WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 |

«ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КОМПОЗИЦИЙ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА И АРАБИНОГАЛАКТАНА (экспериментальное исследование) ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ШАМАНАЕВ АЛЕКСАНДР ЮРЬЕВИЧ

ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

КОМПОЗИЦИЙ ДИГИДРОКВЕРЦЕТИНА И АРАБИНОГАЛАКТАНА

(экспериментальное исследование)

14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ



диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Томск – 2014

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Плотников Марк Борисович

Научный консультант:

доктор медицинских наук, доцент Носарев Алексей Валерьевич

Официальные оппоненты:

Толстикова Татьяна Генриховна, доктор биологических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение Новосибирский институт органической химии имени Н.Н. Ворожцова Сибирского отделения Российской академии наук, лаборатория фармакологических исследований отдела медицинской химии, заведующая лабораторией Ахмеджанов Рафик Равильевич, доктор биологических наук, Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Национальный исследовательский Томский политехнический университет», кафедра экологии и безопасности жизнедеятельности института неразрушающего контроля, профессор кафедры

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Новосибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «___»_________ 2015 года в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 001.031.01 при Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга» (634028, Томск, пр. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на сайте Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научноисследовательский институт фармакологии и регенеративной медицины имени Е.Д. Гольдберга» (www.pharmso.ru)

Автореферат разослан “______”____________2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Амосова Евдокия Наумовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Хроническая венозная недостаточность (ХВН) нижних конечностей из-за ее широкой распространенности является одной из актуальных проблем современной медицины. По данным эпидемиологических исследований, в развитых странах более 20% взрослого населения имеют выраженные признаки данной болезни, причем у 0,5–1% больных наблюдаются венозные язвы [Robertson L. et al., 2009; Taute B.M., 2010]. В России число больных с разными формами ХВН составляет около 35 млн человек, при этом примерно две трети из них – женщины [Яблоков Е. Г., 1999].

Из-за своей широкой распространенности, высокой стоимости обследования и лечения, а также временной или полной потери трудоспособности пациентов, терапия ХВН связана с существенными финансовыми затратами [Allegra C., 2003; Nicolaides A.N., 2008]. Так, известно, что 1–3 % годового бюджета, выделяемого на здравоохранение в развитых странах, занимают затраты на медицинское обслуживание пациентов с ХВН [Hafner J., 2010]. В исследованиях c использованием различных видов вопросников показано, что ХВН значительно снижает качество жизни больных, является причиной потери трудоспособности и вынужденного выхода на пенсию [Kurz X. et al., 1999].

Важно отметить, что ХВН характеризуется длительным многолетним развитием, начинаясь субъективными ощущениями и функциональными расстройствами и заканчиваясь необратимыми изменениями венозной стенки и клапанов [Nicolaides A.N., 2005; Зубарев А.Р. и др., 2007]. При этом хирургическая коррекция ХВН, выполняемая на стадии органических изменений (варикоз, трофические язвы), показана далеко не всем больным и часто сопровождается рецидивами [Billmann M.K. et al., 2004]. Поэтому все большее значение в последнее время приобретает разработка методов консервативной терапии ХВН, включая применение флеботропных препаратов [Стуров Н.В., 2008; Perrin M. et al., 2011; Котаев А.Ю., 2012].





К основным патофизиологическим процессам при ХВН, на которые может быть направлено действие флеботропных препаратов, относятся повышение проницаемости сосудов, затруднение лимфооттока, снижение венозного тонуса, нарушение гемореологических и гемостатических показателей и воспалительные процессы [Boisseau M.R. et al., 2002; Rathbun S.W. et al., 2007; Баешко А.А., 2008; Серов В.Н., 2008]. К сожалению, препараты, присутствующие на фармацевтическом рынке, не обладают достаточной широтой фармакологической активности или являются слишком дорогими [Nicolaides A.N., 2008]. В связи с этим, актуальной проблемой является разработка новых флеботропных препаратов, способных корригировать как можно больший спектр нарушений и доступных для потребителя.

Как известно, поиск новых лекарственных веществ (ЛВ) сопряжен с большими финансовыми и временными затратами [Beg S. et al., 2011]. С этой точки зрения, более привлекательным является разработка способов повышения биодоступности уже известных молекул. Одним из таких способов является использование ЛВ в композиции с водорастворимыми синтетическими или природными полимерами или олигомерами [Душкин А.В. и др., 2010;

Толстикова Т.Г. и др., 2010]. Показано, что значительного повышения фармакологической активности можно достигнуть, используя природный полисахарид арабиногалактан в комплексе с различными плохо растворимыми лекарственными субстанциями [Tolstikova T.G. et al., 2009].

В нашей работе в качестве основы флеботропного препарата был выбран дигидрокверцетин, поскольку он обладает антиоксидантными, противовоспалительными, капилляропротекторными и антиагрегантными свойствами, способен корригировать показатели гемореологии и микроциркуляции [Колхир В.К. и др., 1995; Сидехменова А.В., 2012].

Степень разработанности. Проблемам повышения эффективности флеботропных препаратов в последнее время уделяется много внимания. Это связано с тем, что наиболее часто используемые в клинической практике препараты, основанные на веществах флавоноидной природы (рутин, диосмин, гесперидин), имеют одно общее ограничение – слишком высокую суточную дозу (порядка 1000–2000 мг). Для решения этой проблемы используют различные дорогостоящие технологии физической модификации (например, микронизирование) [Garner R.C. et al., 2002]. Другим, менее затратным и перспективным способом повышения активности, является создание комплексов ЛВ с веществами, увеличивающими их растворимость в воде (гликозиды и полисахариды) [Толстикова Т.Г. и др., 2010; Khvostov M.V. et al., 2013]. Существенный вклад в изучении влияния различных водорастворимых агентов на активность ЛВ внесли А.В. Душкин и соавторы [Душкин А.В. и др., 2010, 2013]. В частности, они показали возможность увеличения фармакологической активности флавоноида (дигидрокверцетина) при использовании его в комплексе с природным полисахаридом (арабиногалактаном). Однако в работе этих авторов оценивался только эффект композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана на скорость кровотока в сосудах оболочки аллантоиса куриного эмбриона. Между тем, дигидрокверцетин обладает широким спектром фармакологических свойств, которые делают его перспективным в качестве основы для разработки эффективного флебопротектора.

