WWW.KONF.X-PDF.RU
БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА - Авторефераты, диссертации, конференции
 

Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |

«КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ...»

-- [ Страница 1 ] --

Федеральное государственное бюджетное учреждение

«Российский онкологический научный центр имени Н. Н. Блохина»

Министерства здравоохранения Российской Федерации

На правах рукописи

КОЖАРСКАЯ ГАЛИНА ВАСИЛЬЕВНА

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО

МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

14.01.12 онкология



Диссертация на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Научные руководители:

доктор биологических наук, Любимова Н.В.

доктор медицинских наук, Портной С.М.

Москва, 2015 г.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………….............5 ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………...........11

1.1. Современные представления о метастатическом поражении скелета (клиника, диагностика, патогенез)………………………………………………………………11 1.1.1 Клиника костных метастазов у больных раком молочной железы…..11 1.1.2 Инструментальные методы диагностики………………………………13 1.1.3 Факторы прогноза при раке молочной железы и при поражении скелета………………………………………………………………………15 1.1.4 Молекулярные механизмы метастазирования в кости.…………….....

1.2. Общие представления о биохимических маркерах костного метаболизма и их клиническая значимость ……………..…

1.2.1. Характеристика маркеров остеолиза и их значение в диагностике, мониторинге и прогнозе поражения скелета………………………………………..23 1.2.2. Характеристика маркеров остеосинтеза и их клиническое значение....33 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ……………………………………..…....38

2.1. Характеристика больных раком молочной железы……………………............38

2.2. Специальные биохимические методы исследования………………….............47

2.3. Статистические методы исследования………………………………………....49

ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МАРКЕРОВ КОСТНОГО

МЕТАБОЛИЗМА У БОЛЬНЫХ РАКОМ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ………….50

3.1. Исследование биохимических показателей остеолиза у больных раком молочной железы с метастазами в костях по сравнению с практически здоровыми женщинами, больными остеопорозом и больными без поражения скелета……………………………………………………………………………..51 3.1.1. Результаты определения С-концевого телопептида коллагена I типа в сыворотке крови пациенток изучаемых групп……………………….….51 3.1.2. Результаты определения экскреции дезоксипиридинолина с мочой у пациенток изучаемых групп………………………………………….…...58 3.1.3. Результаты определения тартратрезистентной кислой фосфатазы -5b в сыворотке крови пациенток изучаемых групп………………………..…61 3.1.4. Результаты определения Дкк-1 в сыворотке крови пациенток изучаемых групп …………………………………………………………..65

3.2. Исследование биохимических показателей остеосинтеза у больных раком молочной железы с метастазами в костях по сравнению с практически здоровыми женщинами, больными остеопорозом и больными без поражения скелета…………………………………………………………………………….66 3.2.1. Результаты определения костного изофермента щелочной фосфатазы в сыворотке крови пациенток изучаемых групп ……………………..…...66 3.2.2. Результаты определения остеокальцина в сыворотке крови пациенток изучаемых групп…………………………………………………………….....70

3.3. Исследование маркеров костного метаболизма у больных с развившимися метастазами в костях в процессе динамического наблюдения …………..............72

ГЛАВА 4. АНАЛИЗ КЛИНИЧЕСКОЙ ЗНАЧИМОСТИ БИОХИМИЧЕСКИХ

МАРКЕРОВ КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА…………………………………...78

4.1. Диагностическая значимость маркеров костного метаболизма у больных раком молочной железы при поражении скелета……………………………...…...78

4.2. Значение маркеров костного метаболизма в оценке эффективности терапии больных раком молочной железы с метастазами в костях…………………..……82

4.3. Взаимосвязь биохимических маркеров резорбции и формирования костной ткани с клиническими проявлениями метастазов в костях…………..………….…85

4.4. Прогностическое значение маркеров костного метаболизма у больных раком молочной железы……………………………………………………………..…..91 4.4.1. Характеристика общей выживаемости и выживаемости до прогрессирования больных раком молочной железы …………………………91 4.4.2. Общая выживаемость и выживаемость до прогрессирования больных раком молочной железы и ее связь с маркерами костного метаболизма…….94 4.4.3. Включение маркеров костного метаболизма в обследование больных с поражением и без поражения скелета…





ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ…………………………….

….....106 ВЫВОДЫ…………………………………………………………….……..……....119 Список сокращений ………………………………………………………....…...... 121 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………...123

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы Рак молочной железы (РМЖ) занимает первое место в структуре заболеваемости злокачественными опухолями женского населения России и стран СНГ. За последние 15 лет отмечен рост уровня заболеваемости РМЖ и имеется тенденция к дальнейшему повышению этого показателя [2]. При этом, несмотря на успехи, достигнутые в диагностике и совершенствовании методов лечения, смертность от РМЖ остается высокой.

При диссеминации опухоли у больных РМЖ скелет является третьей по частоте локализацией метастазов. Метастазирование в кости часто сопровождается скелетными осложнениями, в числе которых патологические переломы, компрессия спинного мозга, злокачественная гиперкальцемия и неврологические синдромы и, как следствие, способствует использованию наркотических анальгетиков, лучевой терапии и хирургических вмешательств, что снижает качество жизни пациенток и приводит к стойкой инвалидизации [6, 29, 31, 93]. Скелетные осложнения развиваются у 60-70% больных РМЖ и до 50%

– при злокачественных опухолях других локализаций, что обуславливает актуальность повышения точности диагностики и оптимизации лечения костных метастазов [22, 50, 75, 88, 94].

В настоящее время ученые существенно продвинулись в понимании патогенеза метастазирования в кости и связанного с ним остеолиза. Поражение скелета при раке молочной железы носит преимущественно литический характер, при этом основным механизмом остеолиза является активация остеокластов под действием ауто- и паракринных факторов, продуцируемых злокачественными клетками [103, 113].

Достижения последних лет в изучении молекулярных механизмов костного ремоделирования способствовали поиску чувствительных и специфических критериев, отражающих интенсивность процессов деструкции и формирования костной ткани. Интерес к биохимическим маркерам костного ремоделирования как неинвазивным методам обследования онкологических больных с поражением скелета усиливается по мере внедрения в клиническую практику современных лабораторных технологий. Работы большинства исследователей свидетельствуют о клинической значимости биохимических маркеров остеолиза: (N-концевого телопептида-Ntx, телопептида коллагена типа-СТХ, C-концевого крупномолекулярного С-телопептидного фрагмента коллагена I типа-ICTP, Дпиддезоксипиридинолина, Пид- пиридинолина) и остесинтеза: (костного изофермента щелочной фосфатазы – КЩФ) прежде всего в целях мониторинга поражения скелета [17, 57]. В последнее время появляются работы, свидетельствующие о диагностической значимости биохимических показателей крови и мочи при метастазировании в кости солидных опухолей различных локализаций [74, 146].

