WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«Полиэлектролитные комплексы хитозан-каррагинан ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное бюджетное учреждение наук

и

Тихоокеанский институт биоорганической химии им Г.Б. Елякова

Дальневосточного отделения Российской академии наук

На правах рукописи

Володько Александра Викторовна

Полиэлектролитные комплексы хитозан-каррагинан

02.00.10 – Биоорганическая химия

Диссертация на соискание ученой степени

кандидата химических наук

Научный руководитель:



д.х.н. Ермак Ирина Михайловна

ВЛАДИВОСТОК – 2014

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Хитозан

1.1.1 Структура. Физико-химические свойства

1.1.2 Биологическая активность хитозана

1.1.2.1 Антивирусная активность хитозана

1.1.2.2 Иммуномодулирующая и противовоспалительная активность

1.1.3 Применение хитозана

1.2 Каррагинан

1.2.1 Структура. Физико-химические свойства

1.2.2 Биологическая активность каррагинана

1.2.2.1 Антивирусная активность

1.2.2.2 Иммуномодулирующая активность

1.2.3 Применение каррагинана

1.3 Полиэлектролитные комплексы

1.3.1 Общее представление о формировании полиэлектролитных комплексов....... 29 1.3.1.1 Формирование полиэлектролитных комплексов на основе хитозана........... 30 1.3.1.2 Формирование полиэлектролитных комплексов каррагинан-хитозан.......... 34 1.3.2 Методы изучения полиэлектролитных комплексов

1.3.2.1 Основные понятия реологии. Классификация материалов по их реологическому поведению..

1.3.3 Применение полиэлектролитных комплексов

2 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

2.1 Получение и характеристика исходных компонентов комплекса

2.1.1 Выделение и фракционирование каррагинана из водоросли Tichocarpus crinitus

2.1.2 Получение образцов низкомолекулярного и N-дезацетилированного хитозана

2.1.3 Физико-химические характеристики полисахаридов.

2.2 Получение полиэлектролитных комплексов каррагинан-хитозан

2.2.1 Подбор условий для формирования растворимых комплексов каррагинанхитозан

2.2.1.1 Влияние способа получения полиэлектролитного комплекса на его растворимость

2.2.1.2 Влияние параметров среды на процесс формирования комплексов каррагинан-хитозан

2.2.1.3 Влияние структуры и молекулярной массы каррагинана на процесс формирования комплексов каррагинан-хитозан

2.2.1.4 Влияние концентрации каррагинана на процесс формирования комплексов каррагинан-хитозан

2.2.1.5 Влияние молекулярной массы и степени N-ацетилирования хитозана на процесс формирования комплексов каррагинан-хитозан

2.3 Характеристика образования растворимых комплексов каррагинан-хитозан.... 56 2.3.1 Гель-проникающая хроматография

2.3.2 Центрифугирование в градиенте перколла

2.3.3 ИК-спектроскопия

2.4 Изучение in silico комплексов хитозана с -каррагинаном в растворе................ 64

2.5 Определение параметров связывания каррагинана с хитозаном

2.6 Размер и -потенциал комплексов -каррагинана с хитозаном

2.7 Исследование макромолекулярной организации полиэлектролитных комплексов методами микроскопии

2.7.1 Электронная микроскопия

2.7.2 Атомно-силовая микроскопия

2.8 Получение и реологические свойства гелевых комплексов каррагинан-хитозан

2.9 Биологическая активность in vitro комплексов каррагинан-хитозан

2.9.1 Антивирусная активность полисахаридов и их комплексов каррагинанхитозан на модели вируса табачной мозаики

2.9.2 Цитокин-индуцирующая активность полисахаридов и их комплексов каррагинан-хитозан

2.9.3 Антиоксидантная активность полисахаридов и их комплексов каррагинанхитозан

2.10 Биологическая активность in vivo полисахаридов и их комплексов каррагинанхитозан

2.10.1 Противовоспалительное действие полисахаридов и их комплексов каррагинан-хитозан

2.10.2 Гастропротекторное и противоязвенное действие полисахаридов и их комплексов каррагинан-хитозан

3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1 Используемые в работе полисахариды

3.2 N-Дезацетилирование хитозана

3.3 Получение низкомолекулярного хитозана

3.4 Выделение и фракционирование каррагинана





3.5 Приготовление растворимых и гелевых полиэлектролитных комплексов....... 100 3.5.1 Растворимые комплексы

3.5.2 Приготовление гелей

3.6 Определение молекулярной массы полисахаридов

3.7 Основные аналитические методы

3.8 Турбидиметрический метод

3.9 Гель-проникающая хроматография

3.10 Центрифугирование в градиенте перколла

3.11 ИК-спектроскопия

3.12 Компьютерное моделирование

3.13 Метод конкурентного связывания с использованием анионного красителя тропеолина 000-I

3.14 Измерение размера и -потенциала

3.15 Электронная микроскопия

3.16 Атомно-силовая микроскопия

3.17 Измерение реологических параметров

3.18 Биологическая активность in vitro

3.18.1 Антивирусная активность

3.18.2 Цитокин-индуцирующая активность

3.18.3 Антиоксидантная активность

3.19 Биологическая активность in vivo

3.19.1 Противовоспалительая активность

3.19.2 Иммуномодулирующая активность

3.19.3 Гастропротекторная и противоязвенная активность

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АСМ – атомно-силовая микроскопия;

ВМ – высокомолекулярный;

ВТМ – вирус табачной мозаики;

ВПГ – вирус простого герпеса;

ВПЧ – вирус папилломы человека;

ГЗТ – гиперчувствительность замедленного типа;

ДРС – динамическое рассеяние света;

ИК –инфракрасный;

ИЛ – интерлейкин;

ИП – Индекс Паулса;

К – каррагинан;

ЛПС – липополисахарид;

ММ – молекулярная масса;

НМ – низкомолекулярный;

ПА – противоязвенная активность;

ПЭК – полиэлектролитный комплекс;

СА – степень N-ацетилирования;

СД – степень N-дезацетилирования;

СС – степень сульфатирования;

СЭМ – сканирующая электронная микроскопия;

ТИ – тиксотропный индекс;

ТНБС – 2,4,6-тринитобензолсульфокислота;

ФНО – фактор некроза опухоли;

ФСБ – фосфатно-солевой буфер;

Х – хитозан;

ЭБ – эритроциты барана.

ВВЕДЕНИЕ

Одной из актуальных задач современной биологии и медицины является создание новых композитных материалов с широким спектром биологической активности и минимальным побочным действием. В последние годы для их получения используются как синтетические, так и природные полимеры. Особый интерес представляют полиионные полисахариды морского происхождения благодаря их биоразлагаемости, биосовместимости, доступности и разнообразной биологической активности. Способность противоположно заряженных полиионов образовывать полиэлектролитные комплексы (ПЭК) открывает возможность создания на их основе различного рода биологически активных композитов, которые в зависимости от условий получения могут существовать в виде растворов, гелей, нано- и микрочастиц, пленок и мембран, пористых структур и жидкокристаллических дисперсий.