Цель исследования. Изучение фармакологической активности композиций дигидрокверцетина и арабиногалактана.

Задачи исследования.

Оценить антиоксидантную, противовоспалительную и 1.

капилляропротекторную активность композиций дигидрокверцетина и арабиногалактана в различных соотношениях в сравнении с эффектами отдельных компонентов композиции.

Изучить влияние композиции дигидрокверцетина и 2.

арабиногалактана на скорость лимфооттока и тонус венозных сосудов у крыс.

Исследовать влияние композиции дигидрокверцетина и 3.

арабиногалактана на показатели отека, микроциркуляции, плазменного гемостаза и адгезию лейкоцитов в условиях модели хронической венозной недостаточности.

Изучить антитромбогенную активность композиции 4.

дигидрокверцетина и арабиногалактана на модели венозного тромбоза.

Научная новизна. Впервые получены данные об усилении капилляропротекторной, лимфокинетической и противовоспалительной активности дигидрокверцетина при использовании его в композиции с арабиногалактаном. Новыми являются данные о способности арабиногалактана снижать угнетающий эффект дигидрокверцетина на сокращение сегмента воротной вены, индуцируемое KCl. В условиях модели ХВН установлено, что композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана проявляет противоотечную активность, снижает адгезию лейкоцитов и улучшает микроциркуляцию. Кроме того, выявлено, что присутствие арабиногалактана в композиции с дигидрокверцетином не оказывает существенного влияния на антиоксидантную и антитромбогенную активность последнего.

Теоретическая и практическая значимость. Получены данные фундаментального характера об увеличении специфической активности дигидрокверцетина при использовании его в композиции с арабиногалактаном.

Результаты исследований флеботропной активности композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана позволяют рекомендовать ее в качестве основы для разработки средства лечения хронической венозной недостаточности.

Методология и методы исследования. Согласно поставленным задачам выбраны современные высокоинформативные методические подходы, имеющиеся в научно-исследовательских лабораториях НИИФиРМ им. Е.Д.

Гольдберга. В качестве объектов исследования использованы половозрелые крысы-самцы сток Вистар, а также половозрелые мыши-самцы сток CD-I.

Основные методы исследования: физиологические и биофизические (оценка капилляропротекторной, противовоспалительной, венотонической, лимфокинетической, противоотечной активности и микроциркуляции), а также гистологичекие (изучение отека мышечной ткани) и гематологические (определение показателей плазменного гемостаза, изучение адгезии лейкоцитов и антитромбогенной активности). Основные исследования фармакологической активности дигидрокверцетина, арабиногалактана и их композиций проведены на адекватных моделях: неспецифического воспаления, ХВН и венозного тромбоза.

Положения, выносимые на защиту.

При использовании дигидрокверцетина в композиции с 1.

арабиногалактаном в соотношении 1:5 наблюдается увеличение противовоспалительной, капилляропротекторной и лимфокинетической активности дигидрокверцетина.

Курсовое введение композиции дигидрокверцетина и 2.

арабиногалактана в соотношении 1:5 позволяет предотвратить развитие отека, ограничивает нарушения микроциркуляции и повышенную адгезию лейкоцитов у крыс с моделью хронической венозной недостаточности.

Профилактическое введение композиции дигидрокверцетина и 3.

арабиногалактана в соотношении 1:5 оказывает антитромбогенный эффект на модели венозного тромбоза у крыс.

Степень достоверности и апробация материалов. Материалы диссертации представлены на II Всероссийской молодежной научной конференции «Молодежь и наука на Севере» (Сыктывкар, 2013);

международной научно-практической конференции «Свободные радикалы и антиоксиданты в химии, биологии и медицине» (Новосибирск, 2013); IX международной научно-практической конференции «Образование и наука без границ» (Пшемысль, 2013); III межрегиональной научно-практической конференции молодых учных «Человек: здоровье и экология» (Иркутск, 2013);

XIII Всероссийской молодежной научной конференции «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2014);

юбилейной X научно-практической конференции Ассоциации флебологов России (Нижний Новгород, 2014); научно-практической конференции, посвященной 30-летию НИИ МКВЛ "Актуальные вопросы профилактической и восстановительной медицины" (Владивосток, 2014).

По теме диссертации опубликовано 11 работ, из них 3 – в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Личный вклад автора.

Автор принимал непосредственное участие в планировании работы и разработке дизайна исследования, постановке его цели и задач. Автором лично осуществлен анализ литературных данных, проведение эксперимента и интерпретация основных результатов исследования, их статистическая обработка и подготовка к печати статей и тезисов по теме диссертации.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 112 страницах машинописного текста. Состоит из введения, четырех глав, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 302 источника, из них 81 отечественный и 221 зарубежный. Иллюстративный материал представлен 7 рисунками и 12 таблицами.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В первой главе представлен анализ отечественной и зарубежной научной литературы по теме исследования. В первом разделе представлены современные представления о патогенезе хронической венозной недостаточности. Второй раздел посвящен анализу основных направлений фармакологической коррекции нарушений, возникающих на разных стадиях развития ХВН.

Вторая глава диссертации посвящена описанию материалов и методов исследования. Эксперименты проведены на 153 крысах-самцах сток Вистар массой 250–300 г и 42 мышах-самцах сток CD-I массой 25–30 г. Животные получены из отдела экспериментальных биологических моделей НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга, г. Томск. Контрольные и опытные животные находились в стандартных условиях вивария на обычном пищевом рационе и свободном доступе к воде и пище. Массу животных контролировали еженедельным взвешиванием для коррекции вводимой дозы препаратов. Условия содержания и манипуляции с животными соответствуют стандартам, указанным в нормативных документах, регламентирующих работу с лабораторными животными – ГОСТ 53434-2009. – Принципы надлежащей лабораторной практики, Приказ МЗ и СР РФ № 708н и ГОСТ Р ИСО 10993-2, 2009.

