WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

«СОЧЕТАННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ МАЛЫХ ДОЗ ДИОКСИНА И Т-2 ТОКСИНА НА ОРГАНИЗМ КУР И ПУТИ КОРРЕКЦИИ ...»

На правах рукописи

КОРЧЕМКИН АНДРЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

СОЧЕТАННОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ МАЛЫХ ДОЗ ДИОКСИНА И Т-2

ТОКСИНА НА ОРГАНИЗМ КУР И ПУТИ КОРРЕКЦИИ

06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени



кандидата биологических наук

Казань – 2015

Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности».

Научный руководитель: Папуниди Константин Христофорович заслуженный деятель науки РТ и РФ, доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты: Софронов Владимир Георгиевич доктор ветеринарных наук, профессор заведующий кафедрой зоогигиены Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана Яппаров Ильдар Ахтамович доктор биологических наук, заведующий отделом разработки био и нанотехнологий в земледелии и животноводстве Татарского научно-исследовательского института агрохимии и почвоведения

Ведущая организация: «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Защита состоится «2» февраля 2016г. в 1000 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, Казань, Научный городок-2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБВНИВИ» (г. Казань).

Электронный вариант автореферата и текст объявления о защите размещен на официальных сайтах ВАК РФ www.vak.ed.gov.ru, полный текст диссертации, автореферата, отзыв научного руководителя – на официальном сайте ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» www.vnivi.ru

Автореферат разослан «___» __________ 2015г.

Ученый секретарь диссертационного совета В.И. Степанов

1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Главной задачей современной ветеринарной науки и практики является обеспечение населения безопасными продуктами животноводства. В настоящее время экологическая обстановка не исключает одновременное загрязнение биосферы соединениями техногенного происхождения, такими как диоксины и микотоксины. Они чрезвычайно токсичны, высоко устойчивы и широко распространены в окружающей среде [4, 7, 9]. Эти токсиканты вызывают снижение продуктивности, нарушения в системе крови, обменных процессах, приводят к понижению резистентности и угнетению иммунологической реактивности организма, даже в самых малых концентрациях [1, 2]. За последние годы в мировой практике наблюдались массовые случаи интоксикации людей и животных данными ксенобиотиками вследствие употребления загрязненных ими кормов и продуктов питания. Проблема диоксинов и микотоксинов находится под пристальным вниманием Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), программ ООН по продовольственной и сельскохозяйственной безопасности (ФАО), окружающей среде (ЮНЕП), Международного агентства по исследованию рака (МАИР) и др. Множественность клеточных мишеней для диоксина и Т-2 токсина определяет широкий спектр токсических эффектов. Это гепатотоксичность, иммунотоксичность, мембранотоксичность, нейротоксичность, эндокринотоксичность, дерматотоксичность, метаболические дефекты, связанные с модуляцией активности ферментных систем. По результатам многочисленных исследований отечественных и зарубежных ученых данные соединения обладают эмбриотоксическими, тератогенными, канцерогенными и мутагенными свойствами. Характер индивидуального биологического действия диоксина и Т-2 токсина разносторонне изучен, подобраны средства терапии и профилактики, однако сведений о сочетанном токсикозе птиц крайне мало [8].

На основании выше изложенного, изучение сочетанного воздействия диоксина и Т-2 токсина на организм птицы, разработка средств терапии и профилактики интоксикаций является актуальной задачей ветеринарной медицины и имеет важное практическое значение.

Степень разработанности проблемы. Исследования сотрудников ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» и других организаций выявили токсическое действие отдельно диоксина и Т-2 токсина на организм различных видов животных. В последние годы обнаружено множество фактов загрязнения кормов изучаемыми токсикантами. Сотрудниками отдела токсикологии ФЦТРБ-ВНИВИ были изучены новые методы лечения отравлений диоксином и Т-2 токсином. Но вопрос сочетанного воздействия Т-2 токсина и диоксина на организм кур-несушек, остается неизученным.





Цель и задачи исследования. Целью работы явилось изучение длительного влияния диоксина, Т-2 токсина и их сочетанного воздействия на морфофункциональные показатели организма и продуктивные качества курнесушек.

Для реализации поставленной цели были определены следующие задачи:

1. Изучить симптоматику и характер гематологических изменений при раздельном и сочетанном воздействии диоксина и Т-2 токсина на организм кур-несушек;

2. Установить характер изменения биохимических и иммунологических показателей крови кур-несушек при отравлении их диоксином в отдельности и в сочетании с Т-2 токсином;

3. Изучить патоморфологические и электронно-микроскопические изменения в органах и тканях при отравлении кур-несушек диоксином в отдельности и в сочетании с Т-2 токсином;

4. Изучить эффективность применения бентонита, АСД-2, янтарной кислоты и димефосфона при отравлении кур-несушек диоксином в отдельности и в сочетании с Т-2 токсином.