Выполненный Jung K. и Lein M. мета-анализ по определению маркеров костного метаболизма у пациентов со злокачественными опухолями различных локализаций (рак легкого, почки, простаты, молочной железы) свидетельствует о необходимости разработки количественных критериев для каждого из маркеров с учетом их специфичности, а также особенностей костной деструкции.

Стандартизация исследования биохимических маркеров костного ремоделирования по мнению выше указанных авторов необходима для оптимизации обследования онкологических больных с опухолями повышенной остеотропности.

Цель исследования:

изучение значимости маркеров костного метаболизма в диагностике, мониторинге и прогнозе поражения скелета у больных раком молочной железы для улучшения отдаленных результатов лечения и качества жизни.

Для достижения цели были поставлены следующие основные задачи исследования:

1. Провести исследование показателей костной резорбции (Дпид, ТРКФ, СТХ, Дкк-1) и костеобразования (КЩФ, остеокальцина) у больных раком молочной железы с поражением скелета по сравнению с практически здоровыми женщинами, больными остеопорозом и пациентками без поражения скелета.

2. Сопоставить корреляционные соотношения между уровнями изучаемых показателей крови и мочи у больных с поражением и без поражения скелета.

3. Провести анализ взаимосвязи маркеров костного метаболизма крови и мочи с клиническими проявлениями метастазов в костях и оценить их чувствительность, специфичность и диагностическую значимость.

4. Проанализировать значение маркеров костного метаболизма в оценке эффективности терапии больных с метастазами в костях.

5. Оценить прогностическое значение биохимических маркеров остеолиза и остеосинтеза при их динамическом исследовании у больных раком молочной железы.

Научная новизна исследования Впервые на большом материале проведено изучение данных клинических, инструментальных и биохимических методов обследования при оценке метастатического поражения скелета у больных раком молочной железы в процессе системной противоопухолевой и костно-направленной терапии.

Установлена взаимосвязь уровней биохимических маркеров костного метаболизма с клиническими проявлениями опухолевого процесса в костях (распространенность поражения, патологический перелом, выраженность болевого синдрома и получаемое обезболивание).

Впервые проанализировано значение маркеров костного метаболизма в мониторинге метастазирования в кости рака молочной железы. Доказана самостоятельная значимость СТХ в качестве биохимического критерия для оценки метастатического остеолиза, наблюдения за эффективностью проводимой терапии и улучшения отдаленных результатов лечения.

Впервые на большой группе больных раком молочной железы оценена значимость маркеров остеолиза (СТХ) и остеосинтеза (КЩФ) при их динамическом определении в качестве независимых факторов прогноза развития костных метастазов.

Практическая значимость Повышение уровней СТХ и КЩФ при их динамическом определении у 30 из 167 (18%) больных без клинических проявлений болезни опережало манифестацию костной деструкции на 3-24 месяца. Включение маркеров в обследование больных раком молочной железы способствует повышению точности ранней диагностики костных метастазов.

У больных с высокими уровнями маркера остеолиза (СТХ 0,74 нг/мл) и остеосинтеза (КЩФ 43,7 Ед/л) значительно раньше возникали скелетные осложнения, резко ухудшающие качество жизни и в целом показатели общей, выживаемости до прогрессирования и безрецидивной. Высокий уровень остеолиза отражает злокачественное течение костных метастазов рака молочной железы.

Изменение уровней маркеров на 50% по отношению к их исходным значениям у больных раком молочной железы является биохимическим критерием для качественной и своевременной оценки эффекта лекарственной терапии.

При многофакторном анализе установлена прогностическая значимость СТХ наряду с основными клиническими характеристиками рака молочной железы и эффективностью первичного лечения. Полученные результаты послужили основанием для включения СТХ в обследование больных раком молочной железы с поражением и без поражения скелета для улучшения отдаленных результатов лечения и качества жизни.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. У больных раком молочной железы с поражением скелета выявлено достоверное повышение уровней маркеров костной резорбции (СТХ, Дпид, ТРКФ) и костеобразования (КЩФ). Наиболее значимым маркером метастазирования в кости является СТХ.

2. Установлена достоверная зависимость маркеров костного метаболизма от клинических проявлений метастазов в костях (распространенность поражения скелета, наличие патологического перелома, выраженность болевого синдрома и употребление анальгетиков). Наиболее информативными показателями являются СТХ и КЩФ.

3. СТХ – чувствительный маркер мониторинга, отражающий эффективность лечения больных с метастазами в костях. У больных при поражении скелета на фоне эффективной терапии бисфосфонатами доказано достоверное снижение показателя по сравнению с исходными значениями и повышение его при отсутствии эффекта.

4. У больных раком молочной железы в процессе динамического определения маркеров костного метаболизма СТХ и КЩФ зарекомендовали себя как независимые факторы прогноза развития костных метастазов.

Апробация работы состоялась на совместной научной конференции сотрудников отделения лаборатории клинической биохимии, лаборатории клинической иммунологии опухолей, отделения хирургии опухолей женской репродуктивной системы, отделения химиотерапии и комбинированного лечения злокачественных опухолей, отделения диагностики опухолей, отделения опухолей молочных желез, кафедры онкологии РМАПО МЗ РФ, отделения химиотерапии института клинической онкологии ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н.

Блохина» июня 2015г. Материалы диссертации представлены на международной научно-практической конференции «Ведущий многопрофильный госпиталь страны: основные функции, достижения и направления развития»

(Москва, 2006 г.), the 36th Meeting of the International Society of Oncology and BioMarkers (Tokyo, Japan, 2008), VI Международной конференции «Молекулярная медицина и биобезопасность» (Москва, 2009г.) и международной конференции «Национальные дни лабораторной медицины» (Москва, 2010 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 137 страницах, состоит из введения, обзора литературы, характеристики клинического материала и методов исследования, собственных результатов исследования, выводов и списка литературы, включающего отечественных и 123 зарубежных источника.

Работа иллюстрирована 19 таблицами и 24 рисунками.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕТАСТАТИЧЕСКОМ

1.1.

ПОРАЖЕНИИ СКЕЛЕТА (КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА, ПАТОГЕНЕЗ)

В клинической практике появление костных метастазов представляет значимую клиническую проблему для сохранения качества жизни больного [4, 112]. Современные лучевые методы диагностики поражения скелета обладают различной диагностической чувствительностью и специфичностью, имеют свои преимущества и ограничения и не всегда дают исчерпывающую информацию о состоянии костной деструкции не только на этапе их первичного выявления, но и в процессе лечения, что может привести к ошибочной тактике ведения больного.

