WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |

«ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ ...»

-- [ Страница 1 ] --

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ

НАУЧНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ

«УРАЛЬСКИЙ НАУЧНО - ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ

ВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ»

На правах рукописи

ПОРЫВАЕВА

Антонина Павловна

ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ



МОДЕЛИРОВАНИЯ ХРОНИЧЕСКОЙ

ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ

03.02.02 - Вирусология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени доктора биологических наук

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Глинских Нина Поликарповна Екатеринбург - 2015

ОГЛАВЛЕНИЕ

1 ВВЕДЕНИЕ

2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 16 2.1.1 ВЛИЯНИЕ ВИРУСОВ ГЕРПЕСА НА ПОПУЛЯЦИОН- 16

НОЕ ЗДОРОВЬЕ ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА

2.1.1.1 Герпесвирусные заболевания в популяциях сельско- 17 хозяйственных животных 2.1.1.2 Герпесвирусы популяции человека 21 2.1.1.3 Реализация инфекционного потенциала вируса герпе- 26 са 2.1.1.4 Особенности иммунитета при герпесвирусной инфек- 28 ции 2.1.2 ОСОБЕННОСТИ МОДЕЛИРОВАНИЯ ВИРУСНЫХ 37

ЗАБОЛЕВАНИЙ ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА

2.1.2.1 Патогенность вируса простого герпеса для лабора- 39 торных животных 2.1.2.2 Чувствительность лабораторных животных к возбу- 42 дителям в зависимости от генетической характеристики 2.1.2.3 Влияние половых гормонов на реализацию инфекци- 44 онного потенциала возбудителя 2.1.2.4 Влияние способа введения вируса на развитие экспе- 45 риментальной герпесвирусной инфекции 2.1.2.5 Модели хронической герпесвирусной инфекции 48

2.2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.2.1 МАТЕРИАЛЫ, ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВА- 50 НИЯ 2.2.1.1 Объекты экспериментальных исследований 51 2.2.1.2 Методика подбора экспериментальной модели для воспроизведения хронической герпесвирусной инфекции 52 2.2.1.3 Методы лабораторной диагностики, использованные в экспериментальных исследованиях 63 2.2.1.4 Характеристика референтных популяций человека и животных 2.2.1.5 Клинико-лабораторные тесты, использованные для обследования в референтных популяциях человека и живот- 71 ных 2.2.1.6 Методика изучения эффективности применения лиофилизированного препарата аллофибробластов (АФБ) для лечения герпесвирусных поражений кожи и слизистых оболочек в референтных популяциях человека и животных 73

2.2.2 ОСОБЕННОСТИ РЕАЛИЗАЦИИ ВАРИАБЕЛЬНОСТИ

ИНФЕКЦИОННОГО ПАТЕНЦИАЛА ВИРУСА ПРОСТОГО ГЕРПЕСА В ПОПУЛЯЦИИ РАНДБРЕДНЫХ

МЫШЕЙ 2.2.2.1 Динамика распространения вируса в организме экспериментальных мышей и клинические формы герпетического заболевания 77 2.2.2.2 Динамика изменений иммунологического статуса, биохимического профиля и морфофункциональных показателей в популяции рандбредных мышей при хронической герпесвирусной инфекции 88 2.2.2.3 Формы исхода герпетического заболевания 107

2.2.3 ВЛИЯНИЕ ХРОНИЧЕСКОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА БИОЛОГИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ

МЫШЕЙ – САМЦОВ

2.2.3.1 Инфицированность органов мочеполовой системы и морфофункциональные особенности строения семенников мышей – самцов при экспериментальной герпесвирусной

–  –  –

1 ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы. На современном этапе воздействия неблагоприятных эндогенных и экзогенных факторов представляют растущую угрозу для популяционного здоровья человека и животных. Различные химические и физические факторы, в первую очередь радиация и соединения тяжелых металлов, считаются основной причиной мутаций на хромосомном и молекулярном уровне [41, 74, 76, 101]. Однако с этими факторами контактирует относительно небольшая часть популяции, тогда как уникальной особенностью вирусов является их повсеместное распространение. Комитет экспертов Всемирной Организации Здравоохранения ещё в 1987 году в аналитическом докладе прогнозировал рост вирусных заболеваний и то, что «…вирусные инфекции будут определять будущие инфекционной патологии в ХХI веке» [72]. В структуре инфекционных заболеваний животных и человека вирусы семейства Herpesviridae занимают одно из первых мест наряду с вирусами гриппа и ОРВИ [14, 31, 112].





Число людей, инфицированных вирусами герпеса, по данным российских и зарубежных исследователей в странах СНГ и России составляет более 21 миллиона [31, 50, 90]. В животноводческих хозяйствах Российской Федерации, по данным государственного ветеринарного надзора, вирусами герпеса инфицировано от 17 % до 43 % животных племенных и товарных хозяйств [81].

В настоящее время известно более 40 герпесвирусов человека и позвоночных животных, которые различаются между собой элементами структуры генома, физико-химическими свойствами и патогенным действием на филогенетически близкие организмы. Однако общим для всех герпесвирусов является то, что, однажды попав в организм, вирус пожизненно сохраняется в нервных ганглиях в латентном состоянии и при реактивации вызывает рецидивирующие поражения [8, 19, 88]. Несмотря на большой объем накопленной информации о структуре герпесвирусов, составе их белков и нуклеиновых кислот, молекулярных механизмов репликации и персистенции, взаимодействии вирусов с иммунной и эндокринной системой «хозяина», вопросы реактивации персистирующих вирусов, хронизации заболевания и влияние этих процессов на течение и характер инфекции, а также на развитие патологических изменений остаются недостаточно изученными [24, 27, 32, 65, 125, 136].

Вопросы о влияние вирусов на живой организм в целом, изучение отдаленных последствий вирусных инфекций, как острых, так и особенно персистирующих приобретают важное теоретическое и практическое значение для сохранения популяционного здоровья человека и животных.

Задачи по обеспечению условий снижения риска распространения герпетических заболеваний на основе внедрения комплекса лечебно-диагностических и профилактических мероприятий являются актуальными как для медицины, так и для ветеринарии.

