WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

«ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Федеральный центр охраны здоровья животных»

(ФГБУ «ВНИИЗЖ)

На правах рукописи

Абдуллоев Хушбахт Сатторович

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУСА

ИНФЕКЦИОННОГО БРОНХИТА КУР ГЕНОТИПА QX

06.02.02 «ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с

микотоксикологией и иммунология»



Диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Макаров Владимир Владимирович

Научный консультант:

кандидат ветеринарных наук Фролов Сергей Владимирович Владимир-2015 Оглавление Введение

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие сведения о болезни

1.2 Таксономия вируса

1.3 Физико-химические свойства вируса 11

1.4 Особенности эпизоотологии и патогенез 12

1.5 Диагностика и классификация штаммов вируса ИБК 13

1.6 Инфекционная активность вируса ИБК 19

1.7 Иммунитет 1.7.1 Пассивный иммунитет 23 1.7.2 Активный иммунитет

1.8 Контроль и профилактика ИБК 27

1.9 Заключение по обзору литературы 31

2. Собственные исследования

2.1 Материалы 33

2.2 Методы исследования 36 2.2.1 Оценка эпизоотической ситуации 36 2.2.2 Подготовка вируссодержащего материала 36 2.2.3 Определение условий культивирования штамма QX вируса ИБК на куриных эмбрионах 36 2.2.4 Репродукция вируса на культурах клеток 36 2.2.5 Титрование вируса 36 2.2.6 Определение степени антигенного родства 37 2.2.7 Оценка патогенных свойств штамма QX 38 2.2.8 Оценка протективной функции вакцины из штамма Н120 серотипа Mass против заражения штаммом QX 38 2.2.8.1 Тест на цилиостаз 2.2.8.2 Выделение нуклеиновой кислоты 39 ПЦР с обратной транскрипцией и 2.2.8.3

–  –  –

Введение Актуальность темы. Инфекционный бронхит кур вирусная

– высококонтагиозная болезнь птиц, возбудителем которой является представитель третьей группы семейства Coronaviridae Gammacoronavirus, Avian infectious bronchitis virus. Болезнь имеет широкое распространение и поражает птиц всех возрастов и направлений продуктивности. Характеризуется многообразием клинических признаков, вызывая поражения респираторной, мочевыделительной, репродуктивной и пищеварительной систем. Развитие заболевания среди восприимчивого поголовья сопровождается значительными экономическими потерями, которые складываются из гибели молодняка птиц (до 20% поголовья), снижения привесов, снижения яичной продуктивности, отрицательной конверсии корма и др. Профилактические мероприятия, направленные на предупреждение инфекции, значительно осложняются антигенной вариабельностью возбудителя, количество вариантов которого превышает 50 серотипов. Столь гетерогенная популяция вируса ИБК объясняется, во-первых, природой РНК-содержащих вирусов, склонных к мутациям, во-вторых, интенсивным применением живых вакцин, в-третьих, иммунным прессингом со стороны вакцинированного организма, что способствует преимущественному отбору и закреплению новых серовариантов вируса. На сегодняшний день нет чётких рекомендаций по классификации выделяемых изолятов вируса ИБК, но наиболее часто для этих целей используются молекулярные и серологические методы. В настоящий момент молекулярные методы диагностики вируса ИБК имеют первостепенное значение в диагностике ИБК. Многочисленные исследования по классификации штаммов вируса ИБК показали, что данные молекулярной диагностики совпадают с данными серологической диагностики.

В разный период времени на конкретных территориях имеет распространение определённый антигенный спектр вируса ИБК. Так, на примере Европы можно проследить, что голландские варианты вируса ИБК (штаммы D1466, D274) были доминирующими в 1980-е гг., серотип UK793B (штамм 4/91) – в начале 1990-х гг., итальянские штаммы серотипа Italy 02 – в конце прошлого века и начале этого, а в последнее время широко распространился китайский вирус, относящийся к генотипу QX [11, 14, 17, 74].

Вирусы, относящиеся к генотипу QX, вызывают различные клинические формы заболевания и были выделены как от невакцинированной, так и от вакцинированной птицы [48, 50, 58, 78, 124, 146, 158, 159]. Вирус ИБК генотипа QX был выявлен в РФ на Дальнем Востоке еще в 2001 г.





[5], затем вирус был обнаружен и в европейской части РФ [15]. В РФ за последние годы было выделено несколько изолятов, относящихся к генотипу QX из птицехозяйств Ивановской, Ростовской, Ульяновской областей и Краснодарского края. В связи с выделением в РФ относительно нового и малоизученного вируса ИБК генотипа существует научный и практический интерес к изучению его QX иммунобиологических свойств. Таким образом, изучение иммунобиологических свойств вируса ИБК генотипа QX штамма IBV RF 08-10 (далее по тексту штамма QX) является актуальной задачей ветеринарной науки и практики.

Степень разработанности проблемы. Изучению вопросов экологии, фенотипических свойств вируса ИБК, а также разработке мер борьбы с болезнью посвящено много научных публикаций. И в принципе на сегодняшний момент отработан подход к диагностике, культивированию и разработке средств профилактики в случае возникновения нового вируса ИБК актуального антигенного типа.

Впервые вирус ИБК генотипа QX был выделен и охарактеризован учеными из КНР, которые выделили вирус от бройлеров с поражением железистого желудка. Позже генетически идентичные вирусы выявляли в странах ЕС, в России, на Ближнем Востоке от больных птиц с признаками нефрозо-нефрита и патологией репродуктивной системы. Генетически схожие изоляты вируса ИБК, выделенные в разных странах, стали называть «QX-подобными».

Главным средством диагностики вируса ИБК являются молекулярные методы. На сегодняшний момент в базе данных GenBank представлена нуклеотидная последовательность генетически родственных штаммов этого генотипа. Для серологической идентификации вирусов генотипа QX доступны коммерческие наборы на основе РТГА. В плане вирусологических исследований вируса генотипа QX, помимо работ зарубежных учёных, некоторый опыт имеется и в ФГБУ «ВНИИЗЖ». В первую очередь здесь проводятся молекулярные исследования данного вируса и по результатам полногеномного секвенирования было показано, что генотип QX вируса ИБК значительно отличался от референсштаммов вируса ИБК и имел всего 60% гомологии по аминокислотной последовательности. Также проводились вирусологические исследования, направленные на изучение патогенности вируса для цыплят. В результате его патогенность не была установлена [15].

В связи с широкой распространенностью вируса ИБК серотипа D 388 (т.н.