1.1.1. Клиника костных метастазов у больных раком молочной железы

Клиническая картина костных метастазов у больных РМЖ выражается хроническим болевым синдромом, деформацией, патологическими переломами, компрессией спинного мозга, злокачественной гиперкальциемией и неврологическими нарушениями [9, 31, 107, 133]. У больных РМЖ боль, как проявление заболевания, часто вызвано метастатическим поражением скелета (44%), несколько реже – метастазами во внутренние органы (34%) и местным распространением процесса (22%). Болевой синдром имеет место у 70% больных с метастазами в костях в течение жизни. Адекватное обезболивание при этом затруднительно без использования наркотических анальгетиков и проведения лучевой терапии, возможности которой ограничены необходимостью повторного облучения, диссеминацией поражения, а также мигрирующим характером болей.

Патогенез болевого синдрома у больных при поражении скелета в последнее время детально изучается. Известны несколько механизмов развития болевого синдрома. Костная боль возникает вследствие деструкции костей остеокластами, патологических переломов, компрессии и инфильтрации нервных стволов и рефлекторном мышечном спазме [44]. Выраженность боли у больных оценивается с помощью вербальных (словесных) шкал [10].

При поражении скелета у 25% больных РМЖ наблюдаются патологические переломы длинных трубчатых костей, у 46% – компрессионные переломы позвонков [8, 55, 76, 88]. Переломы позвонков часто сопровождаются усилением болей, кифозом, снижением их высоты и неврологическими нарушениями.

Деструкция ребер и проксимальных отделов плечевой и бедренной костей наблюдаются в 3 раза реже, чем переломы позвонков. В результате перелома позвонка развивается компрессия спинного мозга. Синдром компрессии спинного мозга развивается у 1-5% больных с метастатическим раком молочной железы.

Синдром сдавления спинного мозга возникает в органах вследствие экстрадуральных метастазов (95%) и обычно за счет поражения позвонков:

поясничных и крестцовых (59%), грудных (57%) и шейных (17%) [9]. Первым проявлением прогностически неблагоприятного осложнения (компрессии спинного мозга) является хронический болевой синдром, который встречается у большинства больных (90%). У больных с компрессией спинного мозга развиваются неврологические нарушения (дисфункция тазовых органов, парезы и параличи). При своевременном лечении у 10% больных с параличами развивается обратимый эффект. Не менее серьезным скелетным осложнением является злокачественная гиперкальцемия, которая выявляется у 10-30% больных РМЖ с костными метастазами и может приводить к полиорганным нарушениям [46].

Гиперкальцемия у больных расценивается как ургентное состояние, проявляющаяся слабостью, атаксией, тошнотой, гипотонией, полиурией, характерными изменениями зубца Т на электрокардиограмме. В отсутствии коррекции осложнения развиваются дегидратация, почечная недостаточность, кома и смерть.

Обобщая выше сказанное, следует отметить, что метастазирование в кости у онкологических больных обусловливает плохой прогноз течения заболевания, сопровождается частым развитием скелетных осложнений, значительно ухудшает качество жизни, увеличивает смерть и повышает расходы на лечение. По данным разных авторов 5-летняя выживаемость больных с изолированными метастазами в костях колеблется от 20 до 31%, тогда как с висцеральными и костными метастазами составляет около 20%, что определяет важность своевременной диагностики [4, 49].

1.1.2. Инструментальные методы диагностики Современная диагностика метастатического поражения костной системы располагает различными методами визуализации [11, 13, 21, 23, 78, 80].

Основным методом выявления костных метастазов является рентгенологический.

К рентгенологическим методам относятся: планарная рентгенография (Рг), трансмиссионная компьютерная томография (КТ) и магнитно-резонансная томография (МРТ). Метастазы в костях с анатомо-рентгенологической точки зрения бывают остеокластические (литические), остеобластические (склеротические) и смешанные, имеющие признаки как остеолиза, так и склероза.

Рентгенологический симптом при поражении скелета – деструкция. Осложнением остеолитического варианта метастаза является перелом в виде передней клиновидной деформации или центральных компрессионных переломов или полного сдавления позвонка с коллапсом заднего участка тела позвонка. Кроме клиновидной деформации в позвонке выявляются признаки метастатического поражения замыкательных пластинок в виде деструкции, уплотнения или склеротических изменений. При остеобластических метастазах пораженная кость теряет структурный рисунок.

Следует отметить, что чувствительность рентгенографии, как основного метода диагностики костных метастазов, ограничена. Примерно в 30% случаев метастазы, выявляемые при остеосцинтиграфии (ОСГ), рентгенологически не выявляются, так как для его визуализации необходима деминерализация костной ткани не менее 40-50%. Существующие изменения, которые предшествуют развитию деструкции костного матрикса, не позволяют применять эти методы для ранней диагностики.

Загрузка...
В клинической практике для уточнения поражения скелета используют и другие методы визуализации (КТ, МРТ, ПЭТ). РКТ как метод аксиальной визуализации расширяет возможности рентгенографии в оценке состояния костной ткани. Высокая разрешающая способность РКТ, его чувствительность, позволяет выявить мелкие очаги (от 0,5 мм), тогда как на планарной рентгенограмме они не видны. Диагностические возможности МРТ, как одной из современных методик, велики, однако в оценке состояния костной системы она уступает КТ. При выявлении метастазов в осевой скелет МРТ более информативна, чем КТ, но при наличии метастазов в плоских костях ее возможности весьма ограничены. Однако использование высокотехнологичных методов визуализации в качестве дополнения связано со значительным увеличением стоимости обследования.

К радиодиагностическим методам относятся планарная ОСГ и позитронная эмиссионная томография (ПЭТ). Известно, что радионуклидный метод обладает высокой чувствительностью по отношению к процессам формирования костной ткани, но не к процессам остеолиза [12]. В клинической практике наряду с однофотонной эмиссионной компьютерной томографией (ОФЭКТ), основанной на использовании гамма-излучающих радионуклидов, большую диагностическую роль играет и ПЭТ. При этом в качестве метки применимы такие биологически важные ультракороткоживущие позитрон-излучающие радионуклиды, как C, F-фтордезоксиглюкозы (18F-ФДГ), которые обладают уникальными N, O, свойствами радиофармпрепарата. При обследовании онкологических больных основной задачей ПЭТ является прогностическая оценка биологической активности первичной опухоли, определение распространенности опухолевого процесса, раннее выявление рецидивов и мониторинг эффективности противоопухолевого лечения [24].

