WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 |

«КАРДИОПРОТЕКТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ 4-МЕТИЛ-2,6-ДИИЗОБОРНИЛФЕНОЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ/РЕПЕРФУЗИИ МИОКАРДА ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ЩЕТИНИН ПЕТР ПАВЛОВИЧ

КАРДИОПРОТЕКТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ

4-МЕТИЛ-2,6-ДИИЗОБОРНИЛФЕНОЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ

ИШЕМИИ/РЕПЕРФУЗИИ МИОКАРДА

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ



диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск – 2014

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет»

Министерства здравоохранения Российской федерации и Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Плотникова Татьяна Макаровна

Научный консультант:

доктор медицинских наук Чернышева Галина Анатольевна

Официальные оппоненты:

Ласукова Татьяна Викторовна, доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Томский государственный педагогический университет», кафедра медико-биологических дисциплин, профессор Новожеева Татьяна Петровна, доктор биологических наук, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научно-исследовательский институт психического здоровья»

Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, лаборатория клинической психонейроиммунологии и нейробиологии, старший научный сотрудник

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Научноисследовательский институт кардиологии»

Защита состоится «___» _________ 2015 г. в _____ часов на заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научноисследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»

(634028, Томск, пр. Ленина, 3; адрес сайта: http://www.pharmso.ru)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»

Автореферат разослан «___» ____________2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Амосова Евдокия Наумовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Совершенствование эффективности фармакотерапии сердечно-сосудистых заболеваний, в том числе наиболее распространенных и опасных – ишемической болезни сердца (ИБС) и инфаркта миокарда, сегодня имеет особое значение для глобальной системы здравоохранения [Оганов Р.Г., Масленникова Г.Я., 2009; Бойцов С.А. и др., 2010]. Это обусловлено распространенностью данных патологий и высокой степенью инвалидизации и летальности больных ИБС и инфарктом миокарда. Так, в ряду всех известных случаев летальных исходов в мире, по последним данным, не менее 30% связывают с сердечнососудистыми заболеваниями, из них более половины приходится на долю ИБС [World Health Statistics, 2011; Go A.S. et al., 2013; Kolesnikova I.E. et al., 2013; Tsverava M.D., 2013]. В Российской Федерации отмечается один из наиболее высоких в Европе показателей распространенности ИБС. По официальным данным от этого заболевания страдает не менее 10 млн. человек, находящихся в трудоспособном возрасте [Бойцов С.А. и др., 2010; Крюков Н.Н. и др., 2010]. В связи с этим проблема фармакотерапии ИБС является одним из приоритетных направлений развития науки, технологий и техники в Российской Федерации.

Несмотря на заметный прогресс в лекарственной терапии ИБС, весьма актуальной остается проблема разработки новых лекарственных средств, способных эффективно защищать кардиомиоциты от ишемического повреждения, а также позитивно влиять на течение самого заболевания и улучшать качество жизни пациентов [Рылова Н.В., 2012;

Глезер М.Г. и др., 2013].

На сегодняшний день основой лечения ИБС являются классические антиангинальные средства – органические нитраты, блокаторы кальциевых каналов и адреноблокаторы, статины, действие которых, в основном, направлено на изменение условий гемодинамики [Бубнова М.Г. и др., 2010; Werdan K. et al., 2012; Глезер М.Г. и др., 2013].





Вместе с тем, за последние годы во всем мире проведено большое количество экспериментальных и клинических исследований, доказавших эффективность фармакологической защиты миокарда при синдроме ишемии-реперфузии с помощью средств, обладающих кардиопротективной активностью [Пархоменко А.Н., 2006; Jintao W., 2012; Житникова Л.М., 2012]. В этом русле находится концепция метаболического подхода к терапии ИБС, согласно которой внедрены и имеют доказанную клиническую эффективность ряд лекарственных средств, способных повышать устойчивость сердечной мышцы к недостаточному кровоснабжению. К ним относятся препараты с поливалентным действием – триметазидин, ранолазин, мельдоний, сукцинатобразующие средства – мексикор, натрия оксибутират, а также естественные компоненты дыхательной цепи – убихинон, цитохром С и искусственные редокссистемы – олифен [Пархоменко А.И. и др., 2002; Пархоменко А.Н., 2006].

Весьма перспективной группой для разработки новых лекарственных средств, обладающих кардиопротективной активностью, являются пространственно затрудненные фенолы на основе терпенофенолов. Синтез оригинальных соединений данной группы осуществлен в Институте химии Коми НЦ УрО РАН [Чукичева И.Ю., Кучин А.В., 2004; Чукичева И.Ю. и др., 2007; Буравлев Е.В. и др., 2008]. Соединения этого ряда обладают выраженной антиоксидантной и антигипоксической активностью [Жданкина А.А. и др., 2009; Жданкина А.А. и др., 2010; Плотников М.Б. и др., 2010].

Установлено наличие гемореологического, антиагрегантного и антитромбогенного эффектов у представителя терпенофенолов – 4-метил-2,6-диизоборнилфенола на моделях транзиторной ишемии головного мозга и дегенеративных изменений сетчатки глаза [Максимов И.Б., 2001; Жданкина А.А. и др., 2009; Плотников М.Б. и др., 2010].

Указанные эффекты являются основанием для исследования кардиопротективных свойств 4-метил-2,6-диизоборнилфенола с целью разработки нового лекарственного средства при острой ишемии/реперфузии миокарда.

Полного аналога лекарственного средства, разрабатываемого на основе 4-метилдиизоборнилфенола, в России и за рубежом нет. Ближайшим аналогом можно считать триметазидин, обладающий противоишемической и цитопротекторной активностью, но в спектре действия препарата отсутствуют эндотелийпротективный и гемореологический эффекты. Это явилось основанием для разработки лекарственного средства на основе 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, обладающего новым механизмом кардиопротективного действия при острой ишемии/реперфузии миокарда.

Степень разработанности. Среди препаратов, обладающих кардиопротективной активностью, лидирующие позиции занимают лекарственные средства, повышающие устойчивость миокарда к гипоксии посредством влияния на процессы метаболизма в сердце – триметазидин, ранолазин, мельдоний и другие. Вместе с тем, доказана важная роль нарушений функции эндотелия и реологических свойств крови при ишемии миокарда. Однако лекарственные средства, оказывающие целенаправленное действие на данные звенья патогенеза ишемии/реперфузии миокарда, отсутствуют.

Цель исследования. Изучить механизмы кардиопротективного действия 4-метилдиизоборнилфенола в условиях модели острой ишемии/реперфузии миокарда.

Задачи исследования.

Изучить влияние 4-метил-2,6-диизоборнилфенола на процессы перекисного 1.

