WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«СИСТЕМЫ НПАВ – Н2О – ЭЛЕКТРОЛИТЫ В МИЦЕЛЛЯРНОЙ ЭКСТРАКЦИИ И ФОТОМЕТРИЧЕСКОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ ...»

-- [ Страница 1 ] --

САРАТОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИМЕНИ Н.Г. ЧЕРНЫШЕВСКОГО

На правах рукописи

Шестопалова Наталия Борисовна

СИСТЕМЫ НПАВ – Н2О – ЭЛЕКТРОЛИТЫ В МИЦЕЛЛЯРНОЙ

ЭКСТРАКЦИИ И ФОТОМЕТРИЧЕСКОМ ОПРЕДЕЛЕНИИ

СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИЩЕВЫХ КРАСИТЕЛЕЙ



02.00.02. – аналитическая химия

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата химических наук

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор химических наук, профессор Чернова Римма Кузьминична Саратов – 2014

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………….

ГЛАВА 1. ПРОБОПОДГОТОВКА И МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ В ПРОДУКТАХ

ПИТАНИЯ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)…………………………......

1.1 Номенклатура и области применения синтетических пищевых красителей……..………………………………………………………

1.2 Способы извлечения синтетических красителей из пищевых продуктов…………..………………………………………………….. 13

1.3 Методы определения синтетических пищевых красителей……………………………………………………………..

1.3.1 Спектрофотометрия……………...…………………………....... 25 1.3.2 Хроматография…………………………………………………. 32 1.3.3 Электрохимические методы……………………………..…….. 41 1.3.4 Капиллярный электрофорез……………………………………. 48 ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, АППАРАТУРА, РЕАКТИВЫ…. 52

2.1 Предварительные испытания…………………………………...……. 52

2.2 Методы исследования……..…………………………………………. 55

2.3 Реактивы……...…………………………………………………………. 63

ГЛАВА 3. ФАЗОВОЕ РАССЛОЕНИЕ, ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ

И ЭКСТРАКЦИОННЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

МИЦЕЛЛЯРНОЙ ФАЗЫ В СИСТЕМЕ (ОП-10) – Н2О……........ 66

3.1 Политермическое изучение водных растворов ОП-10…………...... 66

3.2 Макромолекулярный лиганд - ОП-10: взаимодействие с ионами щелочных и щелочноземельных металлов в водной и мицеллярной фазах……………………………………………….... 71

3.3 Об изотропном состоянии мицеллярной фазы ОП-10……………... 77

3.4 Влияние гидрофобности и заряда ионных форм синтетических красителей на параметры мицеллярной экстракции………………... 82 ГЛАВА 4. ПОЛИТЕРМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДНОСОЛЕВЫХ РАСТВОРОВ ОП-10 ……………………………..….. 88

4.1 Влияние сильных электролитов на температуру помутнения водных растворов ОП-10……………………………………….......... 88

4.2 Влияние режима нагрева и концентрации соли на фазовое расслоение в системе (ОП-10) – Н2О – Na2SO4 и состояние мицеллярной фазы………………………………………………......... 95

4.3 Факторы, влияющие на мицеллярную экстракцию пищевых красителей Е122 и Е133……………………………………..……….. 106

4.4 Мицеллярная экстракция красителей Е102, Е110, Е124, Е129 и Е151 в оптимальных условиях……………………………………..... 116

ГЛАВА 5. ИЗОТЕРМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ СИСТЕМЫ

(ОП-10) – Н2О – ЭЛЕКТРОЛИТЫ (25°С)………………………... 123

5.1 Установление границ фазового расслоения и моделирование бинодальных кривых…………………………………………………. 123

5.2 Влияние концентрации Na2SO4 на фазовое расслоение и физикохимические характеристики мицеллярных фаз ОП-10…………...... 134

5.3 Влияние кислот и оснований на фазовое расслоение……………… 136

5.4 Применение системы (ОП-10) – H2O – Na2SO4 для мицеллярной экстракции синтетических пищевых красителей…………………... 143 ГЛАВА 6. ПРАКТИЧЕСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ………………………………. 151

6.1 Методология применения систем нПАВ – Н2О – электролиты для мицеллярной экстракции и фотометрического определения синтетических красителей в пищевых продуктах………………….. 151

6.2 Методики определения синтетических красителей в продуктах питания………………………………………………………………... 152 6.2.1 Определение Е110, Е122 и Е133 в безалкогольных напитках… 152 6.2.2 Определение Е102, Е110 и Е122 в мармеладе и желатиновых десертах………………………………………………………… 155 6.2.3 Определение Е110 и Е124 в концентратах желе……………… 158 6.2.4 Определение Е124 в концентрате киселя……………………...... 160 ВЫВОДЫ……………………………………………………………………….. 166 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ……………………………………………………. 168 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………………. 170 ПРИЛОЖЕНИЕ………………………………………………………………..





ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. В настоящее время мировое сообщество уделяет пристальное внимание качеству продуктов питания. Об этом свидетельствуют: выпуск специализированных журналов («Food Chemistry», «Пищевая промышленность», «Вопросы питания»), проведение международных конференций (Белград (2012 г.), Прага (2013-2014 гг..)) и др.

Синтетические пищевые красители (СПК) широко применяются в современных технологиях для улучшения потребительских свойств продуктов питания. Их содержание нормировано и требует постоянного контроля, зачастую оперативного. В настоящее время для подавляющего большинства пищевой продукции ГОСТы на определение СПК отсутствуют.

Ключевым моментом при разработке методик определения СПК являются способы их извлечения из органических матриксов пищевых продуктов. Для этих целей наиболее часто применяют твердофазную экстракцию (ТФЭ) (H. Huang и др) и в ряде случав – органические растворители (Суханов П.Т.).

Применение ТФЭ к пищевым матриксам сложного состава, содержащим белки, углеводы, жиры и образующим при обработке водой эмульсии, суспензии, взвеси, имеет много осложнений. Кроме того, при наличии в продуктах, как правило, одного – двух красителей, извлечение их ТФЭ с последующим определением трудоемкими и дорогостоящими методами (капиллярный электрофорез, ВЭЖХ) не оправдано. Сочетание же ТФЭ со спектрофотометрическим определением пищевых красителей требует их предварительной десорбции, что существенно усложняет анализ, увеличивает погрешность.

В связи с этим, актуальна разработка достаточно универсальных, простых и дешевых способов извлечения СПК из пищевых матриксов, сочетающихся с различными методами определения, как для подтверждения качества и безопасности пищевых продуктов, так и для идентификации и выявления возможных фальсификаций.

В последнее время развивается направление гомогенной экстракции, основанное на применении в качестве экстрагентов фаз: водорастворимых полимеров – для концентрирования аминокислот (Н.Я. Мокшина), микроэлементов (В.М. Шкинев); поверхностно-активных веществ (ПАВ) разных классов – для концентрирования микроэлементов (Y. Shijo, H. Kohara, N. Ishibashi, K. Pytlakowska), белков, органических токсикантов (W. Hinze, D.