По диагностической ценности ОСГ опережает рентгенологический метод от 3-6 месяцев до года, характеризуется высокой чувствительностью (99,3%) и низкой специфичностью (до 77,5%) по сравнению с рентгенографией [14]. В то же время при оценке информативности методов диагностики поражения скелета другими авторами [23, 61] было установлено, что ПЭТ имеет одинаковую чувствительность (77,7%) с ОСГ, но обладает более высокой специфичностью (97,6 и 80,9% соответственно). Chang M.C. с соавторами провели сравнительный анализ диагностической информативности ПЭТ и ОСГ у больных раком легкого при поражении скелета [41]. На основании полученных результатов установлено, что остеосцинтиграфия по чувствительности (87%) и по специфичности (82%) уступала ПЭТ (93% и 95% соответственно). Тем не менее, установлено, что обменные процессы в остеопластических метастатических очагах протекают медленнее, чем в остеолитических в связи с ингибированием основных медиаторов остеолиза. При этом склерозирование сопровождается уменьшением метаболической активности опухолевых клеток, что приводит к снижению чувствительности ПЭТ в выявлении остеопластических метастазов. Ограничение ПЭТ на практике связано с малым числом проводимых исследований, поэтому привлекается в основном для решения сложных диагностических и дифференциально-диагностических задач [60, 136].

Подводя итог, следует отметить, что для диагностики костных метастазов применимы разные методы лучевой диагностики в зависимости от клинической ситуации [27].

1.1.3.Факторы прогноза при раке молочной железы и при поражениискелета

Течение рака молочной железы у пациенток часто осложняется развитием костных метастазов (до 60% всех случаев заболевания, у больных с распространенными формами – до 80%) [6, 8, 56]. Метастазирование в кости является одной из основных причин смертности больных. Продолжительность жизни больных РМЖ с костными метастазами, по данным разных авторов, в среднем составляет 12-28 месяцев, при этом до 20 % больных живут более 5 лет.

Средняя продолжительность жизни больных с висцеральными метастазами не превышает 6-13 месяцев [49].

Развитие костных метастазов связано как с общими закономерностями метастазирования в кости, так и с ключевыми характеристиками опухоли.

Прежде всего, с клиническими особенностями РМЖ (размер первичной опухоли, ее локализация, форма роста, распространенность процесса, наличие и степень поражения регионарных лимфатических узлов, возраст, менопаузальный статус) и биологическими (гистологический тип, степень злокачественности опухоли, HER2 статус, рецепторный статус, маркеры ангиогенеза и пролиферации, экспрессия PTHrP) [3, 5]. При анализе клинических характеристик РМЖ практическую значимость имеют количество пораженных регионарных лимфатических узлов, степень вовлечения их в опухолевый процесс, первичный размер опухоли, рецепторный статус опухоли, которые непосредственно влияют на рецидив заболевания и соответственно на выживаемость больных. По данным некоторых авторов [5, 15] в течение 5 лет рецидив РМЖ выявляется при наличии одного пораженного подмышечного лимфоузла у 23%, 2 – у 40%, 6-10 – у 63%, 16-20 – у 75% больных. Общая 5-летняя выживаемость при отсутствии метастазов в лимфатических узлах и размерах первичной опухоли меньше 1см составляет 99%, тогда как при увеличении размера от 1 до 2 см продолжительность жизни снижается (90,6 и 86,2 % соответственно). При анализе позитивного рецепторного статуса отмечена его значимость в большей степени для безрецидивной выживаемости. Рецепторопозитивные опухоли чаще метастазируют в кости, мягкие ткани, органы репродуктивной системы, тогда как рецепторотрицательные прогрессируют в головной мозг, печень и ассоциированы с более короткой выживаемостью. Среди клинических характеристик болезни, связанных с биологическими особенностями опухоли, были установлены неблагоприятные признаки, как 3 степень злокачественности, гистологические варианты опухоли (инфильтративный протоковый и дольковый рак), отсутствие псевдокапсулы опухоли, инфильтрация раковыми эмболами кровеносных и/или лимфатических сосудов, а также окружающих опухоль тканей, с которыми больные имеют худшие показатели выживаемости. По данным литературы [7] существует взаимосвязь между степенью злокачественности опухоли и продолжительностью жизни больных РМЖ. 5-летняя и 10-летняя общая выживаемость больных, опухоль которых имела 3 степень злокачественности, была ниже (31 и 18% соответственно) по сравнению с I степенью (75 и 45%). У больных с ранними формами РМЖ были выявлены неблагоприятные морфологические признаки, влияющие на течение заболевания: наличие опухолевой инвазии по невральным волокнам, некроз опухоли, раковые эмболы в лимфатических щелях и сосудах, сосудистая опухолевая инвазия. При наличии периневральной инвазии прогрессирование процесса наблюдалось в 87%, при ее отсутствии – в 3,9% случаев (р=0,00001). Частота прогрессирования достоверно (p=0,005) выше в 2,5 раза при наличии в опухоли сосудистой инвазии по сравнению с больными - с отсутствием. 5-летняя выживаемость больных составила 8,7% против 22,7%, (p=0,005). Прогрессирование процесса было выявлено у 30% больных с выраженным некрозом клеток в опухоли и у 9% больных - при отсутствии некроза (p=0,005), [16].

В последнее время большое внимание уделяют изучению клинических факторов прогноза при метастазах в костях [4, 79]. Автор работы [4] проанализировал данные о 151 больной РМЖ с метастазами в костях в оценке эффективности лекарственной терапии. Результаты исследования позволили автору выделить наиболее благоприятные и неблагоприятные факторы прогноза при оценке эффективности лечения, длительности ремиссии и выживаемости.

При этом наиболее значимыми факторами в отношении 5-летнего прогноза жизни среди изучаемых признаков явились эффективность проведенного лечения, длительность ремиссии, наличие или отсутствие рецидива болезни, количество пораженных анатомических зон костной системы, суммарная доза доксорубицина, вовлечение в процесс висцеральных органов и возраст больных.

На основании многофакторного анализа автором было отобрано 9 информативных признаков, указанных выше, которые позволили оценить индивидуальный прогноз 5-летней выживаемости для больного. В прогнозе эффективности лечения были выявлены факторы прогноза (число зон костного метастазирования, поражение печени) и безрецидивный период. Возраст и менструальный статус в отношении прогноза эффективности лечения больных РМЖ с поражением скелета расценены автором менее информативным. В прогнозе длительности ремиссии были выделены следующие факторы прогноза:

достижение лечебного эффекта, распространенность опухолевого процесса, интенсивность химиотерапии, возраст больного и уровень рецепторов прогестерона.