Степень разработанности темы. Клинические и экспериментальные исследования доказали, что герпесвирусная инфекция протекает как общее системное заболевание организма с поражением многих органов и тканей, нередко в тяжелой форме [35, 63, 70, 119]. Однако механизмы формирования системного заболевания в настоящее время не до конца выяснены. Оценка влияния взаимодействий «вирус – хозяин» на состояние популяционного здоровья человека и животных также требуют системного и более детального изучения процессов персистенции герпесвирусов. Генетическая общность герпесвирусов человека и животных позволяет использовать эталонные штаммы для создания экспериментальных моделей при изучении общебиологических проблем, в частности, разработки прикладных и фундаментальных вопросов [27, 48, 120].

Для изучения механизмов развития, течения и последствий инфекционного процесса в настоящее время используются две модели - in vitro и in vivo [47, 106].

В первом случае - это клеточные культуры, как человеческого, так и животного происхождения. Модель "клетка - вирус" обладает неоспоримыми преимуществами, особенно при изучении генетического воздействия вируса на клетку, механизмов репликации вируса, развития неопластических изменений [28, 85, 124].

Однако механизмы воздействия вируса на клеточные культуры in vitro и на клетки в условиях животного организма могут быть столь различны, что речь идет уже не о количественных различиях, а о качественных особенностях и существенных закономерностях [74, 98, 106]. Исход инфекции определяется возрастом и генетическими особенностями организма «хозяина», состоянием и зрелостью его иммунной системы, сопутствующими заболеваниями, физическими и химическими факторами окружающей среды [54, 140].

Модель in vivo должна позволять не только воспроизвести определенную форму герпесвирусного заболевания, но и проследить влияние инфекции на иммунные, биохимические процессы, происходящие в организме экспериментального животного и его потомства в будущем [87, 104, 140, 147]. Анализ источников литературы показал, что экспериментальные модели герпесвирусной инфекции создавались в основном для конкретных форм заболеваний [4, 57, 141]. Исходя из поставленных задач, вирусный антиген вводили непосредственно в исследуемый орган или систему [25, 65, 99]. При моделировании, например, герпетического энцефалита вируссодержащий материал вводился либо непосредственно в головной мозг, либо в кожно-мышечную шейную складку животного [148]. Однако и у животного, и у человека заражение вирусами герпеса происходит, прежде всего, при близких, интимных контактах [39, 133]. Нередко происходит аутоинокуляция, когда больные сами переносят вирус из очага инфекции на незараженные части тела

– слизистые оболочки и кожу глаз, рта или половых органов [23, 108, 155].

Цель исследования: Изучить теоретические и практические аспекты моделирования хронической герпесвирусной инфекции.

Задачи исследования:

- получить адекватную экспериментальную модель герпесвирусной инфекции in vivo для изучения механизмов взаимодействия «вирус – хозяин»;

изучить особенности персистенции вируса простого герпеса в периоды рецидив – ремиссия»;

провести комплексное исследование иммунологических и биохимических показателей динамики у животных в эксперименте в условиях персистенции вирусного генома;

изучить характера изменений, обусловленных хронической герпесвирусной инфекцией органов иммунной, нервной, кроветворной и репродуктивной систем;

- изучить влияния хронического герпесвирусного процесса на биологический потенциал экспериментальных животных-самцов;

- оценить риска вертикальной передачи и развития неонатального герпеса у экспериментальных животных при хронической герпесвирусной инфекции;

- усовершенствовать алгоритм диагностики герпесвирусной инфекции с использованием современных методов детекции возбудителя;

- изучить на экспериментальной модели герпесвирусной инфекции in vivo эффективность иммунобиологического лиофилизированного препарата аллофибробластов (АФБ) для лечения заболеваний человека и животных, вызванных вирусом герпеса.

Научная новизна. Получены новые данные о механизме персистенции герпесвирусов в организме:

- персистирующий вирус формирует в организме животного множественные очаги инфекции, что и обеспечивает постоянную антигенную нагрузку на организм;

- развитие хронического процесса сопровождается сложным комплексом патологических изменений на клеточном и органном уровнях, что приводит к функциональному перенапряжению организма;

- хроническая воспалительная реакция, вызванная герпесвирусной инфекцией, активирует субклинические аутоиммунные процессы, усугубляя тяжесть и интенсивность патологических изменений в организме.

Получен ряд новых данных о характеристике герпесвируса, как вектора генетической информации:

- патогенное действие герпесвируса на сперматогенез осуществляется на уровне клеток сперматогенного эпителия;

- в подвижных сперматозоидах нормальной морфологии у экспериментальных мышей-самцов диагностирована абортивная форма герпесвирусной инфекции.

Впервые подтвержден риск вертикальной передачи вируса подвижными сперматозоидами нормальной морфологии, которые содержат ДНК либо белки стадий жизненного цикла вируса простого герпеса. Инфицирование эмбрионов вирусом проявляется в виде неонатального диссеминированного герпеса с вовлечением висцеральных органов.

Впервые в алгоритме диагностики герпесвирусной инфекции использовано устройство на основе лазерного модуля для оценки активности вируса в клеточной системе.

Доказана эффективность иммунобиологического лиофилизированного препарата аллофибробластов (АФБ) для лечения поражений кожи и слизистых при генитальном герпесе у человека и пустулёзного вульвита у крупного рогатого скота.

Теоретическая и практическая значимость работы. На основании теоретического обобщения и результатов собственных исследований предложена научно-обоснованная модель хронической герпесвирусной инфекции in vivo, которая по существу отражает механизмы взаимодействия комплекса «инфекционный агент – макроорганизм». Валидность экспериментальной модели хронической герпесвирусной инфекции и высокий уровень экстраполяции полученных данных были установлены при сравнительных клинико-лабораторных исследованиях.

Показано, что заболевание у человека, и у крупного рогатого скота развивается по сходному алгоритму.

Для сохранения биологического потенциала и репродуктивного здоровья популяций человека и животных на основе экспериментальной модели был усовершенствован алгоритм диагностики герпесвирусных инфекций – Патент на полезную модель № 2013158784/15 (140765).

Изучение эффективности антивирусных препаратов с использованием разработанной экспериментальной модели позволило оптимизировать комплекс лечебно-профилактических мероприятий, направленных на сохранение популяционного здоровья человека и животных – Патент на изобретение № 2012102733/15 (2483739).

По результатам исследования разработаны и внедрены в практическое здравоохранение и ветеринарную практику Уральского Федерального округа 4 методических документа по диагностике, лечению и профилактике герпесвирусных инфекций (2009-2013 г.г).

Методология и методы исследования.

