WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 9 |

«РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФГБУ «ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЙ,

РАДИАЦИОННОЙ И БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ»

На правах рукописи

СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ

РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ

ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И



ПОРОСЯТ

06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Научный консультант:

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов Расых Халиуллович Казань – 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

Стр.

ВВЕДЕНИЕ………………………………

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Общие сведения о роде Escherichia……………………………….

1.1 Эшерихиозная диарея телят……………………………………….

1.2 Лечение и профилактика эшерихиоза новорожденных телят…..

1.2.1 Эшерихиозная диарея поросят…………………………………… 1.3 Профилактика и лечение эшерихиоза поросят…………………..

1.3.1 Заключение по обзору литературы……………………………….

1.4 Обоснование и поиск направлений по созданию новых средств, 1.5 обладающих иммунопротекторными свойствами при колибактериозе телят и поросят…………………………………..

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ …………………...............

Материалы и методы исследований……………………………..

2.1 Материалы ………………………………………………………… 2.1.1 56 Методы исследований …………………………………………….

2.1.2

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ………..

Состояние и тенденции развития животноводства в 3.1 Нижегородской области РФ……………………………………… 62 Эпизоотологический мониторинг болезней свиней в 3.2 Нижегородской области………………………………………….. 67 Эпизоотологический и иммунологический мониторинг 3.3 крупного рогатого скота в отдельных хозяйствах Нижегородской области…………………………………………… 73 Изготовление полиантигенного комплекаса на основе пилезных 3.4 антигенов и специфических иммуноглобул

–  –  –

Оценка терапевтической эффективности 3.5 противоэшерихиозного композиционного препарата «Пабисорб» на лабораторных и сельскохозяйственных животных…………………………………………………………..

–  –  –

Изучение лечебно-профилактического действия препарата 3.5.2.3 «Пабисорб» при колибактериозе и внешнем -облучении животных…………………………………………………………… Изучение иммуногенной активности комплексных 3.6 субъединичных 4-пили вакцин на зараженных возбудителем эшерихиоза лабораторных и сельскохозяйственных животных...

Разработка метода иммуноферментного анализа для 3.6.1 обнаружения специфических антител E. coli в сыворотке крови телят и поросят…………………………………………………….

Получение антигенного варианта антиэшерихиозных 3.6.2 эритроцитарного и бентонитового диагностикумов для оценки поствакцинального гуморального иммунитета на фоне применения вакцины СП4ПВ…………………………………….

Оценка гуморального иммунного ответа у лабораторных 3.6.3

–  –  –

Изучение иммуногенной активности противоэшерихиозной 3.6.3.1 вакцины СП4ПВ…………………………………………………… Оценка эффективности разработанной вакцины для защиты 3.6.4 телят и поросят от колибактериоза……………………………….

Изучение профилактической эффективности субъединичной 3.6.4.1 вакцины СП4ПВ для защиты телят……………………………… Изучение профилактической эффективности субъединичной 3.6.4.2 вакцины СП4ПВ для защиты поросят…………………………… ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………

РЕКОМЕНДАЦИЯ ПРОИЗВОДСТВУ…………………………. 206 СПИСОК СОКРАЩЕННЫХ ТЕРМИНОВ………………………. 208 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

–  –  –

5. Приложение 5. Инструкция по применению «набора препаратов для выявления антител к бактериям Echerichia coli методом реакции непрямой гемагглютинации»…………………

6. Приложение 6. Инструкция по применению «Набора препаратов на основе бентонитового диагностикума для выявления антител к бактериям Echerichia coli методом реакции бентонитовой флокуляции (РБФ)»……………………

7. Приложение 7. Акт производственного испытания «Субъединичной вакцины против колибактериоза телят и поросят» в условиях СПК им. 1 Мая, неблагополучного по колибактериозу телят………………………………………………





8. Приложение 8. Акт производственного испытания «Субъединичной вакцины против колибактериоза телят и поросят» в условиях СТФ ООО «Авангард», неблагополучного по эшерихиозу поросят…………………………………………….

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Одной из наиболее сложных проблем, которые стоят перед ветеринарией сегодня, являются болезни желудочно-кишечного тракта новорожденных телят и поросят инфекционной природы, которые широко распространены, вызывают высокую смертность и причиняют значительный экономический ущерб.

Установлено, что ведущее место в этиологии инфекционной диареи телят и поросят принадлежит энтеропатогенным штаммам Escherichia coli, обладающим широким набором серовариантов, продуцирующим адгезивные антигены К99, К88, F41, 987Р, А20, которым и принадлежит ведущая роль в развитии эшерихиозов [50, 98, 99, 100, 105, 117, 194, 203, 247, 284, 289, 309].

Немаловажное значение в развитии эшерихиозов среди молодняка играет комплекс предрасполагающих и сопутствующих факторов к которым относят: такие факторы, как неудовлетворительные условия кормления и содержания матерей до отелов и опоросов – недостаточность и несбалансированность рационов кормления, различные нарушения обмена веществ, нарушение естественной резистентности организма, содержание животных при неудовлетворительных условиях микроклимата, отсутствие моциона, отсутствие необходимых условий для отела и опороса а также нарушение условий содержания молодняка в первые дни после рождения – запоздалая выпойка молозива, несоблюдение принципа «пусто-занято» при формировании групп молодняка и др. [71, 72, 162, 163, 181, 186, 188, 216, 218, 219, 287].

В современных условиях основным подходом при борьбе с эшерихиозами является создание у новорожденных колострального (молозивного) иммунитета путем активной иммунизации матерей перед родами [62, 64, 102, 175, 176, 139, 142, 146, 173, 189, 190, 192, 233].

Следует отметить, что иммунизация стельных коров и супоросных свиноматок существующими вакцинами в ряде случаев не обеспечивает выраженный колостральный иммунитет у нарождающего молодняка [211].

Это по мнению ряда авторов [50, 51, 52, 96, 97, 282] связано с наличием у больных телят и поросят широкого набора серовариантов возбудителя E. coli.