В настоящее время продолжается изучение факторов прогноза с позиции современных представлений о механизме метастазирования в кости. Авторы некоторых работ [4, 5, 8, 22] оценили значение паратиреоид-подобного протеина (PTHrP), как важного фактора роста, при развитии костных метастазов. При этом у 32 женщин с рентгенологическими подтвержденными костными метастазами РМЖ автором работы [4] была выявлена положительная корреляция между степенью экспрессии паратериоид – подобного протеина (PTHrP) и числом зон костного метастазирования. В целом, на сегодня известны и другие факторы роста, участвующие в развитии и поддержании метастазов в костях. О них будет подробно представлен материал в следующем подразделе. Оценка факторов прогноза при раке молочной железы и при метастазах в костях способствует оптимизации лечения больных РМЖ с целью улучшения выживаемости и качества жизни.

1.1.4. Молекулярные механизмы метастазирования в кости

Метастатическое поражение костной ткани является одним из наиболее частых осложнений злокачественных опухолей молочной железы. По данным разных авторов частота метастазирования в кости достигает 50-60% в общей популяции больных РМЖ, а при распространенных формах – 70-80%, при этом примерно в 20% наблюдений метастазы служат первым проявлением генерализации опухолевого процесса [6, 55]. Обобщая данные авторов, представленные выше, следует отметить, что метастазирование в кости снижает не только общую 5-летнюю выживаемость (у больных РМЖ с костными метастазами она не превышает 20%), но и качество жизни онкологических больных, вызывая сильные боли, патологические переломы, гиперкальцемию и компрессию спинного мозга.

В последнее время в связи с поиском новых подходов в лечении костных метастазов, а также применением неинвазивных методов, способствующих повышению точности диагностики, мониторинга и прогноза поражения скелета, изучению патогенетических механизмов метастазирования в кости уделяется большое внимание. В соответствии с современными представлениями, метастатический остеолиз представляет собой системный процесс, обусловленный, прежде всего, активацией остеокластов в результате действия ауто - и паракринных факторов, продуцируемых злокачественными опухолями, с последующим нарушением баланса между костной резорбцией и костеобразованием. В то же время непосредственному действию опухолевых клеток на костный матрикс в настоящее время придается меньшее значение по сравнению с более ранними работами [98, 141]. По данным многих авторов [28, 65, 113] активацию зрелых остеокластов стимулируют PTHrP, некоторые факторы роста и цитокины: трансформирующие факторы роста (TGF) и, факторы некроза опухоли и, интерлейкины IL-1, IL-6, IL-8, простагландины E, v3интегрины, тромбоцитарный и инсулиноподобный факторы роста I и II, сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), колониестимулирующий фактор макрофагов, а также фактор роста фибробластов, матриксные металлопротеиназы 2 и 9, катепсин К, которые создают благоприятные условия для адгезии, миграции и инвазии опухолевых клеток. Все эти факторы в свою очередь увеличивают экспрессию RANKL, непосредственно влияющего на образование остеокластов. RANKL экспрессируется костными стромальными клетками остеобластной линии, а RANK, в свою очередь, предшественниками остеокластов миелоидного происхождения.

Взаимодействие лиганда и рецептора RANK необходимо для дифференцировки, выживания и активации остеокластов [33, 44]. Кроме того, остеобласты продуцируют OPG (остеопротегерин), который связывает RANKL и препятствует созреванию и активации остеокластов, вызывая апоптоз. По последним литературным данным [45] цитокиновая система, состоящая из рецептора RANK, его лиганда (RANKL) и остеопротегерина (OPG), является ключевым молекулярным звеном в формировании остеокластов. В тоже время разрушение костной ткани сопровождается выделением различных факторов роста, в том числе TGF, который содержится в костном матриксе и выделяется в процессе резорбции костной ткани. При этом он выполняет важную роль, стимулирует развитие метастазов и активирует остеобласты за счет увеличения секреции RANKL и снижения уровня OPG, в результате ускоряется остеолиз [96, 137].

В целом, развитие метастазов в костях можно представить в виде замкнутого круга. Опухолевые клетки выделяют различные факторы роста, в том числе, такие как паратиреоид-подобный протеин, TGF, ИФР и т.д., продукция которых стимулирует выработку остеобластами прежде всего RANKL и М-КСФ.

в свою очередь способствует дифференцировке и активации RANKL остеокластов, что приводит в конечном итоге к усилению резорбции кости. В процессе деградации костного матрикса высвобождаются факторы роста, вновь стимулирующие рост опухолевых клеток (рисунок 1) [22, 114].

Рисунок 1. «Замкнутый цикл» костного метастазирования.

Выраженная активность процессов резорбции и снижение интенсивности костеобразования при поражении скелета предполагает детерминированную генетически продукцию опухолевыми клетками белковых факторов не только стимулирующих остеокласты, но и вызывающих нарушение действия остеобластов [86, 115].

В последнее время научный и практический интерес представляет исследование идентифицированного белка dickkopf-1 (Дкк-1), который является антагонистом Wnt-сигнальной системы, принимающей участие в регуляции межклеточных взаимодействий и морфогенезе опухоли. На сегодня известно, что Wnt-сигнальный путь включает в себя большую группу белков и ядерных рецепторов, основным из которых является липопротеин низкой плотности. В результате взаимодействия с этим рецептором сигнального белка Wnt происходит активация -катенина, стимулирующего остеобластогенез. При этом Дкк-1 способен связывать рецепторы сигнального пути Wnt, блокировать дифференцировку и пролиферацию остеобластов, что приводит к изменению пролиферации, миграции, апоптозу клеток и, таким образом, к прогрессированию заболевания [129]. В настоящее время имеются единичные работы [135], которые отмечают повышение концентрации Дкк-1 в сыворотке крови у больных множественной миеломой, раком легкого, пищевода и РМЖ с метастазами в костях. Однако изучение значимости показателя при поражении скелета у больных злокачественными опухолями различных локализаций ограничено в связи с аналитическими трудностями.

Непосредственное действие остеокластов осуществляется за счет секреции в межклеточное пространство протеолитических ферментов тартратрезистентной кислой фосфатазы-5b (ТРКФ-5b) и катепсина К. Причем ТРКФ-5b является одним из важнейших ферментов остеокластов, растворяющих гидроксиаппатит и принимающих непосредственное участие в процессах костной резорбции [40].

Другим важным аспектом патогенеза метастатического остеолиза по данным ведущих в этом направлении исследователей [99, 103, 121] является ингибирующее действие вышеописанных цитокинов, факторов роста и биологически активных соединений на остеобласты в зависимости от гистогенеза злокачественной опухоли. При этом активированное остеокластами костеобразование характеризуется усиленным синтезом и секрецией белков преимущественно в виде пропептидов проколлагена I типа (С-и N-концевых пропептидов), некоторых неколлагеновых белков, основным из которых является остеокальцин, а также повышением КЩФ. В результате нарушения баланса между процессом остеолиза и остеосинтеза формируются очаги повышенной плотности костной ткани, представленные на рентгенограммах в виде картины остеосклероза, в частности при раке простаты [100]. Особый интерес представляют экспериментальные данные, свидетельствующие о том, что клетки РМЖ могут секретировать факторы, стимулирующие остеобласты [124]. В соответствии с этим фактом можно предполагать, что в развитии остеосклероза, признаки которого обнаруживаются также при поражении скелета у больных РМЖ, важную роль играют паракринные факторы, усиливающие костеобразование, хотя общепринятым признан механизм усиления формирования костной ткани в ответ на интенсивную резорбцию.