штамм) в странах Европы разрабатывается стратегия QX-подобный специфической профилактики и борьбы с ним. Зарубежными учеными изучена протективность «классической» вакцины на основе штамма Н120 серотипа Mass против вируса генотипа QX [87]. Также было доказано, что последовательная иммунизация цыплят против ИБК вакцинами из разных серотипов: Mass и 793/В – обеспечивает высокий уровень защиты против заражения вирулентным вирусом генотипа QX [146]. Голландскими учёными была разработана живая вакцина на основе аттенуированного в КЭ штамма вируса генотипа QX [87]. Вакцина на основе аттенуированного штамма вируса генотипа QX была разработана и американскими учеными.8Исходя из вышесказанного, можно сделать вывод, что инфекционный бронхит кур, где этиологическим агентом является вирус генотипа QX, является актуальной проблемой во многих странах мира, и поэтому проводится огромная работа по изучению многих аспектов болезни.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей диссертационной работы являлось углубленное изучение иммунобиологических свойств вируса ИБК генотипа QX, выделенного на территории РФ в 2010 г.

В рамках основной цели были определены следующие задачи:

- провести анализ эпизоотической ситуации по ИБК в мире и в РФ, где этиологическим агентом выступает вирус генотипа QX;

- определить динамику накопления штамма QX вируса ИБК в КЭ;

- установить возможность адаптации вируса ИБК к культурам клеток различного происхождения и определить влияние адаптации на антигенные свойства вируса;

- изучить степень антигенного родства в реакции нейтрализации;

- определить патогенность штамма QX для птицы разного возраста;

- оценить протективные свойства коммерческой вакцины из серотипа Mass против заражения вирусом штамма QX.

Научная новизна исследований. В процессе исследований были получены следующие результаты, представляющие научный интерес.

–  –  –

2. Определены условия культивирования вируса генотипа QX в КЭ.

Установлены условия для адаптации вируса к культурам клеток различного происхождения и продемонстрировано отсутствие влияния культивирования в искусственных условиях на антигенную структуру вируса.

3. Выявлена степень антигенного родства вируса ИБК генотипа QX, выделенного на территории РФ, относительно референс-штаммов вируса.

Показано, что наименьшее антигенное родство вирус генотипа QX имеет с вирусом серотипа Mass и несколько большее, но также значительно отличное от вируса серотипов 793/В и D274.

4. Определена степень патогенности в экспериментальных условиях для птиц разного возраста и установлено его негативное влияние на органы респираторной, мочевыделительной и репродуктивной систем.

Практическая и теоретическая значимость исследования. В процессе научно-исследовательской работы по теме диссертации были разработаны три методических рекомендации ученым советом и утверждены (одобрены заместителем директора ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2014 г.).

Результаты, полученные при выполнении работы, позволили оценить эпизоотическую ситуацию по ИБК генотипа QX в мире и в РФ. Установлены основные иммунобиологические свойства вируса ИБК штамма QX, такие, как культуральные свойства, патогенность для птицы разного возраста, интенсивность репродукции вируса на неиммунной и иммунной птице с использованием непрямых методов обнаружения вируса (оценка цилиарной активности трахеи и ПЦР-РВ), изучена протективная активность коммерческой вакцины из серотипа Mass в отношении вируса штамма QX.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Анализ эпизоотической ситуации по ИБК, где этиологическим агентом является вирус генотипа QX, и оценка степени распространенности вируса данного генотипа в России и в мире.

2. Параметры культивирования вируса генотипа QX в куриных эмбрионах.

Условия для адаптации вируса ИБК к культурам клеток различного происхождения и её влияние на антигенные свойства вируса.

3. Степень антигенного родства штамма QX с референс-штаммами вируса ИБК.

4. Оценка протективных свойств коммерческой вакцины из серотипа Mass против заражения вирусом генотипа QX.

5. Подход к изучению интенсивности патологического процесса, инициируемого вирусом ИБК в организме птицы на основе непрямых методов обнаружения вируса (оценка цилиарной активности трахеи и ПЦР-РВ).

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена самостоятельно. В ходе выполнения работы практическую и консультативную помощь оказывали сотрудники ФГБУ «ВНИИЗЖ» В.Ю. Кулаков, Д.Л. Долгов, Б.Л. Манин и руководитель ООО «Тест-Пущино» М.В. Возняк, за что автор выражает искреннюю признательность.

Апробация результатов работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях: «Популяционное здоровье животных и эмерджентные инфекции в современных условиях».

(Междунар. научно-практ. конф., Волгоград, 2013); «Современные проблемы гуманитарных и естественных наук» (XVI Международная науч.-практ. конф., Москва, 2013); «Инновационные процессы в АПК» (VI Международная науч.практ. конф. преподавателей, молодых ученых, аспирантов и студентов Москва, 2014).

Промежуточные результаты экспериментов вошли в материалы ежегодных отчетов лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ» 2013гг.

Публикация научных исследований. По материалам диссертации опубликованы 4 научных работы, в том числе 3 работы в изданиях, рекомендованных ВАК РФ для кандидатских и докторских диссертаций.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 115 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, который состоит из 194 источников, в том числе 171-зарубежных авторов.

Работа иллюстрирована 14 таблицами, 11 рисунками и дополнена приложением аннотаций документов.

Место выполнения работы. Исследования по теме диссертации проводились в течение 2012-2015 гг. на базе лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ центр охраны здоровья животных»

«Федеральный (ФГБУ «ВНИИЗЖ»).

Благодарности. Автор выражает искреннюю признательность научному руководителю д.б.н., профессору Макарову Владимиру Владимировичу и к.в.н.

Фролову Сергею Владимировичу за помощь в организации и выполнении этапов работы, а также за повседневное внимание искренне благодарит сотрудников лаборатории профилактики болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ».

10

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общие сведения о болезни Инфекционный бронхит кур (ИБК) - вирусная контагиозная болезнь кур, возбудителем которой является представитель семейства Coronaviridae, рода Gammacoronavirus. ИБК - экономически значимое заболевание, так как сопровождается гибелью цыплят, снижением привесов, ухудшением конверсии корма и показателей яичной продуктивности [2, 3, 6, 188]. Несмотря на широкое применение специфических профилактических препаратов, заболевание остается одной из главных проблем птицеводства [2, 13, 122, 123].

