WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

«РЫБНЫЕ КОЛЛАГЕНЫ: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ

ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

«ВОРОНЕЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИНЖЕНЕРНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ»

На правах рукописи

БОЛГОВА Светлана Борисовна

РЫБНЫЕ КОЛЛАГЕНЫ: ПОЛУЧЕНИЕ, СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ



Специальность: 05.18.07 - Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ Диссертация на соискание ученой степени кандидата технических наук

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор технических наук, профессор Антипова Людмила Васильевна Воронеж – 2015

СОДЕРЖАНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Источники коллагенов

1.2 Современные представления о структуре и свойствах коллагенов 14

1.3 Опыт и тенденции применения коллагеновых субстанций в отраслях экономики

ГЛАВА 2. ПОСТАНОВКА ЭКСПЕРИМЕНТА, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Характеристика объектов исследований и условия эксперимента 42

2.2 Порядок проведения экспериментов

2.3 Общие методы исследования

2.4 Инструментальные и специальные методы исследования 47 ГЛАВА 3. Исследование сырья и обоснование параметров получения коллагеновых дисперсий

3.1 Обоснование выбора источников рыбного коллагена 57

3.2 Гистоморфологическая характеристика и химический состав исследуемого сырья

3.3 Исследование условий и разработка режимов получения коллагеновых дисперсий

3.4 Идентификация структурных особенностей коллагена 71

3.5 Оценка качества и безопасности коллагеновых дисперсий 72 ГЛАВА 4. Исследование свойств коллагеновых субстанций

4.1 Определение аминокислотного состава

4.2. Исследование электрофоретической подвижности коллагеновых белков

4.3 Электронно-микроскопический анализ коллагеновых дисперсий 78

4.4 Сравнительная оценка суммарных ароматов коллагеновых дисперсий различного происхождения

4.5 Изучение структурообразования коллагеновых дисперсий 86 ГЛАВА 5. Разработка рекомендаций по рациональному применению коллагеновых дисперсий

5.1 Использование коллагеновых дисперсий в технологиях пищевых продуктов

5.2 Проведение

–  –  –

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Рыба и рыбные продукты являются важным компонентом в пищевом рационе, а для населения ряда стран - основным продуктом питания. Сложившаяся политическая ситуация и санкции Евросоюза, США и других сторонников существенно отразились на жизни нашей страны.

Продуктовое эмбарго лишило Россию ряда импортного сырья и продуктов, в том числе рыбных. [78,143] Поэтому развитие прудового рыболовства и аквакультуры является актуальным, перспективным и поддерживается Правительством РФ, о чем свидетельствуют важнейшие стратегические документы: «Водная стратегии Российской Федерации на период до 2020 года», «Стратегия развития рыбохозяйственного комплекса Российской Федерации на период до 2020 года», «Доктрина продовольственной безопасности Российской Федерации на период до 2020 года» от 24 апреля 2012г. №1853п-П8, в которой выделяются следующие приоритеты:

• Биофармацевтика и биомедицина с подпрограммой «Биосовместимые материалы»;

• Пищевая биотехнология с подпрограммами «Глубокая переработка пищевого сырья», «Функциональные пищевые продукты, включая лечебные, профилактические и детские», «Пищевые ингредиенты, включая витамины и функциональные смеси».

Производство прудовой рыбы постоянно растет. Этому способствует увеличивающийся спрос на недорогую рыбу и умелое использование экономических рычагов для развития отрасли. [116,122] Увеличение производства подразумевает разделку и переработку, а, следовательно, большое количество побочных продуктов, которые в лучшем случае идут на удобрения или кормовую муку, а в худшем просто на свалку.

Многие из этих отходов содержат функциональный биополимер коллаген – белок, который благодаря своим уникальным физико-химическим свойствам нашел применение во многих отраслях промышленности.





В Российской Федерации нет предприятий, получающих коллагеновые белки из рыбного сырья. Имеются данные [117] о перспективе организации производства морского коллагена (из кожи морских рыб) на Дальнем Востоке. Но сейчас этот проект только на стадии НИОКР.

На сегодняшний день в России имеется всего два предприятия, производящих коллаген: ОАО «Лужский завод «Белкозин» г. Луга Ленинградской области, построенный еще в советский период и крупнейший в России промышленный комплекс по производству коллагена на базе Верхневолжского кожевенного завода в г. Осташкове Тверской области, открывшийся в феврале 2015 года. До его появления практически весь коллаген импортировался российскими пищевыми заводами из Бразилии и стран Европы [79]. Оба предприятия используют коллагенсодержащее сырье животного происхождения, преимущественно спилок шкур крупного рогатого скота.

По данным газеты «Ведомости» компания «Норд Плас» планирует открытие предприятия по производству коллагена и желатина в особой экономической зоне «Новоорловская» (ОЭЗ) Санкт-Петербурга. В качестве источников коллагена и желатина, так же используется животное сырье. Ввод в эксплуатацию намечен на третий квартал 2015 года. [1,82] Крупнейшими зарубежными производителями коллагеновых белков различного направления использования являются: Япония, Китай, Польша, Германия, США, Дания, Бразилия и Чехия.

Степень разработанности темы Новые сведения по поиску и использованию коллагенсодержащего сырья, полученного из прудовых рыб, представляют большой интерес и открывают перспективы в создании рациональных, экологически чистых, безотходных технологий функциональных пищевых продуктов, получении эффективных и безопасных медицинских, фармацевтических и косметических средств.

В России значительный вклад в изучение источников, свойств, способов получения и применения коллагенов внесли работы Л.В. Антиповой, А.И.

Сапожниковой, Н.В. Меспоровой И.А. Глотовой, О.П. Дворяниновой, С.А.

Сторублевцева, Ю.В. Болтыхова, А.Г. Хаустовой, Н.В. Черниги, Э.М. Расулова, В.И. Воробьва, И.М. Чернухи, И.А. Рогова и др.

Исследования проводили в Воронежском государственном университете инженерных технологий, в рамках Государственного задания №2014/22 НИР №3017 «Биотехнологии переработки сельскохозяйственных животных и рыб в обеспечении продовольственной безопасности страны».