Обобщая современные представления о патогенезе метастазирования в кости, следует отметить его сложный, многоступенчатый на клеточномолекулярном уровне процесс, который сопровождается развитием очагов костной деструкции. Нарушение баланса костного метаболизма при остеопорозе также имеет многофакторную природу. Его регуляция осуществляется целым рядом системных и местных факторов. Причем процесс резорбции, осуществляемый остеокластами, является основной точкой приложения большинства регуляторных воздействий. Являясь системным заболеванием скелета, основным механизмом которого рассматривают эстрогенную недостаточность, остеопороз характеризуется потерей костной массы со снижением МПКТ в различных отделах скелета от -2,5 и более стандартных отклонения от соответствующих пиковых значений костной массы в норме. В целом остеопороз характеризуется медленным течением, поздней диагностикой и высоким риском переломов [38, 127].

Итак, одно из ведущих мест в патогенезе метастазирования в кости принадлежит эндокринным и ауто- и паракринным факторам, которые могут формировать остеотропность и метастатический потенциал опухолевых клеток, а также разнообразие клинических признаков поражения скелета. Перспективы изучения молекулярных механизмов и основных закономерностей биохимических нарушений при поражении скелета связаны с использованием новых маркеров костного ремоделирования для повышения точности диагностики, мониторинга и прогнозирования скелета.

ОБЩИЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРАХ

1.2.

КОСТНОГО МЕТАБОЛИЗМА И ИХ КЛИНИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

С позиции современных представлений о механизме метастазирования в кости РМЖ известно, что оно сопровождается нарушением баланса между костной резорбцией и костеобразованием с преобладанием остеолиза, что находит отражение в изменении уровней маркеров костного метаболизма.

1.2.1. Характеристика маркеров остеолиза и их значение в диагностике, мониторинге и прогнозе поражения скелета При РМЖ поражение скелета носит преимущественно остеолитический характер. Изучение механизмов остеолиза способствует практическому использованию продуктов деградации костной ткани в качестве критериев деструкции. В настоящее время пиридиновые связи коллагена (пиридинолин и дезоксипиридолин), коллагеновые пептиды (С-и N-концевые телопептиды), которые образуются при разрушении костного матрикса, а также синтезируемая активированными остеокластами ТРКФ-5b имеют клиническое значение при оценке поражения скелета РМЖ [71, 72, 123, 125].

Пиридиновые связи коллагена. Известно, что главной особенностью строения костной ткани является преобладание межклеточного вещества, которое представлено минеральными компонентами (65%) и органическим матриксом (35%). Органические вещества костного матрикса: белки, липиды и протеогликаны. Основной белок костной ткани – коллаген 1 типа (90%), содержащий большое количество гидроксипролина, гидроксилизина и серина.

Стабильность коллагенового матрикса обеспечивается межмолекулярными необратимыми связями, входящими в полипептидную цепь коллагена І типа, и соединяют концевую (С -и N - телопептиды) и спиралевидную часть пептидных молекул. Этими межмолекулярными структурами являются пиридинолин (Пид) и дезоксипиридинолин (Дпид).

Они обнаруживаются только в дифференцированном матриксе прочных типов соединительной ткани (костная ткань, дентин, сухожилия и хрящи) и отсутствуют в коллагеновых волокнах кожи, мягких тканей. Пид и Дпид имеют достаточно стабильную структуру, не подвергаются деградации в процессе резорбции коллагена костного матрикса, поступают в циркуляторное русло в составе пептидных фрагментов и практически полностью экскретируются с мочой в свободной (40%) и связанной с пептидами форме (60%) [59]. В течение длительного времени основным методом исследования пиридиновых связей остается жидкостная хроматография, которая определяет как свободные, так и пептид - связанные фракции Пид и Дпид, что соответствует их общей экскреции, наиболее полно отражающей костную резорбцию. В соответствии с данными литературы [74, 132] стало возможным определение пиридиновых связей коллагена в сыворотке крови и моче на основе ИФА, характеризующиеся высокой стабильностью, воспроизводимостью и коррелирует с методом жидкостной хроматографии. Обобщая особенности разных методик определения пиридиновых связей коллагена, следует отметить, что для них характерно ограничение в клинической практике, обусловленное их низкой концентрацией в крови и вариабельностью значений в моче.

Телопептидные фрагменты коллагена І типа. При остеолизе образуются и другие продукты деградации коллагена I типа (С-и N-концевые телопептиды):

СТХ или CrossLaps в виде двух изоформ (-СТХ и -СТХ), крупномолекулярный С-телопептидный фрагмент коллагена I типа (ICTP) и Ntx.

В клинической практике возможно определение С-концевых телопептидов как в крови, так и в моче [82, 89], тогда как в большинстве работ [35, 51, 122, 130] изучали экскрецию Ntx с мочой. В целом, при исследовании С-и N-концевых телопептидов коллагена в моче значения показателей характеризуются высокой вариабельностью и низкой диагностической чувствительностью[ 118, 131, 134]. В настоящее время существует достаточное количество работ, свидетельствующих об исследовании в сыворотке крови двух изомеров концевого телопептида коллагена I типа костного матрикса ( и -СТХ), а также ICTP [77, 146]. В то же время их использование ограничено вследствие методических сложностей. Кроме того, по данным автора [109, 117] при определении СТХ в сыворотке крови обнаружена циркадная вариация показателя в зависимости от возраста, менопаузального статуса и других клинических характеристик РМЖ.