В работе использовали субстанции веществ и их композиции, предоставленные ЗАО «Аметис»: «лавитол пищевой» с массовой долей дигидрокверцетина 98,6% (дигидрокверцетин, ДГК); «лавитолАрабиногалактан» с массовой долей арабиногалактана 98,7% (арабиногалактан, АГ); композиция № 1 – субстанция (порошок) с массовыми долями дигидрокверцетина и арабиногалактана 22,8% и 74,2% соответственно;

композиция № 2 – субстанция (порошок) с массовыми долями дигидрокверцетина и арабиногалактана 14,9% и 80,1% соответственно;

композиция № 3 – субстанция (порошок) с массовыми долями дигидрокверцетина и арабиногалактана 8,7% и 86,6% соответственно.

Растворение исследуемых веществ и их композиций в дистиллированной воде проводили при интенсивном встряхивании и температуре 20±2 оС.

Растворимость дигидрокверцетина per se составила 0,33 г/л, арабиногалактана – более 10 г/л. В сочетании с арабиногалактаном растворимость дигидрокверцетина увеличивалась следующим образом: в композиции № 1 до 0,5 г/л, в композиции № 2 до 0,66 г/л, в композиции № 3 до 2 г/л.

Определение общей антиоксидантной активности in vitro проводили с использованием спектрофотометрического метода [Prieto P. et al., 1999]. В данном методе присутствие антиоксидантов в реакционной среде сопровождается увеличением оптической плотности, которое отражает выраженность антиоксидантной активности веществ.

Противовоспалительную активность оценивали по снижению отека задней конечности у мышей при субплантарном введении формалина (0,04 мл 2% раствора) [Шварц Г.Я. и др., 2013].

Исследование капилляропротекторной активности проводили с использованием метода И.А. Ойвина и К.М. Монаковой [1953]. Критерием сосудистой проницаемости служило время выхода красителя в очаг воспаления, вызванного внутрикожным введением 0,02 мл ксилола. В качестве индикатора проницаемости (красителя) капилляров использовали синий Эванса.

При оценке лимфокинетической активности определяли скорость оттока лимфы (мкл/кг·мин), выделившейся через прокол млечной цистерны (cisterna chyli) животных. Лимфу стабилизировали гепарином в конечной концентрации 50 ЕД/мл.

При исследовании сократительной активности сегментов воротной вены крысы использовался метод механографии. Метод механографии позволяет исследовать сократительную активность (механическое напряжение) гладкомышечных сегментов в условиях, близких к изометрическим. Для исследования влияния исследуемых субстанций на сокращение гладкомышечных клеток (ГМК) воротной вены животные подвергались эвтаназии ингаляцией СО2. После этого вскрывали брюшную полость, выделяли участок воротной вены. Выделенный фрагмент воротной вены длиной 2–3 см тщательно очищали от жира и соединительной ткани и промывали в растворе Кребса (NaCl – 120,4 мМ; КCl – 5,4 мМ; CaCl2 – 2,5 мМ;

MgCl2 –1,2 мМ; KH2PO4 – 0,6 мМ; трис(гидрокси-метил)аминометан – 15,5 мМ;

глюкоза – 5,5 мМ; рН=7,44) при 25 oС. В работе использовали фрагменты вены в виде колец шириной 2 мм, которые помещали между фиксированным на дне камеры штоком и крючком, соединенным с датчиком силы (FT10g AD Instrument, Ukraine). Для записи миограммы использовался персональный компьютер с 14-битным АЦП L791 (Л-Кард, Москва). Данные обрабатывались с помощью программы «Lgraph 2». Перед тестированием исследуемых веществ трехкратно проверяли реакцию сосуда на введение 40 мМ КCl. Для оценки влияния исследуемых субстанций на сокращение ГМК проводили 20-минутную преинкубацию с веществами в следующих концентрациях: ДГК – 0,001%, АГ – 0,005%, композиция № 2 с соотношением 1:5 – 0,006%. После периода преинкубации индуцировали сокращение ГМК добавлением КCl (40 мМ) или фенилэфрина (ФЭ, 10-5 М). Исходные амплитуды сокращений приняты за 100%: в первом случае – реакция сосуда на КCl, во втором – реакция сосуда на ФЭ.

Хроническую венозную недостаточность моделировали путем ограничения кровотока в каудальной полой вене в течение двух недель [Плотников М.Б. и др., 2013]. В 1 день эксперимента у животных под эфирным наркозом проводили лапаротомию, выделяли участок каудальной полой вены проксимальнее правой почечной вены и подводили под него лигатуру. После чего в бедренную вену вводили гепарин в дозе 250 ЕД/кг и осуществляли частичную окклюзию каудальной полой вены при помощи иглы с диаметром сечения 0,8 мм, которую прикладывали к вене в месте лигирования. После перевязки сосуда частично восстанавливали просвет сосуда, извлекая иглу. У ложнооперированных животных полностью повторяли оперативное вмешательство, но без этапа окклюзии сосуда. Затем рану послойно ушивали и проводили обработку операционного поля антисептиками (0,02% раствор фурацилина, порошок стрептоцида). Для снижения риска послеоперационных инфекций перед операционным вмешательством животным внутримышечно вводили гентамицин (4 мг/кг).

Противоотечную активность исследуемых веществ и их композиции оценивали по изменению объема стопы задних конечностей и площади интерстициального пространства в мышце голени. На гистологических препаратах мышцы голени, окрашенных гематоксилином и эозином, с помощью программы «Adobe Photoshop CS2» измеряли площадь интерстициального пространства по отношению к стандартной площади ткани (в %) в полях зрения при десятикратном увеличении1.

Давление в каудальной полой вене измеряли прямым методом с помощью датчика давления TSD104A аппаратного комплекса для электрофизиологических исследований производства «Biopac Systems Inc.»

(США). Доступ осуществлялся через бедренную вену. Перед измерением венозного давления крыс наркотизировали диэтиловым эфиром, затем внутривенно вводили гепарин в дозе 250 ЕД/кг.

Уровень микроциркуляции в поверхностных тканях голени оценивали методом лазерной доплеровской флоуметрии с использованием датчика TDS 144 аппаратного комплекса производства «Biopac Systems Inc.» (США). Данные обрабатывались с помощью программы «AcqKnowledge 4.2 for MP150».