Американские ученые Schalk и Hawn в 1931 г. [169] описали неизвестную болезнь дыхательной системы молодых цыплят, которая характеризовалась высокой контагиозностью и гибелью. Далее, Beach и Schalm в 1936 г. [34] доказали вирусную этиологию заболевания, а в 1937 г. Baudette [122] культивировал вирус в развивающихся куриных эмбрионах (РКЭ). Вирус ИБК – первый представитель семейства Coronaviridae в истории изучения возбудителей этого семейства. В последующие годы вирус ИБК, помимо респираторной болезни, был причиной снижения яичной продуктивности, развития нефрозонефритов, миопатий и других клинических признаков.

В настоящее время заболевание встречается во всех странах мира с развитым птицеводством. Штаммы серотипа Massachusetts (Mass) вируса ИБК были единственным антигенным вариантом вируса до середины 1950 г. и на его же основе изготавливались вакцины. Jungherr et al. в 1956 г. [130] в реакции нейтрализации (РН) определили новый антигенный вариант вируса ИБК, который отличался от вируса серотипа Mass. За последние 60 лет было выявлено и зарегистрировано огромное количество серотипов и вариантов вируса ИБК, которые, к сожалению, не имеют единой системы классификации. В настоящее время считают, что столь высокое генетическое и антигенное разнообразие вируса связано с точечными мутациями и рекомбинациями в геноме вируса [4, 50, 93, Перекрестная защита между серотипами невысока, и потому 95].

вакцинопрофилактика этой болезни затруднительна [18].

11

1.2 Таксономия вируса Вирус ИБК (Avian infectious bronchitis virus) относится к семейству Coronaviridae роду Gammacoronavirus. По современным данным номенклатуры вирусов семейства Coronaviridae, Arteriviridae, Roniviridae объединяются в недавно организованный порядок Nidovirales. Семейство Coronaviridae состоит из родов Coronavirus (всего 4 группы), Torovirus и ряд других еще не классифицированных коронавирусов позвоночных [123].

Коронавирусы в свою очередь имеют внутригрупповую цифровую классификацию 1, 2, 3, 4 или альфа, бета, дельта, гамма, соответственно. Альфабета-дельта Coronavirus вызывают различные заболевания млекопитающих и птиц. Gammacoronavirus объединяет коронавирусы птиц (ИБК, коронавирусы индеек и фазанов). В серологических реакциях было показано значительное антигенное внутривидовое различие коронавирусов птиц, хотя анализ генома этих вирусов указывал на высокий процент гомологии [42, 45, 83].

1.3 Физико-химические свойства вируса Вирус ИБК – оболочечный, округлой или плеоморфной формы вирус размером 80-120 нм в диаметре. Геном вируса состоит из одноцепочечной РНК, которая образует комплекс с нуклеокапсидным белком (N). Билипидная оболочка клеточной мембраны окружает нуклеокапсид вириона, что делает вирион чувствительным к липидным растворителям, например, хлороформу [113].

Комплекс РНК и нуклеокапсидный белок (спиральный нуклеокапсид) окружен мембраной. Оболочка вируса содержит три вирусных белка: белок шипов (S), гликопротеин типа I, который формирует на поверхности вируса пепломеры, напоминающие корону, мембранный белок (М) и гидрофобный оболочечный белок (E). Также известен ряд неструктурных белков вируса, которые участвуют в стадии репликации [121].

Плотность частиц вируса в растворе хлористого цезия составляет 1,24 г/мл.

Большинство штаммов вируса ИБК инактивируются в течение 15 минут при 56С или за 90 минут при 45С. Автоклавирование и воздействие микроволн губительно сказывается на инфекционной активности вируса, но вирусная РНК может быть обнаружена в ОТ-ПЦР. Вирус в составе экстраэмбриональной жидкости (ЭЭЖ) куриных эмбрионов (КЭ) может остаться жизнеспособным в течение многих лет при минус 30С, а в лиофилизированном виде – до 50 лет.

Вирус ИБК может быть выделен из инфицированных тканей, консервированных в 50% глицерине, что стоит учитывать при транспортировке образцов для исследования. Некоторые штаммы вируса устойчивы при рН 3, тогда как некоторые в кислой среде инактивируются. В культуре клеток вирус более стабилен при рН 6,0-6,5 чем при рН 7,0-7,5. Вирус эфирлабильный, но некоторые штаммы сохраняют активность после воздействия 20% эфира (4°С, 18 ч).

Воздействие 50% хлороформом при комнатной температуре в течение 10 мин и 0,1% дезоксихолатом натрия (4°C, 18 ч) полностью инактивирует вирус [144].

Вирус ИБК чувствителен к наиболее распространенным дезинфицирующим средствам, в том числе 0,05% или 0,1% бетапропиолактону [63] или 0,1% формалину. Бетапропиолактон не влияет на антигенные свойства вируса [145, 56].

1.4 Особенности эпизоотологии и патогенез ИБК – заболевание преимущественно кур (Gallus gallus domesticus), но ученым удавалось выделить вирус от фазанов, цесарок, индеек, голубей и гусей с различными патологиями [24, 43]. Воротами инфекции являются верхние дыхательные пути, где вирус реплицируется в эпителиальных тканях органов дыхания, а также вирус может реплицироваться в других органах, имеющих эпителиальные клетки (почки, яйцевод, придатки, пищевод, железистый желудок, слепокишечные миндалины, бурса Фабрициуса).

Источником болезни является больная птица, выделяющая вирус в окружающую среду с экскретами. Заражение в основном происходит воздушнокапельным путем или контактно через обслуживающий персонал или инвентарь.

Мнения ученых о трансовариальной передаче вируса расходятся [119].

Неодинаково мнение исследователей и о роли петушков в распространении вируса, т.к ряд племенных хозяйств не применяет профилактическую вакцинацию петушков [37, 151]. Ученым удавалось выделить вирус ИБК из семенников и спермы [36]. Некоторые авторы связывали эпидидимиты и камни в придатках семенников с воздействием вируса ИБК Показана также [119, 151].

чувствительность птиц к болезни в зависимости от породы [39, 41, 144]. Влияние сезонности на развитие болезни в условиях промышленного птицеводства не имеет большого значения, так как птиц выращивают круглогодично, а зоогигиенические нормы практически одинаковы во всех временных промежутках. Несмотря на высокую чувствительность к дезинфектантам и повсеместно проводимую специфическую профилактику в настоящее время не существует стран, благополучных по ИБК. Некоторые штаммы вируса способны вызывать болезнь у 100% поголовья, а смертность может достигать 20% [124].

Загрузка...

Болезнь распространена по всему миру, однако существуют эндемичные штаммы, характерные для той или иной географической зоны в определенное время.

В последнее время все чаше в литературе встречаются научные статьи по тематике молекулярной эпизоотологии ИБК в мире [25, 137, 138]. Ученым удается определить молекулярно-генетические свойства штаммов вируса ИБК, выделенных еще в 40-х годах прошлого столетия [74].

