WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 


Pages:   || 2 |

«РАЗВИТИЕ, ОРГАНИЗАЦИЯ И РЕГЕНЕРАЦИЯ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ СТЕНКИ ВЛАГАЛИЩА ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

ШУРЫГИНА ОКСАНА ВИКТОРОВНА

РАЗВИТИЕ, ОРГАНИЗАЦИЯ И РЕГЕНЕРАЦИЯ

МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ СТЕНКИ ВЛАГАЛИЩА

03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

доктора медицинских наук



Казань - 2014

Работа выполнена в Государственное бюджетной образовательное учреждение высшего профессионально образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации Ямщиков Николай Васильевич

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор заслуженный работник высшей школы РФ

Официальные оппоненты: Баженов Дмитрий Васильевич доктор медицинских наук, профессор член-корреспондент РАН, заведующий кафедрой анатомии ГБОУ ВПО Тверская ГМА Минздрава России, Банин Виктор Васильевич доктор медицинских наук, профессор член-корреспондент РАН заведующий отделом медикобиологических проблем

ГНУ ВИЛАР ФАНО РФ

Павлов Алексей Владимирович доктор медицинских наук, профессор заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии

ГБОУ ВПО ЯГМУ

Минздрава России

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова»

Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита диссертации состоится «20» марта 2015 г. в 10.00 на заседании Диссертационного совета Д 208.034.01 при ГБОУ ВПО Казанский ГМУ Минздрава России (420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49 «Б»).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Казанский ГМУ Минздрава России (420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49 «Б») и на официальном сайте www.kgmu.kcn.ru

Автореферат разослан «___» _________________________2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор Л.Д. Зубаирова Введение. Актуальность темы. Изучение гистофизиологии тканей в нормальных и экспериментально измененных условиях является одним из ведущих направлений современных фундаментальных исследований.

Многочисленные работы морфологов посвящены вопросам структурнофункциональных характеристик мышечной ткани, которая входит в состав стенок большинства полых органов (Баженов Д.В., 1988; Клишов А.А., 1994;

Ямщиков Н.В., 1991; Данилов Р.К., Зашихин А.Л., 1994, 2001; Кузнецов С.Л., 1999; Суворова Г.Н., 2001; Одинцова И.А., 2004; Данилов Р.К., 2008; Gabella G., 1981; Campbell G.H. et al., 1987; Worl J. et al., 2005; Garfield R.E. et al., 2010; Liu R. et al., 2014). Общепризнана ее определяющая роль в нормальном функционировании органов и при развитии реактивных состояний.

В настоящее время усилия ученых направлены на детальное изучение гистофизиологии мышечной ткани внутренних органов, ее органоспецифичности с применением новых методов исследования в нормальных и экспериментальных условиях (Агафонов Ю.А., 1999;

Башилова Е.Н., 2000; Пахтусова Н.В., 2002; Бурыкин И.М., 2004; Бармина А.О., 2008; Gannon B.J. et al., 2000; Gualteri M. et al., 2011; Wanjare M. et al., 2013; Ludlow J.W. et al., 2013).

Однако, до сих пор недостаточно внимания уделялось вопросам эмбрионального и постнатального гистогенеза и гистофизиологии мышечной ткани стенки влагалища млекопитающих. В связи с этим анализ структурнофункциональной организации, особенностей базисных процессов гистогенеза мышечного компонента стенки влагалища половозрелых лабораторных животных представляется весьма актуальным. Аномалии развития и заболевания органов репродуктивной системы во многом определяют увеличение частоты осложнений во время беременности и родов (Краснопольский В.И. и др., 1999; Farage M., Maibach H., 2006; Breech L.L. et al., 2009; Trad M., Palmer S., 2013). Поэтому всестороннее, детальное изучение структурных основ жизнедеятельности мышечной ткани органов женской половой системы является в настоящее время не только важным разделом современной морфологии, но и имеет большое значение в решении проблемы сохранения репродуктивного здоровья женщины. В последние годы многочисленные исследования посвящены изучению гистофизиологии тканей стенки влагалища при пролапсе тазовых органов (Ящук А.Г., Каюмов Ф.А., 2008; Takacs P. et al., 2010; Takacs P. et al., 2011; Kannan K. et al., 2011).





Появляются новые работы в области инженерии тканей, образующих стенку влагалища in vivo (De Filippo R.E. et. al., 2003; Ho M.H. et al., 2009; Gualtieri M. et al., 2011; Shridharan I. et al., 2012; Wanjare M. Et al., 2013; Raya-Rivera A.M. et al., 2014). В связи с чем полученные данные в ходе настоящего исследования могут быть весьма полезными для тканевой инженерии и реконструктивной хирургии.

Данные литературы о межтканевых взаимоотношениях тканей в ходе закладки органа и источниках развития мышечной ткани влагалища противоречивы (Sygalony J.P. et al., 1989; Drews U. et al., 2002; Oh S. J. et al., 2003; Drews U., 2007; Cai Y., 2009; Masse J. et al., 2009; Fritsch H. et al., 2013).

Гладкая мышечная ткань, являясь ведущим структурнофункциональным компонентом трубчатых висцеральных органов, имеет большое значение в их нормальном функционировании, возникновении реактивных состояний и патологии. В настоящее время проведено достаточное количество исследований, посвященных изучению ГМТ сосудов и висцеральных органов (Ямщиков Н.В., Суворова Г.Н., 2003; Созыкин А.А., 2004; Болдуев В.А., 2006; Gabella G., 1984; Chaabane C. et al., 2014). Однако, работы, посвященные эмбриональному и постнатальному гистогенезу, структурной организации гладкой мышечной ткани стенки влагалища млекопитающих в литературе - единичны, а сведения, приведенные в них, противоречивы (Del Vecchio F.R. et al., 1982; Giraldi A. et al., 2002; Basha M.

et al., 2013).

Изучение эмбрионального и постнатального гистогенеза поперечнополосатой мышечной ткани влагалища является практически неизученным вопросом. Само присутствие исчерченной мышечной ткани в стенке влагалища упоминается в некоторых руководствах по гистологии (Быков В.Л., 1999; Leslie P. Gartner, James L. Hiatt, 2007; Michael H. Ross, Wojciech P., 2009) и описана в единичных научных публикациях (LagunesCordora R., Tsutsumi V. et al., 2009, Skocylas L. C., Jallah Z. et al., 2013). При этом, до сих пор, ни одна из современных классификаций тканей однозначно не определяет место исчерченной мышечной ткани влагалища в общей системе мышечных тканей. Дискуссионными в научной литературе являются вопросы о фенотипе поперечнополосатой мышечной ткани, располагающейся в стенке влагалища, особенностях ее структуры и реактивности при различных воздействиях (Rodriguez-Antolin J. et al., 2009;

Martinez-Gomez M. et al., 2009). Данная проблема в настоящее время является одной из наименее изученных.