Работа выполнена в 2006-2014 гг. в отделе мониторинга и прогнозирования инфекционных болезней ФГБНУ «Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт» в соответствии с планом научно-исследовательских работ «Разработать и усовершенствовать существующие средства и методы борьбы с массовыми инфекционными болезнями молодняка животных на основе изучения их этиологической структуры, факторов, патогенности возбудителей, закономерностей формирования иммунитета» (№ госрегистрации 01201267271, № госрегистрации 01201359410).

Лабораторные исследования выполнены в ФБУН «Екатеринбургский научноисследовательский институт вирусных инфекций» в соответствии с планом научно-исследовательских работ «Научные исследования и разработки с целью обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия и снижения инфекционной заболеваемости в Российской Федерации (№ госрегистрации 01201174323);

по заданию Министерства промышленности и науки Свердловской области (Госконтракт № 8/ЛС от 03.11.2010).

Экспериментальные и клинико-лабораторные исследования в референтных популяциях человека и животных проводили согласно требований Приказа МЗ РФ №267 от 19.06.2003г. и Национального стандарта РФ ГОСТ Р53434-2009, СП 1. 3. 2322-08, МУ 1. 3. 2569-09 соответственно. Анализ государственной ветеринарной статистической отчетности (формы 1-Вет, 1-Вет А, 2-Вет), Медицинских документов № 25/у – 04, и результатов клинико-лабораторных исследований проведен в соответствии с ФЗ № 152 от 27.07.2006 и Приказом Роспотребнадзора РФ № 4 от 10.01.2014 [59, 71, 73].

Объектами экспериментальных исследования являлись эталонный штамм вируса простого герпеса человека 1 типа Л2 – ВПГ-1; 265 беспородных лабораторных крыс; 135 сирийских хомячков; 60 мышей линии Balb/c; 426 беспородных белых мышей, образцы проб органов и тканей экспериментальных животных.

Референтную группу обследованных больных представляли мужчины и женщины (3223 чел.), обратившихся в Свердловский Областной кожновенерологический диспансер в период 2006 – 2013 годов. Объектами исследований служили образцы клинических материалов: кровь, сыворотка крови, моча, слюна, соскобы эпителия со слизистых оболочек ротовой полости, глаз, урогенитального тракта.

Референтную популяцию животных представлял крупный рогатый скот (КРС) всех возрастных групп уральского типа черно-пёстрой породы, содержащийся в 38 сельскохозяйственных предприятиях Уральского региона (1200 особей). Объектами исследований служили образцы клинических материалов: кровь, сыворотка крови, соскобы эпителия со слизистых оболочек носовой полости и урогенитального тракта.

Для лечения герпетических поражений кожи и слизистых оболочек у животных и человека использовали лиофилизированный препарат аллофибробластов (АФБ) Р № 001402/01 2002, разработанный в Екатеринбургском НИИ вирусных инфекций.

Исследование экспериментальных и клинических образцов было проведено:

- вирусологическими методами: выделение ВПГ на клеточных культурах; выявление антигена ВПГ-1 люминесцентным методом (ИФ-метод) с использованием флюоресцирующих иммуноглобулинов к вирусу простого герпеса «SimulFluor HSV 1/2 Kit» и моноклональных антитела к индивидуальным белкам ВПГ (сверхранние –, ранние –, поздние – ), любезно предоставленные профессором Косяковой Н.П. (ГУ НИИ вирусологии РАМН); детекцию вирусной ДНК проводили на тест-системах «АмплиСенс HSV 1, 11-FL»; выявление антигена герпесвируса КРС осуществляли в реакции непрямой иммунофлюоресценции;

- серологическими методами: определение уровня специфических антител к ВПГ в сыворотке крови в реакции непрямой иммунофлюоресценции (РНИФ);

определение уровня антител к ВПГ классов Ig M, Ig G методом ИФА с использованием тест-систем производства «Вектор – Бест»; определение уровня специфических антител к герпесвирусу КРС в реакции нейтрализации;

- иммунологическими методами: фенотипический состав лимфоцитов периферической крови устанавливали методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием маркеров производства «BioLine»; цитокиновый профиль определяли по количественному содержанию ФНО-, -ИНФ, ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4 методом ИФА на микропланшетах «ProCon» производства «Протеиновый контур»

Санкт-Петербург.

Биохимические и гематологические исследования, а также определение уровня фермента миелопероксидазы (МПО), уровня циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), количественного содержания щелочной фосфатазы (ЩФ), индекса лейкоцитарной интоксикации (ЛИИ) осуществляли по стандартным методикам [81, 83, 84].

Клинические и патологоанатомические исследования проводили в соответствии с требованиями Приказа МЗ РФ №267 от 19.06.2003г. и Национального стандарта РФ ГОСТ Р53434-2009 [71, 73].

Статистическая обработка данных проведена с использованием пакетов прикладных программ «Statistica 6.0».

Положения, выносимые на защиту:

1. Рандбредная популяция лабораторных мышей-самцов является валидной экспериментальной моделью для изучения стратегии персистенции вируса простого герпеса и вариабельности реализации его инфекционного потенциала.

2. Реализация инфекционного потенциала вируса простого герпеса в период "рецидив - ремиссия" происходит непрерывно в виде литической, латентной и абортивной формы инфекции: в одном макроорганизме они протекают одновременно на разных уровнях инфекционного очага.

3. Определяющим звеном в регуляции баланса между "организмом - носителем" и "инфекционным агентом" является персистенция ВПГ в "органах - мишенях": головном и спинном мозге, печени, легких, почек и клетках сосудистого эндотелия.

4. Сложный комплекс патологических изменений в организме экспериментальных животных обусловлен как прямым, так опосредованным действием вируса простого герпеса. Нарушения иммунорегуляторных процессов выражаются в количественных и качественных изменениях клеточного иммунитета, которые осложняются генерализацией воспалительной реакции и развитием полиорганной дисфункции.

5. Деструктивные эффекты генерализованного процесса в организме млекопитающих являются следствием тяжелых метаболических расстройств в системе углеводного и липидного обмена.