Perez-Bendito, S. Kumar), которое получило название экстракции «в точке помутнения» (cloud point extraction, СРЕ, мицеллярная экстракция).

Преимуществами мицеллярной экстракции являются: высокие коэффициенты абсолютного концентрирования при малых объемах проб;

низкая себестоимость анализа; отсутствие органических растворителей;

возможность извлечения гидрофобных и гидрофильных аналитов;

экологическая безопасность и инертность по отношению к сложным биологически-активным веществам; возможность сочетания с физикохимическими методами анализа.

Систематического изучения мицеллярной экстракции на основе неионных ПАВ как способа извлечения синтетических красителей из сложных матриц продуктов питания ранее не проводилось.

Актуальным является также оценка влияния изменения состояния мицеллярных фаз нПАВ под действием высаливателей на их экстрагирующую способность, а также разработка новых подходов к проведению мицеллярной экстракции красителей в политермических и изотермических (25°С) условиях.

Цель настоящего исследования: Установление физико-химических закономерностей фазового разделения и экстракционных свойств мицеллярных фаз в системах нПАВ – Н2О – электролиты в политермических и изотермических условиях; создание новых простых и экономичных методик идентификации и фотометрического определения синтетических красителей непосредственно в мицеллярных экстрактах из матриксов пищевых продуктов.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

Оценить экстрагирующую способность оксиэтилированных нПАВ по отношению к разным классам синтетических красителей.

Выявить закономерности экстракции ионных форм гидрофильных и гидрофобных синтетических красителей мицеллярными фазами нПАВ.

Систематически изучить влияние катионов и анионов электролитов на температуру и особенности фазового расслоения в модельной системе (ОП-10)–Н2О–электролиты. Оценить способность нПАВ как макромолекулярного лиганда взаимодействовать с ионами щелочных и щелочноземельных металлов.

Выявить влияние совокупности факторов (концентрация, температура, электролиты) на физико-химические и аналитические характеристики мицеллярной фазы ПАВ-экстрагента в поли- и изотермическом режимах.

Оценить изотропное (анизотропное) состояние мицеллярных фазэкстрагентов, связь со структурными и экстракционными характеристиками.

Установить условия фазового расслоения в системах (ОП-10) – Н2О – электролиты при существенном снижении температуры помутнения (25°С).

Разработать простые способы мицеллярно-экстракционного извлечения и фотометрического определения синтетических пищевых красителей (Е102, Е110, Е122, Е124, Е129, Е133 и Е151) в продуктах питания.

Научная новизна полученных результатов:

Впервые показана возможность концентрирования синтетических красителей (СК) разных классов мицеллярными фазами неионных ПАВ в двухфазных водно-солевых системах. Изучены основные закономерности фазового разделения в системах нПАВ – Н2О – электролиты при изо- и политермическом режимах расслаивания. Обоснован выбор солей и нПАВ для получения оптимальных экстракционных систем. Выявлена высокая высаливающая способность карбонатов, сульфатов, фосфатов натрия при фазовом разделении водных растворов ОП-10; показано, что этот эффект коррелирует с величинами свободной энергии гидратации Гиббса.

Политермически изучены процессы фазового разделения водных растворов нПАВ и показаны особенности экстракции синтетических красителей изотропной мицеллярной фазой ОП-10, содержащей до 75% воды. Исследован состав полимергомологов ряда нПАВ. Установлен факт непосредственного взаимодействия ионов щелочных и щелочноземельных металлов с оксиэтилированными нПАВ, охарактеризованы образующиеся аддукты и оценена их всаливающая (высаливающая) роль при фазовом разделении водных растворов нПАВ в присутствии электролитов.

Изучены физико-химические характеристики анизотропных мицеллярных фаз, содержащих до 58% воды, полученных в политермическом режиме; приведены доказательства в пользу образования гексагональной структуры; показана возможность обратимого фазового перехода от изотропного к анизотропному состоянию (40-60°С) и значение этого процесса для фотометрического определения СК непосредственно в мицеллярных экстрактах нПАВ. Изучено влияние кислот и оснований на фазовое разделение и экстракционное концентрирование мицеллярными фазами ОП-10 ряда красителей. Установлено, что с увеличением заряда и гидрофильности СК степень экстракции уменьшается. Показано увеличение эффективности экстракционного концентрирования гидрофильных СК мицеллярными фазами ОП-10, полученными из водно-солевых растворов в изотермическом режиме фазового разделения.

Практическая значимость работы:

Разработана методология применения систем нПАВ–H2O–электролиты для мицеллярной экстракции синтетических красителей с последующим фотометрическим определением непосредственно в экстрактах пищевых продуктов. На основании установленных закономерностей высказан прогноз оптимизации получения мицеллярных фаз нПАВ для экстракционного концентрирования «в точке помутнения» различных классов синтетических красителей.

Показаны преимущества применения системы (ОП-10) – H2O – Na2SO4 при 25°С для экстракционного извлечения гидрофильных синтетических пищевых красителей из желатин содержащих матриксов пищевых продуктов.

Разработаны новые способы мицеллярно-экстракционного извлечения, идентификации и фотометрического определения красителей Е102, Е110, Е122, Е124, Е129, Е133 и Е151 в безалкогольных напитках и белковосахаристых продуктах питания, отличающиеся низким пределом обнаружения, универсальностью, простотой, экономичностью.

На защиту автор выносит:

1. Физико-химические закономерности фазового разделения водных и водно-солевых растворов нПАВ в политермических и изотермических условиях. Мицеллярные фазы нПАВ как универсальные экстрагенты синтетических красителей разных классов.

2. Солевые эффекты в системах нПАВ – Н2О – электролиты.

Оксиэтилированные нПАВ как макромолекулярные лиганды.

3. Факторы, влияющие на фазовое разделение в системах (ОП-10) – Н2О – электролиты в изотермических условиях (25°С). Обоснование выбора электролитов для оптимизации мицеллярной экстракции синтетических пищевых красителей.

4. Влияние изотропного и анизотропного состояния мицеллярных фаз нПАВ на экстракцию синтетических красителей.

5. Новые способы идентификации и фотометрического определения синтетических красителей непосредственно в экстрактах из пищевых матриксов, отличающиеся универсальностью, простотой, экономичностью, низким пределом обнаружения.

Личный вклад автора. Автором выполнены основные теоретические и экспериментальные работы по ключевым направлениям исследования. В диссертации обобщены результаты, полученные лично автором совместно с соавторами публикаций.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на:

Всероссийской конференции с международным участием «Современные проблемы химической науки и образования» (Чебоксары, 2012); ХХII и ХХIII Российской молодежной научной конференции «Проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Екатеринбург, 2012, 2013);

Всероссийской школе-конференции «Химия биологически активных веществ» молодых ученых, аспирантов и студентов с международным участием «ХимБиоАктив-2012» (Саратов, 2012); Всероссийской конференции по аналитической спектроскопии с международным участием (Краснодар, 2012); III и IV конференциях молодых ученых «Presenting (Саратов, 2012, 2013); 6-й Academic Achievements to the World»

Всероссийской научно-практической конференции «Экологические проблемы промышленных городов» (Саратов, 2013); IX Всероссийской конференции молодых ученых с международным участием «Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии» (Саратов, 2013); II

Съезде аналитиков России (Москва, 2013); симпозиуме «Saratov Fall Meeting:

Optics and Biophotonics» SFM’13 (Саратов, 2013); VIII Всероссийской конференции с международным участием молодых учёных по химии «Менделеев – 2014» (Санкт-Петербург, 2014); ХХ международной научнопрактической конференции «Естественные и математические науки в современном мире» (Новосибирск, 2014).