1.5 Диагностика и классификация штаммов вируса ИБК Диагностика ИБК основана на выделении вируса и определении специфического иммунного ответа серологическими методами. Наиболее часто в лабораторной практике используется вирусовыделение в КЭ, в трахеальной органной культуре (ТОК), в культуре клеток, молекулярно-генетические и серологические методы исследований. Успешная диагностика инфекции зависит от ряда факторов, в том числе от времени отбора проб от момента возникновения болезни, от уровня иммунитета к вирусу в момент заражения, от количества отобранных проб, от вида и качества проб, от генетических особенностей птицы, от способа содержания птицы [82]. Все штаммы вируса ИБК могут быть выделены из дыхательных путей в высоких концентрациях, особенно из трахеи в течение первых 3–5 дней после заражения. Вследствие того, что титр вируса значительно снижается на второй неделе после заражения, обнаружение вируса в этот период времени становится практически невозможным. При хроническом течении ИБК наибольшую диагностическую ценность имеют пробы слепокишечных миндалин и смывы из прямой кишки, нежели пробы респираторных органов [29, 35, 60, 128, 178]. Для повышения эффективности диагностики ИБК в качестве одного из методов рекомендуют использовать восприимчивых индикаторных птиц, содержать которых рекомендуют в течение недели совместно с другими птицами [94].

Прямые методы обнаружения вируса. Вирусовыделение является основным методом диагностики вируса ИБК. Вирус ИБК хорошо размножается в 10-дневных куриных эмбрионах и в высоких титрах накапливается в ЭЭЖ КЭ через 48-60 ч после заражения [16, 101]. При этом чувствительность эмбрионов к одному и тому же вирусу ИБК может быть неодинаковой [68, 157]. Выделение вируса и его серологическую идентификацию довольно успешно проводят также в ТОК [62]. Эта культура не требует предварительной адаптации вируса, но имеет высокую чувствительность. Обычно о положительной реакции судят по замедлению или прекращению двигательной активности реснитчатого эпителия, которое наступает через 3-4 сут после инокуляции, в зависимости от штамма и дозы вируса [8, 59].

Для вирусовыделения ИБК также успешно используют различные культуры клеток, но цитопатическое действие (ЦПД) и бляшки наблюдаются только в первично трипсинизированных тканях эмбрионов кур [91]. Иногда для репликации вируса и проявления ЦПД необходимо провести адаптацию вируса к данной культуре путём проведения нескольких пассажей [116]. Otsuki et al. [144] изучали размножение вируса ИБК в различных типах клеток и клеточных линий, включая первично трипсинизированные клетки почки эмбрионов кур, клетки HeLa, ВНК-21. Ими было показано, что только штаммы Beaudette и Holte вызывают ЦПД в культуре клеток ВНК-21, тогда как подобные изменения в культуре клеток HeLa не выявляются. Другими учеными при изучении патогенеза вируса ИБК удавалось адаптировать его к фибробластам эмбрионов кур, к клеткам эпителия трахеи, к культуре клеток Vero [179].

В настоящее время в диагностике ИБК широко используется метод ПЦР для обнаружения генома вируса ИБК. Разработаны и применяются на практике множество модификаций данного метода, о чем свидетельствуют большой объем исследований во всём мире. Был разработан и широко внедрен в лабораторную практику метод ОТ-ПЦР. Метод был впервые разработан Jackwood et al. в 1997 г.

[125] для амплификации гена S субъединцы S1. Также было разработано обнаружение гена N вируса ИБК в ОТ-ПЦР [52].

Многие вирусы животных и человека агглютинируют красные клетки крови, включая вирус ИБК. Однако вирус ИБК не агглютинирует эритроциты без предварительной обработки трипсином или нейраминидазой. РГА можно использовать для экспресс-выявления вируса ИБК в аллантоисной жидкости, особенно при исследовании полевых изолятов [40, 79, 187].

Метод иммуноферментного анализа впервые был разработан в 1970 г. и широко используется в ветеринарной практике для обнаружения антител к вирусу ИБК [57, 141, 191]. Однако для обнаружения антигена ИФА оказался непригоден из-за низкой чувствительности, которая составляет 102-103 ЦД 50.

Классификация вируса ИБК. На сегодняшний день отсутствует общепризнанная система классификации вируса ИБК. Согласно рекомендациям МЭБ, классификацию вируса ИБК проводят функциональными тестами, изучая иммунобиологические свойства вируса, и нефункциональными тестами, где изучается геном вируса [31].

Серологическая классификация вируса основана на использовании серологических методов – РТГА и РН, выполненных в КЭ, в ТОК или в культуре клеток.

В 1956 г. впервые обнаружили антигенную гетерологичность между двумя штаммами серотипа Mass и Conn вируса ИБК в реакции нейтрализации (РН) [91].

В настоящее время данный метод используется редко по нескольким причинам:

он трудоемкий, дорогостоящий и длительный, плохо поддаётся стандартизации и имеются технические сложности, связанные с чувствительностью биологических систем к неадаптированному вирусу и необходимостью получения специфических гипериммунных сывороток [57, 64, 132]. Поэтому данный метод в рутинных диагностических целях применяется редко, однако в научноисследовательских работах по идентификации вируса не имеет аналога [103, 106].

Использование РТГА для серологической идентификации вируса ИБК имеет своих сторонников и противников. Исследования ряда авторов показали, что серологическая идентификация штаммов вируса ИБК в РТГА существенно не отличается от идентификации в РН, выполненной в ТОК [41, 60]. Напротив, другие ученые считают, что из-за высокой перекрестной реакции между штаммами вируса ИБК РТГА менее специфична, чем РН [59].

В настоящее время для оценки антигенного родства между штаммами вируса ИБК в научных целях используют ИФА на основе моноклональных антител к S1 белку [30]. Так, ученые из Китая охарактеризовали 8 вариантных штаммов вируса ИБК с помощью ИФА на основе моноклональных антител [50].

G. K. Zellen и J. Thorsen [194], оценивая антигенное родство референтных штаммов вируса ИБК с помощью ИФА, показали высокую специфичность данного метода и его превосходство перед РН.

С тех пор, как было установлено антигенное разнообразие вируса ИБК, с использованием серологических методов было выявлено огромное количество антигенных вариантов вируса ИБК, количество которых в настоящее время достигает, по разным литературным данным, более 70 [17].