Степень достоверности и апробация работы. Материалы диссертации, были доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: «Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири, Дальнего Востока и Крайнего Севера», Новосибирск, (2006); «Актуальные вопросы диагностики и лечения вирусных инфекций», Екатеринбург, (2007); на XV российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», Москва, (2008); IV международной конференции «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями», Санкт-Петербург, (2008); на конгрессе педиатров Урала «Актуальные проблемы педиатрии», Екатеринбург, (2008); всероссийской научно-практической конференции «Генодиагностика инфекционных заболеваний», Москва, (2009); «Актуальные вопросы вирусных инфекций», Екатеринбург, (2010); «Современные проблемы развития биотехнологий», Екатеринбург, (2011); «Инфекция и иммунитет», Санкт-Петербург, (2012); «Диагностика и профилактика инфекционных болезней», Новосибирск, (2013); VIII окружной научно-практической конференции «Современные методы лабораторной диагностики инфекционных заболеваний», Екатеринбург, (2014); Международной научнопрактической конференции «Инновационные подходы к решению современных проблем ветеринарной медицины», Екатеринбург (2015); на заседаниях Ученого Совета ФГБНУ «Уральский научно-исследовательский институт».

Соответствие паспорту специальности. Диссертация соответствует паспорту специальности 03.02.02 «Вирусология» по п. 3, п.6, п.7, п.10.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 38 научная работа, в том числе 19 – в рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК РФ, 1 патент РФ на изобретение, 1 патент РФ на полезную модель, 1 монография, 3 методических рекомендации.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 193 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, заключение, выводы, практические предложения, список литературы и приложения. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 44 рисунками. Список литературы включает 138 наименований, в том числе 22 на иностранном языке.

16

2 ОСНОВНАЯ ЧАСТЬ

2.1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1.1 ВЛИЯНИЕ ВИРУСОВ ГЕРПЕСА НА ПОПУЛЯЦИОННОЕ

ЗДОРОВЬЕ ЖИВОТНЫХ И ЧЕЛОВЕКА

Герпесвирусы характеризуются убиквитарным распространением и поражают широкий круг хозяев – от беспозвоночных до высокоорганизованных организмов, в том числе – человека. Семейство Herpesviridae включает около 70 представителей патогенных для животных и человека [27, 38]. Вирусы репродуцируются в ядре инфицированных клеток, образуют икосаэдральные капсиды диаметром 100 нм, состоящие из 162 капсомеров, которые в последующем обретают суперкапсидную оболочку глико- и липопротеиновой природы. Размеры зрелых вирионов 150 – 220 нм. Вирусный геном представлен линейной двухцепочечной ДНК с относительной молекулярной массой более 80 х 106. По физико-химическим особенностям вирионов и биологическим свойствам герпесвирусов выделено четыре подсемейства: Alphaherpesvirinae ( – герпесвирусы); Betaherpesvirinae ( – герпесвирусы); Gammaherpesvirinae ( – герпесвирусы) и неклассифицированные герпесвирусы.

Эта многочисленная группа ДНК-вирусов обладает уникальной способностью к пожизненной персистенции в организме хозяина. Между организмом «хозяина»

и герпесвирусами устанавливается своеобразное биологическое равновесие, которое может нарушаться под влиянием как эндогенных, так и экзогенных факторов [7, 22, 70]. Нарушение этого «биологического равновесия» приводит к рецидиву герпетической инфекции, который протекает в виде острого процесса с характерными клиническими проявлениями. Как продуктивный, так и абортивный цикл инфекции может сопровождаться трансформацией клеток с развитием лимфопролиферативных синдромов и заболеваний, в том числе и онкологических [5, 23, 45, 124].

2.1.1.1 Герпесвирусные заболевания сельскохозяйственных животных В этиологической структуре вирусных заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц герпесвирусы занимают одно из первых мест наряду с аденовирусами и парагриппом-3. Одними, из наиболее распространенных, являются вирус инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота, вирус псевдобешенства свиней, вирус болезни Марека птиц. Нередко герпесвирусы циркулируют в организме животных и птиц в ассоциациях с другими возбудителями, что осложняет течение заболевания [19, 38, 81, 112].

Герпесвирусные заболевания в популяциях крупного рогатого скота. В животноводческих хозяйствах Российской Федерации существует две основные проблемы, обусловленные герпесвирусной инфекцией – респираторно-кишечная патология и нарушение репродуктивной функции. Причиной формирования респираторной и генитальной патологии является вирусоносительство среди племенного стада [21, 86, 112].

Ведущим патогеном респираторных болезней крупного рогатого скота является вирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ), относящийся к – герпесвирусам Herpesvirus bovis 1. Заражение животных происходит контактным путем. В естественных условиях к вирусу восприимчив только крупный рогатый скот [27].

Вирус ИРТ размножается главным образом в клетках слизистых оболочек респираторного и полового трактов. Для него характерно длительное носительство реконвалесцентами – вирус выделяется со слизистых оболочек в течение 12-14 дней после заболевания. Подобно ВПГ человека вирус ИРТ поражает ганглии тройничного нерва и персистирует в них. Ещё в 1982 году Ackermann M. et al. выделил ДНК ИРТ из тройничного ганглия больного теленка и наблюдал реактивацию вируса ИРТ при культивировании изолированных участков тройничного нерва от этого животного [15]. Длительное носительство вируса ИРТ обнаружено у быков-производителей, страдающих орхитом и азооспермией. Вирус выделялся в области крайней плоти, из эякулята; ДНК вируса обнаруживалась в клетках тестикул [91, 121].

Переболевание ИРТ сопровождается длительным иммунитетом и образованием вируснейтрализующих антител. Однако, как и у человека, наличие антител может свидетельствовать не только об иммунитете, но и о носительстве вируса и потенциальной опасности таких животных для окружающих восприимчивых животных [21].

Заболевания крупного рогатого скота, обусловленные вирусом ИРТ, распространены в странах, как Старого, так и Нового света. По результатам исследований Relman D.A. et al., (2010) в западных штатах США, северной Англии, Новой Зеландии и Северной Африке инфицированность крупного рогатого скота вирусом ИРТ составляет от 17 до 60% поголовья. В Российской Федерации, по данным Рахманова А.М. с соавторами (2010), вирусом ИРТ инфицировано от 16,8% до 42,7% животных племенных и товарных хозяйств. В Уральском регионе в 2007годах сотрудниками НИВИ РАСХН Донник И.М., Печурой Е.В., Шиловой Е.Н. было показано, что респираторная форма ИРТ выявляется у телят в 41% модельных хозяйств, генитальная у коров – в 17%, смешанная (респираторная + генитальная) – в 42% хозяйств [111].