окисления липидов в ткани миокарда при экспериментальной ишемии/реперфузии сердца.

Оценить действие 4-метил-2,6-диизоборнилфенола на реологические свойства 2.

крови и агрегацию тромбоцитов у крыс в условиях острой ишемии/реперфузии миокарда.

Изучить влияние на эндотелиальную 3. 4-метил-2,6-диизоборнилфенола дисфункцию при острой ишемии/реперфузии миокарда у крыс.

Исследовать антиаритмические эффекты 4-метил-2,6-диизоборнилфенола и его 4.

влияние на выживаемость крыс при острой 10-и минутной ишемии с последующей реперфузией миокарда.

Оценить действие 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в сравнении с эффектами 5.

мексидола на величину зоны инфаркта и зоны риска миокарда, а также выживаемость крыс после 45-и минутной экспериментальной ишемии сердца.

Изучить влияние 4-метил-2,6-диизоборнилфенола на сократительную функцию 6.

миокарда у крыс в условиях сердечной недостаточности, сформировавшейся в отдаленный период после острой ишемии/реперфузии.

Научная новизна. Получены новые данные о механизмах кардиопротективного действия 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в условиях острой ишемии/реперфузии миокарда. Впервые установлена способность 4-метил-2,6-диизоборнилфенола устранять синдром повышенной вязкости крови, уменьшать агрегацию тромбоцитов и эндотелиальную дисфункцию при модели острой ишемии/реперфузии миокарда.

Новыми являются данные о наличии антиаритмической активности у 4-метил-2,6диизоборнилфенола и его способности уменьшать зону инфаркта миокарда при ишемии/реперфузии сердца.

Впервые выявлена способность 4-метил-2,6-диизоборнилфенола предупреждать нарушение сократительной функции левого желудочка в отдаленный период после ишемии/реперфузии миокарда.

Теоретическая и практическая значимость. Получены новые данные фундаментального характера о механизмах кардиопротективного действия пространственно затрудненных терпенофенолов при экспериментальной ишемии/реперфузии миокарда, которые объективно доказывают целесообразность дальнейшего проведения клинических исследований 4-метил-2,6-диизоборнилфенола у больных с нарушениями коронарного кровотока.

Получены приоритетные данные о том, что 4-метил-2,6-диизоборнилфенол при лечебно-профилактическом введении снижает смертность животных в постреперфузионный период и уменьшает размеры зоны инфаркта как относительно общей площади миокарда, так и относительно зоны гипоперфузии (Патент РФ № 2499593 от 27.11.2013 г.).

Проведенные исследования были поддержаны грантом Федеральной целевой программы «Развитие фармацевтической и медицинской промышленности Российской Федерации на период до 2020 года и дальнейшую перспективу» в рамках государственного контракта и по теме «Доклинические исследования лекарственного средства на основе 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, обладающего эндотелийпротекторным и противоишемическим действием». Материалы по результатам проведенных исследований вошли в отчеты о доклинических исследованиях 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в качестве кардиопротектора при ишемии/реперфузии миокарда.

Методология и методы исследования. В соответствии с поставленными задачами были выбраны современные высокоинформативные методы, имеющиеся в лаборатории фармакологии кровообращения ФГБНУ «НИИ фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга». Объектом исследования послужили аутбредные крысы-самцы сток Вистар. Для исследования различных видов активности 4-метил-2,6-диизоборнилфенола воспроизводили модель ишемии/реперфузии миокарда в двух различных модификациях, различающихся временем воссоздаваемой ишемии (10 и 45 мин) с последующей рециркуляцией миокарда.

Основные методы исследования: электрофизиологические (производили анализ сердечного ритма и сократительной активности левого желудочка), гемореологические (определяли вязкость цельной крови и плазмы, содержание фибриногена в плазме, спонтанную агрегацию эритроцитов и их деформируемость, гематокрита, рассчитывали коэффициент доступности кислорода), гистологические (определяли размеры зоны резко сниженной дегидрогеназной активности (зоны инфаркта) и зоны гипоперфузии миокарда (зоны риска) при окраске тканей patent blue violet и нитросиним тетразолием с помощью программных методов исследования поперечных срезов сердца), биохимические (определяли продукты перекисного окисления липидов (ПОЛ) в левом желудочке сердца (диеновые и триеновые конъюгаты, основания Шиффа), содержание

–токоферола в тканях сердца, рассчитывали индекс окисленности липидов), гемостазиологические (исследовали АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов, антиагрегантную активность эндотелия сосудов, рассчитывали коэффициент эндотелиальной дисфункции).

Положения, выносимые на защиту.

обладает антиоксидантным, 1. 4-Метил-2,6-диизоборнилфенол эндотелийпротективным, антиагрегантным эффектами, а также способностью уменьшать повышенную вязкость крови при экспериментальной ишемии/реперфузии миокарда.

4-Метил-2,6-диизоборнилфенол оказывает кардиопротективное действие, 2.

проявляющееся способностью препарата снижать число и характер аритмий в реперфузионном периоде, уменьшать размеры зоны инфаркта миокарда и увеличивать выживаемость животных после острой ишемии/реперфузии сердца.

В условиях сердечной недостаточности, сформировавшейся в отдаленный период 3.

после острой ишемии/реперфузии миокарда, 4-метил-2,6-диизоборнилфенол предупреждает нарушение сократительной функции левого желудочка у крыс.

Степень достоверности и апробация результатов. Высокая степень достоверности результатов, полученных в ходе исследования, обусловливается достаточным для решения поставленных задач объемом экспериментального материала и использованием современных методов и методологических подходов, а также высокой точностью статистической обработки полученных результатов. Были применены современные программно-аппаратные комплексы и программное обеспечение. Анализ литературы позволил интерпретировать и подтвердить результаты, полученные в ходе исследования.

Основные положения диссертационной работы представлены на научной конференции молодых ученых и аспирантов, посвященной 120-летию кафедры фармакологии и 90-летию со дня рождения профессора А.С. Саратикова (Томск, 2011);

конференции молодых ученых «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии» (Томск, 2012); IV съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань, 2012); Международной междисциплинарной научной конференции «Биологически активные вещества и материалы:

фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения» (Новый Свет, 2013);

первой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Проблемы разработки новых лекарственных средств» (Москва, 2013); шестой Всероссийской конференции с международным участием «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Москва, 2013).

Опубликованные работы. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 3 – в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ и входящих в российские и зарубежные реферативные базы данных РИНЦ и Scopus, получен 1 патент РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста и структурно состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы. Библиографический указатель включает 217 источников, из них 135 отечественных и 82 зарубежных. Иллюстративный материал представлен 5 рисунками и 15 таблицами.