Тартратрезистентная кислая фосфатаза-5b. Кислая фосфатаза (КФ) – фермент, относящийся к классу гидраз. В организме человека кислая фосфатаза распределена во всех тканях и биологических жидкостях, включая сыворотку крови. Кислая фосфатаза представлена несколькими изоферментами (0, 1, 2, 3а, 3b, 4, 5а и 5b), отличающимися между собой по аминокислотному составу, молекулярной массе, тканевому происхождению, устойчивости к ингибирующему действию L+ тартратов. Тартратрезистентная кислая фосфатаза-5b (ТРКФ-5b) – пятый изофермент кислой фосфатазы, характеризующийся устойчивостью к ингибирующему действию L+ тартратов. Антигенные свойства ТРКФ-5b соответствуют КФ, выделенной из остеокластов, на основании этого было сделано предположение, что тип 5b продуцируется исключительно остеокластами. Способность остеокластов синтезировать ТРКФ уже много лет используется для идентификации этих клеток гистохимическим методом [68]. В этом аспекте особый интерес приобретают работы, посвященные исследованию ТРКФ -5b как потенциального маркера костной резорбции. Так, есть данные об усилении экспрессии ТРКФ-5b в тканях злокачественных опухолей молочной железы, яичников и меланомы [70]. Спектрофотометрические методы определения активности ТРКФ-5b являются недостаточно точными и специфичными из-за наличия в сыворотке крови других изоферментов. Поэтому референтным методом для определения активности пятого изофермента является иммуноферментный анализ с использованием моноклональных антител к ТРКФb, специфичной для остеокластов. Чувствительность метода, независимость от функционального состояния печени и почек позволяют судить об интенсивности костной резорбции [62].

Дкк-1 (Dickkopf-1). Дкк-1 – гликопротеин, ингибитор Wnt-сигнальной системы. Выраженная активность процессов резорбции при злокачественных опухолях предполагает продукцию клетками белковых факторов не только стимулирующих остеокласты, но и вызывающих нарушение действия остеобластов. Дифференцировка и активация этих клеток осуществляется через сигнальный путь Wnt, включающий в себя большую группу белков, основным из которых является ядерный рецептор LRP-5. Взаимодействие сигнального белка Wnt с этим рецептором приводит к активации -катенина, стимулирующего остеобластогенез. Ингибирование сигнального пути Wnt осуществляется белками Дкк-1, способными связываться с его ядерными рецепторами. В настоящее время расшифрована первичная структура четырех разных пептидов Дкк, наиболее активным из которых является Дкк-1, способный связываться с С-концевым доменом рецептора LRP-5, что приводит к его эндоцитозу внутрь мембраны в составе прочного комплекса. В настоящее время методы определения Дкк-1 у больных злокачественными опухолями изучаются и используют в основном иммуноферментный метод [67].

Достижения в изучении молекулярных механизмов метастазирования в кости и успехи современной онкологии в лечении костных метастазов с использованием таргентной терапии обусловливают важность ранней диагностики поражения скелета. В связи с этим существенно возрос интерес к развитию неинвазивных методов диагностики и мониторинга поражения скелета на основе определения биохимических критериев, отражающих интенсивность процессов резорбции и формирования костной ткани.

В настоящее время продукты деградации коллагена І типа наиболее адекватно отражают остеолиз при развитии метастазов в костях. Накоплен определенный материал, свидетельствующий о возможности использования Пид и Дпид в качестве критериев костной резорбции в диагностике и мониторинге поражения скелета у больных со злокачественными опухолями различных локализаций [17, 132]. В этом аспекте сведения литературы немногочисленны и выполнены на небольших группах онкологических больных. Есть данные, подтверждающие эффективность использования этих показателей для мониторинга лечения костных метастазов бисфосфонатами у больных РМЖ (29 больных), предстательной железы (10 больных) и раком легкого (10 больных).

При серийном исследовании панели биохимических маркеров резорбции (ICTP, CTx, NTx, Дпид, Пид) и формирования костной ткани (КЩФ, PINP) на фоне лечения антирезорбтивной терапии наблюдается снижение показателей костного метаболизма, особенно для маркеров резорбции [25, 91, 130, 144].

Результаты исследования пиридиновых связей в моче больных РМЖ, представленные в работах других авторов [54, 105, 132], свидетельствуют о достоверном увеличении их общей экскреции у больных с поражением скелета (соответственно 50 и 35 больных) по сравнению с больными, не имевшими клинических признаков костных метастазов (5 и 13 больных) и контрольной группой. В работе Takeuchi с соавторами [126] было показано, что общая экскреция пиридиновых связей коллагена при метастазах в кости рака простаты (28 больных) была достоверно повышена по сравнению с больными без метастазов (19 больных), а также практически здоровыми мужчинами.

Сравнительный анализ опубликованных данных показал, что усиление экскреции Пид и Дпид в группах больных солидными опухолями различных локализаций по частоте и степени остеолиза было почти одинаковым, что может являться подтверждением выраженного остеолиза как при РМЖ, так и при раке простаты.

В большинстве работ последнего времени исследование закономерностей экскреции пиридиновых связей коллагена, отражающих деструкцию костного матрикса, проводится при сравнении групп больных с метастазами и без метастазов в кости. Следует отметить, что результаты определения Пид и Дпид в моче онкологических больных без метастатического поражения скелета весьма противоречивы. Так, в описанной выше работе было обнаружено достоверное усиление экскреции показателей резорбции (Пид и Дпид) по сравнению с нормой не только при метастазах в костях, но и у больных, не имевших признаков поражения скелета. Повышение уровней Пид и Дпид в моче больных РМЖ и раком простаты без клинических признаков метастазов было менее выраженным, чем у больных с метастазами, однако наблюдалось в 20-50% случаев. У таких больных не исключается поражение скелета в связи с трудностями ранней диагностики метастазирования в кости при использовании инструментальных методов. Кроме того, в соответствии с мнением большинства исследователей механизм усиления экскреции пиридиновых связей можно объяснить местным или системным воздействием факторов, продуцируемых злокачественными клетками [49, 114, 139]. При динамическом наблюдении больных без поражения скелета увеличение экскреции Дпид с мочой в 2 раза по сравнению с исходными значениями показателя опережало клинические проявления метастазов в костях на 6-12 месяцев и характеризовало множественное поражение скелета [7]. Данные исследования, проведенного Demers L. С и соавторами, подтвердили высокую корреляционную связь между экскрецией пиридиновых связей коллагена и признаками деструкции костной ткани, что подтверждает их высокую специфичность и чувствительность в качестве критериев костной резорбции [54].



Pages:   || 2 | 3 | 4 | 5 |
Похожие работы:

«Брит Владислав Иванович «Эффективность методов вакцинации против ньюкаслской болезни в промышленном птицеводстве» Специальность: 06.02.02 ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидат ветеринарных наук Научный руководитель:...»

«Степина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ФЛОРИСТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТЕПНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЮГО-ЗАПАДНЫХ РАЙОНОВ САРАТОВСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология (биологические науки) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор...»

«СЕТДЕКОВ РИНАТ АБДУЛХАКОВИЧ РАЗРАБОТКА НОВЫХ СРЕДСТВ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ЭШЕРИХИОЗОВ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 06.02.02 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Диссертация на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ и РТ Юсупов...»

«Палаткин Илья Владимирович Подготовка студентов вуза к здоровьесберегающей деятельности 13.00.01 общая педагогика, история педагогики и образования Диссертация на соискание ученой степени кандидата педагогических наук Научные руководители: доктор биологических наук, профессор,...»