Например, у больных телят обнаружено более 165 вариантов О-антигена, 55 Н-антигена и 90 вариантов К-антигена. При типизации возбудителя колибактериоза, выделенных от больных диареей поросят, чаще всего обнаруживали эшерихии следующих серовариантов: О1, О2, О4, О8, О15, О26, О78, О103, О119, О126, О137, О138, О139, О141, О147, О149, а также А20, К99, К88, 987Р, F41 [282]. В связи с этим для противоинфекционной защиты новорожденных телят и поросят проводят пассивную иммунизацию путем парентерального и орального введения им специфических гипериммунных сывороток, иммуноглобулинов [46, 48, 143, 145, 214, 215, 258, 259]. Следует однако отметить, что в лечебных сыворотках биофабричного изготовления в ряде случаев наблюдается низкий титр антител, особенно к адгезивным антигенам К88, К99, 987Р и F41, а также ТЛи ТС-энтеротоксинам. Поэтому имеется необходимость усовершенствования существующих и создания нового поколения вакцин против эшерихиозов, а также лечебных средств на основе современных достижений биотехнологии и иммунологии. При этом получение и очистка специфических и иммуногенных белков из E. coli и изыскание средств и способов повышения их антигенной активности, позволяющих увеличить продолжительность и напряженность колострального иммунитета у телят и поросят, является весьма актуальной.

Степень разработанности темы. Значительным достижением в области изучения антигенной структуры E. coli стало обнаружение у микроба образований, играющих роль органа адгезии бактерии к клеткам макроорганизма, названными адгезивными фимбриями или пили [134, 339, 340, 348, 349, 351, 364].

Применение вакцины против колибактериоза из очищенных пилей типа 1, содержащей антигены К88, К99 и 987Р приводило к существенному снижению смертности от эшерихиоза поросят и телят [384, 385, 386].

Однако опыт создания и использования субъединичных вакцин против эшерихиоза в нашей стране небольшой, что диктует необходимость разработки и всесторонней оценки эффективности таких вакцин [203].

С целью повышения эффективности вакцинопрофилактики и лечебных средств ряд исследователей рекомендуют применять их в комбинации с продуктами пчеловодства [6, 116, 120, 121, 155, 179, 244).

Как видно задача поиска современных, эффективных способов и средств повышения иммуногенности вакцины против эшерихий, а также изучение иммуностимулирующих и иммуномодулирующих свойств апипрепаратов в сочетании с вакцинными и лечебными средствами является весьма актуальной.

На основании вышеизложенного было решено провести настоящие исследования с целью разработки композиционного препарата, включающего глобулины, продукты пчеловодства, продукты метаболизма пробиотических микроорганизмов и природные адсорбенты, а также полиантигенного комплекса на основе пилезных (фимбриальных) антигенов в сочетании с продуктами пчеловодства и высокодисперсным природным адсорбентом.

Цель и задачи. Целью исследований явилось разработка технологии получения новых средств специфической профилактики и лечения телят и поросят от эшерихиоза.

Для выполнения вышеуказанной цели были поставлены следующие задачи:

- провести эпизоотологический мониторинг болезней свиней и крупного рогатого скота в Нижегородской области;

- теоретически обосновать возможность и необходимость получения лечебно-профилактических средств нового поколения;

- разработать полиантигенный комплекс на основе пилезных антигенов и иммуномодуляторов для профилактики эшерихиоза телят и поросят;

- разработать иммунотерапевтический композиционный препарат на основе иммуноглобулинов, апифитопродуктов и минеральных сорбентов;

- определить токсичность и безвредность полученных лечебнопрофилактических средств на лабораторных животных;

провести оценку лечебно-профилактической эффективности разработанных средств на лабораторных и сельскохозяйственных животных;

- изучить формирование противоэшерихиозной защиты животных на фоне применения разработанных лечебно-профилактических средств;

- разработать наборы препаратов и инструкции по их применению для выявления антител к бактериям E. coli методом иммуноферментного анализа, а также реакции непрямой гемагглютинации с использованием антигенных эритроцитарных и бентонитовых диагностикумов.

Научная новизна. Теоретически обоснована и экспериментально подтверждена возможность получения противоэшерихиозной субъединичной вакцины на основе пилезных антигенов К88, К99, 987Р и F41, выделенных из энтеротоксигенных штаммов E. coli методом афинной хроматографии.

Однократное подкожное введение субъединичной четырехпилезной вакцины стельным коровам и супоросным свиноматкам индуцирует в их организме выработку специфических антител с последующей передачей специфических антител молозивом новорожденным телятам и поросятам. Колостральный иммунитет обеспечивает сохранность телят и поросят в 90-92,8% случаях в очаге колибактериоза. С учетом патогенеза эшерихиозной инфекции разработан лечебно-профилактический препарат «Пабисорб» на основе специфических глобулинов, антигенных, бифидогенных и сорбционнодетоксикационных средств. Показано, что лечебно-профилактическое действие «Пабисорба» реализуется путем гемо- и миелопротекиорного действия иммуноглобулинов, а также антиоксидантного и антибактериального действия апипродуктов, бифидогенного и детоксицирующего действия микрочастиц природного минераламонтмориллонит.

Разработаны наборы препаратов для выявления антител в сыворотке крови к бактериям E. coli методом ИФА (иммуноферментного анализ), РНГА (реакция непрямой гемагглютинации) и РБФ (реакция бентонитовой флокуляции). По результатам исследований подана заявка на изобретение №2014118171 от 5 мая 2014 года.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные данные указывают на фундаментальное значение антигенной структуры возбудителя эшерихиоза, в которой ключевую роль играют пилезные антигены, способные обеспечить в оптимальных количественных соотношениях в полиантигенном комплексе индуцировать выработку специфических антител в организме стельных коров и супоросных свиноматок с последующей передачей их с молозивом новорожденным телятам и поросятам.