Среди природных полианионов важное место занимают сульфатированные полисахариды красных водорослей – каррагинаны, построенные из остатков Dгалактозы и ее производных, соединенных (14) и (13) гликозидными связями. Структурное разнообразие каррагинанов объясняется присутствием 3,6-ангидрогалактозы, различным местоположением и количеством сульфатных групп, а также нерегулярностью расположения каррабиозных звеньев в молекуле.

Каррагинаны обладают уникальными физико-химическими свойствами и разнообразной биологической активностью, в том числе выраженной антивирусной, антимикробной, иммуномодулирующей и антикоагулирующей.

Среди природных поликатионных полисахаридов широким спектром активности обладает хитозан – линейный полисахарид, полимерная цепь которого построена из -1,4-связанных остатков D-глюкозамина и N-ацетил-D-глюкозамина.

К настоящему времени установлено, что хитозан обладает гиполипидемической, гепатопротекторной, радиопротекторной, иммуностимулирующей, антибактериальной и противовирусной активностями, проявляет кровоостанавливающие свойства, регулирует кислотность желудочного сока, нормализует микрофлору кишечника.

В немногочисленных работах, описывающих комплексы хитозана с коммерческими образцами каррагинана (-, - или -типами), основное внимание авторов уделено вопросам их практического использования. При этом практически не затронутыми остаются вопросы, связанные со структурными особенностями исходных полисахаридов, условиями формирования ПЭК и их макромолекулярной структурой. Вместе с тем физико-химические свойства этих природных биополимеров определяются, прежде всего, их структурой, концентрацией, значением pH, ионной силой и составом растворителя. Очевидно, что процесс формирования ПЭК на основе каррагинана и хитозана зависит от всех вышеперечисленных параметров. Изучение влияния всех этих факторов позволит дополнить представление о механизме образования ПЭК и расширит возможности целенаправленного регулирования физико-химических и биологических свойств новых композитных материалов.

Наличие каррагинанов различных структурных типов с одной стороны и хитозанов разной степени N-ацетилирования и полимеризациии с другой позволит получить широкий набор композитов с различной структурой и свойствами и выбрать наиболее эффективные из них для дальнейшего использования. Получение растворимых форм комплексов каррагинан-хитозан позволит расширить возможности применения ПЭК и увеличить их биодоступность. В связи с этим в данной работе основное внимание уделено получению растворимых комплексов каррагинана с хитозаном и изучению условий их формирования в зависимости от структурных особенностей исходных компонентов.

Целью диссертационной работы является получение и характеристика полиэлектролитных комплексов каррагинан-хитозан, изучение влияния структурных особенностей полисахаридов на процесс формирования комплексов, а также экспериментальное обоснование возможности использования полиэлектролитных комплексов для биомедицинского назначения.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:

1. Получить и охарактеризовать каррагинаны различных структурных типов и хитозаны с разной степенью N-ацетилирования и полимеризации;

2. Подобрать условия образования растворимых комплексов каррагинан-хитозан;

3. Изучить влияние на процесс формирования комплексов структуры и молекулярной массы полисахаридов, концентрации и соотношения исходных компонентов, а также условий среды;

4. Охарактеризовать полученные ПЭК (определить их размер, -потенциал, константы связывания каррагинана с хитозаном и изучить макромолекулярную организацию комплексов);

5. Получить гелевые формы ПЭК и оценить их реологические свойства;

6. Изучить биологическую активность полученных комплексов в сравнении с исходными полисахаридами.

Настоящая работа выполнена в соответствии с планом научных исследований в лаборатории молекулярных основ антибактериального иммунитета ТИБОХ ДВО РАН.

Работа поддержана грантом: Президиума РАН – «Молекулярная и клеточная биология» (руководитель к.б.н. В.А. Рассказов) и интеграционными грантом ДВО – УРО РАН (руководитель д.х.н. И.М. Ермак), ДВО – СО РАН (руководитель акад. Стоник В.А.).

Научная новизна работы. Впервые охарактеризованы растворимые ПЭК каррагинан-хитозан (К-Х), полученные на основе каррагинанов различных структурных типов с хитозанами разной степени и N-ацетилирования полимеризации. Показано влияние структурных особенностей полисахаридов на процесс формирования комплексов. Впервые определены константы связывания каррагинана с хитозаном, методом компьютерного моделирования рассчитаны теоретические модели пространственных структур комплексов. Впервые методом атомно-силовой микроскопии изучена надмолекулярная структура комплексов КХ, и показана ее зависимость от соотношения исходных компонентов. Впервые показано, что комплексы К-Х обладают гастропротекторной активностью, которая зависит от их состава.

Практическая значимость работы. На основе полисахаридов морских гидробионтов создано средство, обладающее гастропротекторной активностью и представляющее собой водорастворимый ПЭК каррагинана с хитозаном при соотношении Х:К 10:1 в/в. Показано, что парентеральное введение ПЭК каррагинан-хитозан экспериментальным животным достоверно снижает выраженность воспалительной реакции организма, индуцированной гистамином.

Полученный ПЭК может найти применение в медицине для профилактики и лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, а также для снижения побочного ульцерогенного действия нестероидных противовоспалительных средств и других лекарственных препаратов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Подобраны условия для получения комплексов каррагинан-хитозан в растворимой и гелевой форме.

2. Образование растворимых ПЭК в широком диапазоне соотношений исходных компонентов определяется степенью сульфатирования каррагинанов и степенью N-ацетилирования хитозанов.

3. Высокосульфатированный x-К полностью связывается с хитозанами различной степени полимеризации, а хитозан с низкой степенью полимеризации полностью связывается с каррагинанами (-К и x-К).

4. Гелевые формы полученных ПЭК представляют собой неньютоновские псевдопластичные жидкости с тиксотропными свойствами.

5. Макромолекулярная структура ПЭК зависит от концентрации и соотношения исходных полисахаридов.

6. Комплексы с высоким содержанием каррагинана проявляют цитокининдуцирующую, антивирусную и антиоксидантную активности in vitro.

7. ПЭК каррагинан-хитозан снижают выраженность воспалительной реакции, индуцированной гистамином, и проявляют гастропротекторную активность, которая зависит от их состава.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены автором в виде устных и стендовых сообщений на XIII и XIV Всероссийской молодежной школе-конференции по актуальным проблемам химии и биологии (Владивосток, Россия, 2010, 2012); «Renewable wood and plant resources: chemistry, technology, pharmacology, medicine» (Санкт-Петербург, Россия, 2011); «2nd International symposium on life sciences» (Владивосток, Россия, 2013).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи в международных журналах, рекомендованных ВАК РФ, и 7 тезисов докладов в материалах научных конференций.

Диссертация обсуждена и одобрена на расширенном заседании отдела молекулярной иммунологии ТИБОХ ДВО РАН 18 февраля 2014 г.

Личный вклад соискателя в проведение исследования.