Научная новизна работы. Впервые изучен механизм действия и особенности сочетанного воздействия диоксина и Т-2 токсина на клинические, гематологические, биохимические, иммунологические показатели кур-несушек, установлены морфологические и электронномикроскопические изменения в органах и тканях. Выявлено взаимоусиливающее действие токсикантов. Экспериментально обоснована эффективность бентонита Биклянского месторождения Республики Татарстан и АСД-2 при длительном сочетанном отравлении кур-несушек диоксином и Т-2 токсином. На способ профилактики отравлений животных диоксином подана заявка на изобритение, регистрационный № 2014150041 от 10.12.2014г.

Практическая ценность работы. Выявленные положительные изменения клинических, гематологических, биохимических, иммунологических показателей, патологоанатомические и электронномикроскопические изменения, происходящие на фоне применения бентонита и АСД-2 при сочетанном воздействии на организм животных диоксина и Т-2 токсина, позволяют рекомендовать вышеуказанные препараты с лечебной целью при отравлении изучаемыми токсикантами. Результаты исследований вошли в методическое пособие «Токсикозы животных, вызванные диоксинами: этиология, профилактика и лечение», утвержденное отделением ветеринарной медицины Российской академии сельскохозяйственных наук (2013). Разработана инструкция по применению бентонита и АСД-2 для лечения и профилактики сочетанного отравления диоксином и Т-2 токсином, утвержденная директором ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» член-корреспондентом РАН, профессором Ивановым А.В.

Методология и методы исследований. Предметом исследований служили кровь, сыворотка крови, внутренние органы кур-несушек. Объектом исследований были куры-несушки кросса «Хайсекс Браун», содержавшиеся в условиях вивария. Методы исследований, использованные для решения поставленных задач, включали клинико-гематологические, токсикологические, фармакологические, биохимические, иммунологические, гистологические, электрономикроскопические и статистические.

Основные положения, выносимые на защиту:

- Симптоматика, гематологические, биохимические показатели крови, патоморфологические и электронно-микроскопические изменения в органах и тканях кур-несушек при длительной интоксикации диоксином в отдельности и в сочетании с Т-2 токсином;

Морфологические изменения в организме кур-несушек при длительной интоксикации диоксином в отдельности и в сочетании с Т-2 токсином;

- Лечебная эффективность бентонита и АСД-2 при длительном сочетанном отравлении кур-несушек диоксином и Т-2 токсином.

Апробация материалов диссертации. Основные научные положения, выводы и рекомендации диссертации доложены, обсуждены и одобрены на научных сессиях ученого совета ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ», IX международной научно практической конференции «WSCHODNIE PARTNERSTWO – 2013» (г.Пшемысль, Польша), VI всеросийском конгрессе по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии» (Москва, международном конгрессе ветеринарных фармакологов и 2014), III токсикологов (Санкт-Петербург, 2014), международном съезде V ветеринарных фармакологов и токсикологов «Актуальные проблемы и инновации в современной ветеринарной фармакологии и токсикологии (Витебск, 2015).

Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 148 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, списка сокращённых терминов, списка использованной литературы, списка иллюстративного материала и приложений. Работа иллюстрирована 17 таблицами и 28 рисунками. Список литературы включает 247 литературных источников, в том числе 76 - зарубежных авторов.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена в лаборатории тяжелых металлов и синтетических ядов отдела токсикологии ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» («ФЦТРБ-ВНИВИ», г. Казань) в период 2012 - 2015 годов.

Экспериментальные исследования проводили на 80 курах-несушках кросса «Хайсекс Браун» в возрасте 135 дней, живой массой 1,5 кг.

В опытах использовали 2,3,7,8-тетрахлордибензо-пара-диоксин (далее диоксин), изготовленный ПО «Химпром» (г. Уфа). Кристаллический Т-2 токсин, полученный при использовании гриба Fusarium sporotrichioides, штамм 2м15, был предоставлен лабораторией микотоксинов ФГБУ «ФЦТРБВНИВИ».

Диоксин применяли в виде масляной эмульсии в дозах 0,51; 0,26 и 0,17 мкг/кг массы тела посредством нанесения на корень языка специально изготовленным для этих целей атравматическим зондом. Т-2 токсин перед скармливанием перемешивали с кормом в дозе 200 мкг/кг корма.

В качестве лечебных средств использовали димефосфон, АСД-2, янтарную кислоту и бентонит Биклянского месторождения Республики Татарстан. Бентонит примешивали к корму из расчета 2% от сухого вещества рациона. Димефосфон выпаивали птице ежедневно в дозе 90 мг/кг массы тела (0,6 мл/кг) через 2 ч после приема сорбента. АСД-2 выпаивали ежедневно в дозе 0,05мл/гол. Янтарную кислоту перемешивали с дневным рационом из расчета 25 мг/кг массы тела.

Кур-несушек подвергали ежедневной пероральной затравке токсикантами в течение 45 суток. До начала эксперимента птица находилась на профилактическом карантине под наблюдением, в условиях вивария Центра. Кормление, поение, содержание птиц проводили согласно принятым нормам.

В ходе эксперимента оценивали клиническое состояние животных, потребление корма и воды. В начале опыта, а затем через каждые 15 сут после первичного введения токсикантов проводили определение массы и температуры тела, осуществляли взятие и общий анализ крови.