Анализ структурной организации тканей с позиций учения о гистогенезе и клеточно-дифферонной организации тканей является одним из весьма спорных вопросов современной морфологии. Концепция дифферонной организации тканей, предложенная предложенная А.А.

Клишовым (1990) и получившая свое развитие в работах Н.В. Ямщикова (1997), Зашихина А.Л. (2001), Данилова Р.К. (2000, 2008), Одинцовой И.А.

(2004), позволяет рассматривать ткани как системы взаимодействующих дифферонов. Исследование их реактивных изменений, взаимодействие в репаративном гистогенезе представляет собой интерес не только для морфологии, но и для практической медицины.

Проблема регенерации тканей является актуальной для современной фундаментальной и практической медицины. В классических гистологических работах Н.Г. Хлопина (1946), А.А. Заварзина (1950, 1957,

1986) подчеркивается, что восстановительный потенциал тканей – является одним из важнейших признаков их детерминации. Кроме того, до настоящего времени не решена проблема акушерского травматизма тканей половых путей в родах и его неблагоприятных последствий для организма женщины.

Несмотря на современные способы усовершенствования ведения родов, частота травматизма тканей органов репродуктивного тракта не имеет тенденции к снижению и составляет 10,2-39,0% (Кулаков В.И., Бутова Е.А., 2003). По статистике акушерского травматизма разрыв промежности, в том числе и влагалища, составляет 7-15% у родивших, причем, у первородящих в 2-3 раза чаще, чем у повторнородящих. В связи с чем актуальность изучения регенераторного потенциала мышечной ткани стенки влагалища не вызывает сомнений.

Таким образом, наличие спорных вопросов о ходе эмбрионального и постнатального развития, гистофизиологии и регенерации мышечной ткани стенки влагалища не позволяют иметь целостное представление об этапах развития, базисных процессах гистогенеза мышечной ткани, а также репаративной регенерации мышечного компонента стенки влагалища.

Изучение этих проблем имеет не только важное значение для фундаментальной, но и для практической медицины.

Цель исследования – комплексный морфологический анализ закономерностей эмбрионального и постнатального развития, структурной организации и особенностей регенерации мышечной ткани стенки влагалища млекопитающих.

Задачи исследования

1. Исследовать особенности эмбрионального развития и основные этапы становления структурной организации мышечной ткани стенки влагалища млекопитающих

2. Изучить межтканевые взаимодействия в ходе становления структурной организации влагалища млекопитающих и соотношение мышечного компонента его стенки в дефинитивном состоянии

3. Изучить с помощью гистологических методов исследования организацию гладкой мышечной ткани влагалища у лабораторных животных

4. Исследовать морфофункциональные особенности исчерченной мышечной ткани влагалища у лабораторных животных

5. Провести морфофункциональный анализ гладкой мышечной ткани стенки влагалища у различных видов млекопитающих и исследовать возрастную динамику ее популяции

6. Изучить особенности формирования и структуру дифферонов гладкой и исчерченной мышечной ткани стенки влагалища млекопитающих

7. Определить место гладкой и исчерченной мышечной ткани стенки влагалища в современной классификации мышечной ткани млекопитающих

8. Выявить общие закономерности и особенности реактивности и регенераторные потенции мышечной ткани при различных способах повреждения у лабораторных животных Научная новизна Впервые в рамках одной работы с использованием комплекса современных морфологических методов проведен детальный анализ мышечного компонента стенки влагалища, результаты которого свидетельствуют о наличии в среднем и проксимальном отделах только гладкой мышечной ткани, пучков гладких миоцитов и волокон поперечнополосатой мышечной ткани в дистальном отделе влагалища лабораторных животных.

Комплексный подход к морфологическому исследованию мышечной ткани стенки влагалища лабораторных животных позволил установить особенности пролиферации, специфической дифференцировки, интеграции, запрограммированной клеточной гибели в ходе эмбрионального и постнатального развития. В работе показан неконкурентный характер процессов пролиферации и дифференцировки гладкой мышечной ткани в эмбриональном периоде. С помощью иммуногистохимических маркеров к гладкомышечному актину и кальпонину продемонстрирован гетерохронный характер дифференцировки гладких миоцитов стенки влагалища в постнатальном периоде развития крыс.

Впервые проведено комплексное гистологическое, электронномикроскопическое, гистохимическое, иммуногистохимическое и морфометрическое исследование исчерченной мышечной ткани дистального отдела влагалища млекопитающих, которое указывает на миотомное происхождение этого вида ткани и позволяет по совокупности полученных данных отнести ее к висцеральной несердечной поперечнополосатой мышечной ткани, уточнить ее место в современной классификации тканей.

Приоритетными являются сведения о морфометрических характеристиках гладких мышечных клеток крыс в разные периоды постнатального развития, которые заключаются в констатации факта их более интенсивного роста на первой неделе постнатального развития и в пубертатный период.

Новизной обладают сведения, полученные о структуре популяции гладкой мышечной ткани в разных отделах влагалища у половозрелых крыс.

Получены новые данные о статистически значимых изменениях объемов гладких миоцитов и объемов их ядер в разные фазы эстрального цикла стенки влагалища у крыс. С помощью иммуногистохимического анализа установлены особенности экспрессии -эстрогеновых рецепторов ядрами гладких мышечных клеток в постнатальный период развития.

Новым является факт обнаружения интерстициальных клеток Кахаля в гладкой мышечной ткани стенки влагалища, который подтвержден данными электронной микроскопии и иммуногистохимического анализа к CD-117.

Впервые изучены особенности репаративной регенерации и регенераторные потенции мышечной ткани стенки влагалища при различных способах повреждения. Проведен сравнительный анализ компенсаторноприспособительных и восстановительных процессов мышечной ткани при действии различных повреждающих факторов.

Комплексный морфологический анализ позволил изучить и рассмотреть мышечную ткань стенки влагалища как системы клеточных дифферонов, для которых характерно формирование новых внутридифферонных и междифферонных взаимоотношений в условиях репаративной регенерации.

Практическая и теоретическая значимость В данной работе представлено комплексное сравнительное морфологическое исследование эмбрионального развития мышечного компонента влагалища. Для практической медицины весьма ценными являются сведения о гетерогенности эмбриональных зачатков мышечного компонента влагалища, которые могут быть использованы при дифференциальной диагностике опухолевых заболеваний влагалища.

Установленные в рамках проведенного исследования особенности развития мышечного компонента влагалища у млекопитающих могут быть использованы в практической медицине для понимания формирования врожденных аномалий развития и их коррекции, приобретенной патологии влагалища.

Полученные экспериментальные данные целесообразно использовать для обоснования экстраполяции результатов экспериментов с использованием лабораторных животных на человека.

Полученные данные об основных этапах и закономерностях гистогенеза мышечной ткани стенки влагалища представляют несомненный интерес для эмбриологов и гистологов с целью решения проблем фундаментального характера, в том числе и управления процессами гистогенеза.