Личное участие автора в получении результатов, изложенных в диссертации.

Соискатель принимал непосредственное участие в планировании и разработке дизайна исследования, а также постановке его цели и задач. Диссертантом лично проведен библиографический и патентный поиск, проанализированы данные отобранной литературы. Автором получены, проанализированы и интерпретированы основные результаты исследования, выполнена их статистическая обработка. Самостоятельно подготовлены к публикации статьи по теме диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В первой главе проведен анализ отечественной и зарубежной научной литературы по теме исследования.

В первом пункте главы приведены сведения о причинах возникновения и развития ишемической болезни сердца, современных лекарственных средствах, применяемых для ее профилактики и лечения, современном состоянии и перспективах развития кардиопротекции, как важного подхода в комплексной терапии ишемических повреждений миокарда. Далее, с привлечением большого количества литературных источников, представлены данные о пространственно затрудненных фенолах, как новом высокоперспективном классе химических соединений, являющихся сильными антиоксидантами, обладающими широким спектром биологической активности, что в сочетании с их низкой токсичностью обусловливает перспективность разработки на их основе новых отечественных лекарственных средств, в частности, обладающих кардиопротективной активностью.

Вторая глава диссертации посвящена описанию материала и методов исследования. Экспериментальные исследования были проведены на 238 аутбредных крысах-самцах сток Вистар массой 230-300 г. Животные были получены из вивария отдела экспериментальных биологических моделей ФГБНУ «НИИ фармакологии и регенеративной медицины им. Е.Д. Гольдберга» (г. Томск). Крысы находились на стандартном рационе со свободным доступом к пище и воде. Животные из контрольных и опытных групп находились в аналогичных условиях и имели одинаковую исходную среднюю массу, которая контролировалась ежедневным взвешиванием для коррекции дозы вводимого исследуемого соединения. Условия содержания и проводимые манипуляции на крысах соответствовали всем стандартам и правилам Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и научных целей (1986), принципов надлежащей лабораторной практики (ГОСТ Р 53434ГОСТ 53434 (2010), ГОСТ Р ИСО 10993-2 (2009). Дизайн исследования, проводимого в рамках диссертационной работы, одобрен этическим комитетом ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ.

В экспериментах использовали субстанцию 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (диборнол®), изготовленную в соответствии с опытно-промышленным регламентом на опытном производстве ФГБУН «Институт химии Коми» научного центра Уральского отделения РАН (г. Сыктывкар).

Были использованы 2 режима введения препарата:

профилактический (100 мг/кг за 1 сут. и за 10 мин. до воспроизведения модели) и лечебно-профилактический (100 мг/кг в течение трех дней и за 15 мин до воспроизведения модели и далее в течение 5 дней после оперативного вмешательства).

В качестве референтного препарата использовали мексидол (ООО «НПК «Фармасофт», Россия) – таблетки, покрытые кишечнорастворимой оболочкой, содержащие 0,125 г этилметилгидроксипиридина сукцината. Таблетки растирали в ступке до порошкообразного состояния, предварительно освобождая от пленочного покрытия, и суспендировали в 1% крахмальной слизи.

Для наркотизации животных применяли тиопентал натрия (ОАО «Синтез», Россия), эфир для наркоза (ООО «Кузбассоргхим», Россия). Кроме того, в работе использовался альбумин (ГУЗ «Свердловская областная станция переливания крови», Россия), ацетилхолина гидрохлорид («Acros Organics», USA), натрия нитропуссид (ООО «АО Реахим», Россия).

Для воспроизведения модели ишемии/реперфузии миокарда крыс наркотизировали тиопенталом натрия (60 мг/кг, внутрибрюшинно), интубировали стальным зондом-воздуховодом и подключали к аппарату искусственной вентиляции легких Rodent Ventilator 7025 (Италия). После торакотомии в 4-м межреберье, проводили перикардотомию и окклюзию левой коронарной артерии на уровне нижнего края auricula sinistra без нарушения топографии сердца в грудной клетке по методу А.Х.

Когана [Коган А.Х., 1979]. Для верификации окклюзии коронарной артерии проводили мониторирование электрокардиограммы (ЭКГ) во II стандартном отведении, используя компьютерный электрокардиограф Поли–Спектр-8/Л. О качестве воспроизведения модели судили по появлению на ЭКГ изменений комплекса QRS: уменьшение амплитуды зубца R, элевация зубца T, а также визуально по побледнению левого желудочка.

Загрузка...

В опытах по изучению противоаритмической активности 4-метил-2,6диизоборнилфенола крысы получали 100 мг/кг препарата в 2%-й крахмальной слизи за 1 сут. и за 10 мин. до оперативного вмешательства (профилактическая схема введения препарата). Длительность окклюзии левой коронарной артерии составляла 10 мин., после чего лигатуру отпускали и проводили реперфузию (10 мин.). Животные из контрольной группы получали эквиобъемное количество 2%-й крахмальной слизи.

Выжившие после ишемии/реперфузии миокарда крысы выводились из эксперимента передозировкой эфира для наркоза.

Эксперименты по изучению антиоксидантной, гемореологической, антиагрегантной видов активности, а также определение влияния препарата на величину зоны инфаркта и зоны риска миокарда, оценку действия на антиагрегантную активность сосудистой стенки и вазодилятаторную функцию эндотелия, на сократительную функцию сердца и артериальное давление проводились в условиях модели ишемии/реперфузии, выполненной по аналогичной методике. Однако длительность окклюзии левой коронарной артерии составляла 45 мин. с последующей рециркуляцией, после чего рана послойно ушивалась и обрабатывалась антисептическим средством.

В указанных сериях опытов животные получали 4-метил-2,6-диизоборнилфенол в течение трех дней и за 15 мин. до операции и далее в течение 5 дней после нее (лечебнопрофилактическая схема введения препарата), после чего осуществлялась оценка вышеперечисленных показателей. Животные, у которых проводили аналогичное оперативное вмешательство без наложения лигатур на левую коронарную артерию, составили группу ложнооперированных. Ложнооперированные животные и крысы из контрольной группы получали эквиобъемное количество 2%-й крахмальной слизи по аналогичной схеме. Во всех группах препарат и крахмальную слизь вводили 1 раз в сутки.

Для изучения гемореологических показателей и агрегации тромбоцитов забор проб цельной крови проводили из общей сонной артерии у наркотизированных крыс спустя 5 суток после создания модели острой ишемии миокарда с реперфузией. Для этого у животных под эфирным наркозом выделяли общую сонную артерию, сосуд перевязывали и проксимально вводили тефлоновый катетер. Кровь стабилизировали 3,8% раствором натрия цитрата в соотношении 9:1.