Публикации. Опубликовано 19 работ, из них 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК, 5 статей в научных сборниках, 10 тезисов докладов на международных и Всероссийских конференциях.

Структура и объем работы. Диссертация состоит их введения, шести глав, выводов, библиографического списка, состоящего из 227 наименований, приложения.

Работа изложена на 196 листах, включает 58 таблиц и 69 рисунков.

ГЛАВА 1. ПРОБОПОДГОТОВКА И МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ

СИНТЕТИЧЕСКИХ КРАСИТЕЛЕЙ В ПРОДУКТАХ ПИТАНИЯ

(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Номенклатура и области применения синтетических пищевых красителей Синтетические пищевые красители (СПК) относят к пищевым добавкам, предназначенным для придания, усиления или восстановления окраски продуктов питания [1]. В зависимости от способов получения пищевые красители делят на натуральные, синтетические и неорганические (рис.1.1).

–  –  –

50% 33% Рис. 1.1. Соотношение природных, синтетических и неорганических пищевых красителей [1].

Как следует из приведенной диаграммы, синтетические красители занимают второе по распространенности место. Это связано с тем, что СПК, полученные методами органического синтеза, позволяют достигать стойких, интенсивных и легко воспроизводимых цветов и оттенков пищевых продуктов; малочувствительны к условиям технологической переработки и хранения, не имеют запаха, характеризуются низкой стоимостью.

Синтетические пищевые красители классифицируют также по химической природе (азо-, трифенилметановые, хинофталоновые, индигоидные) и по цвету водного раствора. Они легко растворимы в воде, как правило, представляют собой порошки или гранулы, содержащие до 80красителя [2].

Спектр пищевых продуктов, в которых содержатся СПК, чрезвычайно широк: напитки, кондитерские изделия, варенья, джемы, рыбные, мясные, кисломолочные продукты, мороженое, парфюмерные и косметические товары, лекарственные средства и др. (рис. 1.2).

25 % Рис. 1.2. Диаграмма распределения пищевых продуктов, содержащих СПК (по данным [3]).

Красителям присваивается индекс Е – порядковый номер в нумерационной системе, установленной Европейским комитетом ФАО ВОЗ для маркировки пищевых добавок, который отражает принадлежность добавки к определенному технологическому классу (красители, консерванты, регуляторы кислотности, загустители и др.). Пищевым красителям присвоены индексы Е100 – Е199. В настоящее время список красителей, разрешенных к применению в РФ, включает 13 наименований, в США – 7, в странах ЕС – 15 [2,4] (табл. 1). Частота применения указанных красителей в РФ приведена на рис. 1.3.

% 10 Е102Е124Е110Е133Е122Е104Е129Е132Е155Е131 Рис. 1.3. Частота использования СПК в пищевых продуктах (по данным [3]).

–  –  –

В определенных концентрациях СПК могут оказывать негативное влияние на здоровье человека: вызвать различные аллергические реакции, гиперактивность у детей и др. [5-8]. Так, например, азокрасители могут восстанавливаться в организме человека до потенциально опасных токсичных аминов. Токсикологической характеристикой синтетических красителей является величина приемлемого суточного поступления (ПСП) – количество пищевой добавки в расчете на 1 кг массы тела человека (средняя масса 60 кг), которое можно употреблять ежедневно в течение всей жизни без риска для здоровья. Для синтетических красителей величины ПСП варьируют в диапазоне 1-25 мг/кг [2].

Несмотря на регламентированное применение СПК в пищевой продукции [9], в ряде случаев имеет место их бесконтрольное использование, что приводит к превышению их допустимых содержаний, фальсификации продуктов. Импорт пищевых товаров создает возможность попадания продукции, содержащей неразрешенные СПК [10]. В связи с этим необходимо проводить контроль, иногда оперативный, за содержанием СПК в различных продуктах питания, что является сложной задачей, связанной прежде всего с трудностью их извлечения из сложных пищевых матриц.

1.2 Способы извлечения синтетических красителей из пищевых продуктов Ключевым моментом и гарантией правильности определения СПК является извлечение их из сложных матриксов продуктов питания.

Следует отметить наибольшую сложность извлечения СПК из кондитерских изделий (конфет, желе, мармелада, пастилы), кисломолочных, рыбных и мясных продуктов, мороженого, жевательной резинки – пищевых продуктов с высоким содержанием углеводов и белков.

Нормативные документы для определения СПК в пищевой продукции стали разрабатываться сравнительно недавно (с 2005 г.). К настоящему времени известно 4 ГОСТа, регламентирующие извлечение красителей из алкогольной продукции, карамели и пряностей [11-14]. В качестве основного способа извлечения СПК рекомендован метод твердофазной экстракции (ТФЭ). Обзор библиографических источников (1994-2014 гг.) показал, что для целей извлечения СПК из пищевых продуктов применяется в основном три способа извлечения:

Загрузка...

твердофазная экстракция;

экстракция органическими растворителями;

гомогенная экстракция.

Твердофазная экстракция (табл. 2). Наибольшее количество работ (более 40) посвящено ТФЭ. В табл. 2 обобщены сведения о сорбентах, элюентах, пищевых объектах, содержащих СПК, а также методах их определения после соответствующего извлечения.

Таблица 2. Твердофазная экстракция синтетических пищевых красителей

–  –  –

Как следует из табл. 2, с помощью ТФЭ извлекают более 40 красителей из различных напитков, десертов, мясных и рыбных продуктов, кондитерских изделий и др.

Чаще всего для извлечения СПК используют полимерные сорбенты, из которых преобладает группа полиамидов, применяемых в виде картриджей и порошков. Обязательной стадией является десорбция СПК с сорбентов после концентрирования. В зависимости от метода анализа элюенты имеют разный состав, часто включающий метанол, аммиак и др. (табл. 2).

С твердофазной экстракцией часто связана достаточно сложная пробоподготовка. Так, в [11] вначале к образцам алкогольных напитков добавляют ледяную уксусную кислоту, нагревают (80-90°С, 5-6 мин), затем пропускают анализируемый раствор через патрон для ТФЭ, заполненный оксидом алюминия, предварительно промытым уксусной кислотой. Для достижения полноты сорбции используют 1-5 патронов. Промывают патроны с сорбированными красителями уксусной кислотой (10 г/дм3), красители затем десорбируют раствором аммиака (25%) до полного обесцвечивания сорбента. Элюат выпаривают на водяной бане, сухой остаток растворяют в дистиллированной воде и затем анализируют.