Результаты проведенного исследования существенно расширяют современные представления о мышечной ткани стенки влагалища и определяют место исчерченной мышечной ткани в общей классификации тканей. Данные светооптического, электронно-микроскопического, иммуногистохимического, гистохимического, морфометрического анализа структурной организации мышечной ткани влагалища свидетельствуют о том, что она обладает органоспецифичностью.

Сведения о структурной организации мышечной ткани стенки влагалища имеют значение для понимания механизма функционирования влагалища, что имеет существенное значение для практической медицины, а именно для разработки новых методов тканевой инженерии с последующим применением в реконструктивной хирургии при приобретенной патологии органов репродуктивного тракта (пролапс стенок влагалища).

Полученные в результате проведенного комплексного исследования характеристики мышечной ткани могут быть использованы в качестве базовых при проведении экспериментов на лабораторных животных и исследовании различных видов повреждений и врожденных аномалий у человека.

Экспериментальные данные по изучению компенсаторных потенций и механизмов репаративной регенерации мышечной ткани стенки влагалища позволяют определить стадии раневого гистогенеза, критерии жизнеспособности элементов мышечной ткани, источники для репаративной регенерации, а также особенности реактивных изменений гладкой и исчерченной мышечной ткани в зависимости от способа повреждения.

Теоретические результаты работы целесообразно использовать в преподавании соответствующих разделов эмбриологии, гистологии, акушерства, гинекологии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Репаративная регенерация гладкой и поперечнополосатой мышечной ткани стенки влагалища происходит гетерохронно и характеризуется формированием новых внутридифферонных и междифферонных взаимоотношений.

2. Поперечнополосатая и гладкая мышечные ткани стенки влагалища характеризуются собственными линиями миогенной дифференцировки и обладают органоспецифичностью.

Внедрение результатов исследования Результаты исследований используются в учебном процессе на кафедре гистологии и эмбриологии ГБОУ ВПО «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, на кафедре физиологии человека и животных ФГБОУ ВПО «Самарский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации, на кафедре цитологии, гистологии и эмбриологии с курсом медицинской биологии ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации, на кафедре цитологии, эмбриологии, гистологии ГБОУ ВПО «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова Министерства образования и науки Российской Федерации.

Получены патенты на полезную модель Федеральной службы по интеллектуальной собственности (РOСПАТЕНТ):

Ямщиков Н.В., Суворова Г.Н., Шурыгина О.В., Григорьева Ю.В., Коновалов И.В., RU. Лабораторный инкубатор. Патент на полезную модель №92299.

Шурыгина О.В., Ямщиков Н.В., Григорьева Ю.В., Коновалов И.В., RU.

Устройство для дозированного растяжения трубчатых органов лабораторных животных. Патент на полезную модель №145930.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 52 работы, из них 26 – в ведущих рецензируемых российских научных журналах из перечня ВАК РФ, рекомендованного для публикаций основных результатов диссертации на соискание ученых степеней.

Личный вклад автора Приведенные в работе данные получены при личном участии соискателя на всех этапах работы, включая организацию и проведение экспериментов, анализ экспериментальных данных, теоретическое обобщение результатов исследования.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 277 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 272 источника, из которых - 154 иностранные. Иллюстративный материал представлен 3 таблицами, 193 рисунками, которые включают гистограммы, электронограммы и микрофотографии.

Апробация работы Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на итоговых научных конференция Самарского отделения НМОАГЭ (2006); на VIII Конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Орел, 2006), на Всероссийских научных конференциях «Бабухинские чтения в г. Орле»

(Орел, 2006, 2007, 2009, 2011); на Международном научном симпозиуме «Применение современных методов анализа в изучении структуры и функции клетки» (г. Архангельск, 2006); на II Международном эмбриологическом симпозиуме «ЮГРА-ЭМБРИО-2006» «Закономерности морфогенезов в онтогенезе и эксперименте у человека и позвоночных животных» (г. Ханты-Мансийск, 2006); на научно-практической конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в ВУЗе», посвященной 100-летию профессора Л.И. Фалина (г.

Москва, 2007); на Всероссийской конференции с международным участием «Инновационные технологии в трансплантации органов, тканей, клеток (г.

Самара, 2008 г.); на Международной конференции «Морфогенезы в эволюции, индивидуальном развитии и эксперименте», посвященной 80летию профессора П.В. Дунаева (г. Тюмень, 2008); Международной научной конференции, посвященной 65-летию Ивановской школы лимфологов «Актуальные вопросы теоретической, экспериментальной и клинической морфологии» (г. Иваново, 2009), на Всероссийском учебно-научном совещании «Вопросы морфологии XXI века» (г. С-Петербург, 2010); на Международной научной конференции «Фундаментальные исследования»

(Москва, 2012); на IX, Х, ХI Конгрессах Международной ассоциации морфологов (г. Бухара, Республика Узбекистан, 2008 г.; г. Ярославль, 2010;

Самара, 2012); на XII Международном Конгрессе МАМ и VII Съезде ВНОАГЭ (г. Тюмень, 2014).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Для решения поставленных задач в работе было проведено 2 группы экспериментов, в которых в качестве объекта исследований были использованы: белые беспородные крысы различных сроков эмбрионального и постнатального развития, половозрелые самки лабораторных животных (крыса, кошка, собака). Животные содержались в стандартных условиях вивария, уход за ними осуществляли по нормам и правилам обращения с лабораторными животными в соответствии с «Международными рекомендациями по проведении медико-биологических исследований с использованием животных» (1985), с правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ от 19.06.2003 №267) и законом «О защите животных от жестокого обращения» гл. V, ст. 10, 4679-ГД от 01.12.1999. Проведение исследования единогласно одобрено на заседании Комитета по биоэтике при Самарском государственном медицинском университете (протокол №84 от 4.12.2009 г.).

В первой группе было проведено изучение эмбрионального и постнатального развития влагалища. Крыс, с датированным сроком беременности получали по стандартной методике (Методы биологии развития, 1977). Первым днем беременности животных считали день обнаружения сперматозоидов во влагалищных мазках. Плоды необходимых сроков развития получали после вскрытия беременных самок, эвтаназию проводили смертельной дозой эфирного наркоза в соответствии с условиями, изложенными в приказе МЗ РСФСР №754. Изучены плоды самок крыс в возрасте 11-20-х суток эмбрионального развития. Для изучения постнатального развития влагалища брали материал от 1-7- дневных, 2, 3, 4, 5, 6, 8 -недельных крысят, половозрелых крыс, кошек, собак.

Вторая группа опытов поставлена для изучения регенерации мышечной ткани стенки влагалища после различного рода повреждений.

Экспериментальная часть проведена на половозрелых самках крыс массой 100-150 г.