Характеристика и группирование штаммов вируса по генетическому признаку определяет генотип. Генетическая идентификация вируса ИБК методом ПЦР в настоящее время широко используется. Данный метод основан на разработке штаммспецифических праймеров, амплифицирующих наиболее вариабельный участок гена вируса ИБК, т.е. S1- ген. L. Calvin et al. [173] впервые описали данный метод и смогли идентифицировать и типировать 30 зашифрованных проб, которые ранее были серотипированы в РН. Результаты их работы не расходились с данными в РН. Молекулярные основы антигенной изменчивости вируса ИБК обычно определяют нуклеотидным секвенированием гена, кодирующего белок S или субъединцу S1 белка S. Это связано тем, что в белке S1 обнаружено большинство эпитопов, отвечающих за выработку нейтрализующих антител [43, 77, 172]. Однако в литературе встречаются сообщения ученых о генотипировании изолятов вируса ИБК по другим структурным белкам (M,N).

В настоящее время метод генетической идентификации вируса ИБК значительно чаще применяется при вирусологических работах, что, в свою очередь, вытесняет классические серологические методы РН и РТГА. Анализ доступной литературы показывает, что мнения исследователей о корреляции между молекулярными и серологическими методами при классификации штаммов разнятся.

Одни авторы показали, что антигенно родственные варианты вируса ИБК имели низкое генетическое сходство, составляющее от 20 до 50% [44, 125, 168].

D. Саvanagh [43] также доказал, что штаммы вируса ИБК, идентифицированные в РН как гетерологичные, имели незначительные различия нуклеотидной последовательности, составляющие 2-3%. С другой стороны, M. Jackwood et al.

[74], исследуя полиморфизм длин рестрикционных фрагментов гена S1, показали его корреляцию с серотипом и идентифицировали более 1000 изолятов вируса ИБК. Особо следует отметить результаты научных трудов S. Ladman et al. [132], которые изучали вопросы антигенного родства и протективного уровня между 5 штаммами вируса ИБК, выделенными на территории США. Авторы убедительно показали, что генетическое типирование вируса ИБК коррелирует с данными по типированию вируса in vivo, где были изучены перекрестные протективные свойства. На рисунке 1 приведены несколько примеров таких исследований, которые были систематизированы по доступным литературным данным. Таким образом, в большинстве случаев результаты генетической классификации, полученные на основе нуклеотидного секвенирования гена S1 вируса ИБК, согласуются с результатами серологической классификации, полученными в РН, что в итоге позволяет корректно проводить специфическую профилактику болезни [75].

–  –  –

Основными преимуществами молекулярных методов для генетической классификации являются скорость выполнения анализа и высокая специфичность [47, 53]. Незаменимым считается данный метод в молекулярной эпизоотологии и при проведении мониторинговых исследований. Однако отсутствует прямая связь между генетической структурой и фенотипическими свойствами возбудителя и в первую очередь с антигенной активностью.

Идентификация вируса ИБК в протектотипы – наиболее подходящая классификация с практической точки зрения. Сущность этого способа классификации состоит в изучении протективности штаммов in vivo с использованием метода перекрестной иммунизации, а отнесение нового штамма к определённому протектотипу производят на основании протективной защиты [31, 44, 102, 105]. Однако этот метод трудоемкий, дорогой, требует наличия восприимчивых птиц и соблюдения специальных условий проведения эксперимента. Поскольку эта классификация новая, то будут копиться данные о количестве и распределении вируса ИБК в протектотипы. По-видимому, количество протектотипов будет явно меньше, чем серотипов, что подтверждают результаты исследования M. R. Shirzad [174]. Авторы показали, что штаммы вируса, относящиеся к разным серологическим группам, обеспечивали перекрестный иммунитет.

К сожалению, не существует единой системы классификации и идентификации штаммов вируса ИБК, которые могли бы стандартизировать этот процесс. Поэтому к выделению и идентификации вируса ИБК необходимо подходить комплексно.

1.6 Инфекционная активность вируса ИБК Тяжесть и исход инфекции ИБК во многом зависит от биологии вируса.

Такие свойства, как патогенность и антигенность, а также взаимодействие вируса ИБК с другими патогенами будут определять тяжесть и исход болезни [112].

Особенности патогенеза вируса ИБК. Механизм патогенности вируса ИБК, как и многих других представителей семейства Coronaviridae, связан с репликацией вируса в чувствительных клетках и системным нарушением гомеостаза.

Вирус размножается в основном в верхних дыхательных путях, что впоследствии приводит к виремии и к поражению других органов [164]. Вирус может реплицироваться в эпителии органов ЖКТ, бурсы Фабрициуса, органов мочеполовой системы [9]. В целом высокая концентрация вируса обнаруживается в слизистой трахеи и в фекалиях птиц в период острого течения болезни и в стадии реконвалесценции [61]. В некоторых случаях ИБК протекает латентно, и больная птица является потенциальным источником заболевания.

Инфицированные птицы выделяют вирус постоянно в окружающую среду и загрязняют инвентарь, яйцо и обслуживающий персонал, которые являются основными источниками непрямого пути передачи инфекции [61].

Респираторные признаки болезни чаще наблюдаются у молодняка птиц, и чаще всего обусловливаются вторичными бактериальными инфекциями [129].

Репликация вируса ИБК в тканях респираторной системы вызывает характерные, но не патогномоничные признаки, такие, как кашель, чихание, трахеальные хрипы, носовые истечения. Иногда могут наблюдаться воспаление и припухлость периорбиты и синусов. В несложных случаях клинические симптомы сохраняются в течение 7-14 сут. У больных цыплят наблюдают депрессию, снижение привесов. Гибель цыплят часто возникает из-за асфиксии вследствие закупорки нижних отделов трахеи слизью. Вирус также может размножаться в эпителиальных клетках легких и воздухоносных мешков. Репликация вируса в этих тканях приводит к очаговым пневмониям и аэросаккулитам [49, 104, 193].

Особый интерес заслуживают некоторые штаммы ИБК, вызывающие преимущественное поражение урогенитальных органов взрослых птиц [37].

Нефропатогенные штаммы вируса ИБК, как правило, не вызывают у больных птиц респираторные признаки болезни [71, 141, 142], но могут быть причиной высокой смертности поголовья [110, 133, 152, 155]. R. Glahn et al. [98], изучая штамм Gray вируса ИБК в организме птиц биохимическими методами, пришли к выводу о том, что тяжесть и исход поражения почек зависят от уровня содержания кальция в рационе.