Экспериментальные результаты, представленные в диссертации, получены лично автором и совместно с сотрудниками ЛМОАБИ и других лабораторий ТИБОХ ДВО РАН, а также совместно с сотрудниками ИАПУ ДВО РАН и НИОХ СО РАН.

На защиту вынесены только те положения и результаты экспериментов, в получении которых роль соискателя была определяющей.

Структура и объем диссертации. Диссертация содержит разделы:

Введение, Литературный обзор, Результаты и обсуждение, Материалы и методы, Выводы и Список литературы, включающий 217 наименований. Диссертация изложена на 137 страницах. Результаты представлены в 18 таблицах и иллюстрированы 30 рисунками.

1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Хитозан 1.1.1 Структура. Физико-химические свойства Хитозан был открыт в 1811 году французским ученым Генри Браконнотом, который выделил его из грибов. В 1823 году Одье нашел похожее соединение в кутикулах насекомых и назвал его хитин. В 1859 году Роджет опубликовал работу, в которой сообщалось, что «модифицированный хитин» можно получить путем нагревания хитина с концентрированным раствором гидроксида калия. Позднее в 1894 году Хупп-Сейлер переименовал «модифицированный хитин» в хитозан [1].

Хитозан синтезируется в природе некоторыми видами грибов [2], но обычно этот полисахарид получают методом щелочного дезацетилирования хитина, который является структурным компонентом клеточной стенки многих ракообразных и насекомых [3, 4].

Хитозан представляет собой линейный полисахарид, полимерная цепь которого построена из -1,4-связанных остатков глюкозамина (GlcN) и небольшого количества N-ацетил-глюкозаминовых (GlcNAc) звеньев [5]. Линейная полимерная макромолекула хитозана имеет по одному полному витку вдоль оси цепи каждые 10,1 – 10,5 [1].

Хитозан, как и хитин, содержит те же самые моносахариды, GlcN и GlcNAc, но, в отличие от хитина, превалирующим моносахаридом является GlcN [6]. В щелочной среде при нагревании ацетамидная группа хитина (I) – поли-14, превращается в первичную D-(N-ацетил-2-амино-2-дезокси-глюкопираноза) аминогруппу с отщеплением уксусной кислоты (1). Обычно не удается достичь полного N-дезацетилирования хитина, поэтому соотношение звеньев GlcN/GlcNAc варьирует в широких пределах в зависимости от глубины процесса N-дезацетилирования [7]. Полимеры, степень N-дезацетилирования которых выше 70 %, принято называть хитозанами, а образцы со степенью N-дезацетилирования ниже 70 % - хитином [8].

(1) Получаемый в результате N-дезацетилирования хитозан (II) приобретает дополнительную реакционноспособную функциональную группу, которая в слабокислых водных растворах присутствует в частично протонированной форме, а при значении pH 4.0 протонирована уже полностью (2):

NH2+H+NH3+ (2) Таким образом, молекула хитозана в растворе присутствует в катионной полиэлектролитной форме, что открывает широкие возможности взаимодействия с отрицательно заряженными молекулами анионами и полианионами [9].

Несмотря на простую структуру, хитозан имеет достаточно сложные физикохимические свойства. Степень N-дезацетилирования (СД) – один из наиболее важных химических параметров, влияющих на свойства хитозана и обуславливающих области его применения. Этот показатель определяет значение pKa, которое может варьироваться в пределах от 6,46 до 7,32 [10-12]. Основная трудность, с которой сталкиваются исследователи при работе с хитозаном, заключается в его растворимости. Установлено, что физико-химические характеристики хитозана и конформационное состояние его молекул в растворе главным образом зависят от СД хитозана, распределения ацетильных групп вдоль полимерной цепи, рН и ионной силы среды [13-15]. При СД 80 % в определенном интервале значений ионной силы кулоновское отталкивание протонированных аминогрупп хитозана является доминирующим. При 50 СД 80 % дополнительный вклад в межмолекулярные взаимодействия вносят водородные связи, образующиеся с участием ацетильных групп хитозана. Объемность ацетильных остатков и сеть водородных связей создают стерические затруднения в макромолекуле полимера и затормаживают вращение пиранозных звеньев вокруг Р-гликозидной связи, в результате чего повышается жесткость полисахаридной макромолекулы. По мере уменьшения СД влияние этих эффектов возрастает, усиливаются гидрофобные взаимодействия, что в результате приводит к усилению самоагрегации молекул хитозана в растворах [11].

Большинство образцов хитозана растворяется в разбавленных кислых растворах, проявляя свойства катионного полиэлектролита [13], для которого характерен полиэлектролитный эффект, приводящий к аномально высоким значениям характеристической вязкости и молекулярной массы (ММ) полимера [16]. Наблюдаемая для хитозана нелинейная зависимость приведенной вязкости от концентрации полимера, характерная для полиэлектролитов, объясняется явлением полиэлектролитного набухания полимера [13]. Как было показано [15], проявление полиэлектролитного эффекта увеличивается с уменьшением ионной силы раствора.

В связи с этим для получения достоверных значений физико-химических параметров хитозана влияние полиэлектролитного эффекта компенсируют добавлением в раствор полимера низкомолекулярного электролита [14].

Для разбавленных кислых растворов хитозана отмечается высокое значение характеристической вязкости (||), что, наряду с полиэлектролитным эффектом, объясняется еще и образованием водородных связей между молекулами полимера [17]. Благодаря своей гидрофильной природе, поликатион образует в растворе ассоциаты, значительную роль, в образовании которых, играют водородные связи [18, 19]. Процесс агрегации хитозана зависит также от концентрации полимера в растворе [11].

1.1.2 Биологическая активность хитозана К настоящему времени установлено, что хитозан обладает гиполипидемической, гипополихолестеринемической, гепатопротекторной, антитоксической, радиопротекторной, иммуностимулирующей, антиоксидантной, антибактериальной, противовирусной активностями, он также регулирует кислотность желудочного сока, обладает противоязвенным действием, нормализует микрофлору кишечника [20].

Несмотря на обширный спектр биологической активности, практическое применение хитозана зачастую ограничено плохой растворимостью в воде. Именно поэтому большую ценность представляют его деполимеризованные продукты [21].

Кроме того, для расширения спектра физиологической активности хитозана получают его сульфатированные, карбоксилированные и другие призводные.

Показано, что биологическая активность хитозана напрямую зависит от химической структуры молекулы, в частности, от молекулярной массы, а также от степени его N-ацетилирования [21, 22]. Низкомолекулярный хитозан обладает мощным липотропным действием – способностью связывать жиры, что является важнейшим фактором предупреждения атеросклероза и ожирения. Еще одно его важное качество – способность связывать радионуклиды, тяжелые металлы и токсины, а также нарушать целостность наружной оболочки вредных микроорганизмов и бактерий, что существенно снижает риск их развития в организме [21, 23]. На моделях язвы желудка у крыс, индуцированной этанолом, уксусной кислотой или индометацином, показано, что низкомолекулярный хитозан (25-50 кДа) проявляет гастропротекторную активность, носящую дозозависимый характер (250 - 1000 мг/кг) [24, 25].