Стандартом [13] регламентировано извлечение СПК из сухих пряностей с последующей идентификацией методом ТСХ. Извлечение водорастворимых СПК предполагает приготовление водного экстракта пряности и сорбции красителей из полученного раствора на твердофазном патроне с оксидом алюминия, затем десорбцию аммиаком, удалении последнего выпариванием. Процедуру приготовления водного экстракта пряностей проводят дистиллированной водой при перемешивании на магнитной мешалке (30 мин), смесь центрифугируют 15 мин (4500 об/мин), водный экстракт декантируют, остаток заливают дистиллированной водой и вновь центрифугируют. Водные экстракты объединяют и для удаления взвешенных частиц отфильтровывают через бумажный фильтр.

18 В работе [43] для извлечения красителей из безалкогольных напитков применяли картриджи для ТФЭ промышленного производства – Waters OasisTM WAX. Через картридж, предварительно обработанный метанолом и водой, пропускали анализируемый напиток и промывали последовательно муравьиной кислотой (2%) и метанолом. Десорбировали красители раствором аммиака в метаноле (5%), элюат высушивали током азота, сухой остаток обрабатывали 50% раствором метанола и фильтровали. Содержание красителей в полученном растворе определяли методом ВЭЖХ.

Для извлечения красителей из креветочных хлопьев в работе [41] применяли колонку HLB C18. Хлопья гомогенизировали и экстрагировали красители смесью этанол-аммиак-вода (7:2:1), раствор выдерживали в ультразвуковой ванне 20 мин, экстракт центрифугировали при 10000 об/мин в течение 15 мин. Эту процедуру проводили трижды, экстракты объединяли, этанол и аммиак удаляли на роторном испарителе. Сухой остаток разбавляли дистиллированной водой, доводили до рН 3,0-3,5 и экстракт пропускали через колонку HLB C18, предварительно обработанную метанолом и дистиллированной водой. Элюировали красители метанолом, содержащим 0,1% аммиака. Элюат высушивали в токе азота и сухой остаток растворяли водой. Перед ВЭЖХ определением растворы фильтровали через нейлоновую мембрану.

При спектрофотометрическом определении красителей для извлечения СПК методом ТФЭ из конфет, безалкогольных напитков, фруктовых соков, желе применяли полиамидный порошок [22-24]. Основная процедура заключалась в растворении измельченных твердых образцов в горячей воде, предварительном дегазировании напитков при нагревании, подкислении раствором соляной [22] или лимонной [23] кислот, добавлении полиамидного порошка, тщательном перемешивании до полной сорбции красителя и обесцвечивания раствора.

После фильтрования адсорбент промывали горячей дистиллированной водой [23, 24], пропаноном [22]. Для десорбции красителей применяли 5% раствор NaOH [22], раствор аммиака [23], смесь этанол: аммиак (90:10) [24] до полного удаления с сорбента. Полученный раствор либо нейтрализовали добавлением HCl [22], либо нагревали на водной бане до удаления аммиака и спирта и доводили 20 % - ным раствором лимонной кислоты до рН 4 [23, 24].

Таким образом, твердофазная экстракция, хотя и применяется для извлечения СПК из ряда пищевых продуктов, однако можно отметить ряд существенных ограничений: необходимость десорбции СПК перед определением, многостадийность пробоподготовки и ее трудоемкость, применение токсичных растворителей.

Экстракция органическими растворителями (табл. 3). Применению органических растворителей для извлечения красителей из пищевых продуктов посвящены немногочисленные работы (13). В табл. 3 обобщены сведения об экстрагентах, условиях проведения экстракции, пищевых объектах, содержащих СПК, а также методах их определения после соответствующей пробоподготовки. С помощью этого способа извлекают не более 15 красителей в основном из модельных растворов и ограниченного числа пищевых продуктов.

Чаще всего в качестве экстрагентов применяют ацетон и его смеси (с изопропанолом, диоксаном) в сочетании с высаливателем сульфатом аммония.

В качестве примеров приводим процедуры пробоподготовки, включающие экстракцию [51, 52]. Так извлечение из безалкогольных напитков красителей Е123, Е102, Е122, Е133, Е124, Е110, Е142, оранжевого G н-бутанолом в виде ионных ассоциатов с октадецилтриметиламмоний бромидом предложено в работе [52]. Для этого к аликвотам дегазированных ультразвуком образцов добавляют фосфатный буферный раствор (рН 5,6) и для минимизации помех матрицы 0-0,3 мл стандартного раствора соответствующего красителя(1 мг/мл). Если образец содержал высокое содержание натурального сока, добавляют хлороформ для удаления натуральных красителей, хлороформный слой после встряхивания отбрасывают. Затем добавляют раствор октадецилтриметиламмония бромида (0,5 %) в н-бутаноле, встряхивают и центрифугируют (1000 об/мин) до полного разделения фаз. Содержание красителя в органической фазе определяют спектрофотометрическим методом.

В работе [51] извлечение красителей Е102 и Е110 из концентрата безалкогольных напитков, желатинового десерта и заварного крема проводили экстракцией толуолом ионных ассоциатов красителей с бромидом триоктилметиламмония. Для этого образцы растворяли в воде и к аликвотам полученных растворов добавляли ацетатный буферный раствор (рН 4,6), разбавляли деионизированной водой, добавляли толуол и кПАВ (1 г/л) и интенсивно встряхивали в течение 1 мин. После разделения фаз органическую фазу центрифугировали. Спектры поглощения регистрировали в диапазоне 340-600 нм.

Способ концентрирования СПК с помощью органических растворителей мало разработан, не нашел широкого применения на практике, связан с трудностью подбора экстрагентов для соответствующих матриксов пищевых продуктов, а также токсичностью органических растворителей.

Такой способ пробоподготовки в основном применялся при определении СПК методом ТСХ и, частично, в спектрофотометрии.

Гомогенная экстракция (табл. 4). В последнее время развивается способ экстракции, в котором в качестве экстрагентов применяют ПАВ [59водорастворимые полимеры [64-66], ионные жидкости [67, 68]. Однако для красителей известны единичные работы. Сведения об определяемых красителях, экстрагентах, условиях проведения экстракции, метрологических характеристиках и пищевых объектах обобщены в табл.4.

Таблица 3. Экстракция синтетических пищевых красителей органическими растворителями

–  –  –

К настоящему времени только для четырех разрешенных пищевых красителей (Е110, Е122, Е133, Е129) для ограниченного числа продуктов найдены оптимальные условия экстракции при «температуре помутнения». В качестве экстрагентов применяли неионные ПАВ - Тритон Х100, Тритон Х114.

Следует отметить простоту, экспрессность процедуры извлечения СПК из продуктов питания с помощью мицеллярной экстракции ПАВ в «точке помутнения».

Так, например, для извлечения красителя Е129 из конфет, напитков, пастилы и желе в работе [59] образцы растворяли в воде при нагревании. К аликвотам добавляли растворы Тритона Х-114 (2,5 об.%), ЦТАБ (0,01 моль/л), KCl (1 моль/л), Тритона X-100 (0,5 моль/л) и цитратный буферный раствор (рН 2,5), разбавляли водой. Полученный раствор помещали в термостатированную ванну на 50 мин при 60°С. После разделения двух фаз, смесь охлаждали, водную фазу декантировали, ПАВ обогащенную фазу с экстрагированными красителями разбавляли водой и фотометрировали.