Проведено три серии экспериментов:

1. В первой серии изучали регенерацию мышечной ткани влагалища после дозированного экспериментального растяжения с помощью устройства для дозированного растяжения трубчатых органов лабораторных животных.

Патент на полезную модель №145930.

2. Во второй серии эксперимента изучали реактивные изменения мышечной ткани стенки влагалища и восстановление их целостности в условиях рассечения. В асептических условиях с применением интубационного эфирного наркоза проводили полное продольное рассечение стенки влагалища с последующим наложением швов.

3. В третьей серии эксперимента изучали регенерацию мышечных тканей после химической альтерации. В качестве повреждающего фактора использовали 3-х кратное применение 36%-раствора ваготила, который вводили во влагалище с помощью марлевого тампона на 3 минуты. Ваготил относится к клинико-фармакологической группе антисептиков, выпускается в виде раствора для наружного и местного применения, является антибактериальным препаратом.

Материал забирали на 3, 5, 7,10,12, 15, 21, 30 сутки от начала эксперимента.

–  –  –

В работе использованы:

Гистологические методы. Для проведения световой микроскопии использовали фиксацию материала в 10% нейтральном формалине на фосфатном буфере (рН-7,4), заливку в парафин, после чего готовили фронтальные, сагиттальные и поперечные срезы толщиной 5-6 мкм, окрашивали гематоксилином и эозином, по Ван-Гизон.

Метод щелочной диссоциации тканей с получением изолированных клеток. Для получения изолированных клеток использован метод щелочной диссоциации тканей по В.Я. Бродскому (1983 г.).

Фрагменты влагалища фиксировали в холодном 10% нейтральном формалине на фосфатном буфере (рН-7,0), затем промывали проточной водой и измельченные кусочки органа переносили в 50% раствор КОН на 12 час. Далее материал помещали в холодную дистиллированную воду на 1 сутки. После 2-х часовой экспозиции при комнатной температуре, воду заменяли на свежую и с помощью магнитной мешалки производили окончательное разделение клеток.

Гистохимический метод. Определение гистохимического профиля поперечнополосатой мышечной ткани влагалища проводили с помощью реакции выявления сукцинатдегидрогеназы по стандартной методике Нахласа (Пирс Э., 1962).

Электронно-микроскопический метод. Для электронной микроскопии использовали префиксацию в 2,5% глутаральдегиде на 0,2 М ка-кодилатном буфере (рН 7,4), фиксацию в 1% ОsО4 и заливали в аралдит.

Для обеспечения прицельного электронно-микроскопического анализа получали серийные полутонкие срезы толщиной 1-2 мкм, которые окрашивали 1% раствором метиленового синего. После идентификации необходимых объектов проводили заточку блоков. Прицельные ультратонкие срезы толщиной помещали на сетки. После контрастирования срезов в 2,5% растворе уранилацетата на 50% этиловом спирте и 0,3% растворе цитрата свинца по E.S. Reynolds, срезы просматривали в электронном микроскопе Hitachi-HU-12.

Иммуногистохимический метод. Иммуногистохимическое исследование проводили в соответствии со стандартными протоколами.

Использовали систему визуализации Ultra Vision ONE c применением моноклональных антител:

1) Моноклональное антитело к маркеру клеточной пролиферации ki-67 (ядерный антиген клеточного деления) – для идентификации клеток, находящихся в митотической, G1, S, G2 фазах клеточного цикла: не окрашиваются ядра клеток, находящихся в фазе покоя G0, клон SP6 (Labvision, США)

2) Моноклональное антитело РСNA – отражает общий уровень синтеза ДНК как в делящихся клетках, так и в полиплоидизирующих, клон PC10 (Labvision, США)

3) Моноклональное антитело к кальпонину - для определения степени дифференцировки гладкой мышечной ткани, клон CALP (Labvision, США)

4) Моноклональное антитело к -гладкомышечному актину – для идентификации гладкой мышечной ткани, клон 1А4 (DACO, Дания)

5) Моноклональные антитела к коллагену II, III, IV, VI, VIII типов – для определения типов коллагена в тканях мышечной оболочки влагалища (DACO, Дания)

6) Моноклональное антитело к -эстрогеновые рецепторы – для идентификации эстрогеновых рецепторов в тканях, клон Н 226 (Labvision, США);

7) Моноклональное антитело к CD 117– для идентификации клеток Кахаля, клон 104D2(DACO, Дания).

После депарафинизации и регидратации срезов осуществляли демаскировку антигенов кипячением образцов в 10 М цитратном буфере на водяной бане. Визуализацию результатов после иммуногистохимической реакции с моноклональными антителами проводили с помощью непрямой стрептавидинбиотиновой пероксидазной реакции. Срезы докрашивали гематоксилином Карацци и заключали в глицерин-желатину. Контролем чувствительности и специфичности реакции служили неиммунизированные кроличьи и мышиные сыворотки, а также срезы контрольных тканей.

Морфометрический метод. Для морфометрического исследования использовали мазки изолированных гладких моцитов. Измерение линейных размеров гладких миоцитов и их ядер производили в двух взаимноперпендикулярых направлениях с помощью программы обработки и анализа изображений Image Tool версии 3.0. В соответствии с полученными цифровыми данными вычисляли объем гладких миоцитов и их ядер (Хесин Я.Е., 1967). Расчеты производили, используя формулу эллипсоида: V = 1/6 a2b, где (a – малый диаметр, b – большой диаметр измеряемого объекта). По вычисленным объемам рассчитывали показатели ядерно-цитоплазменного отношения (ЯЦО) по формуле: ЯЦО = Vядра/(Vклетки-Vядра).

Статистическое исследование данных проводили с использованием статистического пакета SPSS одноименной фирмы.

Проверка данных на соответствие нормальному распределению состояла из следующих процедур:

а) построение гистограмм с наложенной нормальной кривой и нормальных вероятностных графиков; б) проверка на соответствие нормальному распределению одновыборочным тестом Колмогорова-Смирнова. Для описания выборочной совокупности данных использовали средние значения со стандартной ошибкой среднего показателей или стандартным отклонением, для определения статистически значимых различий между значениями показателей в группах данных были использованы непараметрические критерии Манна-Уитни (для двух независимых групп) и Крускала-Уоллиса (для более чем двух независимых групп).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ

Источники развития и ранние стадии гистогенеза мышечной ткани стенки влагалища (эмбриональный гистогенез) В развивающихся органах репродуктивной системы (15,5-16,5 сутки эмбрионального развития крыс) клетки мезенхимы парамезонефральных протоков, прилежащие к эпителию, дифференцируются в фибробласты, чтобы образовать слизистую оболочку, наиболее отдаленные мезенхимные клетки дифференцируются в гладкие миоциты мышечной оболочки проксимального и среднего отделов стенки влагалища. Клетки мезенхимы располагаются как одиночно, так и небольшими скоплениями. Большинство мезенхимных клеток характеризуется высоким показателем ядерно цитоплазменного отношения (1,64±0,73), митотический индекс составляет 5,54±0,65%. По своей ультраструктурной организации они соответствуют промиобластам. Между ними начинают врастать нервные волокна, обладающие, по всей вероятности, индуцирующим влиянием на запуск процесса миогенной дифференцировки. Обнаружение первых миофиламентов в цитоплазме клеток свидетельствует о старте миофиламентогенеза и появлении первых миобластов, которые обладают высокой пролиферативной активностью 4,35±0,54%. Проявления дивергентной дифференцировки мезенхимных клеток дистальных отделов парамезонефральных протоков в элементы гладкой мышечной ткани отмечаются на 15,5-16,5 сутки пренатального развития крыс, становясь очевидными на 17,5 сутки. К концу 17,5 суток начинается формирование кластеров из двух - трех клеток с образованием протяженных простых контактов и десмосом между ними.