Гематологические исследования включали определение количества эритроцитов, гемоглобина, гематокрита, лейкоцитов и дифференциальный подсчет форменных элементов белой крови по общепринятым методам (Кондрахин И.П. и соавт., 2004).

Определение общего белка сыворотки крови проводили на рефрактометре ИРФ-22, белковых фракций - методом Олла и Маккарда в модификации Карпюка С.А. (1962), содержание продуктов перекисного окисления липидов - по Гончаренко М.С., Латиновой А.М. (1985).

Уровень Т-лимфоцитов в периферической крови выявляли методом спонтанного розеткообразования с гетерогенными эритроцитами (Е-РОК).

Идентификацию В-лимфоцитов проводили методом ЕАС - розеток по Фримелю Х. (1987). Фагоцитарную способность нейтрофилов в периферической крови определяли по методике Кост С.А. и Стенко М.И.

(1974), объектом фагоцитоза служила суточная культура Staphylococcus аureus с наличием 1 млрд клеток в 1 мл взвеси. Функциональную способность нейтрофилов определяли по показателям фагоцитоза:

фагоцитарной активности – проценту активных (фагоцитирующих) нейтрофилов; фагоцитарному индексу – среднему числу микробных тел, приходящихся на один сосчитанный нейтрофил; фагоцитарному числу – среднему количеству микробов в одном активном нейтрофиле; фагоцитарной емкости, характеризующей общую фагоцитарную активность.

Для гистологических исследований брали кусочки сердца, печени, почек. Окраску гистопрепаратов проводили гематоксилин–эозином.

С помощью методов электронной микроскопии исследовали ультраструктуру клеток печени и коркового слоя почек.

Патоморфологические исследования и электрономикроскопические исследования проводили совместно с д.б.н. Саитовым В.Р., и ведущим научным сотрудником Губеевой Е.Г., за что выражаем им искреннюю благодарность.

Статистическую обработку полученного цифрового материала осуществляли методом вариационной статистики с применением программы Microsoft Excel и критерия достоверности Стьюдента.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

–  –  –

Исследования были проведены на курах-несушках кросса «ХайсексБраун», разделенных по принципу аналогов на 4 группы по 5 птиц. Первая служила контролем, вторая получала - 2,3,7,8-тетрахлордибензо-парадиоксин (ТХДД) в дозе 0,51 мкг/кг (1/400 от ЛД50); третья – диоксин в дозе 0,26 мкг/кг массы тела (1/800 от ЛД50); четвертая – токсикант ТХДД в дозе 0,17 мкг/кг массы тела (1/1200 от ЛД50). Продолжительность опыта составила 45 дней.

При интоксикации диоксином у кур отмечалось общее угнетение, взъерошенность перьевого покрова, снижение двигательной активности, потребления корма и воды. Живая масса птиц контрольной группы за период опыта увеличилась на 21% относительно фона, в опытных группах данный показатель менялся незначительно.

Количество эритроцитов в контрольной группе птиц увеличилось к 45 сут исследования на 11,3% по сравнению исходным значением. Во второй группе этот показатель был ниже фона на 15,6%, в третьей – менялся незначительно. Уровень эритроцитов в крови кур четвертой группы возрос на 8,1% Содержание лейкоцитов в крови птиц контрольной группы увеличивалось на 45 сут на 10,4%. У кур, затравленных диоксином в дозе 1/1200 от ЛД50, данный показатель увеличился на 7,2% относительно фоновых значений. В третьей и четвертой группах, получавших токсикант в дозах 1/800 и 1/400 от ЛД50, выявлено снижение данного показателя соответственно на 9,3 и 30,6%.

Количество общего белка в крови кур первой и четвертой групп повышалось относительно фоновых показателей на 3,4 и 4,2% соответственно. В группе, получавшей 1/400 ЛД50 ТХДД, данный показатель снизился на 8,8%. В первой группе содержание альбуминов было на уровне с фоновым показателем, -глобулины увеличились на 2,8%, -глобулины – на 12,4%; -глобулины понизились на 22,8%. Во второй группе птиц альбумины снижались на 21,2%; -глобулины – на 27,4%; показатель -глобулинов возрос до 92,5%, -глобулины к концу исследования были выше фоновых показателей на 11,2%. В группе, получавшей токсикант в дозе 1/800 ЛД50, произошло повышение -глобулинов на 28,9% и понижение -глобулинов на 22,8%. В четвертой группе птиц биохимические показатели претерпели незначительные изменения.

Количество Т-лимфоцитов по сравнению с фоном на 45 сут уменьшилось во всех подопытных группах, в контрольной – на 4,83%; в первой, второй и третьей опытных группах на 26,9; 20,0 и 17,8% соответственно, а В-лимфоциты – на 3,9; 25,3; 14,4 и 11,4% соответственно.

В контрольной группе птиц значение фагоцитарной активности, индекса, числа и емкости к концу опыта были выше фона на 1,2; 4,8; 12,5 и 10,8% соответственно. Данные показатели у кур, получавших токсикант в дозе 0,51 мкг/кг, снизились на 17,9; 0,7; 18,3; 48,7% соответственно; в дозе 0,26 мкг/кг

– на 7,1; 2,3; 8,6; 23,8% соответственно; в дозе 0,17 мкг/кг фагоцитарная активность, число и емкость понизились на 1,3; 4,3; 18,9% соответственно, тогда как фагоцитарный индекс остался неизменным.