Установленная возможность получения полиантигенного комплекса с иммуномодулятором нового поколения – природным биополимером – апизаном открывает перспективу использования последнего в качестве не только иммуностимулятора, но и активатора иммунофармакологического действия композиционного противоэшерихиозного лечебного препарата.

На основании собственных исследований разработаны:

Методические указания по диагностике, профилактике и лечению 1.

колибактериоза телят и поросят с применением средств, полученных на основе бионанотехнологии (в порядке производственного испытания). Утв.

академик – секретарем Отделения ветеринарной медицины Российской академии сельскохозяйственных наук, академиком РАСХН А.М. Смирновым 17.10.2013г.

Инструкция по применению субъединичной вакцины против 2.

колибактериоза телят и поросят (в порядке производственного опыта). Утв.

председателем комитета государственного ветеринарного надзора Нижегородской области Е.А.Колобовым и согласована директором ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», член-корр. РАН, профессором А.В. Ивановым.

Инструкция по применению «Набора препаратов для выявления 3.

антител к бактериям Echerichia coli методом иммуноферментного анализа».

Утв. директором ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», член-корр. РАН, профессором А.В. Ивановым и согласована начальником ГУВ Кабинета Министров Республики Татарстан А.Г. Хисамутдиновым.

Технические условия на набор препаратов для выявления антител 4.

к бактериям Echerichia coli методом иммуноферментного анализа (в порядке производственного испытания) Утв. директором ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», членкорр. РАН, профессором А.В. Ивановым и согласована начальником ГУВ Кабинета Министров Республики Татарстан А.Г. Хисамутдиновым.

Инструкция по применению «Набора препаратов для выявления 5.

антител к бактериям методом реакции непрямой Echerichia coli гемагглютинации». Утв. директором ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», членкорр. РАН, профессором А.В. Ивановым.

Инструкция по применению «Набора препаратов для выявления 6.

антител к бактериям Echerichia coli методом реакции бентонитовой флокуляции». Утв. директором ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности», членкорр. РАН, профессором А.В. Ивановым.

Методология и методы исследований. Методологической основой проведенных исследований явилось обоснование конструирования вакцинного полиантигенного комплекса на основе пилезных антигенов и иммуномодуляторов для профилактики эшерихиоза телят и поросят, иммунотерапевтического композиционного препарата на основе иммуноглобулинов, апифитопродуктов и минеральных сорбентов.

Объектом исследований являлись крупный рогатый скот и свиньи различного возраста (в том числе новорожденные телята и поросята), кровь, внутренние органы мышей, белых крыс, кроликов, а также микроорганизмы и первичные культуры лимфоцитов.

Исследования проводились с использованием следующих методов:

1. Выделение и очистка пилезных антигенов из токсигенных E. coli методом афинной хроматографии.

2. Микроскопические – определение с использованием светового микроскопа тинкториальных и морфологических свойств бактерий в мазках отпечатках из проб органов и культур бактерий.

3. Бактериологические – изучение культуральных характеристик бактерий с использованием методов выделения чистых культур.

4. Биологические – иммунизация разработанными комплексными антигенами и заражение референтными штаммами E. coli лабораторных животных и изучение иммунологических показателей у иммунизированных сельскохозяйственных животных.

5. Серологические – разработка и постановка ИФА, РНГА, реакции бентонитовой флокуляции РА, а также выделение гисто- и сывороточных иммуноглобулинов в соответствии с общепринятыми в иммунологии методами.

6. Токсикологические – в процессе составления многокомпонентных вакцинных и лечебных препаратов определяли их совместимость, безвредность, токсичность, раздражающие свойства в соответствии с общепринятыми в токсикологии, иммунологии, вакцинно-сывороточном деле методами.

7. Статистические – обработку экспериментально полученного цифрового материала проводили с использованием метода вариационной статистики с применением критерия достоверности по Стьюденту на персональном компьютере с использованием программного пакета «Microsoft Excel 2007», «Microsoft Word 2007».

Основные положения, выносимые на защиту:

- Субъединичная противоэшерихиозная вакцина разработанная на основе пилезных антигенов К88, К99, 987Р, аписогенного F41, иммуностимулятора и минерального иммуносорбента индуцирует выработку специфических антител в организме стельных коров и супоросных свиноматок.

- Колостральный иммунитет обеспечивает сохранность телят и поросят в 90-91,8% случаях в очаге колибактериоза.

Композиционный инъекционный препарат «Пабисорб», сконструированный с использованием специфического иммуноглобулина, этанолового экстракта биологически активной кормовой добавки «ВитаФорце М», метаболизма и микрочастиц минерального B.bifidum иммуносорбента – монтмориллонита является нетоксичным и безвредным.

Однократное подкожное введение инъекционного препарата Пабисорб» в дозах 1,0-1,5 см3 оказывает выраженное профилактическое действие при колибактериозе телят, предохраняя от заболевания 60-80% животных.

- Разработаны и утверждены методические указания по диагностике, профилактике колибактериоза телят и поросят с применением средств, полученных на основе бионанотехнологии, диагностические наборы для выявления специфических антител к E. coli в сыворотке крови животных методом ИФА, РНГА и реакции бентонитовой флокуляции (РБФ).

Степень достоверности и апробация материалов диссертации.

Исследования выполнены на большом поголовье лабораторных и сельскохозяйственных животных. Проведен статистический анализ полученного материала с использованием компьютерных программ. Научные выводы и практические предложения теоретически и экспериментально обоснованы, что подтверждается фактическими данными. Они логически вытекают из содержания работы, согласуются с поставленными целью и задачами.

Основные результаты исследований доложены, обсуждены и одобрены на отчетных сессиях ученого Совета ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по рассмотрению отчетов НИР (Казань, 2008-2014), на Международных и Всероссийских научно-практических конференциях (Казань, 2011, 2012, 2013, 2014).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе 18 статей в журналах, рекомендованных ВАК России, 5 нормативных документа.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 313 страницах, состоит из введения, обзора литературы, основной части, заключения, списка сокращенных терминов, списка использованной литературы и 8 приложений.