Результаты данной диссертационной работы легли в основу заявки на конкурс Фонда содействия малых форм предприятий в научно-технической сфере по программе «Участники молодежного научно-инновационного конкурса»

(У.М.Н.И.К.) с темой: «Создание отечественных натуральных косметических средств из рыб внутренних водоемов» (руководитель Сторублевцев С.А.) на 2015г. (договор № 0011554 6217ГУ/2015 от 26.06.2015г.), которая стала победителем.

Цель работы – состоит в обосновании условий создания отечественного производства коллагеновых субстанций рыбного происхождения для обеспечения различных секторов экономики.

В рамках поставленной цели были сформулированы и решались следующие основные задачи:

провести патентно-информационный поиск, обосновать выбор сырьевых объектов;

гистоморфологическая характеристика, химический и фракционный состав рыбных шкур как источника функциональных биополимеров;

разработать технологию получения коллагеновых белков, обосновать параметры и режимы обработки рыбных шкур;

идентифицировать и изучить свойства коллагеновых дисперсий;

выявить структурные особенности коллагеновых белков животного и рыбного происхождения;

оценить биологическую безопасность в опытах in vivo и функциональную эффективность коллагеновой дисперсии;

разработать практические рекомендации по использованию рыбных коллагенов в пищевой промышленности и при получении косметических средств;

разработать проекта технической документации на новый вид продукции;

провести апробацию результатов исследований, дать оценку экономической эффективности новых технических решений.

Научная новизна Результаты информационно-патентного поиска показали целесообразность использования рыбного сырья в качестве альтернативного источника коллагеновых белков. На основание гистоморфологической идентификации коллагеновых белков в рыбных побочных продуктах переработки, анализа общего химического состава, количественного соотношения фракций аминокислотного состава белков в качестве источника предложено использовать шкуру толстолобика – наиболее распространенной рыбы прудовых хозяйств ЦЧР.

Выявлены закономерности растворения коллагеновых белков шкуры под действием химических реагентов в результате чего обоснованы условия получения коллагеновых дисперсий. Идентификация состава аминокислот показала близость к аналогам животного происхождения, отклонения обозначают особенности физико-химических свойств методом электрореза и атомно-силовой микроскопии доказано, что для рыбных коллагенов характерна более выраженная электрофоретическая подвижность, молекулярная масса лежит в области 212 кДа, рыбные коллагены характерны выраженными ФТС. Комплекс свойств рыбных коллагенов позволяет обосновать рациональные пути использования в качестве пищевой добавки, съедобных покрытий и в составе основ для косметических средств. Коллагеновые субстанции безопасны, что доказано в опытах in vivo на теплокровных животных.

Теоретическая и практическая значимость работы Теоретическая значимость диссертационной работы обусловлена комплексом исследований направленных на изучение особенностей строения и свойств коллагенов животного и рыбного происхождения.

Разработана и обоснована технология, отвечающая принципам рационального природопользования, обеспечивающая получение биологически безопасной и эффективной коллагеновой дисперсии, для различных отраслей экономики.

Разработан и утвержден проект технической документации на субстанцию коллагеновую 2 %-я (ТУ 9283-001-02068108-2015). Проведена промышленная апробация производства рыбных котлет в коллагеновом пленочном покрытии в кафе «Виктория», г. Бобров, Воронежская обл.; коллагеновой дисперсии рыбного происхождения ООО «ЛДЦ Альдомед плюс» г. Лиски, Воронежской обл., подтвердившая положительные результаты исследований.

Методология и методы диссертационного исследования Методологическая основа диссертационного исследования включает в себя комплекс общенаучных и специальных методов. Основой исследований является изучение современных представлений о структуре и свойствах, технологии получения и применения коллагенов различного происхождения. Данная программа научных исследований основана на принципах рационального природопользования и направлена на совершенствование ресурсосберегающих и энергоэффективных технологий получения коллагеновых дисперсий из шкур рыб.

Научные положения, выносимые на защиту.

• технология получения коллагеновых дисперсий;

• результаты сравнительного анализа свойств коллагенов животного и рыбного происхождения;

• обоснование технических решений по применению коллагеновых дисперсий в получении функциональных пищевых продуктов и косметических средств.

Степень достоверности Достоверность данных, полученных в результате исследований, основывается на строгих доказательствах и использовании математических методов. Научные положения, выводы и рекомендации, представленные в диссертационной работе, обоснованы и подтверждены экспериментальными исследованиями.

Апробация результатов.

Основные положения и результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на международных, всероссийских научно-практических конференциях: «Научные перспективы ХХI века. Достижения и перспективы нового столетия» (Новосибирск, 2015), International congress industrial-academic networks in cooperation activities for Pharmaceutical, chemical and food fields (L`Aquila, 2014), «Продовольственная безопасность: научное, кадровое и информационное обеспечение» (Воронеж, 2014), «Российская аквакультура:

состояние, потенциал и инновационные производства в развитии АПК» (Воронеж, 2012), «Биология – наука ХХI века» (Пущино, 2015), «Инновации и решения в косметической индустрии», «Инновационные разработки молодых ученых воронежской области на службу региона» (Воронеж, 2015), LIII отчетной научной конференции преподавателей и научных сотрудников ВГУИТ за 2014 г.

Разработка экспонировалась на 6-ой межрегиональной специализированной выставке «Ваше здоровье» в рамках 4-го социального форума «Здоровый мир – курс на долголетие (г. Воронеж, 2014 г.), VII выставке-фестивале моды и красоты «Идеаль» (21-23.11.2014г.) (получена награда «За инновационный продукт отечественного производства») Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Диссертационная работа соответствует 3, 5, 10 и 14 пунктам паспорта специальности 05.18.07 - «Биотехнология пищевых продуктов и биологических активных веществ».

По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, 11 статей и тезисов докладов, подана заявка на патент РФ.

Структура и объем работы. Диссертационная работа состоит из введения, глав, выводов, списка литературы из 149 наименований и 4 приложений.

Основное содержание работы

изложено на 159 страницах машинописного текста, содержит 47 рисунков и 26 таблиц.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Источники коллагенов

Коллагены широко применяются в различных областях промышленности.

Однако, производители, как правило, не акцентируя внимание на том, какой именно вид коллагена добавлен в тот или иной продукт.

На современном рынке фигурируют три разновидности коллагена: животный, морской и растительный.