3.2 Токсическое действие Т-2 токсина на организм кур

В опытах использовали кур-несушек кросса «Хайсекс Браун», из которых по принципу аналогов сформировали 2 группы по 5 птиц в каждой.

Птицы первой группы служили биологическим контролем и потребляли обычный рацион. Птицы второй группы с кормом получали Т-2 токсин в дозе 2 ПДК (200 мкг/кг корма). Продолжительность опыта составила 45 дней.

У кур, потреблявших токсичный корм, отмечалось постепенное понижение аппетита и активности, во второй половине опыта выявлено расстройство желудочно-кишечного тракта, птица имела вялый вид, перьевой покров был взъерошенный.

По результатам гематологических исследований, выявлено снижение на 45 сут эритроцитов на 12,4, гемоглобина – на 9,5, лейкоцитов – на 20,8% При затравке кур-несушек Т-2 токсином в дозе 2 ПДК отмечалось снижение количества общего белка на 6,4%, альбумина – на 18,4%. Значение

-глобулина снизилось на 8,5%, количество -глобулинов возросло на 37,7%,

-глобулинов на 6,5%.

Количество Т-лимфоцитов снизилось по отношению с фоновыми значениями на 18,2%, В-лимфоцитов – на 7,1%. Фагоцитарная активность понизилась на 19,8% по отношению к фоновому показателю. Значение фагоцитарного числа было ниже на 21,3%, фагоцитарной емкости – на 45,6%.

3.3 Изучение сочетанного действия малых доз диоксина и Т-2 токсина на организм птиц В опытах использовали кур-несушек кросса «Хайсекс Браун», из которых по принципу аналогов сформировали 4 группы по 5 птиц в каждой.

Птицы первой группы получали вместе с рационом растительное масло (растворитель диоксина); второй - 2,3,7,8-тетрахлордибензо-пара-диоксин (ТХДД) в дозе 0,51 мкг/кг (1/400 от ЛД50) и Т-2 токсин в дозе 2 ПДК (200 мкг/кг корма); третьей – диоксин в дозе 0,26 мкг/кг массы тела (1/800 от ЛД50) и Т-2 токсин в дозе 2 ПДК (200 мкг/кг корма); четвертой – токсикант ТХДД в дозе 0,17 мкг/кг массы тела (1/1200 от ЛД50) и Т-2 токсин в дозе 2 ПДК (200 мкг/кг корма). Продолжительность опыта составила 45 дней.

При сочетанной затравке птиц отмечали общее угнетение, снижение аппетита, взъерошенность перьевого покрова, на 10-11 сут происходило расстройство функции желудочно-кишечного тракта. Во второй группе было отмечено снижение массы тела, первые 25 сут наблюдалось снижение яйценоскости, которая в дальнейшем вовсе прекратилась. К 43 сут пала одна птица. Количество эритроцитов в контрольной группе птиц увеличилось на 11,3% по сравнению исходным значением, во второй группе уменьшилось – на 29,5%, у третьей группы данный показатель снизился на 9,6%. В последней группе птиц количество эритроцитов было незначительно больше фонового значения.

Количество гемоглобина на 45 сут во второй группе было ниже на 18,1%, в третьей – на 14,6%. У птиц, получавших диоксин в дозе 1/400 от ЛД50 совместно с Т-2 токсином, содержание лейкоцитов было ниже фона на 30,3%. В третьей группе происходило снижение данного показателя относительно начальных данных на 20,8%. Аналогичная ситуация с понижением количества лейкоцитов на 7,05% регистрировалась и в четвертой группе птиц.

Количество общего белка в крови кур первой группы повышалось относительно фоновых показателей незначительно. Содержание альбуминов во все сроки исследований было на уровне с фоновым показателем, глобулины к концу опыта увеличились на 2,8%. Процентное соотношение глобулинов было выше фона на 12,4%, тогда как -глобулинов ниже на 22,8%. Во второй группе количество общего белка понизилось на 28,7%.

Содержание альбуминов сократилось на 58,9%, относительно фонового значения; -глобулинов – на 27,7%. Во все сроки исследований количество глобулинов было незначительно выше фоновых значений. В третьей группе содержание общего белка было ниже на 7,4%. Количество альбуминов уменьшилось на 25,0%, а -глобулинов на 21,5%. В четвертой группе птиц содержание общего белка и альбуминов по отношению к фону снижалось на 28,7 и 8,6% соответственно. Концентрация -глобулинов возрастала на 5,7%.

Загрузка...

(табл. 1) Таблица 1 – Иммунобиологические показатели крови кур при сочетанном воздействии ТХДД и Т-2 токсина Показатель Срок исследования, сут Фон 15 30 45

–  –  –

Фаг. емкость, 10 59,9±1,20 56,9±3,30 59,0±3,30 51,8±1,63* Т-лимфоциты, % 32,7±0,20 31,0±0,71 29,6±0,71* 28,3±0,41* В-лимфоциты, % 30,9±1,43 30,6±0,41 30,0±0,71 29,0±0,71 Примечание: * - p0,05 В контрольной группе птиц фагоцитарная активность на 45 сут эксперимента была выше фонового значения 1,3%. Фагоцитарное число, индекс и емкость увеличивались на 12,5; 4,8; 10,8% соответственно.