Для извлечения красителей Е122 и Е133 из желе и леденцов [60] образцы растворяли в воде, фильтровали. К аликвоте полученного раствора добавляли Тритон X-100 (0,5 М), NaCl (1,0 М), ацетатный буферный раствор (рН 5,0) и дистиллированную воду. Полученный раствор выдерживали в термостатированной ванне 30 мин при 76°C. После фазового разделения растворы охлаждали, ПАВ обогащенную фазу вместе с экстрагированными красителями разбавляли водой и измеряли оптическую плотность раствора.

Таким образом, имеющиеся немногочисленные сведения указывают на очевидные преимущества мицеллярной экстракции в точке помутнения с помощью ПАВ, как способа извлечения синтетических красителей из пищевых объектов. Однако, отсутствие систематических исследований не позволяет сделать каких-либо крупных обобщений о возможности применения такого подхода к широкому ассортименту пищевых продуктов.

Исследования в данном направлении представляются перспективными.

24

1.3 Методы определения синтетических пищевых красителей В настоящее время для определения синтетических пищевых красителей в продуктах питания применяют: хроматографические, спектрофотометрические, электрохимические методы, капиллярный электрофорез (рис. 1.4).

Рис. 1.4. Диаграмма распределения работ по методам определения СПК (Общее количество источников – 138).

Данные по указанным методам определения СПК (период 1994-2014 гг.) обобщены в табл. 5-9. Все указанные методы проводятся с предварительной пробоподготовкой, рассмотренной нами в разд. 1.2.

–  –  –

Технология производства пищевых продуктов предусматривает применение как индивидуальных СПК, так и их смесей. При наличии в продуктах питания одного красителя извлечение проводят методом ТФЭ как с последующим определением непосредственно на сорбенте твердофазной спектроскопией [46 - 48], так и после реэкстракции [31, 44, 49, 50, 72].

Спектрофотометрирование экстрактов проводят после экстракции ионных ассоциатов СПК органическими растворителями [51 - 54], поверхностноактивными веществами [59 - 61]. В ряде работ перед фотометрическим определением проводят дериватизацию [24, 73, 74].

Использование смешанных композиций СПК позволяет получать цвета и оттенки, недоступные при использовании индивидуальных красителей.

Смеси включают обычно 2-3 красителя [2], которые, как правило, характеризуются широкими перекрывающимися полосами поглощения.

Поэтому без процедуры предварительного разделения таких спектров идентификация и количественное определение индивидуальных красителей невозможны. Основная масса работ посвящена определению нескольких красителей при совместном присутствии. Для успешного решения таких задач применяют производную спектрофотометрию (табл. 5). В указанной таблице приведены условия определения СПК при совместном присутствии в пищевых объектах и некоторые метрологические характеристики методик.

Для пищевых продуктов, содержащих 2 красителя (табл. 5), наиболее часто применяют первые производные спектров экстрактов или реэкстрактов [31, 51, 75 - 77], а также производные отношения спектров с измерением при нулевом пересечении [49, 78 - 81].

Вторая производная спектров, полученных твердофазной спектрофотометрией с измерением при нулевом пересечении, применялась при определении содержания двух красителей при совместном присутствии [46]. При наличии 3-х красителей, наряду с применением спектров первой производной [82] и первой производной отношения спектров с измерением при нулевом пересечении [83 - 86], применяют вторые производные спектров [87] и вторые производные отношения спектров [88, 89], а также производные двойного отношения спектров [90].

–  –  –

Возможности спектрофотометрического анализа смесей СПК в последнее время существенно расширились с применением хемометрических алгоритмов (табл. 6).

Так, метод двумерной калибровки использован для обработки данных после экстракционно-фотометрического определения двух красителей (Е102, Е110) при совместном присутствии в концентратах напитков и желатиновых десертах [51].

Возможности линейного регрессионного анализа показаны для идентификации 13 синтетических красителей в их различных двух-четырех компонентных смесях [33]. Методика апробирована на большом количестве продуктов (напитки, сладости, желе и др.), из которых красители извлекали при помощи белой шерсти.

Наиболее часто применяемые хемометрические алгоритмы для анализа смесей 2-х и более красителей - проекция на латентные структуры (PLS -1, PLS-2) и регрессия на главные компоненты (PCR) [23, 47, 76, 90 - 94].

Результаты, полученные методами производной спектрофотометрии и с помощью указанных хемометрических алгоритмов, хорошо согласовались [76, 84, 85, 92].

Хемометрические алгоритмы – PLS и PCR – применялись также для обработки производных спектров поглощения нулевого, первого и второго порядков как растворов [93, 95], так и твердой фазы сорбента [47].

Для обработки кинетических спектрофотометрических данных применяли также алгоритмы MCR-ALS, ITTFA, U-PCA-RBL и PC-RBF-ANN [24, 74]. Определение содержание красителей после их ТФЭ на полиамидном сорбенте и последующей десорбции проводили по спектрам первых производных в сочетании с хемометрическим алгоритмом ITTFA [23].

Полученные производные спектров поглощения нулевого, первого и второго порядков обрабатывали также методами CLS, PCR, PLS. Установлено, что ITTFA более точен, чем CLS, PCR и PLS, т.к. исключается влияние фоновых компонентов.

Таблица 6. Применение хемометрических алгоритмов при определении синтетических красителей в пищевых продуктах

–  –  –

Для количественного определения 2-3-х красителей при совместном присутствии с помощью алгоритмов BLLS/RBL и PARAFAC обрабатывали комбинации спектров поглощения при разных значениях рН [96], применяли алгоритмы MCR-ALS [97], HPSAM [25, 26], и многофакторный метод калибровки HLA/GO [98].

Спектрофотометрия широко применяется для определения как индивидуальных красителей, так и их смесей в пищевых продуктах при их содержании СПК от 0,01 до 60 мг/л. Погрешность определения для разных вариантов варьируется в диапазоне от 5% до 9%.

1.3.2 Хроматография Для разделения и количественного определения СПК в продуктах питания применяются различные хроматографические методы: планарная хроматография (тонкослойная (ТСХ), бумажная (БХ)); высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ).

Методы определения СПК в различных пищевых продуктах, условия детектирования, применяемые подвижные и неподвижные фазы, а также некоторые метрологические характеристики представлены в табл. 7. Следует отметить, что при определении красителей хроматографическими методами также центральным вопросом является пробоподготовка с извлечением СПК из различных продуктов питания, которая проводится как для жидких, так и для твердых образцов и зависит от хроматографического метода и специфики образца.

Наиболее простыми и доступными хроматографическими методами, не требующими дорогостоящей и сложной аппаратуры, являются ТСХ и БХ [99]. Идентификация и количественное определение красителей проводят визуально по собственной окраске и коэффициенту подвижности R f в сравнении со стандартами. Основная задача эффективного разделения смесей красителей заключается в выборе соответствующих подвижных и стационарных фаз.