Хитозан проявляет себя как антимикробный препарат по отношению к некоторым видам грибов, дрожжей и бактерий. Противогрибковая активность хитозана выше при низких значениях pH [26]. Кроме того, исследования показывают, что антибактериальная активность хитозана существенно зависит от таких факторов, как рН среды, ионная сила раствора, наличия кислоты, присутствия катионов металлов [27].

Рядом исследований показано, что водорастворимые формы хитозана, преимущественно в высоких концентрациях, проявляют антибактериальную активность по отношению к микроорганизмам видов Bacillus sp., Pseudomonas Fragi и Cryptococcus Albidus. [21].

Антибактериальный эффект хитозана в отношении Escherichia coli и Staphylococcus aureus оценивали по количеству разрушенных клеточных стенок и степени их поврежденности, регистрируемой наличием некоторых ферментов, нуклеотидов и других компонентов, присутствие которых в клетке определяет ее жизнеспособность. Было установлено, что в основе механизма действия хитозана на бактерии лежат два последовательных процесса: отделение клеточной стенки от клеточной мембраны, а затем собственно разрушение клеточной мембраны [28].

При исследовании антибактериальной активности в отношении Staphylococcus aureus было показано, что олигосахариды хитозана с низкой степенью N-ацетилирования (СА) проявляют высокую активность in vitro и in vivo при пероральном введении мышам, зараженным этой инфекцией внутрибрюшинным введением колониеобразующих бактериальных клеток [29].

Сравнительное изучение защитного эффекта хитозана, хитина и при заражении экспериментальных мышей N-ацетилхитогексаозы внутрибрюшинной или внутривенной инъекцией Pseudomonas aeruginosa и Listeria monocytogenes показало, что мыши, которым предварительно вводили указанные вещества, более устойчивы к данным микроорганизмам по сравнению с контрольными животными.

При этом мыши, получавшие хитозан и хитин, имели более высокие показатели воспалительных факторов клеточного и гуморального иммунного ответа, такие как активность перитонеальных макрофагов, активность миелпероксидазы и синтез реакционно способных форм кислорода, что говорит об иммуностимулирующем действии этих полисахаридов [30].

Установлено, что антимикробная активность хитозана против Candida sp. не зависит от ММ полисахарида, тогда как в отношении Rhodotorula sp. более высокая антимикробная активность выявлена у деполимеризованного хитозана [26].

Известна антикоагулирующая активность сульфатированных производных хитозана. Она возрастает с уменьшением ММ полимера и в максимальном значении сравнима с гепарином [31].

Описан протективный эффект этого поликатиона и показано, что хитозан более чем в 10 раз снижает токсичность эндотоксинов грамотрицательных бактерий за счет образования с ними макромолекулярных комплексов [32].

Было показано, что хитозан проявляет высокую гепатопротекторную активность. Вредное воздействие противотуберкулезных препаратов на печень экспериментальных крыс значительно уменьшается при пероральном введение их совместно с хитозаном. Защитные свойства полисахарида проявляются в существенном снижении уровня ферментов, холестерина, триглицеридов, свободных жирных кислот, продуктов перекисного окисления липидов и других диагностических маркеров в сыворотке крови и печени животных [33].

Получены данные об антиоксидантной активности in vitro сульфатированных производных хитозана. Было показано, что способность хитозана связывать супероксид- и гидроксил-радикал возрастает с увеличением степени сульфатирования и ММ полисахарида. Кроме того, авторы полагают, что присутствие и количество сульфатных групп в полисахаридах является важным параметром в проявлении различных видов биологической активности [34]. В то же время, способность карбоксиметилированных производных хитозана связывать дифенилпикрилгидразил радикал уменьшается с увеличением степени карбоксиметилирования, в то же время антиоксидантная активность в отношении супероксид-радикала не зависит от степени N-замещения хитозана, что может быть связано с различием в механизмах антиоксидантного действия в отношении различных свободных радикалов [35].

1.1.1.1 Антивирусная активность хитозана В литературе представлены данные об антивирусной активности хитозана, в особенности о его способности повышать устойчивость растений к вирусам.

Несколько противоречивые данные получены об антивирусной активности хитозана, которая зависит не только от ММ полимера, но и способа его получения [22, 36-38].

Установлено, что хитин, хитозан и их олигосахариды способны стимулировать экспрессию генов, ответственных за синтез различных антимикробных агентов в растительной клетке, повышая тем самым устойчивость растений к бактериальным и вирусным инфекциям [39].

Показано, что хитозан может уменьшать число и размеры вирусиндуцированных локальных некрозов на листьях сверхчувствительных растенийхозяев, а также ингибировать распространение вирусов в системно поражаемых растениях. По имеющимся данным уровень противовирусной устойчивости, индуцированной хитозаном, зависит от вида растения [37]. В то же время, антивирусная активность хитозана определяется его структурой и, прежде всего, степенью полимеризации молекулы [40-42].

Предполагается, что в основе механизма антивирусного действия хитозана в отношении вируса табачной мозаики (ВТМ) лежит его способностью запускать процесс апоптоза в клетках, зараженных вирусом [43]. Еще один аспект противовирусной активности хитозана заключается в индукции под действием этого полисахарида различных провоспалительных факторов и свободных радикалов внутри зараженных ВТМ клеток, что приводит к их разрушению [44].

При изучении антибактериальной и антивирусной активности деполимеризованных и дезаминированных производных хитозана было показано, что активность деполимеризованных продуктов хитозана возрастает с уменьшением ММ, в то время как степень дезаминирования не оказывает какоголибо влияния на антибактериальные и антивирусные свойства полисахарида.

Полностью дезаминированные анионные производные хитозана практически не проявляют ни одного из указанных эффектов [45].

1.1.1.2 Иммуномодулирующая и противовоспалительная активность Хитозан оказывает разнонаправленное влияние на механизмы регуляции клеточного и гуморального иммунного ответа, повышает эффективность доставки и лечебного действия различных препаратов [46, 47], обладает иммуноадъювантными свойствами [48, 49]. Это позволяет рассматривать полисахариды природного происхождения в качестве препаратов для профилактики и лечения заболеваний, вызванных различными нарушениями иммунной системы, острыми или хроническими воспалительными процессами в организме.

Так, например, было установлено, что при использовании капсул хитозана в качестве носителя 5-аминосалициловой кислоты (противовоспалительного препарата) при лечении химически-индуцированного язвенного колита у крыс, значительно повышается эффективность его высвобождения в кишечнике [50].

Многочисленные исследования показали, что хитозан повышает эффективность доставки лекарств через слизистые оболочки. Было установлено, что хитозан повышает проницаемость клеток для препарата, воздействуя на транси внутриклеточный транспортные пути эпителиальных клеток обратимым образом, не влияя при этом на их жизнеспособность [47].