Загрузка...

Для оценки показателей гемостаза пробы крови забирали у крыс из общей сонной артерии под эфирным наркозом. Кровь стабилизировали 3,8% раствором цитрата натрия в соотношении 9:1 после чего центрифугировали для получения плазмы (центрифуга РС-6, 2000 об/мин, время центрифугирования – 10 мин). Исследование показателей свертывающей системы крови проводили на коагулометре КG-4 (Cormay, Польша). Концентрацию фибриногена в плазме оценивали методом тромбообразования Клауса с использованием набора реагентов для определения концентрации фибриногена «Фибриноген-тест».

Определение активированного парциального (частичного) тромбопластинового времени проводили с помощью наборов «АПТВ (АЧТВ)-тест».

Протромбиновое время свертывания оценивали с помощью набора «Техпластин-тест». Все вышеуказанные наборы произведены фирмой «Технология-стандарт» (Россия).

Для оценки адгезионной активности лейкоцитов у крыс под эфирным наркозом забирали пробы крови из общей сонной артерии (стабилизировали гепарином 25 ЕД/мл). Фракцию лейкоцитов получали на градиенте плотности фиколл-верографина при центрифугировании. Для этого 4 мл цельной крови наслаивали на 1 мл смеси фиколла и верографина (7:16), после чего центрифугировали при 800g в течение 25 мин. Полученное кольцо лейкоцитов собирали пипеткой и дважды отмывали в растворе Хэнкса без Са2+ и Mg2+ при 400g в течение 15 мин [Гольдберг Е.Д. и др., 1992]. После этого осадок ресуспендировали в 5 мл раствора Хэнкса без Са2+ и Mg2+. Полученную суспензию лейкоцитов помещали в капилляр, предварительно обработанный раствором Дюльбекко. Клетки инкубировали при 37 оС в течение 60 мин.

Неадгезировавшие лейкоциты удаляли, поворачивая капилляр в вертикальное положение. После чего капилляр заполняли раствором Дюльбекко и при напряжении сдвига, создаваемом давлением 0,05 кгс/см2, удаляли со стенок капилляра адгезировавшие лейкоциты. Число клеток подсчитывали в исходной суспензии, а также первом и втором смыве, используя камеру Горяева.

Выражаем искреннюю благодарность к.м.н., старшему научному сотруднику отдела лекарственной токсикологии НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Фоминой Т. И. за помощь в проведении эксперимента.

Количество клеток в смывах выражали в процентах от числа лейкоцитов в исходной суспензии.

Антитромбогенную активность оценивали на модели венозного тромбоза, выполненной по методу I. Reyers и соавторов [Reyers I. et al., 1989]. Для этого через час после последнего введения исследуемых субстанций животных наркотизировали уретаном (1 г/кг, внутрибрюшинно), вскрывали брюшную полость и перевязывали полую вену дистальнее места отхождения от нее левой почечной вены. Через 2 часа измеряли массу влажного тромба, выделенного из полой вены в месте перевязки [Gerhard H., 2008].

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ «Statistica 6.0». Данные представлены в виде M±m, где M – среднее значение, m – стандартная ошибка среднего значения. Для оценки достоверности межгрупповых различий использовали непараметрический критерий Mann-Whitney U test.

Третья глава диссертации посвящена описанию результатов собственных исследований. Полученные данные представлены в виде таблиц и рисунков.

На начальном этапе исследования была изучена антиоксидантная, противовоспалительная и капилляропротекторная активность композиций дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношениях 1:3, 1:5 и 1:10 в сравнении с дигидрокверцетином и арабиногалактаном в отдельности.

В ряде исследований было показано, что при ХВН наблюдается усиление свободнорадикальных процессов повреждения тканей [Karatepe O. et al., 2010;

Guzik B. et al., 2011; Krzyciak W. et al., 2011]. Это обосновывает выбор дигидрокверцетина в качестве основы для разработки нового флеботропного препарата, с учетом его выраженной антиоксидантной активности [Колхир В.К.

и др., 1995; Плотников М. Б. и др., 2005].

Как показано на рисунке 1, дигидрокверцетин в концентрации 0,002% проявлял высокую антиоксидантную активность. Дигидрокверцетин является антиоксидантом прямого действия, непосредственно связывающим свободные радикалы. Антиоксидантные свойства дигидрокверцетина обусловлены способностью гидроксильных групп молекулы отдавать атом водорода, превращаясь при реакции со свободными кислород-радикальными метаболитами в стабильный флавоксильный радикал [Плотников М. Б. и др., 2005].

Активность композиций дигидрокверцетина и арабиногалактана была несколько ниже по сравнению с дигидрокверцетином в отдельности (Рисунок 1, б–г). При этом оптическая плотность растворов при добавлении композиций № 1 и № 2 была ниже на 13% и 15% соответственно (p0,05), в то время как активность композиции № 3 значимо не отличалась от таковой у дигидрокверцетина.

В литературе имеются данные об антиоксидантных свойствах арабиногалактана [Baggio C.H. et al., 2012]. В работе О.Н. Ли и соавторов продемонстрирована способность арабиногалактана снижать процессы ПОЛ в тканях животных, подвергнутых длительному стрессу [Ли О.Н. и др., 2011]. С другой стороны, имеются данные о присутствии существенной доли фенольных примесей в образцах арабиногалактана, получаемых из древесины лиственницы [Медведева Е.Н. и др., 2011].

Рисунок 1 – Сравнительная оценка общей антиоксидантной активности дигидрокверцетина (ДГК), арабиногалактана (АГ) и их композиций.

Примечание – а – ДГК (0,002%), б – композиция № 1 (0,002% ДГК+0,006% АГ), в – композиция № 2 (0,002% ДГК+0,01% АГ), г – композиция № 3 (0,002% ДГК+0,02% АГ), д – АГ (0,02%), е – АГ (0,2%); & – достоверные различия по сравнению со значениями в пробах с дигидрокверцетином (0,002%) (p0,05); #

– достоверные различия по сравнению со значениями в пробах с арабиногалактаном (0,02%) (p0,01).