Загрузка...

Работа иллюстрирована 44 таблицами. Список литературы включает 392 источника, в том числе 88 на иностранных языках.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие сведения о роде Escherichia История рода Escherichia ведет свое начало с 1885 г., когда молодой мюнхенский педиатр Теодор Эшерих, применяя новые методы, разработанные Р. Кохом, выделил в кишечном содержимом новорожденных самые разнообразные бактерии. Одну из них, встречающуюся практически во всех пробах, он назвал Bacterium coli communae (лат. кишечная палочка, присутствующая у всех). С 1958 г. род Escherichia является типовым родом семейства, а E. coli (кишечная палочка) – типовым видом рода [193]. По данным этих авторов серовары E.coli, вызывающие поражения желудочнокишечного тракта у людей разделяют на пять основных групп:

энтеротоксигенные кишечные палочки (ЭТКП), энтероинвазивные кишечные палочки (ЭИКП), энтеропатогенные кишечные палочки, энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП), энтероагрегативные кишечные палочки (ЭАКП) и диффузноадгезивные кишечные палочки (ДАКП).

Все серовары способны быстро колонизировать поверхность кишечного эпителия, несмотря на конкуренцию со стороны нормальной кишечной флоры (в том числе непатогенных E. coli). Для этого бактерии используют мощный аппарат адгезии, включающий как пили и фимбрии, общие для всех эшерихий, так и особые факторы колонизации, позволяющие им «обживать» участки, обычно свободные от бактерий. Однако после колонизации слизистой тонкого кишечника патогенез поражений, вызываемых диареегенными E. coli, приобретает существенные различия, включающие синтез энтеротоксинов (ЭТКП и ЭАКП), инвазию в энтероциты (ЭИКП), повреждение микроворсинок и цитоскелета энтероцитов (ЭПКП и ЭГКП) [193].

Энтеропатогенные кишечные палочки – бактерии составляют первую по времени выделения группу диареегенных E. coli и выступают основными возбудителями диареи у детей. В 1955 г. Э. Нетер ввел в обращение термин 15 «энтеропатогенные E. coli», и акроним ЭПКП (англ. EPEC) существует уже около 50 лет [365]. Наиболее часто заболевания, вызываемые ЭПКП, регистрируют у детей младше 6 месяцев. В экспериментах на добровольцах показано, что после нейтрализации кислого желудочного сока, инфицирующая доза ЭПКП составляет 108-1010 микробных тел [350]. Тем не менее к настоящему времени зарегистрированы эпидемические вспышки и у взрослых [321, 349, 388], а также отдельные случаи инфекции у лиц с сопутствующими заболеваниями (сахарный диабет, ахилия) [349, 380].

Пути передачи возбудителей: фекально-оральный – через инфицированные пищевые продукты и воду, контактный (реже), определенную роль могут играть членистоногие переносчики. Известны случаи госпитальных вспышек [308, 311, 392]. Резервуар возбудителей: дети как с клинически выраженными, так и с бессимптомными инфекциями (основной), взрослые носители, а также, предположительно, крупный рогатый скот [327, 351].

Патогенез поражений включает три этапа: адгезию бактерий на эпителии тонкого кишечника и «сглаживание» микроворсинок каемчатого эпителия кишечника, повреждение цитоскелета энтероцитов и развитие секреторного ответа.

Механизм и адгезии бактерий на эпителии тонкого кишечника и «сглаживание» микроворсинок каемчатого эпителия кишечника следующий:

все гены, необходимые для реализации феномена «прикреплениесглаживание», расположены в хромосомном «острове патогенности» LEE (англ. Locus of enterocyte effacement, локус «сглаживания» энтероцитов). Он включает кластеры генов: esp, esc (англ. E. coli secretion, кластер секреции E.

coli), sep (англ. Secretionof E. coli proteins, кластер секреции E. coli), eae (англ. E. coli attaching and effacing, кластер «прикрепления-сглаживания» E.

coli, кодирующий синтез интимина) и tir [361, 363, 376]. Среди факторов адгезии E. coli выделяют: пили, инфекционные токсины, белок Tir.

Первичное взаимодействие ЭПКП с энтероцитами включает образование первичной, достаточно дистанцированной связи, обусловленной активностью BFP (англ. Bundle-forming pilus, пиля, образующая пучки) IV типа. Свое название получили из-за способности образовывать агрегаты, BFP напоминающие «пучки веревок». Образование BFP кодируют гены плазмиды EAF (англ. Enteropathogenic adherence factor, энтеропатогенный фактор адгезии) [318, 352, 353, 360, 364]. Пили представляют собой филаменты диаметром 7 нм. Терминальные N-последовательности BFP аналогичны таковым у ТСР Vibrio cholera и прочим пилям IV типа. При адгезии на энтероците эти агрегированные пили бактерий устанавливают достаточно прочную «кабельную связь» с рецепторами клетки, после чего кишечные палочки формируют микроколонии на поверхности эпителия, прочно соединенные между собой. Прикрепление бактерий на энтероциты индуцирует образование секреторного комплекса III EspA, EspB и EspD, в энтероцит. При этом образует дополнительный филамент, EspA связывающий бактерию и энтероцит [345]; EspF способствует созданию еще более тесной связи между бактерией и клеткой-мишенью [362, 389]; EspB и EspD нарушают функционирование мембранных сигнальных систем и формируют «поры» в клеточной мембране, через которые инъецируется молекула белка Tir, где она фосфорилируется, образуя рецептор для интимина. Однако ранее считалось, что адгезия ЭПКП индуцирует фосфорилирование тирозин-содержащих белков, главный из которых – тирозин-фосфорилированный белок Нр 90 (90 кДа), встроенный в клеточную мембрану, представляет собой рецептор, с которым взаимодействует мембранный адгезин ЭПКП – интимин (94 кДа), кодируемый еае геном [328, 343, 344, 371, 372, 373]. Tir после фосфорилирования представляет собой димер, мономеры которого имеют вид спирали и формируют замкнутую петлю, располагающуюся между бактерией и клеточной мембраной. К ее проксимальным участкам прикрепляются молекулы поверхностного адгезина ЭПКП – интимина [329, 356]. В последующем происходит повреждение цитоскелета энтероцитов следующим образом: адгезия ЭПКП на эпителиальных клетках in vitro увеличивает в них внутриклеточное содержание Са2+, что существенно уменьшает полимеризацию актина и обуславливает специфические повреждения, вызываемые ЭПКП [310, 322, 369]; фосфорилирование Tir приводит к образованию двух сериновых [390] и одного тирозинового (Y474) производных. Фланкирующие остатки Tir и Y474 взаимодействуют с адаптерным белком Nck [325, 330], который активирует нейронные белки. Первоначально они имеют форму «чаш», но, постепенно удлиняясь, образуют «пьедесталы», на которых располагаются ЭПКП. Пьедесталы состоят из плотно упакованных цитоскелетных белков: актинина, легких цепей немышечного миозина, прикрепленных к клеточной мембране молекулами талина и эзрина [239, 342, 355].