Известно, что хитозан способен взаимодействовать с клетками эукариот, стимулировать синтез про- и противовоспалительных цитокинов, оказывая на иммунитет разнонаправленное действие, как стимулирующее, так и ингибирующее [51, 52].

На модели экспериментальной бронхиальной астмы у мышей показано, что интраназальное введение теофиллина, содержащего наночастицы хитозана, существенно снижает побочное и повышает лечебное действие препарата, что, вероятно, связано с повышением проницаемости бронхиального эпителия и усиления противовоспалительного эффекта под действием хитозана [53].

Олигосахариды хитозана были протестированы на местные аллергические реакции. Эксперимент проводили на 32 добровольцах, олигосахариды хитозана использовались в качестве различных косметических средств, при этом не наблюдалось никаких побочных реакций, повышения чувствительности или раздражения кожных покровов человека. Эти данные в перспективе позволяют рассматривать олигосахариды хитозана в качестве противовоспалительных препаратов для местного применения [54].

1.1.3 Применение хитозана Диапазон применения хитозана очень широк. Наряду с коллагеном, желатином и глюкозоаминогликанами хитозан играет ведущую роль в тканевой инженерии как биоконструкционный материал [55]. Ионные комплексы хитозана используется для временной замены кожной и костной ткани [56-60], как компонент в искусственных кровеносных сосудах и клапанах [61], имплантант в косметической хирургии [62]. Последнее время хитозан достаточно широко используется для создания биодеградируемых носителей фармацевтических препаратов (антибиотиков, антивирусных, противоопухолевых и антиаллергенных препаратов), обеспечивая пролонгированное действие лекарственных средств [63Способность хитозана образовывать пленки, в сочетании с его антимикробными свойствами, открывает возможность использования хитозана для создания специальных глазных линз, предохраняющих глаза от инфекции в послеоперационном периоде [66, 67].

Биосовместимость хитозана и его устойчивость к действию щелочной среды позволяет использовать его для создания саморассасывающихся хирургических нитей даже в мочевом тракте [68, 69].

Благодаря сорбционным свойствам хитозан способен связывать и выводить из организма жиры, радионуклиды, соли тяжелых металлов и другие токсичные вещества, снижать уровень холестерина в крови и очищать от него стенки кровеносных сосудов [70], что обуславливает применение хитозана в качестве пищевой добавки.

Использование хитозана в бумажной промышленности основано на нанесении его на целлюлозное волокно, в результате чего образуются весьма прочные ионные связи, что приводит к возрастанию прочности бумажного листа.

При этом одновременно улучшаются и другие важные свойства полимера (сопротивление продавливанию, излому, стабильность изображения) [71].

Хитозан, благодаря сопротивлению трению, оптическим характеристикам и пленкообразующей способности, используется в фотографических процессах, связанных с быстрым проявлением изображения, улучшением оптических характеристик фотоизображений [72]. Он широко применяется в промышленности как флоккулирующий агент для очистки сточных вод и сгуститель для водных сред [73].

Хитозан используется для получения гидрогелей. Гидрогели представляют собой гидрофильные сети полимера, которые могут поглотить большое количество воды и значительно увеличиться в объеме. В настоящее время получают разнообразные сшитые гидрогели, которые сохраняют основные свойства хитозана

– биоразлагаемость и малую токсичность [74, 75].

1.2 Каррагинан 1.2.1 Структура. Физико-химические свойства Каррагинаны представляют собой сульфатированные полисахариды, состоящие из остатков D-галактозы и ее производных, которые соединены регулярно чередующимися (14) и (13) гликозидными связями. Структурное разнообразие каррагинанов обусловлено присутствием -(1-4)-связанного моносахаридного остатка в виде 3,6-ангидрогалактозы, а также количеством и местоположением сульфатных групп в молекуле полисахарида. [76]. Регулярные полисахариды, полимерная цепь которых построена из повторяющихся дисахаридных звеньев одного типа, получили собственные названия (рис. 1), и, согласно номенклатуре, предложенной Рессом в 1963 году [77], условно делятся на желирующие и нежелирующие типы.

Нежелирующие Желирующие

–  –  –

Природные каррагинаны редко имеют регулярную структуру, чаще они содержат повторяющиеся звенья нескольких типов и представлены блочной или гибридной структурой, что объясняется ступенчатым биосинтезом полисахаридов в клеточной стенке водорослей. Предполагается, что в начале из остатков галактозы образуется регулярная полисахаридная цепь, затем происходит сульфатирование, после чего сульфат из положения 6 в 4-О-замещенных остатках галактозы ферментативно элиминируется. Последняя стадия приводит к образованию ангидроциклов. Реакции могут проходить не полностью, продуктом синтеза может являться молекулярный гибрид, содержащий звенья разных типов каррагинанов [78, 79]. Так как природные полисахариды представляют собой “молекулярные гибриды”, способные содержать звенья различных типов, то их свойства зависят от распределения этих дисахаридных звеньев вдоль полимерной цепи [80].

Для полисахаридов, как для белков и нуклеиновых кислот, характерны различные уровни структурной организации макромолекул – первичная, вторичная, третичная и четвертичная структуры. Биологические свойства полисахаридов определяются как первичной структурой, так и конформацией макромолекул в растворе и их макромолекулярной организацией [81]. В растворе молекулы каррагинана в зависимости от структурного типа могут принимать различную конформацию. Каррагинаны нежелирующих типов чаще всего имеют конформацию хаотичного клубка (random coil) [76].

Способность каррагинанов подобно другим фикоколлоидам образовывать в водных растворах гели – одно из наиболее важных физико-химических свойств этих полисахаридов. Переход раствора в гель происходит за счет межмолекулярных взаимодействий, при которых каждая молекула полимера кооперативно ассоциируется с несколькими другими. В результате происходит образование единой трехмерной сетки, состоящей из молекул растворенного полимера и заключенного в ней большого количества растворителя. Гелеобразующие свойства каррагинанов зависят от их химической структуры, концентрации полимера, природы добавляемого катиона, температуры раствора. Одним из главных условий гелеобразования является наличие в молекуле 3,6-ангидрогалактозы, которая придает жесткость и обеспечивает спиральную конформацию молекуле полимера [76]. Другим важным параметром, влияющим на способность каррагинанов к образованию гелей, является наличие в растворах таких специфических ионов, как калий и кальций [82]. Таким образом, желирующие свойства каррагинана тем выше, чем меньше остатков серной кислоты в полисахариде и чем выше в нём содержание 3,6-ангидрогалактозы.

Каррагинаны обычно образуют очень вязкие водные растворы, что связано со структурой их линейных макромолекул и полиэлектролитной природой.