Эксперименты по изучению влияния 4-метил-2,6-диизоборнилфенола на сократительную функцию сердца и артериальное давление были выполнены через месяц после воспроизведения инфаркта миокарда. В условиях сформировавшейся сердечной недостаточности крыс наркотизировали тиопенталом натрия (60 мг/кг, внутрибрюшинно), отпрепаровывали правую общую сонную артерию и через надрез в сосуде в полость левого желудочка вводили микродатчик (TSD104A для аппаратнопрограммного комплекса Biopac MP150, США). Осуществляли регистрацию исследуемых параметров сократительной активности левого желудочка, а также систолического и диастолического давления.

Антиаритмическую активность 4-метил-2,6-диизоборнилфенола оценивали электрокардиографически во II стандартном отведении непрерывно с помощью компьютерного электрокардиографа Поли–Спектр-8/Л [Мурашко В.В., Струтынский В.В., 2011].

Вязкость цельной крови определяли на ротационном вискозиметре АКР-2 в диапазоне скоростей сдвига от 3 до 300 с-1, вязкость плазмы – при скорости сдвига 300 сПлотников М.Б. и др., 2011]. Концентрацию фибриногена в плазме оценивали при 1 помощи метода тромбообразования Клаусса на коагулометре КG-4 [Плотников М.Б. и др., 2010].

Гематокрит определяли с помощью капиллярной центрифуги МГЦ-8 и выражали в % [Баркаган, З.С., Момот А.П., 2001].

Агрегацию эритроцитов исследовали с помощью метода силлектометрии [Плотников М.Б. и др., 1995]. Критерием агрегационной активности эритроцитов служил полупериод агрегации Т1/2 – время, за которое величина фотометрического сигнала снижается в два раза [Богоявленский В.Ф., 1981].

Деформируемость эритроцитов оценивали методом эктацитометрии [Габриэлян Э.С., Акопов С.Э., 1985].

Индекс деформируемости эритроцитов (ИДЭ), рассчитывали по методу Bessis M.

[Bessis, M. et al., 1980].

Доступность кислорода для тканей рассчитывали как отношение гематокрита к вязкости крови на высоких скоростях сдвига (50–300 с-1) [Stoltz J.F. et al., 1991].

Определение размеров зоны гипоперфузии и резко сниженной дегидрогеназной активности миокарда проводили при помощи методов гистохимии [Пирс Э., 1956] с расчетом площади зон в Adobe Photoshop CS6.

Содержание диеновых и триеновых конъюгатов определяли спектрофотометрически по характерным для сопряжённых двойных связей пикам поглощения при 232 нм и 270–280 нм соответственно [Plazor, Z., Kussela L., 1968].

Основания Шиффа определяли по методу A. Tappel [Tappel, A.L., 1978].

Индекс окисленности липидов оценивали по соотношению показателей оптической плотности диеновых конъюгатов и неокисленных липидов [Биленко М.В., 1989].

Агрегацию тромбоцитов определяли нефелометрическим методом по Born [Born G.V.R., 1962] в стандартизированной по числу тромбоцитов плазме.

Антиагрегантную активность сосудистой стенки оценивали по степени угнетения АДФ-индуцированной (в конечной концентрации 4·10-5 М) агрегации тромбоцитов при их инкубации с сегментами сосудов брюшной аорты [Балуда, В. П., 1987].

Степень эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных оценивали по расчетному коэффициенту эндотелиальной дисфункции (КЭД), представляющему собой отношение площади над кривой восстановления артериального давления в ответ на введение натрия нитропруссида к площади над кривой восстановления артериального давления в ответ на введение ацетилхолина [Laursen J.B. et al., 1997; Покровский М.В. и др., 2006].

Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета статистических программ «Statistica 9.0» для Windows. В таблицах результаты представлены как средние значения показателей (М) ± стандартные отклонения среднего значения (m). Нормальность распределения оценивали с помощью показателей асимметрии и эксцесса; достоверность различий (р0,05) между сериями определяли с помощью t-критерия Стьюдента, теста Манна-Уитни и 2-критерия.

Третья глава посвящена описанию результатов исследования механизмов кардиопротективной активности 4-метил-2,6-диизоборнилфенола при острой ишемии/реперфузии миокарда. Полученные результаты представлены в виде таблиц и рисунков.

Четвертая глава диссертационной работы посвящена обсуждению полученных результатов исследования с привлечением данных литературы.

Изучение механизмов кардиопротективной активности 4-метил-2,6-диизобрнилфенола в условиях модели ишемии/реперфузии миокарда На первом этапе исследований изучалась антиоксидантная активность 4-метилдиизоборнилфенола при модели ишемии/реперфузии миокарда. Использованная нами модель острой ишемии миокарда с реперфузией характеризуется сохранением в сердце во время ишемии редуцированного кровообращения и, следовательно, притока субстратов и кислорода, что способствует активации процессов ПОЛ [Turer A.T., Hill J.A., 2010]. Особенностью этой модели является также усиление процессов ПОЛ в миокарде вследствие выброса катехоламинов и в результате реоксигенации сердца после восстановления кровотока [Rupp H. et al., 1994; Spear J. F. et al., 2007; Martindale J.J., Metzger J.M., 2014].

На 5-е сутки после ишемии и реперфузии в тканях левого желудочка крыс контрольной группы наблюдалась активация процессов ПОЛ. Содержание диеновых и триеновых конъюгатов возрастало на 69% и 72% соответственно, содержание вторичных продуктов ПОЛ (основания Шиффа) – в 5,4 раза по сравнению с показателями ложнооперированных животных. Индекс окисленности липидов у контрольных животных достоверно увеличивался в 2,4 раза по сравнению со значениями в группе ложнооперированных крыс. К 5-м суткам после создания модели ишемии/реперфузии миокарда у крыс контрольной группы отмечено снижение содержания в тканях миокарда

-токоферола на 59% по сравнению с показателем ложнооперированных животных (Таблица 1). Полученные данные о повышении содержания диеновых и триеновых конъюгатов в тканях миокарда после ишемии/реперфузии миокарда согласуются с результатами клинических исследований, в которых также отмечена активация процессов свободнорадикального окисления у больных с ИБС [Капустник В.А., 2014;

Ройтман Е.В. и др., 2000].