Таблица 7.Хроматографические методы определения синтетических пищевых красителей

–  –  –

Применение БХ (табл.7) описано в единичных работах [58]. Методом традиционной ТСХ при подборе систем растворителей и неподвижной фазы возможно разделение от 4 до 13 СПК [45, 57]. Метод позволяет достаточно быстро (30-40 мин) определять красители при концентрациях на уровне 10 -5моль/л [57].

Предложены различные варианты ТСХ: ион-парная [100], обращенофазовая [101], высокоэффективная [102]. Недостаток токсичные органические растворители входят в состав подвижных фаз. Повысить экологическую безопасность анализа позволяет замена растворителей на циклодекстрин [125].

Значительно ускорить и повысить эффективность процесса разделения 7 красителей позволяет метод двумерной ТСХ - сочетание традиционной и электроосмотической ТСХ [103, 104]. При этом разделение в первом измерении проводится в режиме высокоэффективной ТСХ, а во втором - в режиме электроосмотической ТСХ. Применение масс-спектрометрического детектирования расширяет возможности ТСХ [36, 37].

Для количественного определения СПК применяют различные методы обработки хроматограмм: сканируют, переводят в формат растровой графики и обрабатывают изображения с помощью соответствующего программного обеспечения, например, Adobe Photoshop 5.0 [55, 102, 126, 127], «ColorDens»

[128]. Количественное определение красителей проводят также с помощью оптического видеоденситометра «ДенСкан» и программного обеспечения «Dens» [127].

Высокоэффективная жидкостная хроматография широко используется для разделения, качественного и количественного определения СПК. Наиболее часто применяемые варианты: ион-парная и обращенофазовая ВЭЖХ.

Ион-парная ВЭЖХ предполагает наличие в элюенте соединений противоионов анализируемого вещества. В качестве ион-парного реагента применяли: тетра-n-бутиламмония фосфат [30, 106], октиламин [105], додецилтриметиламмония хлорид [38], цетилтриметиламмoния бромид [27, 107, 108], гексадецилтриметиламмония бромид [109], триэтиламин [110].

Состав подвижных фаз и колонки, на которых проводилось разделение от 3 до 12 красителей методом ион-парной ВЭЖХ, приведены в табл. 7. Метод позволяет определять красители на уровне 0,03-75 мкг/г [108].

Сочетание ион-парной жидкостной хроматографии с он-лайн фотодиодной и электро-распылительной масс–спектрометрией применяли для определения 8 красителей в безалкогольных напитках, джемах, соленых овощах и рыбе [110].

Анализ литературы показывает, что наиболее широко применим для определения СПК вариант обращено-фазовой ВЭЖХ. Условия разделения и метрологические характеристики методик приведены в табл. 7. Подбор оптимальных подвижных фаз позволяет одновременно разделять от 3 до 40 различных красителей на уровне от 0,006 мкг/л [114] до1 мг/л [116].

Для снижения токсичности применяемых растворителей в подвижную фазу добавляли неионные ПАВ – Тритон Х-100 [21, 122].

Сочетание ВЭЖХ с фотодиодной и электро-распылительной массспектрометрией применяли для определения красителей в работах [41, 43, 120]. Для определения до 40 красителей в безалкогольных напитках, в т.ч. 14 СПК, применяли ВЭЖХ с ионизацией электро-распылением и тандемной масс-спектрометрией [40, 121].

Для определения СПК применяли также высокоэффективную ионную хроматографию [123] и ультра-ВЭЖХ [124].

Хроматографические методы оправданы при определении большого количества красителей при совместном присутствии в пищевых продуктах.

1.3.3 Электрохимические методы Для определения СПК описаны методы дифференциально-импульсной полярографии, адсорбционной вольтамперометрии и потенциометрии.

Условия определения, некоторые метрологические характеристики электрохимических методов представлены в табл. 8.

Определение СПК методом дифференциально-импульсной полярографии описано в работах [129 - 132]. Диапазон определяемых содержаний для красителей (Е102, Е110, Е122, Е124 и Е129) варьирует в от 0,1 до 10 ppm [129]. Метод применен для определения красителей в безалкогольных напитках, сиропах, конфетах. В работе [132] при совместном определении Е102, Е110 и Е129 перекрывающиеся полярографические волны обрабатывали с помощью хемометрического алгоритма (PLS).

Методы инверсионной вольтамперометрии применяли для определения красителей Е102, Е104, Е110, Е120, Е122, Е123, Е124, Е127, Е129 и Е133 в различных продуктах питания [133].

Квадратно-волновая и дифференциально- импульсная адсорбционная вольтамперометрия на электроде с висячей ртутной каплей применены для определения красителей в безалкогольных напитках и конфетах [134 - 137].

Вольтамперограммы обрабатывали хемометрическими алгоритмами PLS [136] и ITTFA [137]. Диапазоны определяемых содержаний варьировали в интервале 5 - 272,4 мкг/л.

В последнее время наряду с ртутным электродом предложены стеклоуглеродные электроды, модифицированные: полиаллиламин гидрохлоридом [138], многослойными углеродными нанотрубками [139 висмутом [142], ацетиленовой сажей [143], графеном, полимером с молекулярным отпечатком красителя Е110 [144] и фосфорновольфрамовой кислотой [145]. Пределы обнаружения варьировали от 0,5 мкг/л до 3 мг/л.

–  –  –

Угольно-пастовые электроды, модифицированные наночастицами золота [146], графеном и мезопористым TiO2 [35], микроволокнами оксида алюминия [147], предложены для определения Е110 и Е102 дифференциально-импульсной вольтамперометрией. Модификация электрода наночастицами золота позволяет определять красители с пределами обнаружения от 2 нМ до 30 нМ.

Алмазный электрод, легированный бором применяли для определения смесей красителей Е102 и Е110, Е133 и Е110 в концентратах напитков, желатине и спортивных напитках дифференциально-импульсной и квадратно-волновой вольтамперометрией [148]. Этот электрод также был применен в варианте проточно-инжекционного метода с амперометрическим детектированием [149]. Наиболее чувствительным был вольтамперометрический вариант определения, пределы обнаружения красителей в котором варьировали от 13,1 до 146 нмоль/л.

Методу потенциометрического определения ряда красителей (Е102, Е110, Е104) в напитках и их концентратах, желе, заварном креме посвящены единичные работы [150 - 152]. Для определения применяли угольнопастовый и серебряный электроды, модифицированные ионным ассоциатом Е102 с цетилтриметиламмоний бромидом [150], платиновый, графитовый и мембранный электроды, модифицированные ионным ассоциатом Е110 и цетилпиридинием хлоридом [151], графитовый электрод, модифицированный ионным ассоциатом Е104 и тетрафенилфосфониума бромидом [152]. Наибольшей чувствительностью обладал модифицированный серебряный электрод с пределом обнаружения Е102 5,510-8М.

В электрохимических методах исследованы окислительновосстановительные процессы на электродах разных типов с разными диапазонами определяемых содержаний красителей. Однако эти методы применительно к СПК еще мало разработаны и мало апробированы на реальных пищевых объектах.