Взаимное отталкивание отрицательно заряженных сульфатных групп вдоль полимерной цепи является причиной того, что молекула становится сильно протяженной, в то время как ее гидрофильная часть находится в гидратной оболочке. Оба эти фактора приводят к повышению вязкости раствора. Как и для большинства природных полисахаридов, для каррагинанов характерна полидисперсность по ММ. Большинство каррагинанов имеет ММ от 100 до 500 кДа. Обычно они формируют растворы с вязкостью от 25 до 500 мПа, за исключением -каррагинана который может образовывать высоковязкие растворы до 20000 мПа [83]. Каррагинаны, растворы которых имеют вязкость менее 100 мПа, обладают свойствами, близкими к ньютоновским жидкостям. Степень отклонения от ньютоновского поведения увеличивается с концентрацией и ММ полисахарида [84]. Вязкость водных растворов каррагинанов зависит от типа и ММ полисахарида, присутствия определенных ионов и температуры [85]. Соли снижают вязкость растворов каррагинанов, уменьшая электростатическое отталкивание сульфатных групп. Вязкость растворов каррагинанов зависит от концентрации полимера, конформации его макромолекулы в растворе и ММ.

1.2.2 Биологическая активность каррагинана Каррагинаны обладают широким спектром биологической активности, среди которого наибольший интерес представляют антикоагулирующая, антиоксидантная, противоопухолевая, иммуномодулирующая и антивирусная.

Несмотря на то, что эти полисахариды входят в список веществ, разрешенных к использованию в качестве пищевых добавок [86], биологические свойства каррагинанов до конца не изучены [76, 87, 88].

Антикоагулирующие свойства являются одними из наиболее широко изученных свойств сульфатированных полисахаридов [89]. Сульфатированные галактаны красных водорослей идентифицированы как полисахариды с высокой антикоагулирующей активностью Проявление антикоагулирующей [90].

активности определяется следующими факторами: содержанием сульфатных групп, ММ полисахарида и распределением плотности зарядов вдоль цепи макромолекулы [91].

Показано, что каррагинаны проявляют антиоксидантную активностью [92Установлено, что она зависит от степени сульфатирования (СС), типа основного моносахарида и разветвления углеводной цепи [95, 96].

Согласно литературным данным, деполимеризованные продукты каррагинанов проявляют высокую противоопухолевую активность. Было показано, что олигосахаридная фракция -каррагинана с ММ 1.7 кДа способствует уменьшению скорости роста опухоли саркома-180 у мышей, индукции различных факторов иммунного ответа и увеличению скорости фагоцитоза [97]. Кроме того, была обнаружена высокая ингибирующая активность олигосахаридов каррагинанов относительно асцитной опухоли Эрлиха. Согласно некоторым данным, противоопухолевая активность каррагинанов повышается с уменьшением ММ и СС [98].

1.2.2.1 Антивирусная активность Способность полианнионных полисахаридов ингибировать рост вируса простого герпеса и многих других вирусов известна уже около 40 лет, но долгое время не вызывала особого интереса исследователей, поскольку считалась неспецифической, и механизм ее оставался невыясненным.

Однако после того как было установлено ингибирующее действие гепарина и других сульфатированных полисахаридов на репликацию ВИЧ, эти полимеры привлекли внимание как потенциальные агенты для лечения и профилактики заболеваний, вызванных данным вирусом [99]. К настоящему времени известно, что сульфатированные полисахариды имеют широкий спектр антивирусной активности в отношении большого числа вирусов с оболочкой, включая так называемые условнопатогенные, такие как вирус простого герпеса (ВПГ), цитомегаловирус и другие, возникающие в организме при ослаблении функции иммунной системы [99].

Исследования антивирусной активности /-, /- и -каррагинанов, выделенных из Gigartina skottsbergii в отношении ВПГ 1 и 2 типа показали, что наибольшую активность проявляли - и /-каррагинаны [90, 100]. Авторы, исследующие взаимосвязь структурных особенностей каррагинанов и их антивирусного действия, полагают, что в проявлении ингибирующего действия в отношении многих вирусов, в том числе и ВПГ, определяющую роль играет присутствие -связанной D-галактозы и сульфатных групп во 2 и 6 положениях остатка галактозы в полисахаридах, при этом частичная циклизация, в результате которой образуется приводит к существенному 3,6-ангидро-D-галактоза, понижению активности [90, 101]. В основе механизма действия каррагинанов на ВПГ лежит способность сульфатированных полисахаридов блокировать пути проникновения вириона в клетку-хозяина, возможно, благодаря антиадгезивным свойствам или за счет структурного сродства с некоторыми компонентами вирусной частицы [102]. Рядом исследователей показано, что именно наличие отрицательно заряженных групп в молекулах полисахаридов, обуславливающее сходство со строением вирусных гликопротеинов, способствует блокированию специфического взаимодействия вирусов с клеточными рецепторами CD4 и лежит в основе их ингибирующего действия в отношении многих ретровирусов [99, 103В настоящее время - и -каррагинаны рассматриваются как перспективные противовирусные средства в отношении ВИЧ 1 и 2 типа, кроме того, показано, что их ингибирующее действие повышается с увеличением ММ и СС, но важную роль при этом играют распределение сульфатных групп, конформационная гибкость и относительное количество 3,6-ангидрогалактозы в молекуле полисахарида [106].

При использовании этих полисахаридов в качестве средств доставки анти-ВИЧ препаратов, отмечено существенное увеличение лечебного действия последних [99]. Так, при использовании -каррагинана в качестве конъюгата с целью эффективной доставки 3'-азидо-3'-дезокситимидина – препарата, ингибирующего развитие ВИЧ, было отмечено повышение антивирусного действия этого препарата. При последующем изучении действия каррагинана на вирус иммунодефицита было установлено, что синергизм действия двух веществ обусловлен наличием у самого полисахарида ингибирующей способности в отношении ВИЧ [107]. Поскольку заражение вирусом иммунодефицита в 90 % случаев происходит половым путем, способность сульфатированных полисахаридов препятствовать межклеточной адгезии, в данном случае эпителиальных клеток и мононуклеарных фагоцитов крови, позволяет рассматривать эти полимеры в качестве местных антивирусных агентов в профилактике ВИЧ [99].

Высокую ингибирующую активность в низких концентрациях каррагинаны проявляют в отношении вируса папилломы человека (ВПЧ), передача которого происходит преимущественно половым путем, вследствие чего перспективным является использование каррагинанов в качестве компонента различных контрацептивных и других средств интимного назначения местного применения с целью профилактики передачи ВПЧ [108].

На модели вируса табачной мозаики (ВТМ) была изучена антивирусная активность различных типов каррагинанов, выделенных из красных водорослей семейств Gigartinaceae и Tichocarpaceae [109]. Согласно полученным результатам, наибольшую активность проявляют желирующие типы – -каррагинан и его гибриды – /-и /-каррагинаны.

Противовирусная активность - и -каррагинанов, полученных из водорослей Chondrus armatus, изучена в опытах in vitro при экспериментальной хантавирусной инфекции. Обнаружено выраженное вирусингибирующее действие при использовании каррагинанов при концентрациях 1-2 мг/мл [110].