Таким образом, в отличие от многих возбудителей кишечных инфекций, ЭПКП не распознают какие-либо рецепторы для специфической адгезии на энтероцитах, а сами синтезируют его предшественников и «имплантируют» их в клеточную мембрану.

Поражения, вызываемые ЭПКП, причисляют к диареям, а по мнению О.К. Поздеева, Р.В. Федорова [193], это не совсем верно, так как при вызываемых ими поражениях ведущее место принадлежит функциональным нарушениям в энтероцитах, а не развитию воспалительного ответа.

Характерные клинические проявления диареи, вызванной ЭПКП:

выраженная абдоминальная боль, рвота и водянистый стул без примеси крови. Среди прочих форм коли-инфекции заболевания, вызванные ЭПКП, протекают наиболее длительно и могут продолжаться две недели и более.

Большинство эпидемических вспышек вызывают штаммы-продуценты

ST [307, 319, 320, 353, 358, 370, 375, 377]. Патогенез поражений включает:

адгезию бактерий на эпителии тонкого кишечника, выделение токсинов и развитие секреторного ответа.

Адгезия бактерий на эпителии тонкого кишечника осуществляется за счет активности комплекса пилиарных и фимбриальных факторов. Они представляют собой манноза-резистентные адгезины, создающие преимущество ЭТКП в колонизации эпителия перед резидентными штаммами E. coli [309, 320]. По способности к токсинообразованию выделены штаммы бактерий, продуцирующие только ST или LT либо одновременно токсины обоих типов [193, 337, 341].

При этом ST относится к группе мембраноповреждающих токсинов.

Они представлены небольшими мономерными молекулами, состоящими из дериватов цистеина, соединенных дисульфидными мостиками, которые и придают им устойчивость к нагреванию. Выделяют два класса токсинов, существенно различающихся друг от друга. STа (ST1) представлен пептидом, состоящим из 18-19 аминокислот (2 кДа). Синтез токсина кодирует плазмидный, ассоциированный с транспозоном, ген ectА (Escherichia stable toxin A, термостабильный токсин А кишечной палочки) [326]. К настоящему времени более или менее четко охарактеризованы токсины STp (свиной ST, или STIa) и STh (человеческий ST, или STIb). STa не проникает внутрь клеток и воздействует на рецепторы каемчатого эпителия клеток тонкого и толстого кишечника [347], количество которых весьма значительно у детей и с возрастом уменьшается [314]. Рецептором для выступает STa ассоциированная с клеточной мембраной гуанилат циклаза типа С [315, 378, 382, 383]. Активация гуанилат циклазы повышает уровень цГМФ в клетках эпителия, что приводит к нарушению транспорта ионов железа, потере электролитов и/или нарушению всасывания NaCl с последующим выходом жидкости из клеток. По данным авторов [324, 333] STb (ST2) представлен белком, состоящим из 48 аминокислот (5,1 кДа). Синтез токсина кодирует плазмидный ген estB (англ. Eschrrichia stable toxin B, термостабильный токсин В кишечной палочки). Большинство штаммов-продуцентов STb выделено от свиней, но также зарегистрированы случаи выделения подобных ЭТКП и от человека. Токсин вызывает атрофию микроворсинок каемчатого эпителия кишечника [323, 334, 336]. В отличие от STa, он не влияет на уровень цГМФ/ГМФ, но нарушает всасывание электролитов и воды, а также стимулирует секрецию бикарбонатов энтероцитами и высвобождение простагландина Е2 и серотонина. LT относится к группе А/В токсинов. Они представлены высокомолекулярными олигомерами, также разделенными на две группы – LT-I и LT-II, не вызывающие развития перекрестных иммунных реакций. ЭТКП, продуцирующие токсины первой серогруппы, одинаково патогенны для человека и животных. Бактерии, образующие LT-II, чаще выделяют при поражениях животных [379].

Таким образом, установлено, что род Escherichia в настоящее время объединяет 6 видов бактерий, патогенных для человека и животных [50, 193].

При этом практическую ценность в ветеринарном отношении имеет один вид

- E. coli [1, 3, 51]. E. coli (далее просто эшерихии) в естественных условиях обитают в толстом отделе кишечника млекопитающих, птиц, большинства пресмыкающихся, рыб, насекомых а также человека. Выделяясь с фекалиями эшерихии загрязняют почву, воду, пищевые продукты и другие объекты, где могут сохраняться от нескольких недель до нескольких месяцев [4].