Количество Т и В лимфоцитов сокращалось – на 4,8 и 3,9% соответственно.

Во второй группе фагоцитарная активность и число снижались – на 22,3 и 34,5%. Фагоцитарный индекс, емкость, Т и В-лимфоциты понижались во все сроки исследований. Наибольшее отклонение от фоновых значений отмечено на 45 сут и составило: фагоцитарный индекс – на 14,1%;

фагоцитарная емкость – на 45,8%; процентное содержание Т-лимфоцитов – на 28,1%; В-лимфоцитов – на 23,2%. В третьей группе птиц фагоцитарная активность сократилась на 19,7%. Фагоцитарное число снижалось на 25,2%, фагоцитарный индекс – на 9,8%, фагоцитарная емкость – на 47,2%.

Процентное содержание Т и В-лимфоцитов снизилось по сравнению с фоном на 45 сут – на 22,0 и 27,1% соответственно. В четвертой группе фагоцитарная активность была ниже на 14,0%. Остальные показатели снижались относительно фона во все сроки исследования: фагоцитарный индекс – на 14,7%; фагоцитарная емкость – на 13,6%; Т-лимфоциты – на 13,4%; Влимфоциты – на 6,1%.

При даче курам с кормом диоксина в дозе 1/400 от ЛД50 (0,51 мкг/кг массы тела) и Т-2 токсина (2 ПДК) выявлены признаки гидрофилии в виде отека головного мозга как внутриклеточного так и внеклеточного, отек стенок сосудов головного мозга, легких, сердца, очаговый межальвеолярный и периваскулярный отек в легких, отеки клеток проводящей системы в сердце, стенок капилляров клубочков почек. Отмечается дистрофия эпителия канальцев почек с некробиозом, нейронов и нейронофагия. Мелкоочаговые скопления микрофагальных клеток в сердце и печени. Очаговый внутриклеточный отек в печени (рис.1).

Токсическое действие Т-2 токсина (2 ПДК) и диоксина в дозе 1/800 ЛД50 проявилось в отечности стенок сосудов сердца, головного мозга, легких, печени, селезенки. Выявлены периваскулярные отеки, слабо выраженные в головном мозге, легких, сердце. Лейкоцитоз в сосудах печени. Дистрофия гепатоцитов, реактивные купферовские клетки, микрофаги в синусойдах. В почках очаговая гидрофильная дистрофия, мелковакуольная дистрофия. В селезенке имелись участки разрежения белой пульпы. В головном мозге внутриклеточный отек, периваскулярный отек, дистрофия нейронов, нейронофагия, сателлитоз.

При отравлении птиц диоксином в дозе 1/1200 от ЛД50 (0,17 мкг/кг массы тела) и Т-2 токсином (2 ПДК) выявлены признаки гидрофилии в виде проявлений отеков стенок сосудов, в головном мозге, почках, легких, отек межальвеолярных перегородок в легких (слабо выраженный), очаговый внутриклеточный отек в сердце и в печени.

Рис.1. Гистоструктура печени курицы, получавшей Т-2 токсин (2 ПДК) и диоксин в дозе 1/400 ЛД50, окраска гематоксилином Эрлиха, эозином водным, увеличение объектива x40

3.4 Изучение сочетанного воздействия малых доз диоксина и Т-2 токсина на организм кур и применении терапевтических средств В опытах использовали кур-несушек кросса «Хайсекс Браун», из которых по принципу аналогов сформировали 4 группы по 5 птиц в каждой.

Птицы первой группы получали вместе с рационом растительное масло (растворитель диоксина); второй - 2,3,7,8-тетрахлордибензо-пара-диоксин (ТХДД) в дозе 0,51 мкг/кг (1/400 от ЛД50) и Т-2 токсин в дозе 2 ПДК (200 мкг/кг корма), также задавали вместе с кормом сорбент бентонит из расчета 2% от сухого вещества рациона и димефосфон в дозе 90 мг/кг живой массы тела.

Третьей – диоксин в дозе 0,51 мкг/кг (1/400 от ЛД50) и Т-2 токсин в дозе 2 ПДК (200 мкг/кг корма), также задавали вместе с кормом сорбент бентонит из расчета 2% от сухого вещества рациона и янтарную кислоту в дозе 25 мг/кг живой массы тела. Четвертой – токсикант ТХДД в дозе 0,51 мкг/кг (1/400 от ЛД50) и Т-2 токсин в дозе 2 ПДК (200 мкг/кг корма), также задавали вместе с кормом сорбент бентонит в расчете 2% от сухого вещества рациона и АСД-2 в дозе 0,05 мл на голову. Пятой – совместно с токсикантами в вышеуказанных дозах применяли АСД-2 в дозе 0,05 мл на голову.

Продолжительность опыта составила 45 дней.