Респираторное заболевание взрослых животных, как правило, протекает 10-14 дней в слабой форме с умеренными поражениями респираторного тракта. У телят инфекционный ринотрахеит имеет более тяжелые формы. Поражения респираторного тракта у них сопровождаются острым воспалением, в 63,8% случаев диареей и в 26,9%- конъюнктивитами и кератоконъюнктивитами различной степени тяжести. Развитие крупозной пневмонии на фоне ИРТ у телят наблюдается в 22,6% случаев. Поражения центральной нервной системы, как у телят, так и взрослых животных достаточно редкие и составляют не более 3-5%. При тяжелых эпизоотиях ИРТ смертность среди молодняка крупного рогатого скота может достигать 75%. В этих случаях при патоморфологических исследованиях наблюдается некроз слизистых оболочек всего респираторного тракта, изъязвление сычуга и поражение надпочечников. Вирус ИРТ у переболевших животных выделяется из экскретов носовой полости в течение 1-3 месяцев [70].

Генитальная форма ИРТ (пустулезный вульвовагинит) у коров и телок в 57случаев протекает латентно. Рецидив же заболевания в период стельности имеет характерную, четко выраженную клиническую картину – многочисленные различной величины везикулы и пустулы в эпителии слизистой влагалища, его преддверии и вульве. Уровень абортов у инфицированных коров при острой форме генитального ИРТ составляет 4-5%, у нетелей – до 8-13% [86].

Болезнь Ауески в популяциях домашних свиней. Вирус болезни Ауески (ВБА) является типичным представителем – герпесвирусов и вызывает серьезные заболевания многих видов животных [8]. ВБА интенсивно размножается в миндалинах слизистой носа, ретрофарингиальных лимфоузлах, легких, трахеи, мозге и селезенке свиней. Переболевшие животные длительное время являются вирусоносителями, несмотря на наличие антител. Особую опасность заболевания представляет для крупных свиноводческих комплексов с непрерывными опоросами, где благодаря длительной персистенции вирулентных штаммов ВБА зачастую приобретает энзоотическое течение и периодически вызывает массовую гибель новорожденных поросят. У старших поросят развиваются выраженные парезы и параличи, наблюдается расстройство дыхания и высокая температура. Через 12-14 часов животное, как правило, погибает, но в редких случаях может быть и полное выздоровление. У взрослых животных обычно развивается легкое заболевание верхних дыхательных путей с умеренной лихорадкой и потерей аппетита; инфекция также может протекать субклинически. Контагиозность болезни очень высокая, ВБА обнаруживается в носовом секрете от начала инкубационного периода до конца лихорадки, включая 8-14 дней после исчезновения клинических проявлений [38].

Заболевание может предаваться крупному и мелкому рогатому скоту, описаны случаи инфицирования собак, кроликов, кошек и хорьков. Путь заражения контактный – инфицированные свиньи с легкой или субклинической формой болезни трогают рылом или кусают животное [27].

Заболевание крупного и мелкого рогатого скота ВБА всегда заканчивается смертельно. Инкубационный период короткий. Заболевание начинается с острого зуда обычно задних ног. У некоторых животных наблюдается повышенное слюноотделение. Болезнь стремительно прогрессирует с развитием клонических судорог и расстройством дыхания. В течение дальнейших 12-24 часов животное погибает. Прямой передачи ВБА от животного к животному не наблюдается [27, 81].

Вирус болезни Марека в популяциях домашних птиц. Вирус болезни Марека (ВБМ) кур относится к лимфотропным – герпесвирусам, характеризуется латентными, слабовыраженными транзиторными лимфопролиферативными заболеваниями у их естественных хозяев и персистирует в Т-лимфоцитах [27]. Инфекция лимфоидных клеток приводит к неспецифическому подавлению клеточного и гуморального иммунитета, вызывает трансформацию лимфоцитов, синтез специфического опухолевого антигена – нейролимфотоз с хроническим течением. При наличии добавочных экзогенных, генетических и других факторов (например, смешанной инфекции) ВБМ вызывает неограниченную пролиферацию лимфоидных элементов во внутренних органах и центральной нервной системе, приводящую к развитию прогрессирующего паралича – острый лейкоз. При острых формах болезни опухоли выявляются в основном во внутренних органах – легких, печени, селезенке и других [45, 65].

Естественное заражение осуществляется воздушно-капельным путем, источником вируса являются перьевые фолликулы больных птиц. Переболевшая птица является пожизненным вирусоносителем. Наиболее восприимчивы к ВБМ цыплята в первые две недели жизни. Вертикальная передача вируса отсутствует [27].

Естественная резистентность к ВБМ определяется генетическими факторами, а также физиологическим состоянием. Так было показано, что чувствительность резистентных и восприимчивых к ВБМ линий кур коррелировала с чувствительностью их клеток клеток-мишеней in vitro (лимфоциты селезёнки). Резистентность на уровне клеток-мишеней определяется количеством специфических рецепторов на поверхности лимфоцитов. Однако эпителиальные и фибробластоподобные клетки кур обеих линий были одинаково чувствительны к вирусу. У кур с удалённой бурсой Фабрициуса отмечали меньший уровень поражения лимфоидной системы, менее высокий уровень виремии и летальности [122].

Таким образом, анализ научных публикаций показал, что заболевания герпесвирусной этиологии негативно влияют на биологический потенциал и репродуктивное здоровье популяций сельскохозяйственных животных. Распространение герпетических заболеваний повышает риск возникновения эпизоотических ситуаций, как в отдельных сельскохозяйственных предприятиях, так и в регионах.

2.1.1.2 Герпесвирусы популяции человека

Инфицированность населения вирусами семейства Herpesviridae по данным Всемирной Организации Здравоохранения в разных странах составляет от 52 до 90% [1]. У более чем 25% инфицированных людей отмечаются различные по степени выраженности и полиморфизму клинические проявления герпесвирусной инфекции (ГВИ). В настоящее время известно о 8 типах вируса герпеса, которые являются этиологическими агентами и/или кофакторами болезней человека [2]. К ним относятся: вирус простого герпеса I типа (ВПГ- 1); вирус простого герпеса II типа (ВПГ- 2); вирус варицелла зостер (ВВЗ); вирус Эпштейн-Барр (ВЭБ); цитомегаловирус (ЦМВ); и открытые в конце ХХ века лимфотропные вирусы герпеса человека типов VI, VII, VIII (ВГЧ – 6, ВГЧ – 7, ВГЧ – 8).