Поражение ЖКТ не всегда проявляется клинически или не имеет клинического значения при массовом содержании птиц. Несмотря на это, вспышки ИБК с развитием провентрикулитов были отмечены в птицеводческих хозяйствах Китая [124]. Главной проблемой при кишечной репликации вируса является длительная персистенция в организме, что может быть причиной длительной экскреции во внешнюю среду [128]. В последние десятилетия часто при проведении диагностических и мониторинговых мероприятий выявляют QXподобные штаммы вируса ИБК, которые филогенетически происходят из Китая.

Ученые отмечали высокую смертность поголовья, достигающую 20%, при вспышках ИБК, вызванных штаммами QX [124].

Патогенное действие вируса ИБК на репродуктивные органы обусловлено его тропностью и репликацией в эпителиальных клетках. Ранняя инфекция среди цыплят влечет за собой серьезные необратимые повреждения репродуктивных органов молодок [51]. Особенно это актуально для репродуктивных птиц и птиц яичного направления. Из-за инфекции у молодок нарушается процесс развития яйцевода, что приводит к появлению «ложных несушек» и значительно снижает экономические показатели [3, 49, 69]. У взрослых кур-несушек наблюдают различные дисфункции от депигментации яиц до снижения яйценоскости до 50% [51, 163].

Патология репродуктивной системы петушков, связанная с вирусом ИБК, также рассматривается в научных публикациях. Некоторые авторы описывают эпидидимит и образование камней в семенных канальцах или в придатках [36, 143], связанные с инфекцией ИБК, тогда как другие не обнаруживали повреждения в строме семенника [151]. Вирус ИБК был выделен из спермы инфицированных петушков спустя две недели после заражения [60], но до сих пор в доступной литературе нет данных о передаче половым путём.

Вирус ИБК непрерывно, в течение семи месяцев, выделяли в инфицированных, а также и вакцинированных стадах [28]. Возможным объяснением этого феномена являются постоянное перекрёстное инициирование в результате непрерывной экскреции вируса во внешнюю среду [60].

В начале 1990 г. в Англии от бройлеров с поражением мускулатуры был выделен вируса ИБК серотипа 793/В [32]. В связи со способностью данного возбудителя вызывать развитие миопатий он был подробно исследован. Было установлено, что данный вирус вызывал различную патологию, не характерную для ИБК, и до момента его выделения ученые не сталкивались с подобным клиническим проявлением болезни. В экспериментальных условиях было доказано, что вирус непосредственно не влияет на развитие миопатии пекторальных мышц, но косвенно воздействует на её развитие. По мнению ученых, особенность патогенеза ИБК была связана с образованием иммунокомплексов в стенке сосудов, что приводило к резкому ухудшению транспортировки питательных веществ к этой группе мышц и к развитию атрофии [82]. Некоторые ученые выделяли вирус серотипа 793/В от больных бройлеров из трахеи и слепокишечных миндалин, но не удавалось выделить вирус из мышц. Однако некоторым ученым с помощью ПЦР удалось обнаружить геном вируса 793/В в пораженных мышечных тканях [32].

Антигенная изменчивость вируса ИБК. Идентификация возбудителя, связанного с реальной вспышкой болезни, представляет проблему при диагностике вследствие непрерывного антигенного изменения вируса ИБК, которое способно индуцировать «прорыв вакцинации» [42]. С момента обнаружения серологических отличий штаммов вируса ИБК от классических штаммов серотипа Mass учеными было выделено огромное количество антигенных типов вируса ИБК по всему миру.

Антигенные варианты вируса ИБК, как полагают, возникают вследствие различных изменений в геноме. Это свойство характерно и для других РНКсодержащих вирусов. С другой стороны, появлению новых антигенных вариантов вируса способствует иммунный прессинг со стороны организма птицы из-за проведения специфических и неспецифических мероприятий по борьбе с болезнью [43].

Ассоциированное течение инфекции. Взаимодействие вируса ИБК на системном уровне при смешанном течении с другими инфекционными агентами, такими, как бактерии, вирусы, простейшие, микоплазмы, изучено достаточно широко [27, 84]. H. Adler et al. [27] в своих экспериментах показали, что одновременное инфицирование молодок вирусом ИБК серотипа Mass и M.gallisepticum вызывает у птиц тяжелые клинико-патологоанатомические изменения, тогда как при заражении по отдельности такие нарушения не обнаруживали. Подобные исследования были проведены J.T Blake. [36] на курахнесушках и было выявлено, что яйценоскость и качество яиц были ниже у птиц, зараженных одновременно вирусом ИБК и M.gallisepticum. Однако изучение смешанного течения вируса ИБК и M.synoviae не приводило к развитию подобной клинической и патологической картины [84, 97, 106, 195]. Уникальную экспериментальную модель разработали J. Smith et al. [176], заключающуюся в одновременном заражении птиц вирусом ИБК и E.сoli, что часто возникает в естественных условиях. Позже, используя эту модель, ученые описали вирулентные свойства изолятов вируса ИБК, протективность вакцин и восприимчивость различных генетических линий птиц [39, 65, 70]. Известно, что 23 вирус ИБК при культивировании в КЭ интерферирует с вирусом ньюкаслской болезни. L.G Raggi et al. [161] доказали, что интерференция между этими вирусами происходит и на уровне организма. О наличии интерференции авторы судили по низким титрам антител к вирусу НБ в РТГА, что свидетельствовало об угнетении вируса НБ вирусом ИБК. Аналогичные выводы сделали J. Gelb et al.

[88], используя в своих экспериментах различные комбинации штаммов вирусов НБ и ИБК. L.G. Raggi et al. [161] не выявили интерференци между вирусом ИБК и вирусом инфекционного ларинготрахеита (ИЛТ). Однако А.М. Pattison et al. [147] считают, что аэрозольная вакцинация против ИБК ухудшает иммунологическую толерантность и способствует увеличению смертности при инфекции вирусом ИЛТ.

Большинство опубликованных данных показывает, что инфицирование птиц вирусом ИБК приводит к повышению восприимчивости к другим патогенам.

Кроме того, увеличивается степень и продолжительность оппортунистической инфекции [152].

1.7 Иммунитет 1.7.1 Пассивный иммунитет.

Это невосприимчивость за счет пассивно, извне приобретенных готовых факторов иммунной защиты, главным образом антител. Врожденный иммунитет против внешних агентов включает физические барьеры, обеспечиваемые кожей и слизистыми оболочками, растворимые факторы, такие, как лизоцим, комплемент и белки острой фазы, а также клетки, такие, как макрофаги, гранулоциты и естественные киллеры (NK) [23]. Тем не менее, врожденный иммунитет характеризуется отсутствием специфичности и иммунологической памяти [81].