Лечебно-профилактическое введение 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в течение 3-х суток до создания модели ишемии/реперфузии миокарда и 5-и суток после оперативного вмешательства ограничивало интенсивность процессов ПОЛ: уровень диеновых и триеновых конъюгатов был достоверно ниже в сравнении с контролем на 30% и 26% соответственно. 4-метил-2,6-диизоборнилфенол ограничивал накопление и вторичных продуктов ПОЛ – содержание оснований Шиффа снижалось в 5 раз по сравнению с контролем. Индекс окисленности липидов в группе крыс, получавших 4метил-2,6-диизоборнилфенол, относительно значений контрольных животных снижался в 2 раза (Таблица 1). Особенности строения пространственно затрудненных фенолов (ПЗФ), к которым относится 4-метил-2,6-диизоборнилфенол, обусловливает их способность легко взаимодействовать с различными свободными радикалами, нейтрализуя их с образованием малореакционноспособных фенокси-радикалов [Перевозкина М.Г. и др., 2005; Буравлев Е.В. и др., 2008]. Полученные результаты согласуются с имеющимися сведениями о наличии у 4-метил-2,6-диизоборнилфенола антиоксидантной активности, приводящей к снижению накопления ПОЛ в тканях головного мозга при модели неполной церебральной ишемии [Иванов И.С., Смольякова В.И., 2008; Плотников М.Б. и др., 2010].

Кроме того, в проведенных нами исследованиях к 5-м суткам после создания модели ишемии/реперфузии миокарда у крыс опытной группы содержание – токоферола – эндогенного природного антиоксиданта, оставалось на 29% ниже значений ложнооперированных животных, однако по сравнению с величиной этого показателя у крыс контрольной группы – возрастал в 1,7 раза (Таблица 1). Механизм синергизма токоферола и 4-метил-2,6-диизоборнилфенол хорошо известен и заключается в способности пространственно затрудненных фенолов вступать в реакции с токофероксильными радикалами, которые образуются при окислении -токоферола.

Таким образом, под действием пространственно затрудненных фенолов происходит регенерация активной формы -токоферола, который вновь приобретает способность обрывать цепи свободнорадикального окисления [Перевозкина М.Г. и др., 2006].

–  –  –

Следовательно, антиоксидантная активность 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в условиях ишемии/реперфузии миокарда реализуется как за счет прямого антирадикального действия препарата, так и за счет его способности вступать в синергетические взаимодействия с эндогенной антиоксидантной системой организма.

На сегодняшний день существует достаточно большой массив клинических данных, показывающий, что нарушения реологических свойств крови представляют собой один из важных элементов в каскаде нарушений, происходящих при различных сердечно-сосудистых заболеваниях [Танашян М.М. и др., 2001; Сидельникова Н.С. и др., 2014]. Локальная активация свободнорадикального окисления в зоне ишемии и накопление продуктов деградации свободных радикалов стимулируют повышение свертываемости крови, увеличивают ее вязкость, усиливают агрегацию и адгезию форменных элементов крови [Dianat M. et al., 2014]. При терапии ряда кардиологических заболеваний, в том числе и при остром коронарном синдроме, в составе комплексной терапии показано назначение препаратов, приводящих к снижению вязкости крови [Аникеева Т.В., 2010]. Для оценки гемореологической активности 4-метил-2,6диизоборнилфенола при модели ишемии/реперфузии миокарда было выполнено комплексное исследование влияния препарата на развитие синдрома повышенной вязкости крови (СПВК) в этих условиях.

На 5-е сутки после моделирования ишемии/реперфузии миокарда у животных контрольной группы отмечалось повышение вязкости крови во всем диапазоне скоростей сдвига по отношению к показателям группы ложнооперированных животных (Рисунок 1А). Очевидно, что в возрастание вязкости крови вносит свой вклад увеличение в 1,2 раза вязкости плазмы, что в свою очередь может быть обусловлено увеличением содержания фибриногена в плазме почти в 2 раза (Таблица 2).

Кроме сдвигов макрореологических параметров, ухудшение вязкостных свойств крови при модели ишемии/реперфузии миокарда у крыс обусловлено и изменениями микрореологических параметров. Так, наиболее выраженное повышение вязкости крови (на 23–36%) наблюдались в области низких скоростей сдвига (Рисунок 1А), что может свидетельствовать о нарушении агрегационной активности эритроцитов [Chien S. et al., 1967]. Это подтверждается данными прямого измерения значений этого показателя.

Отмечено увеличение агрегации эритроцитов, которое выразилось в сокращении полупериода агрегации на 1/3 по сравнению с показателем ложнооперированных животных (Таблица 2). Повышение агрегации в условиях модели ишемии/реперфузии могло произойти по причине морфологических изменений эритроцитов, которые в свою очередь могут быть обусловлены активацией процессов ПОЛ, способных вызвать повреждение клеточных мембран [Baskurt O.K. et al., 1998]. Кроме того, повышение спонтанной агрегации эритроцитов в этих условиях может быть связано с повышением содержания фибриногена в плазме крови крыс, вызванным ишемией/реперфузией миокарда (Таблица 2).

Рисунок 1 – Влияние 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг внутрижелудочно) при лечебно-профилактическом введении на вязкость крови (А) и доступность кислорода для тканей (Б) у крыс после ишемии/реперфузии миокарда. По оси абсцисс скорости сдвига, с-1; по оси ординат слева – вязкость крови, мПа·с; по оси ординат справа – доступность кислорода для тканей, усл. ед.

Примечание: ЛО – ложнооперированные животные; * – р0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; + – р0,05 по сравнению со значениями у крыс контрольной группы.

–  –  –

Окислительное повреждение клеточных мембран приводит не только к усилению спонтанной агрегации эритроцитов, но также и к снижению их деформируемости. ИДЭ в группе контрольных животных во всем исследуемом диапазоне скоростей сдвига был достоверно ниже значений показателей в группе ложнооперированных животных (Таблица 2). Ухудшение деформируемости эритроцитов и повышение их способности к спонтанной агрегации негативно сказывается на вязкостных свойствах крови и основной функции эритроцитов – кислородтранспортной [Stoltz J.F. et al., 1991]. Показатель доступности кислорода для тканей в диапазоне высоких скоростей сдвига у крыс с моделью ишемии/реперфузии миокарда в эксперименте был значительно снижен по сравнению со значением у ложнооперированных животных (Рисунок 1Б).

Следовательно, при ишемии/реперфузии миокарда, в условиях активации процессов ПОЛ, наблюдались патологические изменения всех звеньев, определяющих реологию крови. Совокупность всех наблюдаемых изменений свидетельствует о формировании синдрома повышенной вязкости крови (СПВК) у крыс с ишемией/реперфузией миокарда. Полученные в эксперименте данные согласуются с имеющимися в литературе сведениями о том, что патологические процессы в сердечнососудистой системе, связанные с формированием оксидативного стресса, влекут за собой тяжелые гемореологические расстройства, значительно отягощающие протекание основной патологии за счет еще большего увеличения гипоксии органов и тканей, и нуждаются в соответствующей коррекции [Голиков А. П. и др. 2003; Hierso R. et al., 2014].