На 18,5-19,5 сутки пренатального развития крыс митотический индекс клеток в формирующейся мышечной оболочке составляет 3,86±0,23%, ядерно-цитоплазменное отношение 1,49±068. Усиливается гетероморфность и гетерохронность морфологической дифференцировки, что подтверждается обнаружением клеток на разном этапе процесса дифференцировки. Уровень развития сократительного аппарата соответствует малодифференцированным гладким миоцитам. С увеличением количества миофиламентов, они занимают не только периферическую часть клетки, но и области цитоплазмы, расположенные ближе к ядру, формируют толстые пучки. Клетки с подобной ультраструктурой соответствуют дифференцирующимся гладким миоцитам.

Ядерно-цитоплазменное отношение снижается до 1,03±044, митотический индекс составляет 3,24±0,31%. Эти данные свидетельствуют о том, что процесс специфической дифференцировки начинает несколько опережать процесс пролиферации. До этого дифференцировка не мешала активной пролиферации клеток, и они не были конкурентными.

На 19,5-20,5 сутки пренатального развития крыс, наряду с дифференцировкой гладких мышечных клеток, осуществляется их частичная элиминация. Среди нормально развивающихся гладких миоцитов отмечаются клетки в состоянии апоптоза. Вероятно, это объясняется конкуренцией среди гладких мышечных клеток за факторы, влияющие на их рост и дифференцировку. По нашему мнению, источником подобных факторов на этом этапе развития могут являться нервные элементы.

К концу эмбриогенеза на дистальном конце формирующегося органа обнаруживается закладка симпластических структур поперечнополосатого компонента, что определяется скоплением клеток, напоминающих своим строением промиобласты. Дифференцируясь, эти клетки становятся миобластами. Их размеры увеличиваются, развивается цитоплазма и органеллы общего значения. Митотический индекс малодифференцированных клеток составляет 3,83±0,46%. Следует отметить, что в дистальном отделе влагалища мышечный компонент характеризуется наличием элементов разной степени дифференцировки: от делящихся промиобластов до мышечных трубочек, что свидетельствует об активно протекающих процессах специфической дифференцировки. Также, как и дифференцировка гладкомышечных элементов, дифференцировка мышечных волокон характеризуется гетерохронностью. В этот период развития крыс обнаруживаются группы клеток, образующих между собой протяженные контакты. В результате слияния миобластов возникают первые миотубы. Практически сразу после этого начинается миофибриллогенез.

Диаметр мышечных трубочек в среднем составляет 6,26±1,62 мкм.

Гетерохронность развития элементов поперечнополосатой мышечной ткани отчетливо проявляется на этапе образования мышечных трубочек. В более дифференцированных миотубах ядра часто имеют глубокие инвагинации оболочки, расширенное перинуклеарное пространство и очень высокое содержание гетерохроматина, что свидетельствует о запуске апоптотических процессов. Необходимо подчеркнуть, что образование всех основных структурных компонентов клеток происходит в пренатальном гистогенезе, а процессы окончательной ультраструктурной организации происходят на постнатальном этапе гистогенеза. В ходе дифференцировки гладких миоцитов происходит не только усложнение ультраструктурной организации, но и усложнение уровня межклеточных контактов. Анализ данных пролиферативной активности и специфической дифференцировки гладкой мышечной ткани стенки влагалища позволяет сделать вывод о том, что процессы пролиферации и дифференцировки построены на основе неконкурентного типа. Эта же закономерность выявлена и раннее другими исследователями для гладкой мышечной ткани бронхов, мочевого пузыря, прямой кишки (Зашихин А.Л., 1994, 1995, 1997; Агафонов Ю.В., 1997;

Суворова Г.Н., 2001).

Источником развития исчерченной мышечной ткани дистального отдела влагалища служат миобласты, которые, скорее всего, мигрировали из зачатков мышц промежности. Гетерохронность развития мышечных элементов поперечнополосатой исчерченной мышечной ткани дистального отдела влагалища в процессе специфической дифференцировки наиболее отчетливо проявляется в период слияния миобластов, когда некоторые клетки уже содержат сформированные миофибриллы, а часть миобластов лишена сократительных структур. В процессе специфической дифференцировки для исчерченной мышечной ткани влагалища характерна последовательная смена стадий развития: промиобласты, миобласты, мышечные трубочки и миосимпласты.

Постнатальный гистогенез и структурная организация мышечной ткани стенки влагалища Сразу после рождения и в течение первой недели постнатального развития крыс митотический индекс клеток гладкой мышечной ткани стенки влагалища составляет в среднем 2,86±0,65%, то есть активность процессов пролиферации сохраняется. Вместе с тем об активно протекающей специфической дифференцировке свидетельствуют результаты проведенного иммуногистохимического исследования к основным белкам-маркерам гладкой мышечной ткани - -гладко-мышечному актину и кальпонину.

Причем, разная степень окрашивания гладких мышечных клеток свидетельствует о разной степени их дифференцировки, то есть о гетерохронном характере процесса специфической дифференцировки. При иммуногистохимическом исследовании к коллагенам разных типов соединительной ткани мышечной оболочки влагалища определена положительная экспрессия коллагена III типа. При исследовании на чувствительность -эстрогеновых рецепторов тканей стенки влагалища у новорожденных крыс, выявлена положительная экспрессия ядрами не только базального и парабазального слоев эпителия, но и гладких миоцитов мышечной оболочки влагалища.

Исследование ультраструктуры гладкой мышечной ткани стенки влагалища у новорожденных крыс обнаруживает гетероморфность популяции ее клеток. Следует отметить, что на первой неделе постнатального развития темп процессов специфической дифференцировки и интеграции повышается. Гладкие миоциты могут иметь разную электронную плотностью цитоплазмы, что объясняется, в первую очередь, разными темпами дифференцировки и, соответственно, разным количеством миофиламентов в цитоплазме. Гладкие мышечные клетки еще имеют многочисленные отростки, между ними устанавливаются многочисленные и разнохарактерные межклеточные связи. В клетках хорошо развит кавеолярный аппарат; много рибосом и полисом, которые необходимы для интенсивно протекающего миофиламентогенеза.