В нашем исследовании арабиногалактан в концентрации 0,02% проявлял слабую антиоксидантную активность (Рисунок 1, д). Сопоставимая с дигидрокверцетином (0,002%) антиоксидантная активность арабиногалактана достигалась лишь в концентрации в 0,2%, т. е. примерно в 100 раз большей, чем у дигидрокверцетина (Рисунок 1, е).

Таким образом, общая антиоксидантная активность исследованных композиций дигидрокверцетина и арабиногалактана не превышает активности дигидрокверцетина в отдельности. При этом арабиногалактан в концентрации 0,02% проявляет намного меньшую активность по сравнению с дигидрокверцетином и, следовательно, вклад арабиногалактана в общее антиоксидантное действие исследованных композиций можно считать несущественным.

Прогрессирование ХВН, особенно на поздних стадиях, часто связано с воспалительными реакциями организма, сопровождающими такие патологические проявления как тромбофлебит, флеботромбоз, липодерматосклероз и трофические язвы [Pascarella L. et al., 2005; Ojdana D. et al., 2009]. В связи с этим для оценки противовоспалительных свойств важно было исследовать активность всех трех композиций дигидрокверцетина и арабиногалактана в сравнении с отдельными их компонентами.

При изучении противовоспалительной активности исследуемые вещества и их композиции вводили однократно внутрижелудочно за час до инъекции формалина. Дигидрокверцетин в дозе 100 мг/кг и арабиногалактан в дозе 1000 мг/кг не оказывали значимого влияния на прирост объема задней конечности по сравнению с контролем (Таблица 1).

Таблица 1 – Влияние однократного внутрижелудочного введения дигидрокверцетина (ДГК), арабиногалактана (АГ) и их композиций на прирост объема задней конечности у мышей (, %)

–  –  –

Композиция № 1 в дозе 400 мг/кг, композиция № 2 в дозе 600 мг/кг и композиция № 3 в дозе 1100 мг/кг уменьшали прирост объема задней конечности на 19,3%, 15,0 % и 18,4% соответственно.

Таким образом, показано, что противовоспалительный эффект дигидрокверцетина в дозе 100 мг/кг, оцениваемый по снижению отека задней конечности мышей при субплантарном введении формалина, был слабым и не достигал уровня статистической значимости. Установлено, что композиция № 1 в дозе 400 мг/кг, композиция № 2 в дозе 600 мг/кг и композиция № 3 в дозе 1100 мг/кг проявляют выраженную противовоспалительную активность на модели острого экссудативного воспаления у мышей.

Одним из важнейших свойств современных флеботропных препаратов является уменьшение сосудистой проницаемости [Богачев В.Ю., 2005;

Харкевич Д.А., 2010; Perrin M., 2011].

При изучении капилляропротекторной активности установлено, что дигидрокверцетин в дозе 50 мг/кг при курсовом введении в течение 7 дней проявлял тенденцию к увеличению времени выхода красителя (Таблица 2). Как было показано и в других исследованиях, капилляропротекторный эффект дигидрокверцетина при внутрижелудочном введении проявляется в дозах от 100 мг/кг и выше [Соколов С.Я. и др., 1994; Колхир В.К. и др., 1995].

Арабиногалактан в дозе 250 мг/кг ускорял время выхода красителя у животных на 10% по сравнению с контролем, что подтверждает данные о его способности повышать проницаемость сосудов [Kind L. S. et al., 1970; Wauwe J.P. et al., 1989].

Таблица 2 – Влияние курсового (7 суток) внутрижелудочного введения дигидрокверцетина (ДГК), арабиногалактана (АГ) и их композиций на проницаемость капилляров у крыс

–  –  –

Композиция № 1 в дозе 200 мг/кг и композиция № 3 в дозе 550 мг/кг при курсовом введении не влияли на время выхода красителя. Введение животным композиции № 2 в дозе 300 мг/кг приводило к увеличению времени выхода красителя на 22% (p0,05).

Важно отметить, что в нашем исследовании не было выявлено дозовой зависимости влияния арабиногалактана в композиции на увеличение капилляропротекторных свойств дигидрокверцетина. Возможно, что при повышении доли арабиногалактана в композиции № 3 начинает преобладать его способность увеличивать проницаемость сосудов, на фоне чего капилляропротекторный эффект дигидрокверцетина может не проявляться.

Таким образом, установлено, что капилляропротекторная активность композиции № 2 более выражена, чем у дигидрокверцетина. Арабиногалактан отдельно снижает проницаемость капилляров, но способен усиливать ангиопротекторный эффект дигидрокверцетина в композиции № 2 (соотношение ДГК и АГ 1:5).

Анализ выраженности противовоспалительной и капилляропротекторной активности позволяет говорить о наличии у композиций дигидрокверцетина и арабиногалактана преимущества перед дигидрокверцетином в отдельности.

Полученные данные хорошо согласуются с литературными сведениями об усилении фармакологического эффекта лекарственных веществ при их комплексировании с арабиногалактаном [Душкин А.В. и др., 2010; Толстикова Т.Г. и др., 2010]. Учитывая результаты описанных выше экспериментов, для дальнейших исследований была выбрана композиция с соотношением дигидрокверцетина и арабиногалактана 1:5.

Способность ряда растительных веществ флавоноидной природы (диосмин, рутин) увеличивать лимфатический дренаж широко известна и является важным фармакологическим свойством препаратов, используемых в профилактике и лечении ХВН [Кириенко А.И., 2003]. В нашей работе для сравнительного изучения лимфокинетической активности дигидрокверцетина, арабиногалактана и их композиции № 2 была измерена скорость оттока лимфы у крыс после однократного введения этих субстанций. Измерения проводили через час после внутрижелудочного введения дигидрокверцетина в дозе 50 мг/кг, арабиногалактана в дозе 250 мг/кг и их композиции № 2 в дозе 300 мг/кг.

Установлено, что дигидрокверцетин достоверно увеличивал скорость оттока лимфы на 14% по сравнению с контролем, арабиногалактан – на 16%.

Наибольшее увеличение (на 40%) наблюдалось в группе животных, получавших композицию № 2 (Рисунок 2).