Наиболее известным, изученным и применяемым является животный коллаген, который начали получать с 30-х годов ХХ века из отходов кожевенного производства (краевые участки шкур, гольевой спилок шкур, гольевая спилковая обрезь шкур, сухожилия крупного рогатого скота (КРС), гольевой спилок шкур свиней) и отходы мясной промышленности (костная ткань) [138]. Но из-за губчатой энцефалопатии (болезни бешенства КРС) и угрозы передачи вируса человеку, коллаген животного происхождения снят с производства в западных странах. [41,73,90,92] По мнению Сапожниковой А.И., попадание шкур от больных животных на предприятия по переработке кожевенного сырья, где в результате операций золения и двоения шкур образуются гольевая спилковая обрезь, являющаяся сырьем для получения коллагена, полностью исключено благодаря тщательному многократному ветеринарно-санитарному контролю.

Кроме того в процессе получения коллагена животное сырье подвергается действию концентрированных щелочей и органических кислот [125]. По мнению других источников [74], прионы (безвредные клеточные белки, обладающие природной способностью превращаться в устойчивые структуры, вызывающие смертельно опасные заболевания, в том числе коровье бешенство. Они не содержат нуклеиновые кислоты, чем и отличаются от известных микроорганизмов: вирусов, бактерий, грибков), устойчивы к распространенным методам дезинфекции: высоким температурам, замораживанию, высушиванию, химической обработке спиртами, формальдегидом, кислотами, и ферментами.

Даже автоклавированием (134 °C - 18 минут) не достигнуть полного разрушения прионов, способность которых вызвать заражение сохраняется.

Некоторые специалисты считают, что в коллагене наземных животных меньше полезных свойств, нежели в растительном и морском. Из-за большого размера молекул он не доступен глубоким слоям кожи. Но подобный вид коллагена отлично подходит для производства косметических средств в сфере ногтевой и парикмахерской индустрии, где необходим поверхностный эффект.

Поэтому его добавляют в препараты для восстановления структуры волос, смягчения кожи рук, стоп, области локтей. [89] Морской коллаген начали добывать из кожи морских рыб примерно с 70-х годов ХХ века. Многие исследователи уделяют ему особое внимание, потому что рыбий коллаген минимально отличается от человеческого. И, на удивление, более приближен к нему по биохимическому составу, чем коллаген крупного рогатого скота. Однако для того, чтобы косметика с морским коллагеном была действительно эффективной и оказывала выраженное омолаживающее действие, необходимо сохранение его трехспиральной структуры. [89] Получению коллагеновых белков из гидробионтов в настоящее время уделяется много внимания, потому что они обеспечивают дефицит коллагенов животного происхождения.

В 2000 г. в Европе был запущен проект, объединивший семь крупных компаний и научно-исследовательских институтов по изучению рыбного коллагена. Голландский НИИ рыбного хозяйства (RIVO), являясь ведущей организацией данного проекта, предлагает применять коллаген в косметической и фармацевтической промышленности для производства кремов и носителей.

Ученые считают, что коллаген может быть основой искусственной кожи, для людей с серьезными ожогами, позволяющей снизить риск возникновения инфекционных заболеваний. [55] В университете Хоккайдо учеными созданы искусственные кровеносные сосуды из коллагена, полученного из кожи лосося.

Изобретение с успехом прошло клинические испытания на крысах, которым заменили аорты новыми искусственными сосудами.[56] Приверженцы морского коллагена отмечают: температура денатурации животного коллагена слишком высока для проникновения в кожу, в то время как морской коллаген более приспособлен для подобного проникновения. Но необходимо помнить, что средства с таким коллагеном могут вызывать аллергию.

Кроме того, он легче разрушается при низких температурах, чем коллаген животного происхождения, поэтому разработчиками предъявляются весьма строгие требования к организации его производства, транспортировке и хранению. Это обусловливает высокую стоимость средств с морским коллагеном[119].

Первую эффективную гидратацию коллагена из шкур пресноводных рыб, используя органические кислоты, произвел в 1985 году коллектив химиков из Гданьска Мечислав Скродски, Антони Михневич и Генрик Куява. В 1989 году они получили патент № 144584 на открытый ими «Метод производства раствора коллагена».[41] В последующие годы другие польские химики разрабатывали и совершенствовали этот метод. В результате в 2003 году был получен водный раствор коллагена в виде дермокосметологического препарата. В 2007 году была издана (и переиздана в 2009 году с тем же названием) монография «Коллаген.

Новая стратегия сохранения здоровья и продления молодости» украинских ученых С.А. Батечко и А.М. Ледзевирова, посвященная открытию польских биохимиков.

Недавно появились российские сведения о возможности получения коллагеновых субстанций из рыб внутренних водоемов [8,29,41,75,76,145], которые проявили некоторые преимущества, по сравнению с морскими. В частности аллергенности, хранимости, стоимости.

В связи с существующей угрозой заражения человека от животного, возникает вопрос о возможности заражения от рыб. Они, как и крупнорогатый скот, могут являться переносчиками заболеваний опасных для человека. Чаще всего они вызываются паразитами, например: дифиллоботриоз, опистархоз, гнастомоз, меторхоз и д.р. Обезвредить зараженную рыбу можно с помощью посола, глубокой заморозки и длительной термообработки.[42,72,93,99] К тому же при выделении коллагена сырье обрабатывают химическими реактивами (щелочь, перекись, органические кислоты), которые так же оказывают дезинфицирующий эффект.

Что касается растительного коллагена (фитоколлагена), то он хорошо усваивается кожей, но добывать его труднее, чем животный: не все компании могут себе позволить производство косметических препаратов, содержащих такой вид коллагена.

Загрузка...
[119] На самом деле коллаген - это белок животного происхождения, а то, что называют «растительным коллагеном», представляет собой гидролизированный протеин пшеницы (известны и другие источники), обладающий свойствами растворимого коллагена и являющийся наиболее подходящей альтернативой натуральному коллагену животного происхождения. Однако принципиальная разница в составе аминокислот, а именно отсутствие оксипролина и оксилизина, ставят под сомнение аналогичность биологического действия препарата. [53] По мнению автора [61], если на упаковке косметического средства не указан источник коллагена, то, скорее всего он человеческий. Человеческий коллаген получают от доноров, трупов, плаценты и абортированных плодов и имеет низкую вероятность аллергических реакций.