Одни из самых часто встречающихся и наиболее древних возбудителей инфекционных заболеваний человека, который известен врачам более 2000 лет, является вирус простого герпеса (ВПГ) – типичный представитель подсемейства – герпесвирусов [4, 5]. Частота инфицирования ВПГ-1 и вследствие этого заболеваемость герпетическими инфекциями уступают только гриппу и другим острым респираторным вирусным инфекциям (ОРВИ) [3].

Инфицированность популяции человека вирусом простого герпеса напрямую зависит от социально-экономических условий, так в европейских странах она составляет 50-80%, а в странах Азии, Африки и Латинской Америки – 90В Российской Федерации обязательна регистрация только «Генитального герпеса», которая введена в 1993 году. Тем не менее, обращаемость в ЛПУ по поводу заболевания «Генитальный герпес» составляет не более 15-16% от реальной частоты заболевания [5].

ВПГ – инфекция является типичным антропонозом. Источником инфекции являются больные с различными формами болезни и вирусоносители. К факторам передачи вируса относятся: слюна, моча, вагинальный секрет, сперма, кровь, содержимое везикул. Входными воротами инфекции служат поврежденные кожные покровы и слизистые оболочки. Основные пути передачи вируса: половой, контактный, вертикальный и парентеральный, гораздо реже вирус передаётся воздушно-капельным и бытовым путём [20, 104].

Наибольшее количество заболеваний регистрируется в холодное время года и в сезонные эпидемии гриппа и ОРВИ. Эпидемий ВПГ – инфекции не отмечалось, однако наблюдались небольшие вспышки в больницах, школах и дошкольных учреждениях. Отмечены случаи формирования внутрисемейного очага инфекции [14].

Инфицирование новорождённых происходит внутриутробно, во время родов, или постнатально. Однако наиболее часто инфицирование ВПГ происходит в первые три года жизни. Источником инфекции детей обычно является один из родителей или близких родственников с активной формой герпеса. Возможно также заражение через игрушки, посуду и предметы личной гигиены (зубные щетки), которые загрязнены слюной носителя или больного ребенка [63]. Пик инфицированности и заболеваемости ВПГ отмечается в периоды половой и социальной активности [5]. Так резкий подъем заболевания «Генитальный герпес» наблюдается у лиц обоего пола в возрасте 15-17 лет, и в возрасте 24-35 лет с превалированием мужчин [11,20]. Возможно инфицирование медицинского персонала при осмотре, проведении процедур и оперативных вмешательств [31].

Выраженность инфекционно-воспалительных процессов и длительность заболевания при герпесвирусной инфекции (ГВИ) у человека в значительной степени зависят от возраста, пола, физиологических особенностей и сопутствующих заболеваний.

Герпетический стоматит является самой частой формой первичного герпеса, наблюдаемого у детей в возрасте 1-5 лет [14]. У иммунокомпроментированных детей описаны случаи развития невропатии лицевого нерва на фоне первичного герпетического стоматита [33].

Первичный генитальный герпес в большинстве случаев может протекать в бессимптомной форме, с дальнейшим формированием латентного носительства ВПГ или рецидивирующей формы генитального герпеса [20]. В отличие от подростков и взрослых, у которых заболевание генитальным герпесом связано с половыми контактами, у детей генитальный герпес является следствием аутоинфицирования. Заболевание протекает либо в атипичной форме, либо в латентной.

ГВИ способствует снижению общей и местной иммунологической реактивности организма и является триггером развития острого бактериального воспаления в почках у каждого 3 ребенка [33, 60].

Герпетические заболевания глаз. При первичном офтальмогерпесе в 40% случаев наблюдаются поверхностные поражения переднего отдела глаза с вовлечением в инфекционный процесс сосудистого тракта. Сравнительно редко встречаются глубокие поражения стромы и васкуляризации роговицы [51]. В 90% случаев первичный офтальмогерпес принимает рецидивирующее течение [35, 52].

Первичный герпес новорожденных. Заболевание встречается редко, но протекает крайне тяжело с летальным исходом на 4-20-е сутки болезни. Заражение происходит во время родов при прохождении по родовым путям, или внутриутробно (как восходящим, так и гематогенным путем) от инфицированной матери [63, 91]. При этом происходит генерализация инфекционного процесса с поражением кожи, слизистых и жизненно важных органов (ЦНС, легких, печени, селезенки, надпочечников), развитием ДВС-синдрома и сопровождается высокой до 68% случаев летальностью [36].

Рецидивирующая герпетическая инфекция. После первичной герпетической инфекции рецидивы заболевания возникают у 70-90% больных, зараженных ВПГ.

Частота и длительность рецидивов ГВИ зависят от индивидуальных особенностей больного, в первую очередь от состояния иммунной системы и наличия сопутствующих хронических заболеваний или присоединения вторичной инфекции [72, 106]. Особую социальную значимость на современном этапе представляет рецидивирующая герпетическая инфекция репродуктивных органов.

Так, при обследовании женщин репродуктивного возраста с гинекологическими заболеваниями, неподдающимися стандартной терапии, в 83,8% случаев был выделен ВПГ как один из ведущих этиологических факторов заболевания. В 60% случаев у пациенток регистрировались атипичные формы рецидивов генитального герпеса [1]. Кроме того, ВПГ может поражать нижние и верхние органы малого таза, что в последующем может явиться причиной бесплодия или патологии течения беременности [2, 93].

Многочисленные исследования показали, что инфицированность вирусами герпеса может служить причиной неразвивающейся беременности в 20% случаев, вторичного бесплодия – в 60%, невынашивания беременности – в 20%, внутриутробного инфицирования – в 20% [12, 20, 63, 93, 137]. Восходящий путь инфицирования (из шейки матки), который сопровождается размножением и накоплением вируса в околоплодных водах, имеет клинические проявления в виде многоводия, отечного синдрома, задержки внутриутробного развития, невынашивания беременности в 72-80% случаев [32, 63, 93]. Установлено, что трансплацентарное инфицирование в I триместре беременности в 58-60 % приводит к развитию у плода пороков сердца, желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, скелета, гидроцефалии, микроцефалии, катаракты [1, 12, 63]. Инфицирование во II и III триместрах беременности вызывает у плода анемию, гипотрофию, гепатоспленомегалию, пневмонию, менингоэнцефалит, сепсис, который является наиболее частой причиной неонатальной гибели плода [2, 106].