–  –  –

Рисунок 2 – Скорость лимфооттока у крыс при однократном внутрижелудочном введении дигидрокверцетина (ДГК), арабиногалактана (АГ) и их композиции № 2.

Примечание – + – достоверные различия по сравнению со значениями у контрольных животных (р0,05); * – достоверные различия по сравнению со значениями у животных, получавших дигидрокверцетин (р0,05).

Возможно, проявляемый эффект дигидрокверцетина аналогичен действию других антиоксидантов, обладающих лимфокинетической активностью (мексидол, кеторолак) [Хафизьянова Р.Х. и др., 2007].

Лимфокинетический эффект арабиногалактана может быть связан с усилением образования лимфы вследствие повышенной капиллярной проницаемости.

Применение композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана выявило ее превосходящий эффект по сравнению с компонентами в отдельности.

Проявляемый эффект может быть связан с феноменом повышения выраженности фармакологических эффектов лекарственных веществ в композиции с арабиногалактаном.

Таким образом, композиция №2 проявляет большую лимфокинетическую активность по сравнению с дигидрокверцетином и арабиногалактаном по отдельности в дозах, входящих в состав этой композиции.

В патогенезе ХВН важная роль отводится нарушению сократительной функции венозных сосудов, что выражается в снижении их тонуса, а также уменьшении контрактильного ответа венозной стенки на -адренергические агонисты и деполяризующие агенты [Golledge G. et al., 2003; Raffetto J.D. et al., 2010].

При исследовании влияния исследуемых субстанций на сократительную активность изолированного сегмента воротной вены крыс было выявлено, что дигидрокверцетин в нарастающих концентрациях (7,2 мкМ, 12,5 мкМ, 25 мкМ, 50 мкМ, 100 мкМ) не влиял на базовый тонус сосудов (Рисунок 3).

Аналогичные результаты были получены при добавлении в раствор с сегментом воротной вены арабиногалактана и композиции № 2 в широком диапазоне концентраций.

Рисунок 3 – Сократительная активность изолированных сегментов воротной вены печени крыс при добавлении в омывающий раствор дигидрокверцетина в нарастающих концентрациях. Стрелкой указан момент добавления дигидрокверцетина.

В дальнейших экспериментах оценивалось влияние исследуемых веществ и их композиции на амплитуду сокращений сегмента воротной вены крыс, индуцированных KCl (40 мМ) или фенилэфрином (ФЭ, 1·10-5 М).

В концентрации 0,001% дигидрокверцетин оказывал ингибирующий эффект на сокращение сегмента вены, индуцированное 40 мМ КCl, что выражалось в значимом снижении амплитуды сокращения сосуда на 39% по сравнению с контрольным (Таблица 3, Рисунок 4). Добавление 0,005% арабиногалактана, напротив, приводило к достоверному повышению амплитуды гиперкалиевого сокращения на 24%. После предварительной инкубации сегмента воротной вены с композицией № 2 (0,006%) амплитуда его сокращений была близка к значению контрольного сокращения.

Рисунок 4 – Сократительная активность изолированных сегментов воротной вены печени крыс при добавлении 40 мМ KCl в исходную среду (А), а также в среду после предварительной инкубации с дигидрокверцетином (Б), арабиногалактаном (В) и их композицией № 2 (Г). По оси ординат – механическое напряжение, развиваемое сегментом сосуда (мН).

Таблица 3 – Влияние дигидрокверцетина (ДГК), арабиногалактана (АГ) и их композиции на амплитуду сокращения сегмента воротной вены, вызванного KCl (40 мМ)

–  –  –

При исследовании влияния дигидрокверцетина, арабиногалактана и их композиции на сокращение сегмента воротной вены крыс, индуцируемое ФЭ, было выявлено, что все исследуемые вещества оказывали выраженное ингибирующее влияние (Таблица 4). Амплитуда сокращения после периода инкубации с дигидрокверцетином снижалась на 70% по сравнению исходной, с арабиногалактаном – на 66%, с композицией – на 90%.

Таблица 4 – Влияние дигидрокверцетина (ДГК), арабиногалактана (АГ) и их композиции на амплитуду сокращения сегмента воротной вены, вызванного ФЭ (1·10-5М)

–  –  –

Таким образом, полученные данные свидетельствуют об угнетающем действии дигидрокверцетина на сократительный ответ изолированного сегмента воротной вены крыс на действие различных стимулов (KCl, фенилэфрин). Использование дигидрокверцетина в композиции с арабиногалактаном позволяет снизить угнетающий эффект дигидрокверцетина на сокращение, индуцируемое KCl. Все исследуемые вещества ингибируют сокращение гладкомышечных клеток, индуцируемое фенилэфрином.

Полученные результаты явились основанием для дальнейшего углубленного исследования композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:5 в условиях модели ХВН у крыс.

Частичная окклюзия каудальной полой вены приводила к повышению венозного давления до 9,74±0,33 мм рт. ст., что значительно превосходило значения у ложнооперированных животных (4,52±0,18 мм рт. ст.). Венозная гипертензия сохраняется больше 21 сут, что свидетельствует о стабильности данной модели [Плотников М.Б. и др., 2013].

На фоне венозной гипертензии в группе контроля наблюдали достоверное увеличение объема стопы задних конечностей на 9% по сравнению с ложнооперированными животными (Таблица 6). При гистологическом исследовании выявлено увеличение интерстициального пространства на 25% по сравнению с ложнооперированными животными, что свидетельствует о развитии отека мышечной ткани (Рисунок 5).

Борьба с отеком конечностей, который обусловлен как венозным, так и лимфатическим компонентами, чрезвычайно важна в лечении больных с хронической венозной недостаточностью. Появление отека в условиях венозного стаза и гипертензии, связано с дисбалансом между процессом транскапиллярной фильтрации и процессами реабсорбции межтканевой жидкости и лимфатического дренажа [Низамов Ф.Х., 2008].

–  –  –

Рисунок 5 – Мышцы голени крыс. Ложнооперированные животные (а), животные с хронической венозной недостаточностью (б) и животные с хронической венозной недостаточностью, получавшие внутрижелудочно композицию дигидрокверцетина и арабиногалактана (50 мг ДГК и 250 мг/кг АГ) (в). Отек интерстициального пространства. Окраска гематоксилином и эозином, х 10.