Так же выделяют микроколлаген. Названием микроколлаген определяются, в основном, небольшие белковые молекулы (олигопептиды), которые имитируют фрагменты природного коллагена. Эти молекулы оказывают влияние на выработку коллагена и других элементов дермы. Микроколлаген создается в биотехнологических лабораториях и модифицируется путем добавления жировых молекул, которые повышают его устойчивость и позволяют ему лучше проникать через эпидермальный барьер.[119] В лаборатории Джеффри Хартгеринка (Jeffrey Hartgerink) в Университете Уильяма Марша Райса (Rice University) несколько лет назад была разработана компьютерная модель для расчета стабильной структуры коллагеновых цепочек.

[18] По этой модели был получен синтетический аналог коллагена.

Синтетический пептид длиной в 36 аминокислотных остатков способен формировать тройную спираль и насыщаться водой до формирования гидрогеля.

Учеными было проведено испытание гемостатических свойств нового материала.

Результат показал, что синтетического коллагена связывает тромбоциты и активирует их, способствует их агрегации. Это значительно ускоряет остановку кровотечения, и при этом не обнаруживается признаков воспаления. [18] Поиск новых источников коллагеновых белков, изучение их структуры и свойств является предметом исследований многих ученых. Это объясняется появлением современных, высокоточных методов исследования и оборудования, которые дают возможность глубже изучить строение и свойства этих белков. В развитии отечественного производства коллагенов следует признать приоритетность направления по получению рыбных коллагенов.

1.2 Современные представления о структуре и свойствах коллагенов

В организме человека содержится свыше 50 000 индивидуальных белков, отличающихся первичной структурой, конформацией, строением активного центра и функциями. Белки построены из 20 химически различных аминокислот, каждая из которых может занимать любое положение в полипептидной цепи.

Кроме того, белки различаются количеством аминокислот, из которых они построены.[29,41,44,107,109,142] Коллаген - основной структурный белок межклеточного матрикса. Он составляет около 30% общего количества белка в организме, то есть - 6% массы тела. Название "коллаген" объединяет семейство близкородственных фибриллярных белков, которые являются основным белковым элементом кожи, костей, сухожилий, хряща, кровеносных сосудов, зубов. В разных тканях преобладают разные типы коллагена, а это, в свою очередь, определяется той ролью, которую коллаген играет в конкретном органе или ткани, то есть прижизненными функциями. Распределение коллагена в тканях и органах представлено в таблице 1.1

–  –  –

Например, в пластинчатой костной ткани, из которой построено большинство плоских и трубчатых костей скелета, коллагеновые волокна имеют строго ориентированное направление: продольное - в центральной части пластинок, поперечное и под углом - в периферической. Это способствует тому, что даже при расслоении пластинок фибриллы одной пластинки могут продолжаться в соседние, создавая, таким образом, единую волокнистую структуру кости.

Поперечно ориентированные коллагеновые волокна могут вплетаться в промежуточные слои между костными пластинками, благодаря чему достигается прочность костной ткани. В сухожилиях коллаген образует плотные параллельные волокна, которые дают возможность этим структурам выдерживать большие механические нагрузки. В хрящевом матриксе коллаген образует фибриллярную сеть, которая придат хрящу прочность, а в роговице глаза коллаген участвует в образовании гексагональных решток десцеметовых мембран, что обеспечивает прозрачность роговицы, а также участие этих структур в преломлении световых лучей. В дерме фибриллы коллагена ориентированы таким образом, что формируют сеть, особенно хорошо развитую в участках кожи, которые испытывают сильное давление (кожа подошв, локтей, ладоней), а в заживающей ране они агрегированы весьма хаотично.

В межклеточном матриксе молекулы коллагена образуют полимеры, называемые фибриллами коллагена. Фибриллы коллагена обладают огромной прочностью и практически нерастяжимы. Они могут выдерживать нагрузку, в 10 000 раз превышающую их собственную массу. По прочности коллагеновые фибриллы превосходят прочность стальной проволоки того же сечения. Именно поэтому большое количество коллагеновых волокон, состоящих из коллагеновых фибрилл, входит в состав кожи, сухожилий, хрящей и костей.[47,107] Необычные механические свойства коллагенов связаны с их первичной и пространственной структурами. Молекулы коллагена состоят из трх полипептидных цепей, называемых -цепями. Идентифицировано более 20 цепей, большинство которых имеет в своем составе 1000 аминокислотных остатков, но цепи несколько отличаются аминокислотной последовательностью.

В состав коллагенов могут входить три одинаковые или разные цепи.[47,109] Первичная структура -цепей коллагена необычна, так как каждая третья аминокислота в полипептидной цепи представлена глицином, около 1/4 аминокислотных остатков составляют пролин или 4-гидроксипролин, около 11% аланин. В коллагене отсутствуют такие аминокислоты, как цистеин и триптофан, гистидин, метионин и тирозин находятся лишь в очень небольшом количестве.

В составе первичной структуры -цепи коллагена содержится также необычная аминокислота гидроксилизин. Полипептидную цепь коллагена можно представить как последовательность триплетов Гли-X-Y, где X и Y могут быть любыми аминокислотами, но чаще в положении X стоит пролин, а в положении Y

- гидроксипролин или гидроксилизин. Каждая из этих аминокислот имеет большое значение для формирования коллагеновых фибрилл.[44,47] Пролин благодаря своей структуре вызывает изгибы в полипептидной цепи, стабилизируя левозакрученную спиральную конформацию. На один виток спирали приходится 3 аминокислотных остатка, а не 3,6, как это характерно для вторичной структуры глобулярных белков. Спираль пептидной цепи коллагена стабилизирована не за счт водородных связей (так как пролин их не образует), а силами стерического отталкивания пирролидиновых колец в остатках пролина. В результате расстояние между аминокислотными остатками по оси спирали увеличивается, и она оказывается более разврнутой по сравнению с туго закрученной -спиралью глобулярных белков.[44,109,142] Спирализованные полипептидные цепи, перевиваясь друг около друга, образуют трехцепочечную правозакрученную суперспиральную молекулу, называемую тропоколлагеном (рис. 1.1). Цепи удерживаются друг около друга за счт водородных связей, возникающих между амино- и карбоксильными группами пептидного остова разных полипептидных цепей, входящих в состав трхспиральной молекулы. "Жесткие" аминокислоты - пролин и гидроксипролин ограничивают вращение полипептидного стержня и увеличивают тем самым стабильность тройной спирали. Глицин, имеющий вместо радикала атом водорода, всегда находится в месте пересечения цепей; отсутствие радикала позволяет цепям плотно прилегать друг к другу.