Во всех группах, получавших токсиканты совместно с терапевтическими препаратами, особых изменений в поведенческой активности, поедании корма и потреблении воды отмечено не было. В контрольной группе птиц живая масса за период опыта возросла на 21,4%, количество эритроцитов увеличилось на 11,3% по сравнению исходным значением. Содержание лейкоцитов в крови птиц контрольной группы увеличивалось на 10,4%. Уровень содержания гемоглобина в первой повышался на 4,3%. В группе, которой вместе с диоксином и Т-2 токсином задавали димефосфон и бентонит, живая масса птиц в конце опытного периода стала выше фонового значения на 9,1%. В группе, получавшей совместно с токсикантами янтарную кислоту и бентонит, живая масса тела к концу опыта возрасла относительно начальных показателей на 7,14%.

У птиц четвертой и пятой групп живая масса к концу опыта была на уровне фоновых показателей. У второй группы количество эритроцитов на 45 сут было на уровне фона. В третьей группе птиц данный показатель снижался на 12,50%, относительно фоновых значений. В четвертой и пятой группах отмечали повышение изучаемого показателя – на 11,1 и 4,2% соответственно. Уровень гемоглобина во второй, третьей, четвертой и пятой группах относительно фона достоверно не изменялся. Содержание лейкоцитов во второй группе снизилось на 9,3%, в третьей группе – на 9,4%.

В четвертой и пятой группах изучаемый показатель значительным изменениям не подвергался.

У птиц контрольной группы значительным изменениям относительно фона претерпели показатели и -глобулинов, первый показатель был выше на 12,4%, второй – ниже на 22,8%. Во второй группе произошло значительное увеличение и -глобулинов на 17,4 и 20,3% соответственно, а глобулины снизились на 24,1%. В третьей группе уровень и -глобулинов понижался на 23,2 и 13,9% соответственно, -глобулинов повышался на 28,9%. В четвертой и пятой группах к концу опыта значение -глобулинов снизилось на 22,6 и 8,9%, а -глобулинов увеличилось на 28,9 и 38,3% соответственно.

В контрольной группе птиц значение фагоцитарной активности, индекса, числа и емкости к концу опыта были выше фона на 1,2; 4,8; 12,5 и 10,8% соответственно, а количество Т и В-лимфоцитов снизилось на 4,8 и 3,9% соответственно.

Во второй группе птиц, процентное содержание Т и В-лимфоцитов сократилось относительно фона на 9,7 и 3,4%, значения фагоцитарной активности, числа, индекса и емкости варьировалось в незначительных пределах. В третьей группе происходило снижение всех изучаемых показателей: Т и В-лимфоцитов на 13,4 и 10,5%, фагоцитарной активности, числа, индекса и емкости на 4,8; 6,1; 4,5; 8,0% соответственно. В четвертой группе изменения, относительно фона, были незначительными. В пятой группе сократилось содержание Т-лимфоцитов на 15,5% (табл. 2).

Таблица 2 – Иммунобиологические показатели крови кур при сочетанном воздействии ТХДД и Т-2 токсина и терапевтическими средствами Показатель Срок исследования, сут Фон 15 30 45 Контроль

–  –  –

Фаг. емкость, 10 59,9±4,97 64,6±4,97 63,8±4,10 52,8±2,13* Т-лимфоциты, % 32,3±0,41 28,3±0,41* 29,3±0,82* 27,3±0,41* В-лимфоциты, % 31,0±1,22 35,6±0,41* 31,6±1,08 29,3±0,41 Примечание: * - p0,05 При попадании в корм кур ТХДД в дозе 1/400 ЛД50 совместно с Т-2 токсином и при лечении АСД-2 (0,05 мл/гол) и бентонитом в дозе 2% от рациона, изменения гистоструктуры органов были незначительными и выявлялись у трети исследуемых птиц.

Рис. 2. Гистоструктура головного мозга, курицы получавшей диокисин в дозе 1/400 ЛД50, Т-2 токсин и АСД-2, окраска гематоксилином Эрлиха, эозином водным, увеличение объектива x20 Как исключение стоит отметить реактивность круглоядерных клеток в печени, она была у всех кур. Дистрофические изменения органов не выявлены. Отмечен слабо выраженный очаговый отек стенок альвеолярных перегородок в легких.

–  –  –

2.6.1 Ультратонкие исследования гепатоцитов Изменения ультраструктуры гепатоцитов у кур, получавших острую затравку диоксином в дозе 40 мкг/кг, характеризовались следующим образом. Ядра гепатоцитов сохраняют свою форму, ярко выраженных изменений в упаковке хроматина не отмечается. Перинуклеарное пространство незначительно увеличено по всей длине ядерной оболочки.

Цитоплазма сильно вакуолизирована, гиалоплазма плотная, гликогена очень мало (рис. 3). Набухшие цистерны эндоплазматического ретикулума фрагментированы и окружают митохондрии и пероксисомы, встречается аппарат Гольджи. В большем количестве митохондрий имеют просветленный матрикс, кристы развиты слабо. В некоторых митохондриях отмечаются признаки деструкции, а в других - аморфные депозиты кальция (фосфаты кальция). Присутствуют телолизосомы, пероксисомы.