В норме эшерихии присутствуют в кишечнике здоровых животных в качестве постоянной микрофлоры. При этом у молодняка старше двадцатитридцати дневного возраста их количество составляет не более 1-2% от всей численности микрофлоры кишечника. В первые же дни после рождения численность эшерихий может достигать до 50 % и более от всего количества кишечной микрофлоры, что определяется особенностями формирования микрофлоры кишечника, и, если при этом среди эшерихий преобладают энтеротоксигенные, и энтеропатогенные варианты, а молодняк ослаблен и имеет недостаточную иммунную защиту, часто возникают желудочнокишечные болезни эшерихиозной природы - эшерихиозы поросят, телят, собак, ягнят, кроликов и птиц; отечная болезнь поросят [96, 97, 98, 99, 100].

Таким образом, токсические вещества кишечной палочки (E. coli) играют значительную роль в инфекционной патологии животных, участвуя в развитии самых различных тяжелых заболеваний (эшерихиозы, диспепсии, энтериты и др.

). Согласно классификации П.Н. Киселева [124], токсические вещества кишечной палочки представлены нейротоксином, эндотоксином, экзотоксином V1, фибринолизином, гемолизином, муцилазой, липазой, протеазой, энтеротоксином [178, 334, 374]. Кроме обычных микробных токсинов, E. coli образует ряд простых токсических соединений (индол, кадаверин, скатол и др.). Эти вещества имеют безусловное значение в патологии, если интоксикация исходит из кишечника, где они образуются в больших количествах: E. coli вырабатывает ингибиторы холинэстеразы, которые являются продуктами распада азотистых соединений тканей [343].

Образование указанных ингибиторов в кишечнике при пониженной активности холинэстеразы крови в летнее время может вызвать диспепсию.

Кроме того, E. coli продуцирует гистамин, который служит причиной развития диспепсии [323, 347].

Поражающее действие термостабильного энтеротоксина объясняют его способностью выделять жидкость в просвет тонкого отдела кишечника, нарушение ритма кишечной перистальтики, что связано с релаксантным его действием на сокращение гладких мышц, индуцирование норадреналином [334]. По данным ряда авторов, термостабильный энтеротоксин E. coli способен изменять активность гуанилатциклазы и эта форма молекулярной патологии может иметь значение не только в патогенезе интоксикации указанным токсином микроба, но и при диареях, вызванных термостабильными энтеротоксинами других видов патогенных штаммов E.

coli [76, 334].

Способность E. coli вырабатывать особый цитотоксин и что с этим фактором связана способность некоторых штаммов E. coli оказывать поражающее действие на клетки фибробластов куриного эмбриона и вызывать дермонекротический эффект, но с помощью кроличьей антисыворотки к цитотоксину удавалось защитить клетки в культуре от лизиса [98].

Проникновение эшерихий из кишечника в кровяную систему вызывает развитие у разных видов животных септицемии, а у свиноматок проявляется симптомокомплекс ММА (метрит-мастит-агалактия). Так же возможно развитие маститов у коров, воспаления слизистых оболочек дыхательных путей, мочеполового тракта, осложнений раневых процессов [186, 187, 188].

1.2 Эшерихиозная диарея телят Эшерихиоз — инфекционная болезнь телят, протекающая в энтеритной форме, а также в виде сепсиса. Сопровождается она профузным поносом, быстрым обезвоживанием организма, явлениями токсикоза и высокой летальностью.

Заразный характер болезни (белый понос новорожденных) был установлен свыше 100 лет назад, задолго до открытия кишечной палочки и выявления этиологической роли, определенных ее типов в возникновении кишечной инфекции новорожденных телят. Болезнь наносит значительный ущерб животноводству, который складывается из стоимости павших телят и снижения роста поголовья скота, затрат больших средств и труда животноводов и ветеринарных специалистов на лечение, а также из снижения продуктивности переболевших телят в последующий период их жизни [207, 208, 210, 211]. Кроме того, установлено, что у переболевших вылеченных телят, по сравнению с неболевшими, живая масса к двухмесячному возрасту на 16-20 кг ниже; переболевшие телята отстают в росте, плохо используют корма и очень восприимчивы к другим болезням.

Исследованиями последних лет установлено, что у больных телят недостаточность функционирования иммунной системы рассматривается как один факторов патогенеза любых патологических процессов, в том числе и при эшерихиозе [11, 60, 175, 210, 269, 270, 271].

Биологические свойства возбудителя эшерихиоза телят.

Возбудитель — энтеропатогенная кишечная палочка с закругленными концами, длиной 2-3 и шириной 0,4-0,6 мкм, факультативный анаэроб, спор и капсул не образует, грамотрицателен, часто обладает подвижностью за счет перитрихиально расположенных жгутиков. Имеет высокую ферментативную активностью — расщепляет с образованием газа и кислоты лактозу, маннит, 22 глюкозу, не образует сероводород, но образует индол, не разлагает мочевины, не разжижает желатин.

У энтеропатогенных эшерихий сложная антигенная структура, содержат они О-антиген (соматический), поверхностный или капсульный Кантиген и жгутиковый Н-антиген. Известно около 170 серогрупп эшерихий, различающихся по О-антигену, 100 разных вариантов К-антигена и около 60 типов Н-антигенов [246, 248].

Соматический О-антиген представляет собой полисахаридо-протеинолипидный комплекс, в котором полисахарид определяет серологическую специфичность О-антигена, липоид — токсичность, а белок — антигенность.

Соматический О-антиген обладает термостабильностью и устойчивостью к химическим веществам: не разрушается при температуре более 100°С в течение 2-х часов и при воздействии нормального раствора соляной кислоты и этилового спирта [339].

Капсульный К-антиген — имеет полисахаридную природу и имеет три типа поверхностных антигенов— L, В и А, которые отличаются один от другого чувствительностью к нагреванию и некоторым химическим соединениям. Из капсульных антигенов термолабильными являются L- и B-, а термостабильным А-антиген (выдерживает нагревание до 100°С в течение 2,5 часа).