В результате такого скручивания пептидных остовов полипептидных цепей и наличия удлиненной структуры два других радикала из триады аминокислот Глиоказываются на наружной поверхности молекулы тропоколлагена.

X-Y Некоторые комплементарные участки молекул тропоколлагена могут объединяться друг с другом, формируя коллагеновые фибриллы, причем эти участки расположены таким образом, что одна нить тропоколлагена сдвинута по отношению к другой примерно на 1/4 (рис. 1.2) [44,47,142]. Между радикалами аминокислот возникают ионные, водородные и гидрофобные связи.

Рис. 1.1 - Строение молекулы тропоколлагена (фрагмент)

Рис. 1.2 - Строение коллагеновой фибриллы (фрагмент) Важную роль в формировании коллагеновых фибрилл играют модифицированные аминокислоты: гидроксипролин и гидроксилизин.

Гидроксильные группы гидроксипролина соседних цепей тропоколлагена образуют водородные связи, укрепляющие структуру коллагеновых фибрилл.

Радикалы лизина и гидроксилизина необходимы для образования прочных поперечных сшивок между молекулами тропоколлагена, ещ сильнее укрепляющие структуру коллагеновых фибрилл. Кроме того, к гидроксильной группе гидроксилизина могут присоединяться углеводные остатки (гликозилирование коллагена), функция которых пока неясна.

Таким образом, аминокислотная последовательность полипептидных цепей коллагена позволяет сформировать структуру, с уникальными механическими свойствами, которая обладает огромной прочностью. Изменение в первичной структуре коллагена может привести к развитию наследственных болезней.

Рисунок 1.3 – Синтез коллагена Предшественник коллагена синтезируется на рибосомах.

Прежде чем превратиться в зрелую форму он подвергается значительной модификации в эндоплазматическом ретикулуме и аппарате Гольджи. Отщепление сигнального пептида (1) приводит к образованию проколлагена. Молекула проколлагена несет длинный пропептид. Затем следует гидроксилирование остатков пролина и ряда остатков лизина (2). Некоторые остатки гидроксилизина дополнительно гликозилируются (3). Окисление остатков цистеина приводит к образованию дисульфидных связей (4), которые обеспечивают правильное скручивание полипептидных цепей в тройную спираль (5). Прежде чем секретироваться в межклеточное пространство, молекула проколлагена проходит стадии модификации и правильной сборки. В процессе транспорта через плазматическую мембрану отщепляются N- и С-концевые пропептиды (6). Коллаген выходит из клетки и в результате ступенчатой сборки образует микрофибриллы (7). аминогруппы некоторых остатков лизина подвергаются ферментативному окислению с образованием альдегидных групп (8). На последнем этапе происходит конденсация (9) с образованием внутри- и межмолекулярных поперечных связей, в результате коллагеновые фибриллы приобретают окончательную структуру, которая характеризуется большой прочностью на разрыв и высокой устойчивостью к действию ферментов - протеиназ. [29,47] Долгое время считали, что фибриллярный коллаген отвечает только за предохранительные и опорные функции. Открытие новых типов коллагена показало, что для них характерно большое функциональное разнообразие. Но уникальными белковыми объектами коллагены делает разнообразие уровней организации, на которых происходит функционирование коллагеновых полипептидов.

На сегодняшний день известно более двух десятков различных коллагенов.

Для некоторых из них до сих пор продолжается расшифровка первичной структуры – цепей, но брутто состав уже известен для многих коллагеновых субъединиц. Тем не менее, продолжают появляться данные об обнаружении новых типов коллагенов. [13,17,123].

При изучении коллагена, полученного из различных органов, выяснилось, что он состоит из разных молекул, которые отличаются друг от друга аминокислотным составом и физико-химическими параметрами, но имеют одинаковую молекулярную массу. Так же обнаружено, что это различие обусловлено существованием нескольких разновидностей -цепей, которые кодируются разными генами (Никитин и др., 1977; Слуцкий, Симхович, 1980;

Fessler, 1978). Молекула коллагена I типа построена из трех пептидных цепей, двух 1(I) цепей и одной 2(I) цепи. Каждая цепь содержит домен из 338 повторов, образованных из аминокислотных триплетов Gly-X-Y, где Х и Y могут быть любой аминокислотой, но в большинстве случаев X представлен пролином, а Y - гидроксипролином. Конформация каждой из пептидных цепей коллагена спираль, отличающаяся от -спирали. В молекуле коллагена все три спирали перевиты друг с другом, формируя плотный жгут. Все три цепи ориентированы параллельно; соединяясь "бок о бок", образуют микрофибриллы, которые в свою очередь, формируют более толстые фибриллы, а из них образуются волокна и пучки волокон. На сегодняшний день так и не установлено, каким образом осуществляется "узнавание" цепей, которое необходимое для обеспечения постоянного отношения 1 : 2, равного 2:1. В культурах хондроцитов, фибробластов воспаленной десны, некоторых опухолях, амниотических клетках, костях черепа и сухожилиях обнаружена разновидность коллагена I типа, состоящая из трех l(I)-цепей (Слуцкий, Симхович, 1980; Мауnе et al., 1976; Little et al., 1977; Moro, Smith, 1977; Crouch, Born-stein, 1978). Не установлено, что именно отражает наличие этих тримеров: аномалию сборки, определенную стадию дифференцировки или эмбриональные черты клеток. Возможно, что они представляют собой отдельный тип коллагена [129,134].

Коллаген II типа состоит из трех одинаковых -цепей, которые отличаются от

-цепей I типа. По сравнению с I типом у него повышено содержание углеводов.

(Слуцкий, Симхович, 1980; Аlitalo, 1980).

Коллаген III типа, также как коллаген II типа, состоит из трех идентичных цепей. Отличительной особенностью является наличие двух остатков цистеина в каждой -цепи. Они находятся около карбоксильного конца и образуют дисульфидные связи [129]. Коллаген III типа обычно содержится там же, где и коллаген I типа, в разных соотношениях (Stenman, Vaheri, 1978; Adam-son, Ayers, 1979; Alitalo, 1980). Процесс созревания проколлагена III типа замедлен и он включается in vivo в состав внеклеточного матрикса (Timpl et al, 1977) [40].