В литературе имеются сведения о влиянии ПЗФ на нарушение реологических свойств крови, вызванных моделированной неполной транзиторной ишемией головного мозга у крыс. В условиях этой модели показано, что применение 4-метил-2,6диизоборнилфенола снижает содержание фибриногена в плазме крови и ее вязкость, улучшает деформируемость эритроцитов и снижет их агрегацию, приводя к ограничению развития СПВК [Плотников М.Б. и др., 2010].

Лечебно-профилактическое введение 4-метил-2,6-диизоборнилфенола при ишемии/реперфузии миокарда приводило к улучшению вязкостных свойств крови как за счет влияния на клеточные (деформируемость и агрегация эритроцитов), так и плазменные (вязкость плазмы) факторы. Так, показатель вязкости крови у крыс опытной группы во всем исследованном диапазоне скоростей сдвига не отличался от значений группы ложнооперированных животных и был достоверно на 9–25% ниже значений в контроле (Рисунок 1А). У крыс опытной группы снижалась также и вязкость плазмы до величины, близкой к показателю у ложнооперированных животных, что было на 10% ниже значения у крыс контрольной группы. Нормализация показателя вязкости плазмы крови в группе с курсовым лечебно-профилактическим введением 4-метил-2,6диизоборнилфенола, вероятно, может быть обусловлена снижением содержания в ней фибриногена (Таблица 2). Подобный эффект 4-метил-2,6-диизоборнилфенола был продемонстрирован исследователями ранее при модели неполной ишемии головного мозга [Плотников М.Б. и др., 2010].

Под влиянием 4-метил-2,6-диизоборнилфенола происходило также отчетливое улучшение показателей микрореологии, о чем свидетельствовало не только снижение агрегационной активности эритроцитов, но и улучшение их деформируемости.

Полупериод агрегации эритроцитов возрастал на 30%, а ИДЭ у животных данной группы увеличивался на 15–60% по сравнению с показателями в контрольной группе (Таблица 2). Нормализация вязкоэластических свойств эритроцитов при применении 4-метил-2,6диизоборнилфенола, очевидно, приводила к нормализации параметров вязкости крови на высоких скоростях сдвига, так как именно в этом диапазоне скоростей сдвига вязкость крови преимущественно зависит от способности мембраны эритроцитов к упругой деформации [Левтов В.А. и др., 1982].

Лечебно-профилактическое введение 4-метил-2,6-диизоборнилфенола крысам, перенесшим ишемию миокарда с реперфузией, улучшало показатель кислородтранспортной функции эритроцитов: коэффициент доступности кислорода для тканей возрастал на 9–18% по сравнению со значением в контроле (Рисунок 1Б).

Следовательно, лечебно-профилактическое введение 4-метил-2,6диизоборнилфенола в условиях модели ишемии/реперфузии миокарда уменьшает повышенную вязкость крови в широком диапазоне скоростей сдвига за счет ограничения агрегационной активности эритроцитов, улучшения их деформируемости и снижения вязкости плазмы. Введение крысам 4-метил-2,6-диизоборнилфенола способствует повышению доступности кислорода для тканей в условиях постишемических изменений реологических свойств крови.

В литературе имеются сведения о том, что существует определенная взаимосвязь между возникновением ишемии/реперфузии миокарда и развитием гиперагрегации тромбоцитов [Tang X. et al., 2013]. Гиперагрегация тромбоцитов – один из важных механизмов развития сосудистого тромбоза, что может значительно усугубить течение сердечно-сосудистой патологии и даже привести к внезапной смерти при окклюзии магистральных сосудов [Ермакова О.В. и др., 2010]. В свою очередь, механизм повышения агрегации тромбоцитов исследователями напрямую связывается с формированием при ишемии/реперфузии окислительного стресса [Бышевский А.Ш. и др., 2005]. Следовательно, антиагрегантная терапия является одним из важных направлений комплексной терапии острых ишемических и реперфузионных процессов в сердечно-сосудистой системе [Лазарева Е.Н. и др., 2013].

Наличие антиагрегантной активности у 4-метил-2,6-диизоборнилфенола при ишемии/реперфузии миокарда прогнозировалось в связи с имеющимися литературными сведениями о его доказанной способности снижать АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов в условиях модели неполной ишемии головного мозга у крыс [Плотников М.Б. и др., 2010].

В проведенных нами исследованиях показано, что при воспроизведении модели острой ишемии/реперфузии миокарда у крыс контрольной группы происходило повышение АДФ-индуцированной обратимой агрегации тромбоцитов до 33%, что на 74% превышало показатель у ложнооперированных животных (Таблица 3). Одной из причин этого эффекта может быть повышение вязкости крови и нарушение деформационных свойств эритроцитов при ишемии/реперфузии миокарда, что может существенно повысить агрегационную активность тромбоцитов [Bhavsar J., Rosenson R.S., 2010].

–  –  –

Амплитуда АДФ-индуцированной обратимой агрегации тромбоцитов в плазме крови крыс с острой ишемией и реперфузией миокарда, получавших 4-метил-2,6диизоборнилфенол, была достоверно ниже, чем показатель у животных контрольной группы, но не достигал значений амплитуды агрегации у ложнооперированных животных (Таблица 3). Следовательно, 4-метил-2,6-диизоборнилфенол при лечебнопрофилактической схеме введения достоверно уменьшал гиперагрегацию тромбоцитов, вызванную ишемией/реперфузией миокарда.

Гемореологическая активность 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, выявленная нами в этих условиях может вносить свой вклад в антиагрегантный эффект препарата, способствовать улучшению перфузии миокарда. Снижение показателя вязкости крови, уменьшение агрегационной способности тромбоцитов при курсовом лечебнопрофилактическом введении 4-метил-2,6-диизоборнилфенола способно привести к уменьшению явлений реологической окклюзии, которая сопровождает ишемическое повреждение миокарда, и улучшить коллатеральный кровоток в сердце. В свою очередь, коллатеральный кровоток, наряду с венозной ретроперфузией, остаются единственно возможными факторами компенсаторного ответа на редуцированный сердечный кровоток в зоне ишемии, вызванной окклюзией левой коронарной артерии [Lekven I., Anderssen K., 1980; Harold D., Sanford P., 1982]. Все это может способствовать улучшению микроциркуляции, ослаблению гипоксии ткани миокарда и, как следствие, уменьшению электрической нестабильности и гетерогенности миокарда как при профилактическом, так и при лечебном применении 4-метил-2,6-диизоборнилфенола.