Так как применение методов искусственной специфической пассивной защиты в птицеводстве ограничено, изучение роли материнских антител (МАТ) при ИБК научно и практически оправдано. IgG, которые передаются от вакцинированных кур через желток потомству, могут быть обнаружены в сыворотке и в слизистой дыхательных путей вылупившихся цыплят [152]. Было показано, что такие антитела защищают цыплят от контрольного заражения в течение 4 недель в 24 зависимости от методов контрольного заражения и последующей оценки защиты [73]. В свою очередь, МАТ могут снизить активность живых вакцин, применяемых в суточном возрасте [72, 73, 135, 139]. Однако, несмотря на разные мнения об эффективности вакцинации против ИБК в суточном возрасте, ее рутинно проводят в птицеводстве. Тем не менее, вакцинация цыплят с МАТ в суточном возрасте против ИБК стимулирует выработку активного иммунитета в дыхательной системе [135]. Изучению роли МАТ при инфицировании вирусом ИБК и развитию активного иммунитета в ответ на вакцинацию посвящена работа S. P. Mondal et al. [139]. Авторы сообщали, что суточные цыплята имели высокий уровень МАТ в сыворотке (5,2 lg) и относительно низкий в дыхательных путях (2,7 lg). Тем не менее, уровень защиты от ИБК у этих цыплят зависел от МАТ, обнаруживаемых в респираторном тракте. В заключение они пришли к выводу, что вакцинация цыплят в суточном возрасте истощает уровень МАТ в респираторном тракте, и, как результат, снижает их резистентность к инфицированию вирусом ИБК.

Имеется публикация, где показана положительная корреляция между экономическими потерями, вызванными ИБК, и низкими или неровными титрами антител у птицы в мясном птицеводстве. Авторы пришли к выводу, что стратегия вакцинации родительского стада должна быть направлена на обеспечение высокого и ровного иммунного статуса к ИБК у потомства [118, 188].

1.7.2 Активный иммунитет.

Активный иммунитет формируется вследствие активации антигенспецифических эффекторных механизмов, в том числе B-клеток (гуморальных), Т-клеток (клеточных) и макрофагов, а также выработкой клеток памяти.

При экспериментальном заражении птиц или других животных вирусом ИБК отмечали иммунологическую реакцию организма, сопровождающуюся выработкой специфических антител. Гуморальные антитела, вырабатывающиеся в ответ на заражение вирусом ИБК, у птиц выявляют в ИФА, РН, РТГА и т.п. [75, 100, 189]. Выявление высоких титров гуморальных антител коррелирует с низким уровнем вирусовыделения из почек и герминативных органов и обеспечивает надежную защиту от снижения яйценоскости [75]. Тем не менее, ряд ученых полагает, что уровень гуморальных антител не коррелирует с устойчивостью птиц при контрольном заражении [29, 85]. Значение B-клеток при инфекции вирусом ИБК было изучено в экспериментах, когда птиц подвергали искусственному иммунодефициту (бурсэктомия, обработка циклофосфамидом) [81, 85, 61 149, 192]. У птиц с иммунодефицитом отмечали тяжелое и продолжительное проявление болезни с длительным периодом выделения вируса [81, 103].

Существуют три основных класса иммуноглобулинов птиц: IgM, или ранние, IgG или IgY, и IgA. В организме птицы, инфицированной вирусом ИБК, IgM выявляют в первые дни после инфекции, их уровень не стабилен и достигает своего пика к 8 дню после инфицирования [76, 111, 184]. Хотя и было показано, что выявление таких иммуноглобулинов в ИФА является информативным при диагностике ряда инфекций, но в рутинных диагностических исследованиях при ИБК этот анализ не применяется [111]. В 1980-х гг. J. Н. Darbyshire et al. [73] разработали метод выявления IgG методом ИФА и показали, что метод обладает высокой чувствительностью. IgG против вируса ИБК выявляют уже через 4 дня после инфицирования. Их концентрация достигает своего пика через 21 день, а далее происходит их снижение. Оценка поствакцинального иммунитета основана на выявлении антител данного класса с помощью доступных коммерческих ИФАнаборов [190].

Ряд исследователей предполагает, что выработка активного иммунитета к вирусу ИБК связана с условиями содержания и кормления [65, 66, 67].

Более века назад выдающийся иммунолог А. М. Безредка ввел в науку понятие иммунитет". Он определил местный иммунитет как "местный формирование невосприимчивости к инфекции отдельного органа, например, кожи или кишечника. Местный иммунитет дыхательных путей у птиц зависит от лимфоидной ткани, расположенной в голове и в трахеобронхиальной области [33, 174]. Антитела к вирусу ИБК в верхних дыхательных путях играют важную роль в защите от инфекции [111, 184]. Было показано, что у инфицированных кур специфические к вирусу ИБК IgA и IgG обнаруживаются в трахеальных смывах [152, 163]. Однако в более ранних исследованиях при изучении роли местных антител к вирусу ИБК ученые не определили потенциальное значение их в иммунитете. Было показано, что обнаружение высоких титров антител в слезной жидкости не гарантировало защиту птиц от контрольного заражения, тогда как некоторые птицы с более низкими показателями антител были устойчивыми [92, Этот феномен устойчивости можно объяснить комплексной 94].

организованностью иммунной системы: структурно-физиологических приспособлений устойчивости, неспецифических и специфических факторов иммунитета.

Так как вирус является внутриклеточным паразитом, очевидно, что клеточный иммунитет будет играть большую роль в иммунопатогенезе инфекции.

Тем не менее, в доступной литературе сообщения, касающиеся роли клеточноопосредованного иммунитета при ИБК, ограниченны.

Была доказана антиген-специфическая пролиферация Т-лимфоцитов у инфицированных или вакцинированных вирусом ИБК цыплят [183]. Химический иммунодефицит, вызванный обработкой цыплят циклоспорином с последующим заражением вирусом ИБК, приводил к высокой смертности из-за развития болезни [81]. В своих исследованиях доктор Pei J. [148] показал, что Т-клетки памяти играют важную роль при остром течении ИБК. Он доказал, что Т-клетки памяти, полученные в промежутке от 3 до 6 недель после заражения птицы, защищали других птиц от клинического проявления болезни в результате заражения штаммом Grey вируса ИБК. Эти клетки памяти были определены как CD8.