Коллагены I, II и III типов называют интерстициальными. Lля них является характерным образование волокон с периодичной поперечной исчерченностью (Никитин и др., 1977; Alitalo, 1980). Обнаружена целая группа коллагенов в составе базальных мембран. Эти коллагены имеют трехспиральную структуру, но не образуют волокон с поперечной исчерченностью и, видимо, не состоят из трех идентичных -цепей. К настоящему времени описано 4 типа коллагенов базальных мембран, различающихся иммунологически и химически [40,47,109,134].

Коллаген IV типа в отличие от всех предыдущих, очевидно, совсем не подвергается процессингу (Minor et al., 1976; Adamson, Ayers, 1979; Crouch, Bornstein, 1979; Alitalo et al., 1980). В связи с этим он имеет увеличенную молекулярную массу (140-185 кДа) и содержит дисульфидные связи (Timpl et al., 1978; Adamson, Ayers, 1979; Tryggvason et al., 1980). Спирализованная часть молекулы, устойчивая к пепсину, имеет больший размер, чем у интерстициальных коллагенов (Minor et al., 1976; Adamson, Ayers, 1976). Для коллагена IV типа характерно высокое содержание 3-оксипролина и углеводов. Показано[129], что коллаген IV типа состоит из трех идентичных -цепей, однако позже было установлено, что в нем имеются две различные цепи, отличающиеся по подвижности в ПААГ-ДСН (Adamson et al., 1979; Bailey et al., 1979b; Alitalo et al., 1980 d; Tryggvason et al., 1980). [10].

Еще один тип коллагена базальных мембран был выделен из эмбрионального материала. Позже этот же тип обнаружили в пепсиновых экстрактах кости и хряща, а также в базальных мембранах почек. Коллаген V типа состоит из двух различных -цепей. Обе цепи по размеру сходны с таковыми интерстициальных коллагенов (Rhodes, Miller, 1979). В отличие от коллагена IV типа коллаген V типа не содержит дисульфидных связей и имеет небольшое количество 3оксипролина (Burgeson et al., 1976; Rhodes, Miller, 1978, 1979). Соотношение цепей в молекуле точно не установлено. Синтез и созревание коллагена V типа практически не изучены. [2,3,109,134].

Коллаген VI типа представляет собой вариант коллагенов базальных мембран, состоящий из двух различных -цепей. От коллагена V типа его можно отделить дифференциальным высаливанием (Kresina, Miller, 1979). С-цепь не содержит цистеина, но он имеется в D-цепи (Kresina, Miller, 1979; Dixit, 1980). У коллагена VI типа мало 3-оксипролина, но много оксилизина (Glanville et al., 1979; Dixit, 1980). Стехиометрия молекулы не установлена, но предполагается, что формула этого коллагена C2D (Kresina, Miller, 1979). Биосинтез, процессинг и сборка этого типа коллагена не изучены. [12].

Коллаген VII типа плотно держит коллагеновые фибриллы (пучки) базальной мембраны с коллагеновыми фибриллами из дермы. То есть коллаген VII-го типа «скрепляет» и удерживает коллагеновые пучки IV-го типа (базальная мембрана, которая «держит в тонусе» эпидермис), и коллагеновые волокна I и III типов (основное пространство дермы). Он характеризуется большой компактностью и стабильной структурой, по сравнению с другими коллагенами. -цепи данного коллагена и его метаболизм не исследованы.

Коллаген XI структурно похож на коллаген II типа. Формула коллагена XI имеет вид 1 (XI)2(XI)3(XI), причем 3(XI) – цепь, весьма сходна с 1(II) – цепью, что позволяет предложить, что и 3(IX) и 1(II) - продукты одного гена.

Коллаген IX, 1 (IX) 2(IX) 3(IX), существенно отличается по строению от фибриллообразующих коллагенов, как называют коллагены II и XI. Основное отличие заключается в том, что N-терминальный участок 1 (IX), нест достаточно крупный доменный участок, а 2 (IX) содержит участок присоединения гликозаминогликановой боковой цепи [134].

Представленные типы коллагена не показывают все его многообразие.

Изучение их состава и структуры ведется по сей день. Изучение аминокислотного состава и последовательности чередования аминокислот показало, что существует два типа цепей – цепи 1 и 2, а также четыре разновидности цепи 1: 1 (I), 1 (II), 1 (III) и 1 (IV).

Авторы Ramachandrаn и Karth (1955), а далее авторы Rich и Crick (1967) обнаружили, что третичная структура коллагена состоит из трех взаимносвитых цепочек, имеющих общую ось. Длина этой бациллярной формации составляет около 290 нм, а диаметр 1,4 нм. Речь идет о тропоколлагене, обладающем способностью агрегирования в фибриллярные формации. [15,21,60,100,144,146].

Изучение спектров коллагена, полученного из сухожилия крысиного хвоста, авторами [58] показано, что параметры тонкой структуры спектров связаны с диффузионной подвижностью молекул конституционной воды и с их частичным упорядочением. [58].

Коллагеновые волокна состоят из различимых в электронном микроскопе фибрилл – вытянутых в длину белковых молекул, тропоколлагенов. (рис.1.4).

Необходимо четко разграничивать понятия «коллагеновые волокна» и «коллаген». Первое понятие по существу является морфологическим и не может быть сведено к биохимическим представлениям о коллагене как о белке.

Коллагеновое волокно представляет собой гетерогенное образование и содержит, кроме белка коллагена, другие химические компоненты. Молекула тропоколлагена – это белок коллаген [19,44].

–  –  –

Коллагеновые фибриллы имеют различную ориентацию в зависимости от выполняемой биологической функции соединительной ткани. Так, например, в сухожилиях, фибриллы коллагена расположены в виде поперечно-связанных параллельных пучков, которые обладают большой прочностью на разрыв и практически нерастяжимы.

Последовательность образования тканевых фрагментов на основе коллагеновых волокон представлена на рисунке 1.5.

Рис. 1.5 - Последовательность образования коллагеновых тканей (на примере сухожилия) Основу структурной организации коллагенового волокна составляют ступенчато расположенные параллельные ряды тропоколлагеновых молекул, ориентированные в продольном и поперечном направлениях и сдвинутые на четверть, что обусловливает поперечную исчерченность фибрилл с периодом от 60 до 70 нм (как правило, 64 нм).