В соответствии с современными представлениями, в патогенезе невосстановления кровотока после реперфузии миокарда (no-reflow) помимо реологической окклюзии существенное значение имеет и нарушение функции эндотелия [Vrints C.J., 2009;

Коноплева Л.Ф., 2011]. В результате развивающейся дисфункции эндотелия происходит нарушение важнейших ее физиологических функций – баланса вазоконстрикции и вазодилятации, потенцирования и ингибирования факторов фибринолиза и агрегации тромбоцитов, а также выработки про- и противовоспалительных факторов [Коноплева Л.Ф., 2011]. При этом нарушаются эндотелийзависимое расширение сосудов, противовоспалительные и антикоагулянтные свойства сосудистого эндотелия [Тюренков И.Н., Воронков А.В., 2013; Madigan M., 2013].

Одним из механизмов формирования эндотелиальной дисфункции при ишемии/реперфузии может быть активация липидной пероксидации в тканях с выбросом активных пероксирадикалов в системный кровоток [Vrints C.J., 2009]. Исходя из этого, эффективными эндотелийпротекторами могут быть вещества, обладающие, по крайней мере, двумя видами активности: способностью стимулировать NO-синтазу и/или снижать инактивацию NO активными формами кислорода, а также защищать клетки эндотелия от ПОЛ [Kang S., Yang Y., 2007; Vrints C.J., 2009].

Для оценки эндотелийпротективной активности 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в условиях модели острой ишемии/реперфузии миокарда изучали следующие важнейшие для сердечно-сосудистой системы функции, зависимые от эндотелия – вазодилятирующую и антиагрегационную активность [Kang S., 2007].

У животных контрольной группы ишемия миокарда с последующей реперфузией вызывала существенное снижение антиагрегантной активности эндотелия сосудов, о чем свидетельствовало повышение амплитуды АДФ-зависимой агрегации тромбоцитов почти в 2 раза (Рисунок 2) и 2-х кратный рост КЭД (Таблица 4) по сравнению с показателями у ложнооперированных крыс.

Введение 4-метил-2,6-диизоборнилфенола на этом фоне повышало антиагрегантную активность сосудистой стенки, о чем свидетельствовало снижение АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов после их инкубации с сегментами сосудов крыс опытной группы (Рисунок 2). Кроме того, у животных, получавших 4метил-2,6-диизоборнилфенол, КЭД составил 1,09, что характеризует нормализацию эндотелийзависимой вазодилятации (Таблица 4).

Агрегация, % #* #+ #

–  –  –

Рисунок 2 – Влияние 4-метил-2,6-диизоборнилфенола (100 мг/кг внутрижелудочно) при лечебно-профилактическом введении на антиагрегантную активность сосудистой стенки у крыс после ишемии/реперфузии миокарда.

Примечание: # – р0,05 по сравнению со значениями без инкубации с сегментом аорты;

* – р0,05 по сравнению со значениями у ложнооперированных животных; + – р0,05 по сравнению со значениями у крыс контрольной группы. По оси абсцисс – группы животных, по оси ординат – амплитуда АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов (агрегация, %).

–  –  –

Антиоксиданты повышают образование NO и эндотелийзависимую вазодилятацию у людей с сердечно-сосудистыми заболеваниями [Марков Х.М., 2009], потенцируют антиагрегантную активность эндотелия [Гуманова Н.Г. и др., 2007]. 4метил-2,6-диизоборнилфенол, являясь мощным антиоксидантом, вероятно, проявляет свою эндотелийпротективную активность прежде всего за счет ингибирования метаболического окисления NO, приводя к повышению его биодоступности и, следовательно, усиливая его антиагрегантное и вазодилятирующее действие [Марков Х.М., 2009].

Таким образом, антиоксидантные свойства 4-метил-2,6-диизоборнилфенола обеспечивают мультимодальный эффект препарата, заключающийся в его способности улучшать реологические свойства крови, уменьшать эндотелиальную дисфункцию и повышенную агрегацию тромбоцитов в условиях модели ишемии/реперфузии миокарда.

Отмеченные эффекты 4-метил-2,6-диизоборнилфенола способны существенно повлиять на условия гемодинамики и особенно микроциркуляции миокарда и быть основой его кардиопротективного действия при патологии.

Как известно, при ишемическом повреждении сердца смещение равновесия в системе прооксидант-оксидант в строну прооксиданта является одним из ключевых звеньев деструкции кардиомиоцитов и способствует формированию электрической гетерогенности и, как следствие, аритмогенной активности миокарда [Sapa J. et al., 2011].

В проведенных нами исследованиях моделирование 10-и минутной ишемии с последующей 10-и минутной реперфузией миокарда провоцировало развитие всех видов ишемических и реперфузионных аритмий (Рисунок 3). Основную долю нарушений ритма сердца в контрольной группе животных составили желудочковые тахикардии (23,1% и 24%) и фибрилляции (61,5% и 60%), соответственно в период ишемии и реперфузии. Полученные результаты согласуются с данными литературы [Нарыжная Н.В. и др., 2011].

Профилактическое введение 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в этих условиях несущественно изменяло структуру нарушения ритма в период ишемии. Отмечалась лишь тенденция к снижению частоты возникновения желудочковых фибрилляций – наиболее тяжелого вида аритмий по сравнению с контролем (Рисунок 3).

В реперфузионном же периоде превентивное введение 4-метил-2,6диизоборнилфенола значимо повышало число случаев позитивного, без желудочковых аритмий, исхода реперфузионного периода и, напротив, снижало частоту возникновения фибрилляций желудочкового происхождения в эксперименте (Рисунок 3).

Предотвращение 4-метил-2,6-диизоборнилфенолом наиболее тяжелых форм аритмии может иметь высокое значение при ишемии/реперфузии, поскольку именно они значительно ухудшают прогноз при инфаркте миокарда. Подтверждением этому является достоверное увеличение выживаемости животных из группы с превентивным введением 4-метил-2,6-диизоборнилфенола в течение 1-го дня после эксперимента по сравнению с контролем (96% выживших в опыте – против 77% в контроле). При этом, основная гибель животных приходилась именно на период реперфузионных повреждений миокарда.

В механизме антиаритмической активности 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, повидимому, особую роль играют антиоксидантные эффекты препарата и способность подавлять ПОЛ [Плотников М.Б. и др., 2010]. Благоприятный эффект препарата также, очевидно, может усиливаться наличием у него антигипоксической активности, выявленной ранее на модели острой гипобарической гипоксии [Иванов И.С., 2009].

Гемореологические эффекты 4-метил-2,6-диизоборнилфенола, доказанные в условиях ишемии/реперфузии миокарда. Они способны нивелировать проявления реологической окклюзии, сопровождающей ишемическое и реперфузионное повреждения миокарда, и, как следствие, ослаблять гипоксию миокарда и уменьшать эффекты электрической нестабильности мышцы сердца.