В настоящее время одной из важных и нерешенных проблем считается идиопатическое бесплодие у мужчин и его связь с герпесвирусной инфекцией [13].

Теория De Ture F.A о влиянии инфекции мочеполовых путей на физиологию репродуктивных процессов в отношении герпесвирусов получила подтверждение по многим положениям [121]. Так в исследованиях Бочаровой Н.Е. (2008), Климова Р.Р. с соавторами (2010) было показано, что у мужчин с нарушением фертильности в цитоплазме сперматозоидов присутствуют структуры морфологически сходные с капсидами герпесвирусов [16]. У инфицированных мужчин зарегистрировалось нарушение фертильности сперматозоидов и достоверно снижение количество морфологически нормальных гамет в эякуляте [26, 37].

У пациентов с хроническим течением генитальной герпетической инфекции отмечены случаи склероза тканей простаты, дисфункции дополнительных половых желез, снижение антибактериальной активности простатического секрета [32, 49]. При частых рецидивах заболевания у инфицированных мужчин диагностировалось иммунодефицитное состояние, которое характеризовалось выраженной Тклеточной депрессией, дисбалансом в продукции интерферонов (-ИФН/-ИФН), нарушением функциональных связей между иммунной и гормональной системами [13, 107].

Таким образом, анализ доступных научных данных показал, что патология у человека, вызываемая герпесвирусной инфекцией, имеет большое клиническое значение. При этом детального и глубокого изучения прогностических факторов о предрасположенности тех или иных категорий пациентов к развитию герпетических заболеваний до сих пор не было сделано. Проблема патологии, обусловленная вирусом простого герпеса, нуждается в пополнении фактическим материалом и в системном анализе результатов клинико-лабораторной диагностики.

2.1.1.3 Реализация инфекционного потенциала вируса простого герпеса Основными этапами развития герпетической инфекции являются: первичная инфекция слизистых оболочек и кожных покровов, распространение вируса по периферическим нервным волокнам, острая инфекция ганглиев с последующим установлением латентности. Механизмы нахождения вируса в латентном состоянии и его реактивация до конца не изучены [15].

Исследования процесса формирования латенции показали, что герпесвирус, проходя путь от внешнего везикулярного элемента к нервным клеткам регионарного ганглия, трансформируется в безоболочечные L – и PREP – частицы и в таком виде длительное время персистирует в нервных клетках [127]. Становление латентной инфекции связано со структурными изменениями в вирусном геноме.

Это принципиально важное положение было установлено методами рестрикционного анализа и блоттинг-гибридизации с меченными Р вирусными ДНК при сравнении вирионной ДНК эталонного ВПГ-1. В латентном состоянии вирусный геном переходит в нереплецирующееся состояние, которое обеспечивают несколько генов вируса: ген, кодирующий синтез раннего белка, предшествующий репликации вирусной ДНК, и поздний ген вируса, кодирующий структурные полипептиды вириона. Предполагается, что процесс регулируется не самим вирусом, а генным аппаратом клетки хозяина [70]. Вирус циклически мигрирует между ганглием и поверхностью кожи (механизм «замкнутого цикла»). Для ВПГ характерна пожизненная персистенция в виде двухнитчатых кольцевых форм ДНК в нейронах чувствительных ганглиев и в коже [18, 109]. Установление латентной инфекции происходит параллельно развитию иммунных реакций организма хозяина, которые сдерживают размножение вируса в клетках слизистых оболочек и кожи, снимают сигнал, вследствие чего клетки ганглия становятся непермиссивными. Во время реинфицирования ганглия могут появляться новые фокусы латентной инфекции [7, 22].

Помимо нейрогенного пути распространения герпесвирусной инфекции (ГВИ), большое значение имеет гематогенный путь её распространения. Как было показано, в экспериментальных исследованиях на животных ВПГ обладает выраженным эритротропизмом, вследствие чего происходит инфицирование новых клеток. Кроме того, ВПГ взаимодействует с лейкоцитами, при этом наблюдаются грубые повреждения хромосомного аппарата клеток и скопления в них вирусного антигена [24, 37, 105].

Для объяснения механизмов персистенции ВПГ, которые допускают развитие рецидивов Roizman B. в 1965 году разработал две альтернативные гипотезы на основе статистического или динамического состояния вируса. Согласно «статистической гипотезе», ВПГ находится в клетках паравертебрального сенсорного ганглия в интегрированном или свободном непродуктивном состоянии. Под влиянием «провоцирующего фактора» вирус активируется и перемещается из ганглия по аксону периферического нерва в эпителиальные клетки, где реплицируется.

Предполагается, что этому во многом способствуют восприимчивость клеток и ослабление иммунологического контроля. По «динамической гипотезе» небольшое количество вируса постоянно реплицируется и выбрасывается из ганглия.

Достигая по нервному окончанию кожи, ВПГ вызывает микрофокусы инфекции, которые локализуются механизмами местного иммунитета, предупреждая развитие рецидивов или ослабляя их проявление [21]. Таким образом, в системе «вирус

– хозяин» устанавливается равновесие. Нарушение равновесия между клеткой и вирусом под влиянием «провоцирующего фактора» приводит к усилению репликации вируса, что клинически проявляется рецидивом. Затем между клеткой и вирусом устанавливается новое равновесие, при котором прекращается репликация ВПГ до тех пор, пока какой-либо «провоцирующий фактор» снова не нарушает этого баланса [20, 106].

И «статистическая», и «динамическая» гипотезы получили многочисленные подтверждения в экспериментальных и клинических исследованиях. Было показано, что характер клинического исхода первичной ГВИ в значительной степени определяется иммунным статусом организма [30, 54, 131]. Формирование противогерпетического иммунитета происходит как при манифестном, так и при бессимптомном течении, при этом иммунная система реагирует только на свободные вирусные частицы или антигенные детерминанты. Например, на геном вируса, интегрированный с геномом клеток паравертебральных ганглиев, реакции иммунной системы не наблюдается [24]. В тоже время следует отметить, что ВПГ обладает тропизмом к форменным элементам крови – эритроцитам, тромбоцитам, гранулоцитам, макрофагам, лимфоцитам, что способствует пожизненной персистенции структур вируса в организме хозяина и обуславливает изменение клеточного и гуморального иммунитета [129].