Упрощенная проекция структуры тропоколлагена представлена на рисунке 1.6. В каждой из трех цепочек (A, B, C) отмечаются то, что связи, соединяющие дополнительные цепочки с водородным атомом, исходят из центра тройного пучка, тогда как -углеродные атомы глицина с двумя водородными атомами находятся вблизи центра. В этом центре отсутствует пространство для следующего углерода. Если бы на этой позиции находился иной радикал, нежели глициновый, то все три цепочки были бы удалены друг от друга в большей степени и не могли бы образовывать стабилизирующие водородные связи [134] Рисунок 1.6 – Упрощенная проекция структуры тропоколлагена Аминокислотная последовательность определяет пространственную структуру белков, а та в свою очередь – биологические и технологические функции. Следует отметить, что коллаген по сравнению с другими белками обладает специфическим составом и необычной последовательностью аминокислот. Все аминокислоты можно разделить на три группы в зависимости от строения боковой цепи. Первую группу представляют глицин, валин, аланин, изолейцин, фенилаланин и пролин это неполярные аминокислоты, характеризующиеся химической инертностью. Ко второй группе можно отнести серин, треонин, тирозин, метионин, оксипролин - кислоты, имеющиеся в составе активные реакционно-способные группы. К третьей группе относят полярные аминокислоты, диссоциирующие как основания (лизин, оксилизин, аргинин, гистидин) и как кислоты (глутаминовая и аспарагиновая). Наличие полярных аминокислот обусловливает высокую реакционную способность коллагена.

Коллаген содержит значительное количество глицина, который распределен в молекуле вполне равномерно, это означает, что образует каждую третью аминокислоту в последовательности отдельных цепочек. Это распределение является условием тесного соединения полипептидных цепочек в трехкратные спирали. Большое количество данной аминокислоты вызывает высокое содержание азота в коллагене. Присутствие тирозина в молекуле коллагена стало предметом длительных споров. Подробные исследования аминокислот показали, что весь тирозин накапливается в терминальных пептидах, не имеющих структуру спирали, которые можно отщепить протеолитическими ферментами [54].

Следующей типичной аминокислотой коллагена является гидроксилизин, который встречается также в некоторых других протеинах, например, в шерсти.

Однако в этих протеинах содержание гидроксилизина по сравнению с коллагеном является небольшим. Его задача состоит в том, чтобы связывать сахаридные компоненты.

В коллагене довольно редко встречаются лейцин и изолейцин; только рибонуклеаза и фиброин шелка обладают меньшим содержанием этих двух аминокислот. Цистеин присутствует в большем количестве только в коллагене низших животных, в котором он стабилизует структуру с помощью дисульфидных мостиков; у высших животных он встречается лишь в регистрационном пептиде 1-цепочки.

Сложность структуры коллагена определяет важные функциональные свойства этого белка:

– способность сохранять структуру на молекулярном уровне при выделении из тканей и отделении от других компонентов;

– способность после выделения и перевода в раствор к реконструкции с образованием различных видов надмолекулярных структур, что широко используется для получения различных видов искусственных коллагеновых материалов (ИКМ), находящих применение в пищевой промышленности, медицине, ветеринарии и др. отраслях народного хозяйства;

– возможность стабилизации надмолекулярной структуры и ее дополнительного структурирования, лежащие в основе консервирования, первичной обработки и переработки коллагенсодержащего сырья (выделка кожи и меха), а также получение искусственных или модифицированных коллагеновых материалов.

Основными отличительными признаками этого белка являются его уникальные механические свойства, химическая инертность, его необычный аминокислотный состав и способность превращаться в желатину - более низкомолекулярный белковый продукт - при длительном нагревании в воде, а также в водных растворах кислот и щелочей. Весьма актуальным является изучение изменения структуры коллагеновых структур под действием различных факторов [14,51].

Ранние исследования показали [86], что коллаген способен растворяться в разбавленных кислых буферных растворах, из которых он может быть переосажден в виде фибрилл, обладающих характерной "полосатостью". Другие биополимеры, присутствующие в коллагене, такие, как полисахариды или мукополисахариды, являются, как правило, неизменными компонентами этого белка.

Авторами [115] предложены различные методы интенсификации процесса растворения коллагена - кавитация на стадии предварительной обработки коллагенсодержащего материала и механическое перемешивание на стадии растворения в уксусной кислоте. Для получения чистых, не загрязненных химическими реагентами продуктов растворения коллагена, применяемых в качестве сырья в медицине и пищевой промышленности, использована обработка комплексом ферментных препаратов. Получены коллоидные растворы, сохранившие волокнистую структуру, необходимую для дальнейшего использования продуктов растворения коллагена [115].

При обычных условиях волокна коллагена плохо растяжимы. При нагревании до 60°С влажный коллаген резко сокращается до 1/3-1/4 своей нормальной длины. После сокращения коллаген приобретает новые свойства; у него появляется каучукоподобная эластичность, связанная, по всей видимости, с частичным разрушением поперечных межцепочечных водородных связей. В присутствии кислот, щелочей и водных растворов солей коллаген поглощает значительное количество воды. Способность к набуханию коллагена может быть двух различных типов или быть их комбинацией [16,86]. Первый из них, известный в практике как '"разбухание", возникает вследствие действия кислот или щелочей, является неспецифичным и подавляется действием солей. Обычно он интерпретируется как эффект Доннана, обусловленный наличием заряженных групп в волокнах молекулы коллагена. Такое набухание минимально в изоэлектрической точке, которая лежит в интервале рН 6.5-8.5. При смещении рН от изоэлектрической точки в любую сторону оно возрастает до максимума, а затем, при значениях менее рН 7.0 падает. При набухании фибриллы коллагена укорачиваются, становятся более толстыми и прозрачными [134,142].

Другой тип набухания наблюдается в растворах нейтральных солей; он хотя и вызывает утолщение волокон коллагена, но не приводит к укорачиванию их длины, при этом они расщепляются на тонкие нити. Эти изменения не исчезают при растяжении волокон, а исходное состояние может восстановиться только после длительного промывания коллагена от солей водой. Скорее всего, этот эффект объясняется специфическим действием ионов, которые вызывают разрушение солеобразных мостиков между коллегановыми цепями.