Изменения ультраструктуры гепатоцитов группы кур, получавших острую затравку диоксином 500 мкг/кг. Ядра гепатоцитов сохраняют свою форму, происходит перераспределение хроматина, ядрышки встречаются редко. Небольшое просветление кариоплазмы и неравномерное увеличение перинуклеарного пространства и накопление в нем продуктов распада в виде мембраноподобных структур.

Рис. 3. Околоядерный участок клеток гепатоцитов кур, получавших затравку диоксин в дозе 40 мкг/кг.

Условные обозначения: Я – ядро, Ядр - ядрышко, МХ – митохондрии, ПС – пероксисомы, ПНП – перинуклеарное пространство, АГ – аппарат Гольджи, ТЛ – телолизосомы 4 ЗАКЛЮЧЕНИЕ Таким образом, на основании результатов проведенных исследований можно сделать следующие выводы:

1. Поступление в организм птиц диоксина в дозах 0,17 и 0,26 мкг/кг массы тела в течение 45 дней вызывает проявление клинических признаков, выражающихся угнетением общего состояния, одышкой, диареей, понижением двигательной активности, снижением яйценоскости.

Поступление токсиканта в дозе 0,51 мкг/кг массы тела вызывает более сильные проявления перечисленных клинических признаков.

2. Длительное поступление диоксина в испытуемых дозах в организм кур приводит к нарушению обменных процессов, а также функций органов и систем, что проявляется изменениями количества общего белка и его фракций, снижением количества эритроцитов до 15,6%, лейкоцитов – до 30,6%.

3. Поступление диоксина в исследуемых дозах оказывает угнетающее воздействие на естественную резистентность и иммунобиологическую реактивность, характеризующееся снижением содержания Т и В-лимфоцитов

– на 26,9 и 25,3% соответственно, а так же снижением фагоцитарной активности и емкости нейтрофилов.

4. Сочетанное воздействие диоксина в дозе 0,51 мкг/кг массы тела с Т-2 токсином (200 мкг/кг корма) вызывает эритроцитопению (на 29,5%), лейкоцитопению (до 30,3%), снижение уровня гемоглобина (на 18,1%), количества эозинофилов, псевдоэозинофилов и моноцитов (на 21,41; 29,32 и 43,48% соответственно), а также существенное изменение уровня общего белка, его фракций и естественную резистентность организма.

5. Применение бентонита из расчета 2% от сухого вещества рациона и АСД-2 в дозе 0,05 мл на голову (или янтарную кислоту в дозе 25 мг/кг с кормом) при сочетанной интоксикации кур-несушек диоксином в дозе 0,51 мкг/кг массы тела с Т-2 токсином в дозе 200 мкг/кг корма, способствует нормализации клинического статуса, оказывает благоприятное воздействие на гематологические и биохимические показатели крови, естественную резистентность и иммунобиологическую реактивность.

6. Диоксин в дозе 1/800 ЛД50 приводит к отечности стенок сосудов сердца, легких, печени, селезенки, головного мозга с сохранением их структуры, различными проявлениями нейронодистрофии: от деформации клеток – до полного их распада. Имеются признаки лизиса нейронов клетками микроглии. Выявлены признаки энцефалопатии, нейронодистрофии, обратимые и необратимые некрозы нейронов. В печени – вакуольная дистрофия и некрозы, образования по типу гиалиноподобных телец, реактивные «купферовские» клетки. В сердце на фоне отёчности стромы признаки дистрофии клеток проводящей системы и очаговой вакуолеподобной дистрофии кардиомиоцитов.

7 Изменения ультраструктуры гепатоцитов и клеток корковой зоны почек кур, получавших затравку диоксин в дозе 40 мкг/кг, характеризуются многообразием морфологических проявлений – просветлением матрикса митохондрий, набуханием цистерн ЭПР, сильнейшей (тотальной) вакуолизацей цитоплазмы и лизисом (полной деструкцией) клеток.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Для профилактики отравлений при сочетанной интоксикации кур-несушек диоксином и Т-2 токсином рекомендуется ежедневно применять бентонит из расчета 2% от сухого вещества корма и АСД-2 в дозе 0,05 мг на голову (или янтарную кислоту в дозе 25 мг/кг с кормом).

2. Результаты исследований рекомендуется использовать при чтении лекций и проведении занятий со студентами и аспирантами по курсу ветеринарная токсикология и экология.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Дорожкин, В.И. Актуальные вопросы ветеринарно-санитарных мероприятий на территориях, загрязненных экотоксикантами / В.И.

Дорожкин, А.М. Смирнов, П.Н. Рубченков // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2010. - №2. - С.1.

2. Желтов, В.А. Изучение токсичности и опасности диоксинов и диоксиноподобных соединений / В.А. Желтов, А.Л. Лавров, В.Н. Волков, Г.П. Лаврусенко, К.А. Комарова // Ветеринария. - 2008. - №10. - С. 52-54.

3. Кост С.А. Определение фагоцитарной активности лейкоцитов /С.А. Кост, М.И. Стенко // Клиническая гематология животных. М:, 1974, - С.21-27.

