбугийн БАТ-ЭРДЭНЭ РАЗВИТИЕ СОВРЕМЕННОЙ МОНГОЛЬСКОЙ НАЦИОНАЛЬНОЙ БОРЬБЫ 13.00.04 теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научный руководитель: член-корр. РАО, доктор педагогических наук, профессор Калмыков С.В. Улан-Удэ, Оглавление стр....»

«Саргаев Алексей Вячеславович СОЦИАЛЬНО-КУЛЬТУРНАЯ И ПРАВОВАЯ АДАПТАЦИЯ ИНОСТРАННЫХ ГРАЖДАН В РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (на материалах Республики Бурятия) Специальность 22.00.04 – социальная структура, социальные институты и процессы ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата социологических наук Научный руководитель: Чукреев Петр Александрович, доктор социологических наук, профессор...»

«АЛЬ БАТТАУЙ ГАЗВАН АЗИЗ МУХСЕН НАЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ СТАНОВЛЕНИЯ И РАЗВИТИЯ СИСТЕМЫ ФИЗИЧЕСКОГО ВОСПИТАНИЯ В ИРАКЕ 13.00.04 – теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук...»

«Гриненко Евгения Николаевна ИНТЕГРАЛЬНАЯ ОЦЕНКА КАЧЕСТВА АУДИОВИЗУАЛЬНЫХ ПРОГРАММ В ЦИФРОВЫХ ТЕЛЕВИЗИОННЫХ СИСТЕМАХ С КОМПРЕССИЕЙ ДАННЫХ Специальность: 05.11.18 – Приборы и методы преобразования изображений и звука ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата технических наук...»

«Дворкина Наталья Ивановна СИСТЕМА ФОРМИРОВАНИЯ БАЗОВОЙ ЛИЧНОСТНОЙ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ РЕБЕНКА НА ЭТАПАХ ДОШКОЛЬНОГО ОНТОГЕНЕЗА Специальность 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры Диссертация на соискание ученой степени доктора педагогических наук Научный консультант, доктор педагогических наук, профессор Л.И. Лубышева Майкоп, 2015 СОДЕРЖАНИЕ ОБЩАЯ...»

«АЛЕКСЕЕВА ПОЛИНА АЛЕКСАНДРОВНА МЕХАНИЗМ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ УПРАВЛЕНИЯ ПРЕДПРИЯТИЯМИ СФЕРЫ УСЛУГ Специальность 08.00.05 – Экономика и управление народным хозяйством (экономика, организация и управление предприятиями, отраслями, комплексами – сфера услуг) Диссертация на соискание ученой...»

«Мельникова Наталия Юрьевна Социально-педагогические особенности эволюции Олимпийских зимних игр 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры Диссертация на соискание ученой степени доктора...»

«ЛЕВЧЕНКО ОЛЬГА ВАСИЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА МЕХАНИЗМА СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ОРГАНИЗАЦИОННО-ЭКОНОМИЧЕСКИХ ФОРМ ГОСУДАРСТВЕННОЙ ПОДДЕРЖКИ ИННОВАЦИОННОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ МАЛЫХ ПРЕДПРИЯТИЙ Специальность 08.00.05 – Экономика и управление народным хозяйством (управление инновациями) Диссертация на...»

«Постольник Юлия Александровна Формирование профессиональных компетенций студенток на занятиях плаванием средствами водных видов спорта Шифр специальности 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания,спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры...»

«Близневский Александр Юрьевич ПРОГРАММНО-ЦЕЛЕВОЕ УПРАВЛЕНИЕ РАЗВИТИЕМ СФЕРЫ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРЫ И СПОРТА В ПРОСТРАНСТВЕ КРАСНОЯРСКОГО КРАЯ 13.00.04. – теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора педагогических наук Научный...»

«Слепцова Галина Николаевна Формирование межкультурной компетентности бакалавров-педагогов средствами иностранного языка (на примере Республики Саха (Якутия)) Специальность 13.00.01 Общая педагогика, история педагогики и образования ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научный руководитель: доктор педагогических наук, профессор Неустроев Николай Дмитриевич Якутск...»

«Мохаммед Валид Хасан Хебах ОРГАНИЗАЦИОННО-МЕТОДИЧЕСКИЕ КОМПОНЕНТЫ СИСТЕМЫ СПОРТИВНОЙ ОРИЕНТАЦИИ И ОТБОРА В РЕСПУБЛИКЕ ЙЕМЕН (на примере спортивных игр) 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры Диссертация на соискание ученой степени...»

«Гвасалия Майя Валериановна Спонтанные и индуцированные сорта и формы чая (Сamellia sinensis (L.) Kuntze) во влажных субтропиках России и Абхазии, перспективы их размножения и сохранения в культуре in vitro Специальность 06.01.05 – Селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Ким Татьяна Константиновна Организационно-педагогическое и программно-методическое обеспечение физического воспитания в системе «семья-школа» 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры Диссертация...»

«ИЗ ФОНДОВ РОССИЙСКОЙ ГОСУДАРСТВЕННОЙ БИБЛИОТЕКИ Алексеева, Анастасия Олеговна Новые интерактивные медиа в контексте теорий информационного общества Москва Российская государственная библиотека diss.rsl.ru Алексеева, Анастасия Олеговна.    Новые интерактивные медиа в контексте теорий информационного общества  [Электронный ресурс] : дис.. канд. филол. наук : 10.01.10. ­ М.: РГБ, 2007. ­ (Из фондов Российской Государственной Библиотеки). Культура. Наука. Просвещение ­­ Телевидение ­­ Теория и...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.