«Куяров Артём Александрович РОЛЬ НОРМАЛЬНОЙ МИКРОФЛОРЫ И ЛИЗОЦИМА В ВЫБОРЕ ПРОБИОТИЧЕСКИХ ШТАММОВ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ У СТУДЕНЧЕСКОЙ МОЛОДЕЖИ СЕВЕРА 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание учёной степени кандидата...»

«Карачевцев Захар Юрьевич ОЦЕНКА ПИЩЕВЫХ (АКАРИЦИДНЫХ) СВОЙСТВ РЯДА СУБТРОПИЧЕСКИХ И ТРОПИЧЕСКИХ РАСТЕНИЙ В ОТНОШЕНИИ ПАУТИННОГО КЛЕЩА TETRANYCHUS ATLANTICUS MСGREGOR Специальность: 06.01.07 – защита растений Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель: Попов Сергей...»

«Вафула Арнольд Мамати РАЗРАБОТКА ЭЛЕМЕНТОВ ТЕХНОЛОГИИ ВЫРАЩИВАНИЯ ПАПАЙИ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ЗДОРОВОГО ПОСАДОЧНОГО МАТЕРИАЛА И ЭКСТРАКТОВ С БИОПЕСТИЦИДНЫМИ СВОЙСТВАМИ ДЛЯ ЗАЩИТЫ ЕЕ ОТ ВРЕДНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 06.01.01 – общее земледелие и растениеводство Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных...»

«Моторыкина Татьяна Николаевна ЛАПЧАТКИ (РОД POTENTILLA L., ROSACEAE) ФЛОРЫ ПРИАМУРЬЯ И ПРИМОРЬЯ 03.02.01 – Ботаника Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, старший научный сотрудник Н.С. Пробатова Хабаровск Содержание Введение... Глава 1. Природные...»

«Ульянова Онега Владимировна МЕТОДОЛОГИЯ ПОВЫШЕНИЯ БЕЗОПАСНОСТИ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ВАКЦИН НА МОДЕЛИ ВАКЦИННЫХ ШТАММОВ BRUCELLA ABORTUS 19 BA, FRANCISELLA TULARENSIS 15 НИИЭГ, YERSINIA PESTIS EV НИИЭГ 03.02.03 – микробиология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант:...»

«Мухаммед Тауфик Ахмед Каид ХАРАКТЕРИСТИКА ГЕНОТИПОВ С ХОРОШИМ КАЧЕСТВОМ КЛЕЙКОВИНЫ, ОТОБРАННЫХ ИЗ ГИБРИДНЫХ ПОПУЛЯЦИЙ АЛЛОЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОЙ ЯРОВОЙ ПШЕНИЦЫ МЯГКОЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДНК-МАРКЕРОВ Специальность 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений Диссертация на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Научный...»

«Ядрихинская Варвара Константиновна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ РАСПРОСТРАНЕНИЯ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ В Г. ЯКУТСКЕ И РЕСПУБЛИКЕ САХА (ЯКУТИЯ) 03.02.08 – экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент М.В. Щелчкова Якутск 2015...»

«Доронин Максим Игоревич ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ИНФЕКЦИОННОГО НЕКРОЗА ГЕМОПОЭТИЧЕСКОЙ ТКАНИ ЛОСОСЕВЫХ РЫБ 03.02.02 «Вирусология» Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, Мудрак Наталья Станиславовна Владимир 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ 1 ВВЕДЕНИЕ 2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2.1 Характеристика возбудителя инфекционного...»

«Любас Артем Александрович ПАЛЕОРЕКОНСТРУКЦИЯ СРЕДЫ ОБИТАНИЯ ПРЕСНОВОДНЫХ МОЛЛЮСКОВ В НЕОГЕН-ЧЕТВЕРТИЧНЫХ ВОДОТОКАХ С ЭКСТРЕМАЛЬНЫМИ ПРИРОДНЫМИ УСЛОВИЯМИ Специальность 25.00.25 – геоморфология и эволюционная география Диссертация на соискание ученой степени кандидата географических наук Научный руководитель: доктор биологических наук...»

«СЕРГЕЕВА ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА ПРИМЕНЕНИЕ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ЗАКВАСОК ДЛЯ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ МЯСНОГО СЫРЬЯ И УЛУЧШЕНИЯ КАЧЕСТВА ПОЛУЧАЕМОЙ ПРОДУКЦИИ Специальность 03.01.06 – биотехнология ( в том числе бионанотехнологии) Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель Доктор биологических наук, профессор Кадималиев Д.А. САРАНСК 2014 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ.....»

«Петренко Дмитрий Владимирович Влияние производства фосфорных удобрений на содержание стронция в ландшафтах Специальность 03.02.08 экология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Белюченко Иван Степанович Москва – 2014 г. Содержание Введение Глава 1.Состояние изученности вопроса и цель работы 1.1 Экологическая...»

«Смешливая Наталья Владимировна ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ СИГОВЫХ РЫБ ОБЬ-ИРТЫШСКОГО БАССЕЙНА 03.02.06 Ихтиология Диссертация на соискание учёной степени кандидата биологических наук Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент Семенченко С.М. Тюмень – 2015 ОГЛАВЛЕНИЕ...»

«Цховребова Альбина Ирадионовна ВЛИЯНИЕ ФАКТОРОВ СРЕДЫ НА РАЗВИТИЕ БЕСХВОСТЫХ АМФИБИЙ СЕВЕРНЫХ СКЛОНОВ ЦЕНТРАЛЬНОГО КАВКАЗА Специальность 03.02.14 – биологические ресурсы Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель доктор биологических наук профессор Калабеков Артур Лазаревич Владикавказ 2015 Содержание Ведение..3 Глава I. Обзор литературных данных. 1.1....»

«БРИТАНОВ Николай Григорьевич ГИГИЕНИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕПРОФИЛИРОВАНИЯ ИЛИ ЛИКВИДАЦИИ ОБЪЕКТОВ ПО ХРАНЕНИЮ И УНИЧТОЖЕНИЮ ХИМИЧЕСКОГО ОРУЖИЯ 14.02.01 Гигиена Диссертация на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор...»

«Цвиркун Ольга Валентиновна ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПРОЦЕСС КОРИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПЕРИОДЫ ВАКЦИНОПРОФИЛАКТИКИ. 14.02.02 – эпидемиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора медицинских наук Научный консультант: заслуженный деятель науки РФ, лауреат Государственной премии СССР профессор, доктор медицинских наук Ющенко Галина Васильевна Москва – 20 Содержание...»









 
2016 www.konf.x-pdf.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, диссертации, конференции»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.