47 1.3.4 Капиллярный электрофорез Для разделения смесей синтетических пищевых красителей и последующего определения в различных продуктах питания применяется два основных варианта капиллярного электрофореза: капиллярный зонный электрофорез (КЗЭ) и мицеллярная электрокинетическая хроматография (МЭКХ). Условия определения СПК в пищевых объектах, некоторые метрологические характеристики методик представлены в таблице 9.

Методом капиллярного зонного электрофореза возможно разделение и определение до 12 СПК с разными пределами обнаружения, зависящими от аппаратурного оснащения, техники проведения эксперимента, методологии анализа.

Для разделения красителей в варианте КЗЭ применяют различные буферные растворы и их композиции: боратный [153, 154], фосфатный [155, 156], карбонатный [32], фосфатно-боратный [157], фосфатно-карбонатный [158].

В варианте мицеллярной электрокинетической хроматографии описано разделение до 15 красителей (табл.9). В фоновый электролит добавляют додецилсульфат натрия [159, 160], дезоксихолат натрия и ацетонитрил [29, 161], Бридж 35 и ацетонитрил [162].

Микроэмульсионная электрокинетическая хроматография (МЭЭКХ) применялась для разделения и определения восьми пищевых красителей [17].

Сравнение двух методов (КЗЭ и МЭЭКХ) для определения красителей в безалкогольных напитках и фруктовом мороженом показало сопоставимые пределы обнаружения: 0,27 – 1,80 мг / мл для МЭЭКХ и 0,21-2,42 мг / мл для КЗЭ.

–  –  –

*** Как видно из обзора библиографических источников глубиной в 20 лет, для определения СПК привлекается ряд современных инструментальных методов, имеющих свои достоинства и недостатки.

Однако, оценивая известные к настоящему времени способы извлечения СПК из продуктов питания и возможность их адаптации к спектрофотометрическому методу (наиболее простому и органичному для СПК, имеющих собственную окраску в видимой области спектра), целесообразно обратить внимание на мало разработанный вариант гомогенной экстракции на основе ПАВ, позволяющий, согласно имеющимся единичным работам и нашим предварительным исследованиям, не только после проведения однократной экстракции полностью извлекать СПК из пищевых матриксов, но и проводить непосредственное определение красителей в мицеллярной фазе экологически безопасного экстрагента.

Отсутствие систематических исследований в данном направлении не позволяет делать более широкие обобщения и требует направленных и комплексных дальнейших исследований.

ГЛАВА 2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, АППАРАТУРА, РЕАКТИВЫ

–  –  –

Один из вариантов гомогенной экстракции, как указывалось ранее, основан на применении водных растворов ПАВ, образующих при определенных условиях двухфазные системы. Для нПАВ, рассматриваемых в данной работе, фазовое разделение происходит, в основном, при повышенных температурах (температура помутнения, tпом). Для нПАВ, содержащих полиоксиэтиленовые фрагменты, интервалы таких температур, в зависимости от строения ПАВ, а также их партий и марок, могут варьировать в широком диапазоне [166].

Поскольку в настоящей работе изучается возможность применения мицеллярных фаз нПАВ для экстракции синтетических красителей, представлялось целесообразным очертить круг тех нПАВ, водные растворы которых не только способны к фазовому расслоению при достаточно низких температурах, но также и принципиальную возможность образующихся мицеллярных фаз к экстракции широкого круга синтетических красителей.

В связи с этим для ряда полиоксиэтилированных нПАВ (табл. 10) были определены tпом 1%-ных водных растворов.

Как видно из полученных данных, температура помутнения нПАВ в большей степени зависит от длины оксиэтиленовой цепи (m) и в меньшей степени от длины гидрофобного радикала (n). Так, с увеличением числа оксиэтильных групп возрастает растворимость нПАВ и помутнение раствора наблюдается при более высокой температуре. Несмотря на то, что все вышеприведенные ПАВ образуют мицеллярные фазы, в аналитическом плане представляют интерес только препараты тех ПАВ, которые имеют наиболее низкие tпом (до 100°С).

–  –  –

Примечание: *- в присутствии 5% NaCl.

Для аналитической практики принципиальное значение имеют:

скорость формирования фазы и ее объем, оптическая прозрачность в УФ- и видимой областях спектра, вязкость, компактность. С практической точки зрения, наиболее удобным для целей экстракции, является фазовое расслоение растворов оксиэтилированных алкилфенолов с длиной углеводородной цепи (С

- 8-10) и числом оксиэтильных звеньев не выше 12, которые образуют мицеллярную фазу, компактно локализующуюся в нижней части раствора при температуре не выше 90°С.

В связи с наибольшей доступностью и экономической целесообразностью для дальнейших исследований был выбран препарат ОПпромышленный аналог Тритона Х-100), производимый согласно ГОСТ 8433-81, который представляет собой продукт обработки смеси моно- и диалкилфенолов оксидом этилена и не является индивидуальным химическим соединением. Его следует рассматривать как смесь полимергомологов, с различной длиной алкильных и оксиэтиленовых цепей.

–  –  –

Препарат использовали для модельных систем с фазовым разделением:

(ОП—10) – вода и (ОП-10) – вода – электролиты.

Проведенные нами исследования показали, что мицеллярные фазы выше приведенных ПАВ (табл. 10) являются достаточно универсальными экстрагентами и способны в разной степени экстрагировать СК, включая и такие гидрофильные красители, как, например, азорубин и бромфеноловый синий (БФС) (табл. 11).

–  –  –



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
 
Похожие работы:

«ОХЛОПКОВ АЛЕКСЕЙ СЕРГЕЕВИЧ СВОЙСТВА ТОВАРНОЙ СЫРОЙ НЕФТИ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ИДЕНТИФИЦИРОВАТЬ ИСТОЧНИК НЕФТЯНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРИРОДНОЙ СРЕДЫ 03.02.08 Экология (химические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: Доктор химических наук, профессор ЗОРИН...»

«Патеюк Людмила Сергеевна МИНЕРАЛЬНЫЕ ЭЛЕМЕНТЫ РОГОВИЦЫ И НЕОРГАНИЧЕСКИЕ БИОХИМИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ СЛЕЗЫ ПРИ КЕРАТОКОНУСЕ 14.01.07 – глазные болезни Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель – академик РАН, доктор медицинских наук, профессор С.Э. Аветисов Москва – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Список сокращений ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. ОБЗОР...»

«УДК 911.3:332.1 (430) БАННИКОВ Алексей Юрьевич Кластеры как новая форма территориальной организации химической промышленности Германии Специальность: 25.00.24 – Экономическая, социальная, политическая и рекреационная география Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор географических наук, профессор А.П. Горкин Москва – 2015 СОДЕРЖАНИЕ...»

«Волкоморов Виктор Владимирович ИДЕНТИФИКАЦИЯ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ АДЕНОКАРЦИНОМЫ ЖЕЛУДКА РАЗЛИЧНЫХ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ТИПОВ 03.01.04 – биохимия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук...»