В популяции гладкой мышечной ткани стенки влагалища встречаются клетки, находящиеся на разных стадиях апоптоза. Результаты проведенного исследования, как и ранее полученные данные Суворовой Г.Н. (2001), Созыкиным А.А. (2004) по исследованию гистогенеза гладкой мышечной ткани других внутренних органов, подтверждают сведения об обнаружении большинства гибнущих апоптозом клеток в конце эмбрионального и раннем постнатальном периодах.

После рождения крыс в дистальном отделе стенки влагалища интенсифицируется процесс дифференцировки исчерченных мышечных компонентов. При иммуногистохимическом исследовании часть мышечных волокон дистального отдела влагалища обнаруживает положительную экспрессию к миозину типа II, что свидетельствует об интенсивно протекающих процессах специфической дифференцировки. В образовавшихся к концу эмбриогенеза миотубах происходит значительное увеличение объема цитоплазмы, начинает формироваться саркомерная организации миофибрилл, можно различить формирующиеся Z- линии.

Наряду с миофибриллами, в цитоплазме можно различить и отдельные пучки миофиламентов. Ускорение развития симпластов после рождения достигается, по-видимому, за счет встраивания миобластов не только в терминальных участках, но и на их боковых поверхностях.

Для раннего постнатального периода гистогенеза гладкой и исчерченной мышечной ткани характерна гетероморфность клеточной популяции. В гладкой мышечной ткани при электронно-микроскопическом исследовании обнаруживаются и делящиеся мышечные клетки, и малодифференцированные, и дифференцирующиеся. Последний тип клеток, имеющих в своей цитоплазме миофиламенты и хорошо развитый синтетический аппарат, относится к миоцитам синтетического типа и расценивается рядом исследователей, как популяция молодых клеток, (Зашихин А.Л., 1994; 2001; Агафонов Ю.В., 1999). Активно происходит процесс интеграции клеток: между терминальными участками соседних клеток образуются комплементарные интердигитации, большую площадь занимают длинные десмосомоподобные контакты, способствующие объединению клеток в пучки, отмечаются простые контакты и формирующиеся щелевидные контакты. Таким образом, в ранний постнатальный период развития крыс в мышечной ткани стенки влагалища продолжается процесс пролиферации, но активность его постепенно снижается, и интенсивно протекает процесс дифференцировки, сопровождающийся, с одной стороны, установлением межклеточных коммуникаций, а с другой – частичной гибелью клеток.

В возрасте 1 месяца постнатального развития крыс поперечнополосатая мышечная ткань имеет структуру мышечных волокон. Гладкая мышечная ткань представлена клетками всего гистогенетического ряда.

Пубертатный период у крыс начинается в 8 недель постнатального развития. В этот период с помощью иммуногистохимического метода обнаруживается положительная экспрессия -эстрогеновых рецепторов ядрами клеток базального и парабазального слоев эпителия, а также гладких миоцитов мышечной оболочки влагалища. Причем, плотность окрашивания в пубертатный период значительно плотнее, чем у новорожденных. G. Pelletier (2000) считает, что у новорожденных особей женского пола обнаруживаются эффекты действия, вероятнее всего, материнских гормонов. По мнению ряда исследователей (Farage M., Maibach H., 2006), основные органоспецифические изменения происходят в пубертатный период, в течение менструального цикла, во время беременности и менопаузы.

Результаты применения метода щелочной диссоциации тканей с получением изолированных клеток показывают, что у новорожденных и крысят первой недели постнатального развития гладкие миоциты полиморфны по своей форме: встречаются и отростчатые, и веретеновидные клетки. Изучение мазков изолированных клеток позволяет проследить особенности цитокинеза гладких миоцитов различной степени дифференцировки. В гладких мышечных клетках с небольшим количеством миофиламентов цитокинез включает в себя формирование борозды деления, межклеточного мостика и разделение клеток. У дифференцированных миоцитов цитокинез, вследствие хорошо развитого сократительного аппарата и необходимости преодоления препятствия в виде крупных пучков миофиламентов, происходит с некоторым опозданием или цитокинез не происходит вообще, в связи с чем встречаются единичные двуядерные мышечные клетки, как следствие ацитокинетических митозов в ранний постнатальный период.

Анализ линейных параметров гладких миоцитов, полученных методом щелочной диссоциации тканей, является одним из маркеров, позволяющих оценить формирование популяции и судить о темпах дифференцировки гладкой мышечной ткани стенки влагалища. Исследование объема гладких мышечных клеток у крыс в постнатальный период развития показало неуклонный рост этого параметра клеток (таблица 2).

Таблица - 2. Морфометрические показатели гладких миоцитов стенки влагалища в постнатальный период развития крыс

–  –  –

Примечание: *- величина значимо (p0,05) отличается от аналогичной в следующем периоде.

В течение первой недели постнатального развития характер нарастания объема гладких миоцитов достаточно интенсивный, затем наступает некоторая стабилизация этого показателя, и следующий пик активности приходится на пубертатный период, что, по-видимому, обусловлено влиянием женских половых гормонов. Биохимический механизм действия эстрогенов, связан со стимуляцией синтеза РНК в клетках и тканях репродуктивных органов, вследствие чего изменяются скорость и объем биосинтеза белков. Увеличение содержания эстрогенов стимулирует транслокацию рецепторов к эстрадиолу из цитоплазмы в ядро. По мнению G.

Pelletier (2000), увеличение содержания ядерного рецептора коррелирует с клеточным ростом.

Метод щелочной диссоциации тканей позволяет также идентифицировать волокна поперечнополосатой мышечной ткани дистального отдела влагалища и провести оценку изменений диаметра мышечных волокон.

Средние данные диаметров мышечных волокон в постнатальный период представлены на рисунке 1.

Рисунок 1 - Динамика изменения диаметра мышечных волокон поперечнополосатой мышечной ткани дистального отдела влагалища крысы в постнатальный период.

Таким образом, в постнатальный период развития процессы гистогенеза мышечной ткани стенки влагалища продолжаются, они активно протекают до пубертатного периода. Однако, рост и нарастание объема мышечного компонента происходит к периоду половой зрелости, что сопровождается продолжающимися процессами дифференцировки, запрограммированной клеточной гибели, интеграции и адаптации к выполняемым функциям.

Дефинитивная организация мышечной ткани стенки влагалища.

Клеточно-дифферонная организация гладкой и исчерченной мышечной ткани влагалища взрослых самок Методами светового и электронно-микроскопического исследования подтверждено наличие двух видов мышечной ткани в стенке влагалища.

Специализированных межклеточных контактов между ними не обнаружено.