1.2.2.2 Иммуномодулирующая активность Каррагинаны оказывают разнонаправленное действие на иммунную систему, как стимулирующее, так и супрессивное [111]. Индукция формирования интерферона, неспецифического фактора, защищающего организм от инфекций, является одним из первых эффектов системного действия каррагинанов [112]. Они стимулируют синтез ФНО-альфа лейкоцитами мышей [113]. При этом стимулирующее действие на иммунную систему выше у каррагинанов с низкими ММ и высоким содержанием сульфатных групп [114].

Было показано, что -каррагинан увеличивает активность макрофагов, тогда как другие структурные типы полисахарида оказывают ингибирующее действие на функции макрофагов [115-117]. Оральное введение -каррагинана мышам, иммунизированных овальбумином для инициации аллергической реакции, способствовало снижению количества овальбумин-специфических IgE и гистамина в сыворотке, что дает возможность использования -каррагинана с целью смягчения аллергических реакций [118]. Группа исследователей показала, что введение каррагинанов in vivo влияет на продукцию воспалительных цитокинов, таких как ИЛ-1, ИЛ-6 и фактор некроза опухолей [119-121].

На ингаляционной модели пневмонии у мышей было показано, что введение каррагинана за 24 часа до и через 48 часов после инфицирования существенно повышает выживаемость экспериментальных животных [122].

Интраперитонеальное введение каррагинана через 24 часа после индуцирования плеврита способствовало усилению хемотаксического ответа в плевральной полости мышей [121].

Последние данные свидетельствуют о том, что сульфатированные полисахариды водорослей могут регулировать ответ врожденного иммунитета прямым образом, посредством связывания со специфическими рецепторами, такими как маннозный и толл-подобные рецепторы фагоцитарных клеток, включая макрофаги, при этом наибольшую активность проявляют деполимеризованные продукты каррагинанов [123, 124].

Влияние каррагинанов на иммунную систему носит дозозависимый характер. В высоких концентрациях эти полисахариды не оказывают иммуносупрессивного действия, вероятно, вследствие цитотоксичности в отношении супрессорных клеток. В то же время, каррагинаны при низких дозах стимулируют активацию супрессивных макрофагов и ускоряют их созревание [125]. Некоторая противоречивость данных о фармакологическом действии этих полисахаридов может быть обусловлена некорректным сравнением результатов, полученных в различных экспериментальных условия, на разных структурных типах каррагинанов. При этом очень важен способ введения полисахарида и его доза.

1.2.3 Применение каррагинана Благодаря своим физико-химическим свойствам каррагинан имеет достаточно широкое применение. Около 70 % производимого в мире каррагинана используется в пищевой промышленности: при производстве молочных (шоколадное молоко, щербеты, домашний сыр, сырные пасты, детское питание), мясных и рыбных продуктах (консервы, оболочки колбас, желейные покрытия), приправ, безалкогольных напитков, хлебобулочных (хлебное тесто, фруктовые кексы, сахарные глазури) и кондитерских изделий [126, 127].

Каррагинаны используют в пищевой промышленности как гелеобразователи и стабилизаторы эмульсий в системах, основанных на молоке и воде, а также для улучшения свойств других гелей. Это возможно благодаря способности каррагинанов образовывать комплексы с другими гидроколлоидами [128, 129].

Каррагинаны имеют сравнительно высокую температуру разжижения, поэтому их используют при приготовлении фруктовых кондитерских изделий.

Модифицированные каррагинаны препятствуют окислению жиров и являются хорошими антиокислителями. В виде коагулянта их используют в мясных консервах, фруктовых гелей и желе [130]. Известно использование каррагинанов в качестве съедобного покрытия для хранения продуктов [131].

Второе место по потреблению каррагинанов после пищевой индустрии занимает косметическая промышленность. Их применяют при изготовлении лосьонов, кремов, шампуней не столько из-за хороших реологических свойств, сколько из-за так называемого остаточного эффекта: каррагинан смягчает кожу.

Благоприятно воздействуя на кератин волос, каррагинан, добавленный в шампунь или фиксатор, делает массу волос более послушной, вероятно, за счет связывания влаги и снятия статического электрического заряда [76].

Известно применение каррагинана в текстильной промышленности. В биотехнологическом производстве его используют для иммобилизации клеток и как заменитель бактериологического агара [132].

Каррагинаны относятся к растворимым пищевым волокнам. Доказано, что пищевые волокна играют значительную роль в регулировании гомеостаза и позволяют достаточно эффективно регулировать метаболические и функциональные нарушения, лежащие в основе таких болезней, как атеросклероз, сахарный диабет, ожирение, ишемическая болезнь сердца и многих других [133].



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |


Похожие работы:

«ДЕМЕШКИН АНДРЕЙ СЕРГЕЕВИЧ ГЕОЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ ПРИРОДНОЙ СРЕДЫ В РАЙОНЕ РАСПОЛОЖЕНИЯ РОССИЙСКОГО УГЛЕДОБЫВАЮЩЕГО РУДНИКА БАРЕНЦБУРГ НА АРХИПЕЛАГЕ ШПИЦБЕРГЕН Специальность 25.00.36 – Геоэкология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор химических наук, профессор Фрумин Г. Т. Санкт-Петербург СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ФИЗИКО-ГЕОГРАФИЧЕСКАЯ И...»

«БИБАЕВА Анна Юрьевна ОСОБЕННОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ ЭСТЕТИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ПРИБРЕЖНЫХ ЛАНДШАФТОВ 25.00.23 – физическая география и биогеография, география почв и геохимия ландшафтов Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор географических наук, профессор Черкашин Александр Константинович Иркутск...»

«Скачков Владимир Михайлович ХИМИЧЕСКОЕ ЛЕГИРОВАНИЕ СКАНДИЕМ, ЦИРКОНИЕМ И ГАФНИЕМ СПЛАВОВ НА ОСНОВЕ АЛЮМИНИЯ специальность 02.00.04 – физическая химия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: проф., д.х.н. Яценко С.П. Екатеринбург ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1 ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ СКАНДИЯ С ЭЛЕМЕНТАМИ В ДВОЙНЫХ...»

«Дубков Константин Александрович Окисление алкенов в карбонильные соединения и кетонизация ненасыщенных полимеров закисью азота специальность 02.00.15 – Кинетика и катализ 02.00.04 – Физическая химия Диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук Научный консультант: профессор, доктор химических наук Панов Геннадий Иванович...»

«СОЛДАТЕНКО ЕЛЕНА МИХАЙЛОВНА СОРБЦИОННЫЕ И БИОЦИДНЫЕ СВОЙСТВА КОМПОЗИТОВ НА ОСНОВЕ ГЛАУКОНИТА, ПОЛИВИНИЛОВОГО СПИРТА И МУЛЬТИДИСПЕРСНЫХ ЧАСТИЦ МЕДИ 02.00.04. – Физическая химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: д.х.н., проф. Доронин С.Ю. Саратов – 2015 Работа выполнена на кафедре аналитической химии и химической экологии Института...»