Введение композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана (50 мг ДГК и 250 мг/кг АГ) в условиях модели хронической венозной недостаточности приводило к снижению венозного давления на 16% по сравнению с контролем.

Объем стоп задних конечностей в группе животных, получавших композицию в течение 14 сут, был достоверно ниже по сравнению со значениями в контроле и статистически значимо не отличался от величин у ложнооперированных животных (Таблица 6), при этом площадь интерстициального пространства в опытной группе достоверно снижалась по сравнению с контролем (Рисунок 5).

Возможно, противоотечный эффект композиции № 2 реализуется за счет выраженных капилляропротекторных и лимфокинетических свойств данной композиции.

Таким образом, композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:5 при курсовом введении крысам с моделью ХВН в проведенном нами исследовании продемонстрировала способность предотвращать увеличение объема задних конечностей и площади интерстициального пространства, а также снижать венозное давление.

В настоящее время все большую роль в патогенезе ХВН отводят нарушениям микроциркуляции, как следствию венозной гипертензии [Грязев С.М. и др., 2008]. В данной работе методом лазерной доплеровской флоуметрии оценивался уровень микроциркуляции, измеряемый в относительных единицах

– blood perfusion unit (BPU).

Моделирование ХВН у животных контрольной группы приводило к нарушению микроциркуляции, отразившееся в снижении ее уровня по сравнению с ложнооперированными животными на 32% (Таблица 7). Уровень микроциркуляции в группе животных, получавших композицию дигидрокверцетина и арабиногалактана (50 мг ДГК и 250 мг/кг АГ), был достоверно выше на 18% по сравнению со значением у контрольных животных.

–  –  –

Таким образом, композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:5 улучшает микроциркуляцию в условиях модели ХВН у крыс.

При исследовании системы гемостаза у животных с хронической венозной недостаточностью обнаружено повышение содержания фибриногена в плазме крови на 14%, а также увеличение протромбинового времени на 11% по сравнению с ложнооперированными животными. Достоверных изменений показателей активированного частичного тромбопластинового времени и тромбинового времени не выявлено.

Полученные данные согласуются с литературными сведениями о том, что у пациентов с ХВН развиваются нарушения гемостаза, которые усиливают микроциркуляторный стаз [Slagsvold C.E. et al., 2009].

Использование композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана (50 мг ДГК и 250 мг/кг АГ) в соотношении 1:5 не изменяло данные показатели гемостаза.

Таким образом, композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:5 не влияет на изменение показателей плазменного гемостаза у крыс в условиях модели ХВН.

В последние годы активно обсуждается вопрос о значении активации лейкоцитов и их адгезии к сосудистой стенке с развитием процесса, называемого лейкоцитарной агрессией [Takase S. et al., 2004; Bergan J.J. et al., 2007; Boisseau M. R. et al., 2007; Nicolaides A.N., 2008]. Обработка и обобщение экспериментальных данных многих исследований привели к созданию полноценной теории, объясняющей механизмы повреждения венозной стенки при развитии ХВН, в иностранной литературе известной как «White Cell Trapping Theory» [Smith P.D., 1999]. Ключевую роль в данной теории играет процесс активации и адгезии лейкоцитов к стенке сосуда с последующим их выходом в окружающие ткани.

В нашем исследовании при измерении адгезионной активности лейкоцитов было выявлено, что моделирование ХВН у крыс приводило к достоверному уменьшению доли неадгезировавших лейкоцитов в 2,4 раза и увеличению доли адгезировавших лейкоцитов в 1,7 раз по сравнению с ложноперированной группой (Таблица 8).

–  –  –

В соответствии с теорией P.D. Smith, при ХВН наблюдается усиление «прилипания» белых клеток крови к эндотелию сосудов, что объясняется снижением скорости кровотока и повышением экспрессии эндотелиоцитами молекул адгезии, включая ICAM-1 и VCAM-1 [Smith C., 1999; Takase S. et al., 1999; Bergan J.J. et al., 2006].

В опытной группе животных применение композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана (50 мг ДГК и 250 мг/кг АГ) ограничивало повышение адгезионной активности лейкоцитов (Таблица 8). Доли неадгезировавших и адгезировавших лейкоцитов были близки к значениям в ложнооперированной группе, причем доля последних значимо отличалась от контроля.

Наблюдаемое снижение адгезионной активности лейкоцитов при использовании композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана может быть обусловлено ее противовоспалительными свойствами. Кроме того было показано, что дигидрокверцетин способен снижать экспрессию молекул адгезии ICAM-1 и Mac-1-индуцированную адгезию лейкоцитов из периферической крови человека [Bito Т. et al., 2002; Wang Y.H. et al., 2004]. На модели ишемии головного мозга было обнаружено, что применение дигидрокверцетина ограничивало миграцию лейкоцитов из сосудов в ткани [Wang Y.H. et al., 2006].

Таким образом, композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:5 снижает адгезионную активность лейкоцитов в условиях модели ХВН.

Известно, что ХВН и венозный тромбоз тесно связаны между собой [Kahn S.R. et al., 2004; Lopez J.A. et al., 2004]. Механизм возникновения тромба включает в себя три основных компонента (триада Вирхова), одним из которых является стаз [Савельев В.С., 2001].

Используемая нами модель стаз-индуцированного венозного тромбоза у крыс сопровождалась быстрой дилатацией полой вены и образованием тромба (Таблица 9). Данная модель стаз-индуцированного тромбоза характеризуется увеличением экспрессии тканевого тромбопластина, адгезией тромбоцитов к стенке сосуда, образованием тромбоцитарных агрегатов в тромбе и на поверхности фибриновых волокон [Lawson C.A. et al., 1997]. Другими тромбозиндуцирующими факторами в данной модели являются повреждение сосудистой стенки и гипоксия, что способствует адгезии лейкоцитов на стенках лигированной вены [Vandendries E.R. et al., 2004].