Электронно-микроскопическое исследование исчерченной мышечной ткани дистального отдела влагалища у половозрелых самок млекопитающих свидетельствует, что поперечнополосатая мышечная ткань имеет типичное симпластическое строение. Наличие миосателлитоцитов, обнаружение положительной экспрессии ядрами мышечных волокон поперечнополосатой мышечной ткани влагалища к миогенину указывает на ее миотомное происхождение.

Определение гистохимического профиля поперечнополосатой мышечной ткани дистального отдела влагалища показывает, что по критерию активности сукцинатдегидрогеназы исчерченная мышечная ткань стенки влагалища представлена всеми типами мышечных волокон: окислительными (39,2%), гликолитическими (29,4%), окислительно-гликолитическими (31,4%).

Проведенный морфологический анализ мазков изолированных клеток показал, что в пределах одной возрастной группы животных гладкие миоциты значимо (p0,05) различаются по размерам. Средний объем гладкомышечных клеток у половозрелой крысы составляет 3602,60±275,22 мкм3. Причем, в дистальном отделе влагалища средний объем клеток составляет 2278±133,26 мкм3, в среднем отделе – 2716,82±175,34 мкм3, в проксимальном отделе - 4879,31±234,48 мкм3, то есть имеет место нарастание средних объемов клеток от к дистального к проксимальному отделу влагалища. Изучение гладкой мышечной ткани свидетельствует о том, что в разные фазы эстрального цикла у половозрелых крыс объем гладких миоцитов, их ядер и ядерно-цитоплазменное отношение отличаются (таблица 3).

Таблица 3 - Морфометрические показатели гладких миоцитов мышечной оболочки влагалища половозрелых крыс в зависимости от стадий эстрального цикла.

–  –  –

Примечание: * - величина значимо (p0,05) отличается от соответствующей в следующей фазе По-видимому, колебания морфометрических показателей гладких миоцитов стенки влагалища связаны с изменением гормонального фона, что согласуется с результатами морфометрического анализа Созыкина А.А.

(2004) при изучении миометрия крыс в разные фазы эстрального цикла.

Объем клеток, среди других морфометрических показателей, является наиболее вариабельным, и гистограммы распределения объемов гладких миоцитов носят нормальный характер, на основании чего можно судить о неоднородности гладкой мышечной ткани и позволяет выделить группы малых, средних и больших клеток и оценить структуру популяции.

Популяция дефинитивной гладкой мышечной ткани стенки влагалища крыс образована субпопуляциями малых, средних и больших миоцитов, представленной на рисунке 2.

Рисунок 2 - Организация гладкой мышечной ткани влагалища половозрелой крысы На представленных ниже диаграммах (рисунок 3) показано однонаправленное нарастание средних объемов гладких миоцитов от дистального к проксимальному отделу влагалища.

Рисунок 3 - Организация гладкой мышечной ткани в разных отделах влагалища половозрелой крысы Это обусловлено перестройкой структуры популяции гладкой мышечной ткани и проявляется в увеличении доли больших и снижении малых миоцитов. Выявленные различия организации гладкой мышечной ткани различных уровней влагалища обусловлены, скорее всего, функционально. С помощью метода щелочной диссоциации тканей и морфометрического анализа нами установлено, что у других лабораторных животных, средний объем гладких миоцитов стенки влагалища составляет 2901,44±60,75 мкм3 (кошка) и 2718,28±77,17 мкм3 (собака).

Дефинитивная гладкая мышечная ткань стенки влагалища лабораторных животных обладает следующими клеточными фенотипами (по данным электронной микроскопии): сократительные («светлые» и «темные»

миоциты, в зависимости от функционального состояния клеток), синтетические и промежуточные (сократительно-синтетические) лейомиоциты. Первый фенотип специализирован на функцию сокращения, хотя в определенной мере они обладают и синтетической активностью.

Синтетические миоциты содержат хорошо развитые органеллы белкового синтеза, комплекс Гольджи, много митохондрий, гранул гликогена, миофиламенты сконцентрированы на периферии клеток. По степени зрелости этот фенотип часть исследователей (Шубникова Е.А., Юрина Н.А., Гусев Н.Б. и др., 2001) относят к малодифференцированным. В них может постепенно увеличиваться объем миофиламентов, а доля синтетического аппарата уменьшаться. Промежуточный фенотип (сократительносинтетический) является переходным, в пределах которого возможна смена фенотипа клеток. По степени дифференцировки их целесообразно отнести к дифференцирующимся клеткам.

Проведенное иммуногистохимическое исследование к CD117 демонстрирует наличие интерстициальных клеток Кахаля среди гладких миоцитов и подтверждает данные электронно-микроскопического изучения организации гладкой мышечной ткани влагалища.

С позиций клеточно-дифферонной организации тканей в эмбриональном гистогенезе поперечнополосатой мышечной ткани, в результате дивергентной дифференцировки, из миотомных предшественников формируются два дифферона – миосателлитоциты и миосимпласты, которые сохраняются на протяжении всего онтогенеза.



Pages:   || 2 |


Похожие работы:

«Крапивкина Эмилия Дмитриевна НЕМОРАЛЬНЫЕ РЕЛИКТЫ ВО ФЛОРЕ ЧЕРНЕВОЙ ТАЙГИ ГОРНОЙ ШОРИИ 03.00.05 – Ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Томск – 2007 Работа выполнена на кафедре ботаники ГОУ ВПО «Кузбасская государственная педагогическая академия» и в Гербарии им. П.Н. Крылова ГОУ ВПО «Томский государственный университет». Научный консультант: доктор биологических наук, профессор Ревушкин Александр Сергеевич Официальные...»

«РАДУГИНА Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – Биология развития, эмбриология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2015 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Исследования в области регенерации, начавшиеся еще в XVIII веке, вновь приобрели актуальность с появлением современных методов исследования....»

«Дандал Али Шебли ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Владимир-2015 Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ) Россельхознадзора и в ФГБАОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» Научный руководитель: Макаров Владимир...»

«УДК 572 БОНДАРЕВА Эльвира Александровна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ВЫСОКОКВАЛИФИЦИРОВАННЫХ СПОРТСМЕНОВ И ИХ АССОЦИАЦИИ С ПОЛИМОРФНЫМИ ГЕНЕТИЧЕСКИМИ СИСТЕМАМИ 03.03.02 – «антропология» по биологическим наукам АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2011 Работа выполнена в...»

«БЕРЕЗИНА Елена Сергеевна ПОПУЛЯЦИОННАЯ СТРУКТУРА, ОСОБЕННОСТИ МОРФОЛОГИИ И ПОВЕДЕНИЯ И РОЛЬ ДОМАШНИХ СОБАК И КОШЕК В РАСПРОСТРАНЕНИИ ПРИРОДНО-ОЧАГОВЫХ ИНФЕКЦИЙ В РОССИИ 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Омск – 2015 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный педагогический университет» и ФБУН «Омский НИИ...»