«САЛЕНКО ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА ПРОГРАММИРОВАНИЕ УРОЖАЙНОСТИ ОЗИМОЙ ПШЕНИЦЫ В ЗОНЕ УМЕРЕННОГО УВЛАЖНЕНИЯ НА ОСНОВЕ ОПТИМИЗАЦИИ ПРИМЕНЕНИЯ МИНЕРАЛЬНЫХ УДОБРЕНИЙ 06.01.04 агрохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учной степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Есаулко...»

«Якушин Роман Владимирович ИНТЕНСИФИКАЦИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОВОССТАНОВИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ЭЛЕКТРОРАЗРЯДНОЙ ПЛАЗМЫ 02.00.04 – физическая химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель д.т.н., профессор Колесников Владимир Александрович Москва2015 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1 ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР 1.1 Физика низкотемпературной плазмы...»

«Слюта Евгений Николаевич Особенности гравитационной деформации малых тел Солнечной системы в зависимости от их химического и минерального состава 25.00.09 – геохимия, геохимические методы поисков полезных ископаемых диссертация на соискание ученой степени кандидата...»

«Матюшин Андрей Николаевич ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОЦЕССА БЕСКАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРМОВАНИЯ МАТЕРИАЛОВ С ПОВЫШЕННОЙ ГИДРОФОБНОСТЬЮ Специальность 05.17.06 – Технология и переработка полимеров и композитов Диссертация на соискание учёной степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор химических наук профессор...»

«РАЕНБАГИНА ЭЛЬМИРА РАШИДОВНА СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТЕХНИЧЕСКОЙ ЭКСПЛУАТАЦИИ ГАЗОБАЛЛОННЫХ АВТОМОБИЛЕЙ ПУТЕМ ОБЕСПЕЧЕНИЯ ВОЗМОЖНОСТИ СЛИВА ГАЗА Специальность 05.22.10 – Эксплуатация автомобильного транспорта Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель доктор технических наук, профессор Певнев Н.Г. Омск –...»

«ЦАРЬКОВА Александра Сергеевна Синтез люциферина люминесцентного червя Fridericia heliota и его аналогов Специальность 02.00.10 – «биоорганическая химия» Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель к.х.н. Ямпольский Илья Викторович Москва – 2015г. Feci quod potui faciant meliora...»

«Савченков Антон Владимирович СИНТЕЗ И СТРОЕНИЕ НОВЫХ КРОТОНАТ-, БУТИРАТИ ВАЛЕРАТСОДЕРЖАЩИХ КОМПЛЕКСОВ УРАНИЛА 02.00.01 – неорганическая химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: д.х.н., проф. Сережкин В.Н. Нижний Новгород – 2014 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ...»

«Восель Юлия Сергеевна ГЕОХИМИЯ УРАНА В СОВРЕМЕННЫХ КАРБОНАТНЫХ ОТЛОЖЕНИЯХ МАЛЫХ ОЗЕР (ФОРМЫ НАХОЖДЕНИЯ И ИЗОТОПНЫЕ ОТНОШЕНИЯ 234U/238U) 25.00.09 Геохимия, геохимические методы поисков полезных ископаемых Диссертация на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Научный руководитель доктор...»

«ЗЯБЛОВ АЛЕКСАНДР НИКОЛАЕВИЧ ОПРЕДЕЛЕНИЕ АМИНОКИСЛОТ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ ПЬЕЗОЭЛЕКТРИЧЕСКИМИ СЕНСОРАМИ НА ОСНОВЕ МОЛЕКУЛЯРНО-ИМПРИНТИРОВАННЫХ ПОЛИМЕРОВ 02.00.02 – Аналитическая химия Диссертация на соискание ученой степени доктора химических наук Научный консультант: доктор химических наук, профессор Селеменев В.Ф. Воронеж – 2014 г....»

«Соколова Татьяна Владимировна МЕТОДИКА ИНТЕГРАЛЬНОЙ ЭКОЛОГО-ГЕОХИМИЧЕСКОЙ ОЦЕНКИ ДОННЫХ ОТЛОЖЕНИЙ ИСКУССТВЕННО СОЗДАННЫХ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ В УСЛОВИЯХ ПРИРОДНОГО И ТЕХНОГЕННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ Специальность 25.00.36 – «Геоэкология» (науки о Земле) Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук...»

«Миронова Кристина Евгеньевна Иммунофотосенсибилизаторы на основе рибофлавина и апконвертирующих нанофосфо ров для фотоиндуцированного разрушения раковых клеток Специальность 03.01.03 – молекулярная биология Диссертация на соискание учёной степени...»

«САЛКИНА Ольга Анатольевна ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКА ПНЕВМОКОККОВОЙ ИНФЕКЦИИ У ДЕТЕЙ ГРУПП РИСКА 14.03.09 – клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук Снегова Надежда Федоровна Москва 2012 ОГЛАВЛЕНИЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СОКРАЩЕНИЯ..5 ВВЕДЕНИЕ..6 ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. ПНЕВМОКОККОВАЯ ИНФЕКЦИЯ: ЭТИОЛОГИЯ, ПРОБЛЕМЫ, СОВРЕМЕННЫЕ...»

«САФОНОВА ЕВГЕНИЯ АЛЕКСАНДРОВНА КОМПЛЕКСЫ МЕТАЛЛОВ С КРАУН-ЗАМЕЩЕННЫМИ ФТАЛОИ НАФТАЛОЦИАНИНАМИ – ОПТИЧЕСКИЕ ПЕРЕКЛЮЧАТЕЛИ С НАСТРАИВАЕМЫМ ДИАПАЗОНОМ ПОГЛОЩЕНИЯ 02.00.04 – Физическая химия 02.00.01 – Неорганическая химия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата химических наук Научные руководители: Доктор химических наук, профессор...»

«ЗАРОВКИНА НАТАЛИЯ ЮРЬЕВНА РЕАКЦИИ 1,3-ДИПОЛЯРНОГО ЦИКЛОПРИСОЕДИНЕНИЯ С УЧАСТИЕМ НЕПРЕДЕЛЬНЫХ ХРОМ/МАРГАНЕЦТРИКАРБОНИЛЬНЫХ -КОМПЛЕКСОВ 02.00.03 – органическая химия 02.00.08 – химия элементоорганических соединений (химические науки) диссертация...»

«ИВЧЕНКО НАТАЛИЯ ВИТАЛЬЕВНА УДК 543.422.3+543.067.5+543:544.344+543.33 ИНДИКАТОРНЫЕ ПЛЕНКИ НА ОСНОВЕ ОТВЕРЖДЕННОГО ЖЕЛАТИНОВОГО ГЕЛЯ С ИММОБИЛИЗОВАННЫМИ ГИДРОКСИКСАНТЕНОВЫМИ КРАСИТЕЛЯМИ И КОМПЛЕКСООБРАЗУЮЩИМИ РЕАГЕНТАМИ 02.00.02 — аналитическая химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель кандидат химических наук, доцент Решетняк...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.