–  –  –

В группах животных, получавших дигидрокверцетин в дозе 50 мг/кг и композицию № 2 в дозе 300 мг/кг, наблюдался выраженный антитромбогенный эффект, что проявлялось существенным уменьшением массы тромба. Массы тромбов у животных, получавших дигидрокверцетин и композицию № 2, были достоверно меньше на 47% и 52% соответственно по сравнению с контролем (Таблица 9). При этом не было выявлено достоверных различий между опытными группами.

Таким образом, профилактическое введение композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:5 проявляет выраженную антитромбогенную активность в условиях модели венозного тромбоза у крыс.

Четвертая глава диссертационной работы посвящена обсуждению полученных результатов исследования с привлечением данных литературы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Суммируя и анализируя результаты, полученные в ходе данной работы, можно сделать вывод о перспективности использования композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана в терапии ХВН. Использование данной композиции может быть полезным, как в профилактических целях, так и для коррекции патологических нарушений. Главными направлениями воздействия композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана являются: уменьшение оксидативного стресса, восстановление нормальной проницаемости сосудов, усиление лимфооттока, противоотечное действие, купирование воспалительных реакций, снижение лейкоцитарной агрессии и тромботических осложнений.

Композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана может быть рекомендована для дальнейших исследований в качестве основы для разработки нового флеботропного средства.

ВЫВОДЫ

Использование дигидрокверцетина в композиции с 1.

арабиногалактаном в соотношении 1:3, 1:5 и 1:10 существенно не изменяет антиоксидантных свойств дигидрокверцетина.

В условиях модели острого экссудативного воспаления у мышей 2.

композиции дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:3, 1:5 и 1:10 проявляют более выраженную противовоспалительную активность по сравнению с отдельными компонентами.

Композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 3.

1:5 проявляет больший капилляропротекторный и лимфокинетический эффект по сравнению с отдельными компонентами.

Композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 4.

1:5 не оказывает влияния на базовый тонус сосудов. При использовании дигидрокверцетина в композиции с арабиногалактаном снижается угнетающий эффект дигидрокверцетина на KCl-индуцированное сокращение воротной вены крыс.

В условиях модели хронической венозной недостаточности у крыс, 5.

вызванной частичной окклюзией каудальной полой вены, композиция дигидрокверцетина и арабиногалактана в соотношении 1:5 предупреждает развитие отека, ограничивает нарушения микроциркуляции и повышенную адгезию лейкоцитов.

Профилактическое введение композиции дигидрокверцетина и 6.

арабиногалактана в соотношении 1:5 снижает тромбообразование в условиях модели тромбоза, индуцированного стазом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕДИССЕРТАЦИИ

Шаманаев, А.Ю. Антиоксидантная активность композиции 1.

дигидрокверцетина с арабиногалактаном / А.Ю. Шаманаев, И.С. Иванов // «Молодежь и наука на Севере»: II Всероссийская молодежная научная конференция. – Сыктывкар, 2013. – С. 214.

Шаманаев, А.Ю. Влияние композиции дигидрокверцетина и 2.

арабиногалактана на процесс тромбообразования у крыс с моделированным венозным тромбозом / А.Ю. Шаманаев, И.С. Иванов, М.Б. Плотников // «Свободные радикалы и антиоксиданты в химии, биологии и медицине»:

Международная научно-практическая конференция. – Новосибирск, 2013. – С.

153.

Шаманаев, А.Ю. Гиполипидемическая активность композиций 3.

дигидрокверцетина и арабиногалактана / А.Ю. Шаманаев, И.С. Иванов, М.Б.

Плотников // "Образование и наука без границ": IX Международная научнопрактическая конференция. – Пшемысль, 2013. – Том. 35. – С. 36.

Шаманаев, А.Ю. Гастропротекторная активность композиции 4.

дигидрокверцетина и арабиногалактана / А.Ю. Шаманаев, И.С. Иванов // «Человек: здоровье и экология»: III Межрегиональная научно-практическая конференция молодых учных. – Иркутск, 2013. – С. 178–183.

Шаманаев, А.Ю. Влияние композиции дигидрокверцетина и 5.

арабиногалактана на уровень микроциркуляции в условиях модели хронической венозной недостаточности у крыс / А.Ю. Шаманаев, И.С. Иванов // «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике»: XIII Всероссийская молодежная научная конференция Института физиологии КНЦ УрО РАН. – Сыктывкар, 2014. – С. 166.

Шаманаев, А.Ю. Лимфокинетическая активность композиции 6.

дигидрокверцетина и арабиногалактана / А.Ю. Шаманаев, И.С. Иванов, А.В.



Pages:   || 2 |
Похожие работы:

«Озерова Ирина Витальевна ВЫЯВЛЕНИЕ АНТИДИАБЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ВНОВЬ РАЗРАБОТАННЫХ НЕЙРОПРОТЕКТОРНЫХ ПРЕПАРАТОВ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательском институте фармакологии имени В.В. Закусова» (ФГБНУ «НИИ фармакологии имени В.В. Закусова») Научный руководитель: доктор...»

«ДВОЙНИКОВА НАТАЛЬЯ АНАТОЛЬЕВНА ОСОБЕННОСТИ НЕЖЕЛАТЕЛЬНЫХ ПОБОЧНЫХ РЕАКЦИЙ ПРИ ФАРМАКОТЕРАПИИ БОЛЬНЫХ ПОЖИЛОГО И ДЕТСКОГО ВОЗРАСТА В ПРИБАЙКАЛЬЕ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Улан-Удэ – 2015 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования «Иркутская государственная медицинская академия последипломного...»

«КОРЧЕМКИН АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ СОЧЕТАННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ МАЛЫХ ДОЗ ДИОКСИНА И Т-2 ТОКСИНА НА ОРГАНИЗМ КУР И ПУТИ КОРРЕКЦИИ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности». Научный руководитель: Папуниди Константин Христофорович заслуженный деятель науки РТ и РФ, доктор...»

«ФИСЕНКО ГАЛИНА ВАДИМОВНА ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ МИКОЦЕЛ В МЯСНОМ ПТИЦЕВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 2013 Работа выполнена на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» Научный...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.