Важным показателем, характеризующим наличие кардиопротективной активности у препарата, является оценка его влияния на размеры зоны инфаркта и зоны риска в миокарде при модели ишемии/реперфузии у крыс.

–  –  –

+ +

–  –  –



Pages:   || 2 |
Похожие работы:

«Озерова Ирина Витальевна ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИДИАБЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВНОВЬ РАЗРАБОТАННЫХ НЕЙРОПРОТЕКТОРНЫХ ПРЕПАРАТОВ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательском институте фармакологии имени В.В. Закусова» (ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова») Научный руководитель: доктор...»

«КОРЧЕМКИН АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ СОЧЕТАННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ МАЛЫХ ДОЗ ДИОКСИНА И Т-2 ТОКСИНА НА ОРГАНИЗМ КУР И ПУТИ КОРРЕКЦИИ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности». Научный руководитель: Папуниди Константин Христофорович заслуженный деятель науки РТ и РФ, доктор...»

«КОБЫЛЯЦКАЯ ГАЛИНА ВЛАДИМИРОВНА ПОЛУЧЕНИЕ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОБИОТИКА ТРИЛАКТОБАКТ В ПЕРЕПЕЛОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 2013 Работа выполнена на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет»...»

«Кулагина Светлана Васильевна СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ГОСУДАРСТВЕННОГО РЕГУЛИРОВАНИЯ ПРЕДПРИНИМАТЕЛЬСКОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ НА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОМ РЫНКЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ Специальность 08.00.05 Экономика и управление народным хозяйством: 8. Экономика предпринимательства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата экономических наук Волгоград, 2013 год Работа выполнена на кафедре «Менеджмент, маркетинг и организация производства» в федеральном государственном...»

«Коровина Елизавета Викторовна РАЦИОНАЛЬНОЕ НАЗНАЧЕНИЕ АНТИГИПЕРТЕНЗИВНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ НА ОСНОВЕ ФАРМАКОЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград – 2015 Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Минздрава России РФ и ГБУ «Волгоградский медицинский научный центр» Научный руководитель: Доктор медицинских...»

«БЕХБУДОВА ЛАМАРА ХАНБАЛАЛОВНА ВЛИЯНИЕ МИФЕПРИСТОНА НА ЭКСПРЕССИЮ ГЕНОВ РЕЦЕПТОРОВ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ В МОНОНУКЛЕАРНЫХ КЛЕТКАХ КРОВИ ПАЦИЕНТОК С МИОМОЙ МАТКИ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Автореферат на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И....»

«Котельникова Светлана Олеговна ИЗУЧЕНИЕ НЕЙРОПСИХОТРОПНЫХ СВОЙСТВ ДИМЕРНОГО ДИПЕПТИДНОГО МИМЕТИКА ФАКТОРА РОСТА НЕРВОВ ЧЕЛОВЕКА 14.03.06. – фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии имени В.В. Закусова» (ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова») Научный...»

«ПЕЧЕНКИНА Ирина Геннадьевна ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ СРЕДСТВ РАСТИТЕЛЬНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ ПРИ ТОКСИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЯХ ПЕЧЕНИ В УСЛОВИЯХ ПОВЫШЕННОЙ ФИЗИЧЕСКОЙ НАГРУЗКИ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2015 Работа выполнена в НИИ Фармации ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздрава России (ГБОУ ВПО ПМГМУ им. И.М. Сеченова...»

«ДВОЙНИКОВА НАТАЛЬЯ АНАТОЛЬЕВНА ОСОБЕННОСТИ НЕЖЕЛАТЕЛЬНЫХ ПОБОЧНЫХ РЕАКЦИЙ ПРИ ФАРМАКОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ПОЖИЛОГО И ДЕТСКОГО ВОЗРАСТА В ПРИБАЙКАЛЬЕ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Улан-Удэ – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Иркутская государственная медицинская академия последипломного...»

«БУЛГАКОВА МАРИНА ДМИТРИЕВНА КАТАЛЕПТОГЕННАЯ АКТИВНОСТЬ ГАЛОПЕРИДОЛА У КРЫС И ЕЕ ИЗМЕНЕНИЕ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ЯИЧНИКОВ И НАДПОЧЕЧНИКОВ 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук ВОЛГОГРАД – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Северо-Кавказский федеральный университет»...»

«Казаишвили Юрий Георгиевич ПОИСК ВЕЩЕСТВ С ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ И ОБЕЗБОЛИВАЮЩЕЙ АКТИВНОСТЬЮ СРЕДИ НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ТИАДИАЗОЛА 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Старая Купавна – 2014 Работа выполнена на кафедре управления и экономики фармации с курсами ботаники, фармакогнозии, фармацевтической технологии, фармацевтической и токсикологической химии Государственного бюджетного...»

«ФИСЕНКО ГАЛИНА ВАДИМОВНА ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ МИКОЦЕЛ В МЯСНОМ ПТИЦЕВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 2013 Работа выполнена на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» Научный...»

«РАДЖКУМАР ДЕНСИНГ САМУЭЛ РАДЖ ФАРМАКОТЕРАПИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ОСТЕОПОРОЗА И НАРУШЕНИЙ КОНСОЛИДАЦИИ ПЕРЕЛОМОВ НА ЕГО ФОНЕ L-АРГИНИНОМ И ЕГО КОМБИНАЦИЯМИ С ЭНАЛАПРИЛОМ И ЛОЗАРТАНОМ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Курск – 201 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский...»

«БУКАТИН МИХАИЛ ВЛАДИМИРОВИЧ Влияние производных бензимидазола на репродуктивную систему крыс-самцов 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук ВОЛГОГРАД – 2013 Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации. Научный руководитель: Спасов Александр Алексеевич Академик РАМН, Заслуженный деятель науки РФ, доктор...»

«ТИМОФЕЕВА АННА САМОВНА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНЫХ ЦИКЛИЧЕСКИХ ГУАНИДИНОВ – ИНГИБИТОРОВ Na+/Н+ ОБМЕНА 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград – 2015 Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный руководитель: Заведующий кафедрой фармакологии ВолгГМУ, Академик РАН, Заслуженный...»

«БАЛАБАНЬЯН ВАДИМ ЮРЬЕВИЧ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ И ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СОЗДАНИЯ НАНОРАЗМЕРНЫХ ФОРМ ФАКТОРОВ РОСТА НЕРВНОЙ ТКАНИ, ФЕНАЗЕПАМА И ПАКЛИТАКСЕЛА 14.03.06 Фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук Москва -2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательском институте фармакологии имени В.В. Закусова» (ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В....»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.