2.1.1.4 Особенности иммунитета при герпесвирусной инфекции

Реакции селективного (естественного или врождённого) иммунитета в отношении ВПГ можно условно подразделить на 3 активные фазы:

1 фаза – вирус подвергается атаке таких белков, как комплемент, противомикробные пептиды (ПМП), природные антитела класса М (Ig M);

2 фаза – продукция заражёнными эпителиальными клетками и резидентными дендритными клетками интерферонов (ИНФ), подавляющих репродукцию вируса;

3 фаза – противовирусную активность проявляют клетки-эффекторы: НФ, МФ и NK.

В 1 фазе барьером на пути проникновения вируса в организм являются механические факторы защиты, которые включают в себя нормальную бактериальную флору, гликокаликс и саму слизистую оболочку. Секретируемые клетками вещества – комплемент, ПМП и природные Ig M также препятствуют взаимодействию вируса с эпителиальными клетками. Комплемент проявляет свою активность в виде каскада реакций, расщепляющих белки, которые служат хемотаксинами для клеток воспаления и активаторами МФ. В исследованиях Harris S.L. et al (1990) г было показано достоверное снижение количества жизнеспособных вирионов ВПГ-1 в реакции нейтрализации после добавления комплемента [28]. Таким образом, комплемент оказывает нейтрализующее влияние на вирус до его прикрепления к клеткам-мишеням. Однако недавно было установлено, что гликопротеин С оболочки ВПГ-1 способен связываться с С3-компонентом, который образуется в результате реакций каскада расщепления белка, и тем самым эффективно защищать вирусные частицы от нейтрализующего действия комплемента [30, 101].

Секретируемые эпителиальными клетками покровных тканей и активированными фагоцитами ПМП участвуют в формировании молекулярной основы селективного иммунитета, в том числе за счет активации TLR-рецепторов. ПМП действуют как эндогенные антибиотики и участвуют в передаче сигналов клеткам, вовлеченным в процесс иммунной защиты [130]. Продукция и секреция природных Ig M осуществляется CD5+ В1 – лимфоцитами. Ig M являются очень важным компонентом селективного иммунитета, они эффективно активируют систему комплемента, опсонизируют вирионы и/или инфицированные клетки, способствуя таким образом их фагоцитозу. Комплексное действие комплемента, ПМП и селективных Ig M направлено на ограничение числа инфицированных вирусом клеток эпителия [118].

В фазе 2 продукция заражёнными клетками эпителия цитокинов (ИФН – и ИФН – ) увеличивает экспрессию адгезивных молекул на клетках-мишенях.

Необходимо отметить, что активная продукция ИФН – и начинается в первые часы после инфицирования и приводит ещё незаражённые клетки в состояние повышенной готовности к запуску механизмов противовирусной защиты [44, 51].



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |   ...   | 6 |
 
Похожие работы:

«Кузнецова Наталья Владимировна СОВРЕМЕННОЕ ГИДРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ РЕКИ ЯХРОМА КАК МОДЕЛЬНОЙ МАЛОЙ РЕКИ ПОДМОСКОВЬЯ 03.02.10 – гидробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Тюрин Владимир Анатольевич МАРАЛ (CERVUS ELAPHUS SIBIRICUS SEVERTZOV, 1873) В ВОСТОЧНОМ САЯНЕ (РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ЭКОЛОГИЯ, ОПТИМИЗАЦИЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ) Специальность 03.02.08 – Экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Д-р биол. наук, профессор М.Н. Смирнов Красноярск 201 Содержание Введение.. 4 Глава 1. Изученность экологии марала.. Биология марала.. 9...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«ШУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ВЛИЯНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ФОРМ АДАПТИВНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ 03.02.03 –...»

«Аканина Дарья Сергеевна РАЗРАБОТКА СРЕДСТВ ДЕТЕКЦИИ ВЫСОКОВИРУЛЕНТНОГО ШТАММА ВИРУСА ГРИППА А ПОДТИПА Н5N 03.02.02 – вирусология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Д.б.н., профессор Гребенникова Т. В. Москва 20 ОГЛАВЛЕНИЕ Список использованных сокращений 1. Введение 2. Обзор литературы 2.1. Описание заболевания 2.2. Общая характеристика вируса гриппа 2.3. Эпидемиология вируса гриппа А...»

«Шинкаренко Андрей Семенович Формирование безопасного и здорового образа жизни школьников на современном этапе развития общества Специальность 13.00.01– общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Абдуллоев Хушбахт Сатторович ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX 06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Макаров Владимир Владимирович...»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Баранов Михаил Евгеньевич Экологический эффект биогенных наночастиц ферригидрита при ремедиации нефтезагрязненных почвенных субстратов Специальность (03.02.08) – Экология (биология) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат...»

«Любас Артем Александрович ПАЛЕОРЕКОНСТРУКЦИЯ СРЕДЫ ОБИТАНИЯ ПРЕСНОВОДНЫХ МОЛЛЮСКОВ В НЕОГЕН-ЧЕТВЕРТИЧНЫХ ВОДОТОКАХ С ЭКСТРЕМАЛЬНЫМИ ПРИРОДНЫМИ УСЛОВИЯМИ Специальность 25.00.25 – геоморфология и эволюционная география Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор биологических наук...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Петухов Илья Николаевич РОЛЬ МАССОВЫХ ВЕТРОВАЛОВ В ФОРМИРОВАНИИ ЛЕСНОГО ПОКРОВА В ПОДЗОНЕ ЮЖНОЙ ТАЙГИ (КОСТРОМСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность: 03.02.08 экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В.В. Шутов...»

«ДОРОНИН Игорь Владимирович Cистематика, филогения и распространение скальных ящериц надвидовых комплексов Darevskia (praticola), Darevskia (caucasica) и Darevskia (saxicola) 03.02.04 – зоология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, заслуженный эколог РФ Б.С. Туниев Санкт-Петербург Оглавление Стр....»

«Смешливая Наталья Владимировна ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ СИГОВЫХ РЫБ ОБЬ-ИРТЫШСКОГО БАССЕЙНА 03.02.06 Ихтиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент Семенченко С.М. Тюмень – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Иртегова Елена Юрьевна РОЛЬ ДИСФУНКЦИИ СОСУДИСТОГО ЭНДОТЕЛИЯ И РЕГИОНАРНОГО ГЛАЗНОГО КРОВОТОКА В РАЗВИТИИ ГЛАУКОМНОЙ ОПТИЧЕСКОЙ НЕЙРОПАТИИ 14.01.07 – глазные болезни ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор...»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.