«БОБКОВА Софья Ниазовна ПРИМЕНЕНИЕ ОКСИЭТИЛАММОНИЙ МЕТИЛФЕНОКСИАЦЕТАТА (ТРЕКРЕЗАНА) ДЛЯ КОРРЕКЦИИ И КОНТРОЛЯ ТЕЧЕНИЯ ГИПЕРЛИПОПРОТЕИНЕМИЙ И ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА 14.03.06 фармакология, клиническая фармакология Диссертация на соискание...»

«Пашкевич Елена Борисовна ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ И БИОПРЕПАРАТОВ ПРИ ОПТИМИЗАЦИИ ПИТАНИЯ РОЗ В УСЛОВИЯХ ЗАЩИЩЕННОГО ГРУНТА Специальность 06.01.04 – агрохимия Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Надежда Владимировна Верховцева Москва – 2014 Содержание: Cтр. Введение.....»

«КЛИМЕНКО Вероника Викторовна МОЛЕКУЛЯРЫЕ МАРКЕРЫ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕДОПЕРАЦИОННОЙ ХИМИОТЕРАПИИ МЕСТНО-РАСПРОСТРАНЕННОГО РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 – онкология 03.01.04 биохимия Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: д.м.н. Семиглазова Т.Ю. д.м.н., проф. Имянитов Е.Н. Санкт-Петербург ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Молекулярные маркеры эффективности...»

«САПУРИНА Ирина Юрьевна НАНОСТРУКТУРИРОВАННЫЙ ПОЛИАНИЛИН И КОМПОЗИЦИОННЫЕ МАТЕРИАЛЫ НА ЕГО ОСНОВЕ Специальность 02.00.06 – высокомолекулярные соединения ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора химических наук Санкт-Петербург ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. Полианилин (ПАНИ)(Обзор литературы) 1.1. Историческая справка 1.2. Строение и общие характеристики...»

«                      ШИЛЯЕВА ЮЛИЯ ИГОРЕВНА ИССЛЕДОВАНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ ФАЗОВЫХ ПЕРЕХОДОВ I РОДА В НИТЕВИДНЫХ НАНОКРИСТАЛЛАХ (In, Sn, Zn) В ПОРАХ АНОДНОГО Al2O3 Специальность 02.00.04 – физическая химия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: доктор...»

«Восель Юлия Сергеевна ГЕОХИМИЯ УРАНА В СОВРЕМЕННЫХ КАРБОНАТНЫХ ОТЛОЖЕНИЯХ МАЛЫХ ОЗЕР (ФОРМЫ НАХОЖДЕНИЯ И ИЗОТОПНЫЕ ОТНОШЕНИЯ 234U/238U) 25.00.09 Геохимия, геохимические методы поисков полезных ископаемых Диссертация на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Научный руководитель доктор...»

«ТОРРЕС МИНЬО КАРЛОС ХАВЬЕР ОЦЕНКА СОРТОВ АМАРАНТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОХИМИЧЕСКИХ И МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕТОДОВ ДЛЯ СОЗДАНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ПРОДУКТОВ НА ОСНОВЕ ЛИСТОВОЙ БИОМАССЫ Специальности: 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений 06.01.09 овощеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научные руководители: доктор, б. наук, профессор М. С. Гинс; доцент, к. с-х. наук Е.В....»

«Гашаева Фатимат Абубовна СИНТЕЗ НОВЫХ ПОЛИГЕТЕРОАРИЛЕНОВ НА ОСНОВЕ ДИКЕТОКСИМА 4,4'-ДИАЦЕТИЛДИФЕНИЛОВОГО ЭФИРА Специальность 02.00.06 – высокомолекулярные соединения диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: заслуженный деятель науки КБР, доктор химических наук,...»

«МОКОЧУНИНА ТАТЬЯНА ВЛАДИМИРОВНА УПРОЧНЯЮЩЕЕ МОДИФИЦИРОВАНИЕ ПРОДУКТОВ НЕФТЕПЕРЕРАБОТКИ УГЛЕРОДНЫМИ НАНОЧАСТИЦАМИ 02.00.11 – коллоидная химия Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук Научный руководитель: доктор химических наук, профессор...»

«КИРЕЕВА ГАЛИНА СЕРГЕЕВНА ВНУТРИБРЮШИННОЕ ХИМИОПЕРФУЗИОННОЕ ЛЕЧЕНИЕ ДИССЕМИНИРОВАННОГО РАКА ЯИЧНИКА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Специальность: 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор медицинских наук В.Г. Беспалов Санкт-Петербург ОГЛАВЛЕНИЕ СПИСОК...»

«Хусаинов Азат Наилевич Физико-химические закономерности образования наночастиц серы, полученных методами измельчения и химического осаждения специальность 02.00.04 – физическая...»

«МАМОНОВА Дарья Владимировна СИНТЕЗ И ИССЛЕДОВАНИЕ СВОЙСТВ НАНОЧАСТИЦ СЛОЖНЫХ ОКСИДОВ НА ПРИМЕРЕ АЛЮМОИТТРИЕВОГО ГРАНАТА И ФЕРРИТА ВИСМУТА Специальность 02.00.21 – химия твердого тела Диссертация на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: д.х.н., профессор Смирнов В.М. Санкт-Петербург ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Литературный обзор 1.1. Особенности синтеза нанокристаллических дисперсных...»

«ИВАНОВ ДМИТРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ПЕРЕМЕШИВАЮЩЕГО ОБОРУДОВАНИЯ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ САНИТАРНОГИГИЕНИЧЕСКИХ ИЗДЕЛИЙ 05.21.03 – Технология и оборудование химической переработки биомассы дерева; химия древесины Диссертация на соискание учёной степени кандидата технических наук Научный руководитель д.т.н., проф....»

«ЧЕРНЫХ Дмитрий Владимирович ПРОСТРАНСТВЕННО-ВРЕМЕННАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ВНУТРИКОНТИНЕНТАЛЬНЫХ ГОРНЫХ ЛАНДШАФТОВ (НА ПРИМЕРЕ РУССКОГО АЛТАЯ) Специальность 25.00.23 – Физическая география и биогеография, география почв и геохимия ландшафтов Диссертация на соискание ученой степени доктора географических наук Научный консультант д.г.н., проф. В.И....»

«ГОЛОВАНОВ СЕРГЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ КОМПЛЕКСНАЯ КОРРЕКЦИЯ ЗДОРОВЬЯ МУЖЧИН В УСЛОВИЯХ АЭРОБНЫХ ФИЗИЧЕСКИХ НАГРУЗОК 13.00.04 – Теория и методика физического воспитания, спортивной тренировки, оздоровительной и адаптивной физической культуры...»

«ПОШИБАЕВА АЛЕКСАНДРА РОМАНОВНА БИОМАССА БАКТЕРИЙ КАК ИСТОЧНИК УГЛЕВОДОРОДОВ НЕФТИ Специальность 02.00.13 – «Нефтехимия» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата химических наук Научный руководитель: доктор геолого-минералогических наук,...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.