Цитотоксические Т-лимфоциты играют важную роль в (CTL) регулировании многих вирусных инфекции у млекопитающих. Цитотоксические лимфоциты индуцируются в селезенке цыплят при иммунизации высокой и низкой дозами аттенуированного и вирулентного вируса ИБК. После первичного введения вируса окулярным методом цитотоксические клетки в периферической крови не обнаруживают, после повторного введения происходит выработка цитотоксических клеток в периферической крови в течение 10 сут. Их количество в крови быстро снижается до низкого уровня, тогда как в селезенке их обнаруживают в течение нескольких недель. Это подтверждает, что цитотоксические клетки имеются в запасе в виде активных клеток в селезенке, и там же имеются клетки памяти, способные быстро размножаться [53].

Максимальный специфический ответ цитотоксических лимфоцитов (CTL) на вирус ИБК с лизисом 82% меченых клеток-мишеней был обнаружен через 10 сут после инфицирования. Специфический CTL-ответ не снижался до тех пор, пока титр вируса был высоким в почках и легких (8 сут). Таким образом, прекращение болезни связано со специфическим вирусу ИБК CTL-ответом, и показана его главенствующая роль в патогенезе острой инфекции. В дальнейшем уровень CTL обычно снижается, а увеличивается количество IgG. На поздних стадиях инфицирования основная роль в защите от инфекции принадлежит гуморальному иммунитету [172, 177].

Очевидно, что имеется необходимость в проведении исследований, направленных на изучение функций иммунитета при инфицировании вирусом ИБК. Такие знания позволят в дальнейшем в диагностике и профилактике болезни.

8. Контроль и профилактика ИБК На сегодняшний день нет ни одной страны с интенсивным птицеводством, благополучной по ИБК [31]. Это подтверждается ежегодными отчетами странчленов МЭБ.

В идеале для контроля ИБК достаточно выполнение основных требований биобезопасности: соблюдение практики "все пусто-все занято", очистка и дезинфекция, строгая изоляция и замена поголовья [43]. Тем не менее, соблюдение этих норм оказывается невозможным в основном для птичников, выращивающих бройлеров, из-за интенсивности программы производства мяса. В этих условиях иммунизация остается единственным надежным инструментом в контроле ИБК [43, 115, 116, 134].

Идея специфической иммунизации птиц против ИБК возникла из наблюдений за инфекциями, возникающими в полевых условиях. Было установлено, что птицы, инфицированные вирусом ИБК до яйцекладки (между 8 и 16 неделями), становились невосприимчивыми к болезни до момента яйцекладки [91].

Для специфической профилактики ИБК используются живые, инактивированные и векторные вакцины [6, 10, 11, 17, 18, 89, 107, 154, 156, 176, 186 ].



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
Похожие работы:

«КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ 14.01.12 онкология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научные руководители: доктор биологических наук, Любимова Н.В. доктор медицинских наук, Портной С.М. Москва, 2015 г....»

«Кириллин Егор Владимирович ЭКОЛОГИЯ ОВЦЕБЫКА (OVIBOS MOSCHATUS ZIMMERMANN, 1780) В ТУНДРОВОЙ ЗОНЕ ЯКУТИИ 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: д. б. н., профессор Мордосов И. И. Якутск – 2015 Содержание Введение.. Глава 1. Краткая физико-географическая...»

«Шапурко Валентина Николаевна РЕСУРСЫ И ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ КАЧЕСТВО ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ (НА ПРИМЕРЕ БРЯНСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Сафранкова Екатерина Алексеевна КОМПЛЕКСНАЯ ЛИХЕНОИНДИКАЦИЯ ОБЩЕГО СОСТОЯНИЯ АТМОСФЕРЫ УРБОЭКОСИСТЕМ Специальность 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Будилова Елена Вениаминовна Эволюция жизненного цикла человека: анализ глобальных данных и моделирование 03.02.08 – Экология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант доктор биологических наук, профессор А.Т. Терехин Москва 2015 Посвящается моим родителям, детям и мужу с любовью. Содержание Введение.. 5 1. Теория эволюции жизненного цикла. 19...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«Сухарьков Андрей Юрьевич РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ОРАЛЬНОЙ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНАЦИИ ЖИВОТНЫХ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: кандидат ветеринарных наук, Метлин Артем Евгеньевич Владимир 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя бешенства 2.2 Эпизоотологические...»

«Якимова Татьяна Николаевна Эпидемиологический надзор за дифтерией в России в период регистрации единичных случаев заболевания 14.02.02 эпидемиология диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«ХАПУГИН Анатолий Александрович РОД ROSA L. В БАССЕЙНЕ РЕКИ МОКША 03.02.01 – ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Силаева Татьяна Борисовна д.б.н., профессор САРАНСК ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава 1. ИСТОРИЯ ИЗУЧЕНИЯ РОДА ROSA L. В БАССЕЙНЕ МОКШИ. Глава 2. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РОДА ROSA L. 2.1. Характеристика рода Rosa L. 2.2. Систематика рода Rosa L. Глава 3....»

«Хохлова Светлана Викторовна ИНДИВИДУАЛИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ РАКОМ ЯИЧНИКОВ 14.01.12-онкология ДИССЕРТАЦИЯ На соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: Доктор медицинских наук, профессор Горбунова В.А Москва 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ Введение Глава 1. Обзор литературы 1.1. Общая характеристика рака яичников 1.1.1. Молекулярно-биологические и...»

«Петухов Илья Николаевич РОЛЬ МАССОВЫХ ВЕТРОВАЛОВ В ФОРМИРОВАНИИ ЛЕСНОГО ПОКРОВА В ПОДЗОНЕ ЮЖНОЙ ТАЙГИ (КОСТРОМСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность: 03.02.08 экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор В.В. Шутов...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»

«ПИМЕНОВА ЕКАТЕРИНА ВЛАДИМИРОВНА РАЗРАБОТКА МЕТОДА ОЦЕНКИ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ АНТИГЕНОВ ВОЗБУДИТЕЛЯ МЕЛИОИДОЗА IN VITRO НА МОДЕЛИ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: доктор...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«ШУБНИКОВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ВЛИЯНИЕ ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ И ФОРМ АДАПТИВНОЙ ИЗМЕНЧИВОСТИ НА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ПАТОГЕННЫХ БУРКХОЛЬДЕРИЙ К ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИМ ПРЕПАРАТАМ 03.02.03 –...»

«АБДУЛЛАЕВ Ренат Абдуллаевич ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ МЕСТНЫХ ФОРМ ЯЧМЕНЯ ИЗ ДАГЕСТАНА ПО АДАПТИВНО ВАЖНЫМ ПРИЗНАКАМ Шифр и наименование специальности 03.02.07 – генетика 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени кандидата...»

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.