Пили эшерихий представляют из себя белковые образования, которые радиально отходят от внешней мембраны микробной клетки.

Первоначально эти образования рассматривались как медиаторы гемагглютинации. Лишь позднее их стали рассматривать как фимбрии, с помощью которых бактерии могут осуществлять функцию адгезии (прикрепления) [53, 54, 55, 350, 352, 360, 363, 364].

Заслуживает внимания механизм взаимодействия антигенов адгезии Е.

coli с эпителиальными клетками кишечника макроорганизма.

У новорожденного молодняка при помощи пилиарных антигенов энтеротоксигенные штаммы E.coli колонизируют чаще слизистую тонкого, реже – толстого отдела кишечника. Контакт адгезивных антигенов кишечной палочки с клетками слизистой кишечника происходит за счет рецепторов, они, как правило, прикрепляются к верхушкам микроворсинок, иногда по всей их длине вплоть до основания, а также к слущивающимся эпителиальным клеткам. В то же время бактериальные клетки без антигенов адгезии в основной своей массе остаются в содержимом просвете кишечника [13, 14, 16, 17, 350].

Антигены адгезии у изолятов E.coli образуются in vivo лучше, чем in vitro. На их синтез in vitro влияют температура выращивания, состав и консистенция питательной среды, наличие в них углеводов, антибиотиков и др. Оптимальная температура выращивания клеток E.coli для синтеза ими антигена К99 и F41 — 37°С [193].

Для продукции клетками E.coli антигенов адгезии пригодны твердые питательные среды: агаровая полусинтетическая среда Минка и ее различные модификации. На этих питательных средах рекомендуется выращивать в течение 18-24 часов. Глюкоза и другие углеводы угнетают синтез адгезина К99 и почти не влияют на продукцию других антигенов адгезии.

Фимбрии обладают хорошо выраженными антигенными свойствами. В условиях эксперимента E.coli с такими фимбриями в состоянии вызывать кишечную форму эшерихиоза у домашних новорожденных животных.

Pearson G. и др. [368] вводили через рот телятам энтеропатогенный штамм Е. coli, имеющий в своем составе пили-антиген К99. Заражали телят в возрасте 6, 10, 16, 26, 27, 29 и 43 ч после рождения, а убивали через 3, 6, 12, 16, 21 и 36 ч после заражения. Установлено, что бактерии прикреплялись к слизистой оболочке всех телят, независимо от срока заражения после рождения. Незначительное количество E.coli достигало нижнего участка тонкой кишки уже через 3 ч после заражения. В последующем распространение бактерий прогрессировало по всей длине кишечника телят.

Патологические изменения в кишечнике имели место уже через 6-12 ч после заражения. Ворсинки были утолщены, укорочены, задерживалось их развитие. Поверхность эпителия была неровной. Заселение тонкой кишки и развитие поражений в результате размножения E.coli происходили довольно быстро, в результате чего уже через несколько часов у зараженных телят появлялась диарея.

Фимбрии К99 имеют спиралевидную форму, чаще всего адгезируются на энтероцитах кишечника, встречаются у 60-100% энтеротоксигенных изолятов E.coli, выделенных при желудочно-кишечных заболеваниях новорожденных телят.

Между адгезином К99 и способностью синтеза термостабильного энтеротоксина у изолятов E.coli существует высокая корреляция, и, следует отметить, что у бактерий, выделенных от поросят, она выражается слабее, чем у бактерий, которые выделены от телят. Так, у телят, больных энтеротоксической формой эшерихиоза, на слизистой подвздошной и тощей кишок находится 69-84% E.coli с К99. Антитела против адгезина К99 в сыворотке крови новорожденных телят, полученных от неиммунизированных коров, встречаются, но редко, в молозиве коров они отсутствуют [316, 317].

В течение последних двух десятилетий получены кардинально новые сведения о детерминантах патогенности возбудителей колибактериоза животных и их молекулярно-генетической характеристики. Ведущими факторами патогенности энтеротоксигенных E.coli являются энтеротоксины, индуцирующие диарейный синдром, и группа термозависимых фимбринальных (нежгутиковых, волосковидных образований) антигенов белковой природы, обеспечивающих адгезию и последующую колонизацию возбудителем тонкого отдела кишечника восприимчивого животного.

Генетические детерминанты указанных факторов локализованы, в основном, на плазмоидных геномах, известных в литературе как плазмиды патогенности [17, 18, 29, 50, 51, 52, 80, 81, 366].

Особенностью антигенов адгезии и термолабильного энтеротоксина является их высокая протективная активность, послужившая предпосылкой для создания на их основе вакцинных препаратов против колидиареи телят, поросят и ягнят.

Уже известно значительное число адгезивных антигенов: К99, K88, F41, 987Р, Att25. От новорожденных телят выделяют Е. coli с адгезивными антигенами К99, F41, Att25. В то же время в ряде случаев выделяют эшерихии, образующие энтеротоксины, но лишенные факторов адгезии [194]. Согласно разработанной системе поиска антигенов адгезии у E.coli, удалось обнаружить штаммы, продуцирующие термозависимый фимбринальный антиген, обозначенный как А20, отличающийся по серологическим свойствам от антигенов К88, К99, 987Р и F41.Выяснилось, что антиген А20 хорошо выращивается на обычных питательных средах при 37°С. При помощи электронной микроскопии установлено, что этот антиген расположен на поверхности бактериальной клетки в виде фимбрий.

Следовательно, указанными авторами впервые выявлен новый термозависимый антиген А20 у эшерихий, вызывающих колидиареи новорожденных телят.

Использование специфической агглютинирующей сыворотки к антигену А20 позволило показать, что штаммы А20 E.coli сравнительно часто выделяются у новорожденных телят с клиникой диареи и они часто обнаруживаются у больных животных в хозяйствах во многих регионах Российской Федерации [157, 203, 204, 205, 206, 227, 229, 230, 231, 234].