«Костюнин Александр Евгеньевич ФАУНА И ЭКОЛОГИЯ ПИЛИЛЬЩИКОВ И РОГОХВОСТОВ (HYMENOPTERA, SYMPHYTA) ЮГО-ВОСТОКА ЗАПАДНОЙ СИБИРИ 03.02.05 – энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2015 Работа выполнена в лаборатории филогении и фауногенеза ФГБУН Института систематики и экологии животных СО РАН Легалов Андрей Александрович Научный руководитель: доктор биологических наук Никитский Николай Борисович...»

«Панкина Илона Анатольевна Технология приготовления пищевого белкового полуфабриката из зерна люпина узколистного (L. angustifolius L.) и кулинарной продукции на его основе Специальность 05.18.15 Товароведение пищевых продуктов и технология продуктов общественного питания Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург Диссертационная работа выполнена на кафедре технологии и организации питания ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский...»

«ГЛУЩЕНКО ЛАРИСА АЛЕКСАНДРОВНА СТРУКТУРА ФИТОПЕРИФИТОНА В ОЦЕНКЕ КАЧЕСТВА ВОДЫ РАЗНОТИПНЫХ ВОДНЫХ ОБЪЕКТОВ БАССЕЙНА РЕКИ ЕНИСЕЙ Специальность 03.02.10 гидробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Красноярск 2010 Работа выполнена в ФГАОУ ВПО «Сибирский федеральный университет» на кафедре водных и наземных экосистем Института фундаментальной биологии и биотехнологии Научный руководитель: кандидат биологических наук, профессор...»

«НИКОЛЬСКИЙ Павел Александрович СИСТЕМАТИКА И СТРАТИГРАФИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ЛОСЕЙ (ALCINI, CERVIDAE, MAMMALIA) В ПОЗДНЕМ КАЙНОЗОЕ ЕВРАЗИИ И СЕВЕРНОЙ АМЕРИКИ Специальность 25.00.02 – Палеонтология и стратиграфия АВТО РЕФЕРАТ диссерт ации на соискани е ученой ст епени кандидат а геолого-минералогически х наук Москва – 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Геологическом институте РАН Научный...»

«Берко Татьяна Владимировна Продуктивность и воспроизводительные Качества птицы родительского стада кросса «хайсекс коричневый» при использовании В кормлении тыквенного жмыха, Обогащенного биодоступной формой йода 06.02.10 – частная зоотехния, технология производства продуктов животноводства АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Волгоград – 2015 Диссертационная работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном...»

«Забелина Ольга Николаевна ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ПОЧВЫ ГОРОДСКИХ РЕКРЕАЦИОННЫХ ТЕРРИТОРИЙ НА ОСНОВАНИИ ПОКАЗАТЕЛЕЙ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ (НА ПРИМЕРЕ Г. ВЛАДИМИРА) Специальность 03.02.08 – экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир 2014 Работа выполнена на кафедре биологии и экологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования...»

«Фомина Светлана Григорьевна ПЕЙЗАЖ ЭНТЕРОВИРУСОВ У ДЕТЕЙ С ОСТРОЙ КИШЕЧНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ 03.02.02. – вирусология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной» Роспотребнадзора. Новикова Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Надежда Алексеевна...»

«Арбузова Елена Николаевна ПРОЕКТИРОВАНИЕ РЕФЛЕКСИВНОЙ СИСТЕМЫ ОБУЧЕНИЯ С ПРИМЕНЕНИЕМ ИННОВАЦИОННОГО УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА ПО МЕТОДИКЕ ОБУЧЕНИЯ БИОЛОГИИ Специальность 13.00.02 – Теория и методика обучения и воспитания (биология, уровень профессионального образования) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора педагогических наук Москва Работа выполнена на кафедре биологии, экологии и методики обучения биологии ГБОУ ВПО города Москвы «Московский...»

«БУДАНОВА Мария Геннадьевна ФЛОРА СОСУДИСТЫХ РАСТЕНИЙ ГОРОДА ОМСКА 03.00.05 Ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2003 Работа выполнена на кафедре ботаники Томского государственного университета. Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор А. С. Ревушкин Официальные оппоненты: доктор биологических наук, ст. н. с. Е. Е. Тимошок кандидат биологических наук, ст. н. с. С. Н. Выдрина Ведущая организация:...»

«КИРИЛЛОВА Ольга Сергеевна АГАРИКОИДНЫЕ БАЗИДИОМИЦЕТЫ НАЦИОНАЛЬНОГО ПАРКА «РУССКИЙ СЕВЕР» (ВОЛОГОДСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность 03.00.24 – микология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова Научный руководитель...»

«ВОЛЬХИН ИВАН АЛЕКСАНДРОВИЧ ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ КОРРЕКЦИИ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА РАЗЛИЧНЫМИ ФОРМАМИ ПИРАЦЕТАМА 06.02.01 – Диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Казань-2015 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Ижевская государственная...»

«ПОДОСОКОРСКАЯ ОЛЬГА АНДРЕЕВНА НОВЫЕ АНАЭРОБНЫЕ ТЕРМОФИЛЬНЫЕ ЦЕЛЛЮЛОЛИТИЧЕСКИЕ МИКРООРГАНИЗМЫ Специальность 03.02.03 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт микробиологии им. С.Н. Виноградского Российской академии наук (ИНМИ РАН) Научный руководитель: Бонч-Осмоловская Елизавета Александровна доктор биологических наук...»

«АЛЕКСАНДРОВА Антонина Юрьевна РЕОРГАНИЗАЦИЯ АКТИНОВОГО ЦИТОСКЕЛЕТА, ЛЕЖАЩАЯ В ОСНОВЕ ДВИЖЕНИЯ КЛЕТОК 03.03.04 клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской Академии медицинских наук Российском онкологическом научном центре имени Н.Н. Блохина РАМН, Отделе математических методов в биологии НИИ физико-химической биологии им. А.Н. Белозерского, МГУ им....»

«МАРКУШЕВА ТАТЬЯНА ВЯЧЕСЛАВОВНА БАКТЕРИИ-ДЕСТРУКТОРЫ ФЕНОЛА И ЕГО ХЛОРИРОВАННЫХ ПРОИЗВОДНЫХ 03.02.03 – «Микробиология» АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Уфа – 201 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт биологии Уфимского научного центра РАН Научный консультант: Еникеева Светлана Ахметовна доктор медицинских наук, профессор Официальные оппоненты: Вахитов Венер Абсатарович доктор биологических наук, профессор...»

«Перфильева Ксения Сергеевна ЭВОЛЮЦИЯ ЖИЛКОВАНИЯ КРЫЛЬЕВ МУРАВЬЕВ (HYMENOPTERA, FORMICIDAE) 03.00.09 – энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2007 Работа выполнена на кафедре биологической эволюции Биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Длусский Геннадий Михайлович Официальные оппоненты: доктор биологических...»







 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.