При нагревании коллагена в водной среде (до 63-64С) его структура деформируется, нити изгибаются, длина их уменьшается до первоначальной величины. Одновременно фибриллы теряют поперечную исчерченность, становятся более эластичными и прозрачными. Под микроскопом обнаруживается очень сильная гомогенизация их микроструктуры. Вследствие теплового воздействия происходит денатурация, то есть разрушение связей, удерживающих коллаген в нативной конформации, а также частичный гидролитический распад по месту пептидных связей. Такой коллаген называют сваренным. Сваренный коллаген (или желатин) необратимо утрачивает нативные физико-химические свойства. В результате разрыва поперечных мостиков в структуре коллагена и увеличения доступности пептидных связей образовавшийся желатин легко переваривается трипсином и другими ферментами, приобретает свойство растворяться в воде. Однако образование желатиновых растворов возможно при достаточно высоких температурах (65-90С), при охлаждении эти растворы застывают, образуя желеподобную массу [54,134].

Ребровой Г.А. и Василевским В.К. изучено влияние УФ-облучения и радиации (270-380 нм) на биохимические, флуорометрические и колориметрические свойства коллагена. Показано, что длительное облучение (120 часов) сопровождается повышением структурной стабильности коллагена к действию специфических и неспецифических протеолитических ферментов, образованием новых дополнительных флуорофор - содержащих соединений, увеличением количества карбонилов в молекуле коллагена и значительным изменением характера распределения продуктов щелочного пиролиза белка при гель - хроматографическом анализе. Изменяются координаты цвета исследуемых коллагеновых пленок. Эти изменения коллагена показали, что при УФ-облучении происходят фотомодифицирующие и фотоокислительные процессы в структуре белка [120].

Сложность и особенности структуры коллагена определяют наиболее важные биологические функции, среди которых можно выделить:

Главная функция коллагена это, конечно, строительная и опорная 1.

роль («клеящая»).

Коллагеновые волокна обеспечивают также выносливость основы 2.

собственно кожи во время внешнего нажима и во время ее растягивания.

Коллагеновые волокна обладают в природе способностью 3.

выдерживать нагрузки.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
 
Похожие работы:

«УШАКОВА ЯНА ВЛАДИМИРОВНА ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИЙ ДНК-МАРКИРОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННО-ГЕНЕТИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЯХ ЯБЛОНИ Специальность 06.01.05. – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Радугина Елена Александровна РЕГУЛЯЦИЯ МОРФОГЕНЕЗА РЕГЕНЕРИРУЮЩЕГО ХВОСТА ТРИТОНА В НОРМЕ И В УСЛОВИЯХ ИЗМЕНЕННОЙ ГРАВИТАЦИОННОЙ НАГРУЗКИ 03.03.05 – биология развития, эмбриология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Доктор биологических наук Э.Н. Григорян Москва – 2015 Оглавление Введение Обзор литературы 1 Регенерация...»

«ТУРТУЕВА ТАТЬЯНА АНАТОЛЬЕВНА РАЗРАБОТКА СБОРА НЕЙРОПРОТЕКТИВНОГО И ЭКСТРАКТА СУХОГО НА ЕГО ОСНОВЕ 14.04.02 фармацевтическая химия, фармакогнозия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор НИКОЛАЕВА ГАЛИНА ГРИГОРЬЕВНА Улан-Удэ – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Головань Екатерина Викторовна Ресурсы декоративных растений для озеленения внутриквартальных территорий (на примере г. Владивостока) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д.б.н., доцент О.В. Храпко Владивосток — Оглавление Введение Глава 1. Современные подходы...»

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«Горовой Александр Иванович БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА ДРЕВЕСНОЙ ЗЕЛЕНИ И ШИШЕК PINUS KORAIENSIS (ПОЛУЧЕНИЕ, СОСТАВ, ИСПОЛЬЗОВАНИЕ) 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Тагильцев Ю. Г. Хабаровск – 2015 СОДЕРЖАНИЕ стр Введение.. 4 Глава 1 Обзор...»

«БАБЕШКО Кирилл Владимирович ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ПРЕДПОЧТЕНИЯ СФАГНОБИОНТНЫХ РАКОВИННЫХ АМЕБ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ДЛЯ РЕКОНСТРУКЦИИ ГИДРОЛОГИЧЕСКОГО РЕЖИМА БОЛОТ В ГОЛОЦЕНЕ Специальность 03.02.08 – экология (биология) диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук Цыганов...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«БОЛОТОВ ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ ОЦЕНКА СОДЕРЖАНИЯ И МИГРАЦИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ЭКОСИСТЕМАХ ВОЛГОГРАДСКОГО ВОДОХРАНИЛИЩА Специальность: 03.02.08. Экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Шумилова Анна Алексеевна ПОТЕНЦИАЛ БИОРАЗРУШАЕМЫХ ПОЛИГИДРОКСИАЛКАНОАТОВ В КАЧЕСТВЕ КОСТНОПЛАСТИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ Специальность 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук Шишацкая Екатерина Игоревна Красноярск...»

«ШУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ВЛИЯНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ФОРМ АДАПТИВНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ 03.02.03 –...»

«_ ТЕМИРОВ Николай Николаевич КОРРЕКЦИЯ АФАКИИ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗА МУЛЬТИФОКАЛЬНЫМИ ИНТРАОКУЛЯРНЫМИ ЛИНЗАМИ С АСИММЕТРИЧНОЙ РОТАЦИОННОЙ ОПТИКОЙ Специальность 14.01.07 – «Глазные болезни» ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских...»

«КЛЁНИНА АНАСТАСИЯ АЛЕКСАНДРОВНА УЖОВЫЕ ЗМЕИ (COLUBRIDAE) ВОЛЖСКОГО БАССЕЙНА: МОРФОЛОГИЯ, ПИТАНИЕ, РАЗМНОЖЕНИЕ Специальность 03.02.08 – экология (биология) (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Бакиев А.Г. Тольятти – 2015 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ ГЛАВА 1. К...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«ПИМЕНОВА ЕКАТЕРИНА ВЛАДИМИРОВНА РАЗРАБОТКА МЕТОДА ОЦЕНКИ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ АНТИГЕНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА IN VITRO НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.