4. Кондрахин И.П. Справочник ветеринарного терапевта и токсиколога /И.П.

Кондрахин, В.И. Левченко, Г.А. Таланов. – М:, «Колос», 2005. – С.507-510

5. Иванов, А.В. Диагностика, профилактика и лечение сочетанных отравлений животных вторичными метаболитами микроскопических грибов рода Fusarium: методическое пособие / А.В. Иванов, М.Я. Тремасов, К.Х.

Папуниди и др. – М:, - 2012. - 56 с.

6. Матвеева, Е.Л. Патоморфологические изменения у животных при отравлении диоксином / Е.Л. Матвеева, В.В. Титов, М.Я. Тремасов и др.// Ветеринария. - 2005. - №1. - С. 53-54.

7. Папуниди, К.Х. Диоксины: опасность, профилактика и лечение, перспективы исследования / К.Х. Папуниди, М.Я. Тремасов, В.А. Новиков и др.// Ветеринарный врач. – 2010. - №5. - С. 25-28.

8. Смирнов, А.М. Эффективность энтеросорбентов при микотоксикозах животных / А.М. Смирнов, Э.И. Семенов, М.Я. Тремасов, К.Х. Папуниди //

Современные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии:

материалы II-го съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов России. – Казань. – 2009. – С. 489-493.

9. Фисинин, В.И. Микотоксины и антиоксиданты: непримиримая борьба (Т-2 токсин – метаболизм и токсичность) / В.И. Фисинин, П. Сурай // Птица и птицепродукты. - 2012. - №3. - С. 38-41.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАНЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Корчемкин А.А. Клинико-гематологические показатели кур-несушек кросса «Хайсекс Браун» при сочетанном отравлении диоксином и T-2 токсином / А.А. Корчемкин, И.Р. Кадиков, И.Ф. Вафин, В.И. Степанов // Материалы IX международной научно-практической конференции «WSCHODNIE PARTNERSTWO - 2013», Пшемысль, 2013. – С. 55-57.

1. Папуниди К.Х. Клинико-гематологические показатели кур-несушек кросса «Хайсекс-браун» при длительном воздействии диоксином в малых дозах / К.Х.Папуниди, А.А. Корчемкин, И.Р.Кадиков, И.И. Идиятов // Ветеринарный врач – 2013. - №6 – С. 10-12.

3. Кадиков И.Р. Применение адептогенов в сочетании с бентонитом при совместном отравлении микотоксином Т-2 и диоксином / И.Р. Кадиков, К.Х.

Папуниди, М.Я. Тремасов, А.А.Корчемкин // Материалы VI всеросийского конгресса по медицинской микологии «Успехи медицинской микологии», Москва, 2014. – С. 328-330.

4. Папуниди К.Х. Влияние диоксина на биохимические и иммунологические показатели крови кур / К.Х.Папуниди, А.А. Корчемкин, И.Ф. Вафин, И.И.

Идиятов // Ветеринарный врач – 2014. - №1 – С. 11-13.

5. Кадиков И.Р. Влияние АСД и бентонита на организм кур-несушек при сочетанном воздействии диоксином и микотоксином / И.Р. Кадиков, А.А.

Корчемкин, А.А. Иванов, И.И. Идиятов //Материалы III международный конгресс ветеринарных фармакологов и токсикологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства в ветеринарии», Санкт-Петербург, 2014

– С. 108-109.

6. Корчемкин А.А. Иммунобиологические показатели крови кур-несушек кросса «Хайсекс Браун» при сочетанном отравлении диоксином и Т-2 токсином / А.А. Корчемкин, И.Ф. Вафин, И.И. Идиятов // Материалы V международного съезда ветеринарных фармакологов и токсикологов «Актуальные проблемы и инновации в современной ветеринарной фармакологии и токсикологии», Витебск, 2015. – С. 262-265.

7. Корчемкин А.А. Эффективность лекарственных средств при сочетанном отравлении кур-несушек диоксином и Т-2 токсином / А.А. Корчемкин, А.А.

Иванов, К.Х. Папуниди // Ветеринарный врач – 2015. - №3 – С. 21-24.



 
Похожие работы:

«ФИСЕНКО ГАЛИНА ВАДИМОВНА ПОЛУЧЕНИЕ И ПРИМЕНЕНИЕ КОРМОВОЙ ДОБАВКИ МИКОЦЕЛ В МЯСНОМ ПТИЦЕВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 2013 Работа выполнена на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет» Научный...»

«КОБЫЛЯЦКАЯ ГАЛИНА ВЛАДИМИРОВНА ПОЛУЧЕНИЕ И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ПРОБИОТИКА ТРИЛАКТОБАКТ В ПЕРЕПЕЛОВОДСТВЕ 06.02.03 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 2013 Работа выполнена на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет»...»

«ШИРИНА АННА АЛЕКСАНДРОВНА ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРОБИОТИКА ПРОМОМИКС С 06.02.03 ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 201 Работа выполнена на кафедре биотехнологии, биохимии и биофизики Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Кубанский государственный аграрный университет»...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.