На основании результатов многолетних лабораторных исследований патологического материала, полученного от больных и павших животных было сделано заключение о том, что основными возбудителями колидиареи являются эшерихии серогруппы 08, способные синтезировать термостабильный энтеротоксин, антиген адгезии К99 и термостабильный капсульный А антиген. Наличие последнего у эшерихий коррелирует с особенностью морфологии образуемых ими колоний — слизистой консистенции, что необходимо учитывать при бактериологической диагностике колидиареи у телят [40, 48, 242]. Кроме того ими установлено, что наиболее часто возбудители колисептицемии у телят, эшерихий серогруппы 0119, в отличие от Е. coli серогруппы 08А+, не образуют энтеротоксинов и антигенов адгезии. Однако для них характерна способность синтезировать альфагемолизин, колицины и сравнительно высокая вирулентность для белых мышей. Показано, что одни и те же штаммы E.coli серогруппы 08А+ и 0119 в течение длительного времени (год и более) могут циркулировать в хозяйстве и являться причиной энзоотических вспышек колибактериоза. У большинства животных с выраженной диареей, вызванной соответственно эшерихиями серогрупп 08А+ и 0119, возбудитель выделяется с фекалиями в больших концентрациях: приблизительно 30-100% колоний Е.

coli, вырастающих на среде Эндо при посеве пробы кала больного животного, относятся к указанным серогруппам.

Таким образом, наиболее существенными факторами вирулентности E.

coli следует считать: этротоксигенность – продукцию энтеротоксинов, повреждающих кишечный эпителий; адгезивность – способность синтезировать антигены адгезии, посредством которых эшерихии колонизируют энтероциты кишечника макроорганизма и проявляют свое болезнетворное действие; инвазивность – способность проникать в эпителий кишечника с возможным размножением в клетках слизистой или же прохождением через эпителий без размножения с генерализацией или без таковой. Все выше приведенные факторы действуют одновременно и тем самым создают инфекционный процесс т.е. в естественных условиях данные факторы действуют не разрозненно, а комплексно[17,50,98,100,304].

Наиболее важными и частыми сопутствующими и предрасполагающими факторами при возникновении эшерихиозов являются неудовлетворительные условия кормления и содержания матерей до отелов - несбалансированность рационов кормления, нарушение естественной резистентности организма, не соблюдение норм микроклимата, отсутствие активного моциона а также нарушение условий содержания молодняка в первые дни после рождения – запоздалая выпойка молозива и др. [36, 181, 182, 183, 184, 185, 281, 284, 285].

1.2.1 Лечение и профилактика эшерихиоза новорожденных телят Телята при рождении имеют некоторые физиологические особенности, которые снижают их устойчивость к инфекционным заболеваниям, в том числе, и желудочно-кишечным. Так у новорожденных кишечник является абсолютно стерильным и заселение его постоянной (резидентной) нормальной микрофлорой происходит постепенно и заканчивается к 20-25 дневному возрасту. Нормальная микрофлора кишечника имеет обширные и разнообразные физиологические функции, основной из которых выступает создание колонизационной резистентности кишечника – комплекса механизмов, предотвращающих колонизацию кищечника, посторонними, в их числе и патогенными микробами, поддерживающих стабильный видовой и количественный состав нормальной кишечной микрофлоры [15, 179, 180].

В поддержании колонизационной резистентности кишечника ведущую роль отводят лакто- и бифидобактериям. Именно ими в большинстве представлена нормальная микрофлора кишечника – они составляют до 80-90 % от общей численности кишечной нормофлоры. Особенность формирования нормальной микрофлоры стерильного кишечника новорожденного животного после рождения состоит в том, что в течение первых дней жизни теленка заселение кишечника происходит главным образом энтерококками, энтеробактериями, другими аэробными микроорганизмами, в то время, как уже было отмечено выше, уровень физиологической нормы по лакто- и бифидофлоре формируется лишь к 20-25 дневному возрасту. Отсутствие у молодняка, особенно в первые дни жизни, нормальной кишечной микрофлоры, которая способна обеспечивать колонизационную резистентность кишечника, является причиной возникновения и распространения желудочно-кишечных болезней телят инфекционной природы. [18, 28].

Наиболее частыми и важными предрасполагающими причинами, которые играют существенную роль в появлении и распространении массовых желудочно-кишечных болезней телят первых дней жизни 28 выступают: антигенное несоответствие родительских пар, их генетическое несоответствие, различные отклонения при развитии гамет, что часто проявляется в виде повторных осеменений, рассасывания эмбрионов в ранние стадии эмбриогенеза, абортами в ранние сроки стельности; различные отклонения в технологии кормления стельных коров и нетелей, особенно в сухостойный период – недостаточность и несбалансированность рационов кормления по питательным веществам, витаминам, макро- и микроэлементам, нарушение в рационе кальций-фосфорного, сахарпротеинового соотношения. Кормление в течение длительного времени монокормами – бардой, жомом, сенажом, силосом (с содержанием масляной кислоты), скармливание недоброкачественных кормов (мерзлые, испорченные, заплесневелые корма). Все эти факторы, действуя по отдельности или в комплексе, пагубно влияют на весь организм стельных коров, особенно в последнюю треть стельности и нарушают ход всех процессов обмена веществ в организме.

Отмечается, что при внутриутробном развитии теленка в его организме происходят такие же серьезные отклонения от нормального развития, какие патологии наблюдаются в течении обмена веществ и состоянии всего организма стельных коров. Так у телят, полученных от коров, которые в период запуска переболели маститами, обычно, уже на 2-3 дни после рождения появляется диарея[32, 33, 75, 85, 86, 122, 123, 199].



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 9 |
Похожие работы:

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Моторыкина Татьяна Николаевна ЛАПЧАТКИ (РОД POTENTILLA L., ROSACEAE) ФЛОРЫ ПРИАМУРЬЯ И ПРИМОРЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Н.С. Пробатова Хабаровск Содержание Введение... Глава 1. Природные...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.